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鼠疫菌重组质粒pcDNATE/F1-V的构建及其免疫效果的研究 被引量:3
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作者 韩岳 王希良 +5 位作者 董梅 邢丽 赵光宇 黄顺军 罗德炎 何凤田 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期208-211,共4页
目的获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组质粒pcDNATE/F1-V,并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pcDNATE/F1-V融合重组质粒,转染COS-7细胞,用Westernblot方法鉴定目的蛋白的... 目的获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组质粒pcDNATE/F1-V,并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pcDNATE/F1-V融合重组质粒,转染COS-7细胞,用Westernblot方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒pcDNATE/F1-V加集落刺激因子(GM-CSF)免疫Balb/c小鼠,观察免疫效果。结果pcDNATE/F1-V在COS-7细胞中表达,免疫鼠体内产生特异性抗体,抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定结果表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pcDNATE/F1-V,其具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠疫杆菌 f1-v抗原 基因重组双价疫苗 免疫应答
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人tPA信号肽和Yersinia pestis保护性抗原F1-V融合基因的构建及其免疫效果观察 被引量:3
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作者 韩岳 王希良 +3 位作者 董梅 邢丽 赵光宇 刘秀华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期811-816,共6页
为获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因,以及人tPA信号肽基因的重组质粒tPA-pVAX1/F1-V,测定其诱导特异性免疫应答的能力,用PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序.构建pVAX1/F1-V融合重组质粒,PCR扩增tPA信号肽片段,并将其插入到... 为获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因,以及人tPA信号肽基因的重组质粒tPA-pVAX1/F1-V,测定其诱导特异性免疫应答的能力,用PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序.构建pVAX1/F1-V融合重组质粒,PCR扩增tPA信号肽片段,并将其插入到F1-V的上游,构建tPA-pVAX1/F1-V融合重组质粒;转染COS-7细胞,Western印迹法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒tPA-pVAX1/F1-V加GM-CSF佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫效果.400个LD50强毒鼠疫菌皮下攻毒观察保护率.结果表明,tPA-pVAX1/F1-V在COS-7细胞中表达;免疫鼠体内产生特异性抗体;抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定表明,所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主;(攻毒保护率达90%.结果提示,已成功构建F1-V融合蛋白真核表达载体tPA-pVAX1/F1-V,它具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,对强毒鼠疫菌皮下攻毒有一定的保护效力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础. 展开更多
关键词 鼠疫杆菌 f1-v抗原 基因融合双价疫苗 tPA信号肽
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鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原的制备及其免疫保护效果的研究 被引量:5
3
作者 王栋 黄顺军 +5 位作者 邢丽 郭习勤 韩岳 罗德炎 李敏 王希良 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期287-291,共5页
为制备鼠疫耶尔森氏菌F1-V重组融合蛋白抗原,观察其免疫原性和免疫保护效果,通过疏水层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原.用氢氧化铝凝胶吸附制备试验性鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原,皮下接种健康BALB/c小鼠,... 为制备鼠疫耶尔森氏菌F1-V重组融合蛋白抗原,观察其免疫原性和免疫保护效果,通过疏水层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原.用氢氧化铝凝胶吸附制备试验性鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原,皮下接种健康BALB/c小鼠,ELISA检测血清F1-V抗体效价、MTT法测定淋巴细胞增殖能力,进一步用400LD50鼠疫耶尔森氏菌141标准毒株皮下攻毒,观察动物的存活情况.通过三步柱层析纯化获得的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原纯度达到90%以上.氢氧化铝凝胶吸附的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠三次,血清抗F1-V抗体效价为1∶(51200±800),对耶尔森氏菌141强毒株攻击的保护率是90%.上述结果表明,制备的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原具有良好的免疫原性和免疫保护效果,为研制鼠疫F1-V重组融合蛋白疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森氏菌 f1-v重组融合蛋白抗原 免疫保护效果
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鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究 被引量:6
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作者 吴秀芳 于三科 +5 位作者 谢应国 王栋 袁源 刑丽 武素琴 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期269-272,276,共5页
目的以重组霍乱毒素B亚单位(rCT-B)为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分... 目的以重组霍乱毒素B亚单位(rCT-B)为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,检测鼻咽喉、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏膜分泌型IgA;采用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。结果以rCT-B为佐剂的鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗滴鼻免疫后,能够诱导血清中IgGI、gA抗体比正常对照组显著升高(P<0.01),同时诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内特异性黏膜抗体升高,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著(P<0.01)。与单纯的F1-V组相比,不同剂量比例疫苗组都能诱导较高、较快的血清IgGI、gA和黏膜sIgA,其中1∶2疫苗组能诱导更强的系统免疫和黏膜免疫,但是相比之下,5∶1疫苗组是最合适的免疫剂量。结论rCT-B佐剂不仅能提高鼠疫F1-V黏膜疫苗的系统全身免疫应答,还能促进诱导呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜sIgA抗体,增强局部免疫应答,提示rCT-B佐剂能显著提高鼠疫感染的免疫应答作用,这为下一步疫苗的免疫保护评价奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠疫f1-v重组蛋白黏膜疫苗 重组霍乱毒素B亚单位 黏膜免疫 系统免疫
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不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的研究 被引量:2
5
作者 袁源 王栋 +1 位作者 邢丽 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期183-186,共4页
目的研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础。方法鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备... 目的研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础。方法鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备黏膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠3次,取尾静脉血,采用ELISA检测血清IgG及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液sIgA;采用FAC检测脾淋巴细胞表型的变化。结果PorB重组蛋白佐剂疫苗组和蛋白体佐剂疫苗组较无佐剂组体液免疫抗体水平高、蛋白体佐剂疫苗组好于PorB重组蛋白佐剂疫苗组,但无显著性差异。结论PorB重组蛋白佐剂疫苗和蛋白体佐剂疫苗均能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫应答,且PorB重组蛋白佐剂疫苗免疫效果可与蛋白体佐剂疫苗相媲美,可进一步论证是否可用PorB重组蛋白佐剂替代蛋白体佐剂,这为鼠疫粘膜疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠疫f1-v抗原 PorB重组蛋白 蛋白体 免疫反应
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鼠疫耶尔森菌F1-V融合蛋白改构体的构建、原核表达及纯化
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作者 房婷 尹可欣 +5 位作者 任军 张晓鹏 于蕊 宋小红 杨秀旭 于长明 《生物技术通讯》 CAS 2015年第4期471-476,共6页
目的:通过基于结构的基因突变获得鼠疫耶尔森菌F1抗原突变体(F1mut),克隆、表达并纯化F1mut-V融合蛋白。方法:通过3轮PCR,将编码F1抗原分子N端1~14位氨基酸的基因序列移到3'端,测序无误后将F1mut基因与V基因的5'端连接,构建改构... 目的:通过基于结构的基因突变获得鼠疫耶尔森菌F1抗原突变体(F1mut),克隆、表达并纯化F1mut-V融合蛋白。方法:通过3轮PCR,将编码F1抗原分子N端1~14位氨基酸的基因序列移到3'端,测序无误后将F1mut基因与V基因的5'端连接,构建改构的融合基因F1mut-V,将其克隆到原核表达载体p ET-32a后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,目的蛋白为可溶性表达,通过硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析、疏水相互作用层析和凝胶过滤层析纯化,用SDS-PAGE和Western印迹分析纯化产物。结果:重组F1mut-V在大肠杆菌中为可溶性表达,表达量占全菌蛋白的25%以上,纯化后目的蛋白的纯度达95%,经Western印迹检测,与抗V、F1抗体均有特异性结合。结论:重组F1mut-V有望成为新一代亚单位疫苗的有效成分。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 f1抗原 V抗原 突变体 f1mut-v融合蛋白 分离纯化
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鼠疫耶尔森菌重组质粒pVAX1/F1-V的构建及其免疫效果的研究 被引量:5
7
作者 韩岳 王希良 +4 位作者 何凤田 董梅 赵光宇 黄顺军 摆茹 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期808-812,共5页
目的获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组真核表达质粒pVAX1/F1-V,并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pVAX1/F1-V融合重组质粒,转染Cos-7细胞,用Western blot方法鉴定目的... 目的获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组真核表达质粒pVAX1/F1-V,并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pVAX1/F1-V融合重组质粒,转染Cos-7细胞,用Western blot方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒pVAX1/F1-V加GM-CSF佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫效果,400个半数致死量(LD50)强毒鼠疫菌皮下攻毒观察保护率。结果pVAX1/F1-V在Cos-7细胞中表达,免疫鼠体内产生特异性抗体,通过抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发TH1型免疫为主,攻毒保护率达60%。结论成功构建F1-V融合蛋白真核表达载体,具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,对强毒鼠疫菌皮下攻毒有一定的保护效力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠疫杆菌 f1-v抗原 基因融合双价疫苗 免疫应答
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蛋白体佐剂及用于鼠疫F1-V抗原的免疫效果 被引量:2
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作者 吴秀芳 谢应国 +3 位作者 袁源 王栋 于三科 王希良 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期247-250,共4页
目的以蛋白体(proteosomes)佐剂,非共价结合鼠疫F1-V重组蛋白为免疫原,探讨滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的免疫应答和免疫保护效果。方法佐剂与鼠疫F1-V重组蛋白为免疫原非共价结合,滴鼻免疫BALB/c小鼠4次后,采用间接ELISA检测血... 目的以蛋白体(proteosomes)佐剂,非共价结合鼠疫F1-V重组蛋白为免疫原,探讨滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的免疫应答和免疫保护效果。方法佐剂与鼠疫F1-V重组蛋白为免疫原非共价结合,滴鼻免疫BALB/c小鼠4次后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏液分泌型IgA;并用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。第4次免疫后7d,用100峨的鼠疫141强毒株进行腹腔攻毒。结果(1)以蛋白体为佐剂的鼠疫F1-V抗原与单纯的F1-V组相比,蛋白体疫苗组诱导血清IgG、IgA抗体显著升高(P〈0.01),同时蛋白体疫苗组能诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内多个黏膜部位特异性IgA抗体的产生,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著(P〈0.01);(2)蛋白体疫苗组主要引起IgG1型抗体,主要诱导TH2型免疫反应;(3)蛋白体疫苗组NALT和SP中CD^4+/CD^8+比值比PBS对照有显著增高(P〈0.01),MLN和PP中CD^4+/CD^8+比值与PBS对照差异无统计学意义(P〉0.05)。(4)小鼠100 LD50的鼠疫141强毒株腹腔攻毒后鼠疫F1-V重组蛋白组小鼠免疫保护率为0,而蛋白体佐剂疫苗组小鼠免疫保护率为67%。结论以自制的蛋白体为鼠疫F1-V抗原的佐剂滴鼻免疫小鼠,蛋白体不仅提高鼠疫F1-V抗原的系统免疫应答,而且能诱导小鼠呼吸道、消化道和生殖道局部黏膜免疫应答。蛋白体佐剂鼠疫疫苗对100 LD50的鼠疫141强毒株腹腔攻毒具有一定的免疫保护作用,这为鼠疫黏膜疫苗的研制提供候选材料,也为鼠疫黏膜疫苗深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白体 鼠疫f1-v重组蛋白 滴鼻免疫
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F1-V重组亚单位疫苗对鼠疫耶尔森氏菌141强毒株皮下攻毒保护性的研究 被引量:2
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作者 王栋 贾暖 +2 位作者 李鹏 邢丽 王希良 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2007年第3期320-324,共5页
在此实验中,设计了一种包含2种成分的重组融合蛋白作为疫苗成分来防护鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia)可能产生的生物威胁.重组F1-V蛋白与铝佐剂结合,分别以10,20,50μg剂量免疫BALB/C小鼠,周期为2个月.检测小鼠血清抗体水平和T辅... 在此实验中,设计了一种包含2种成分的重组融合蛋白作为疫苗成分来防护鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia)可能产生的生物威胁.重组F1-V蛋白与铝佐剂结合,分别以10,20,50μg剂量免疫BALB/C小鼠,周期为2个月.检测小鼠血清抗体水平和T辅助细胞的亚型.免疫后小鼠以25~600LD50剂量的鼠疫耶尔森氏菌141强毒株进行皮下攻毒实验.结果证明,F1—V重组蛋白在小鼠体内诱导产生足够保护的免疫应答.血清IgG水平是产生最终保护力的一个重要因素.20μg的免疫剂量可以诱导血清抗体效价高达51200,使小鼠对400LD50的鼠疫耶尔森氏菌产生100%的保护.F1—V重组蛋白引发的抗体亚型主要为IgG1类,说明抗体反应趋向Th2型反应.流式细胞分析表明,铝佐剂主要帮助F1—V重组融合蛋白诱导强烈的体液免疫而不是CTL细胞免疫应答.表明F1—V重组亚单位疫苗株有希望成为一种新型的鼠疫疫苗候选株. 展开更多
关键词 耶尔森氏菌(Yersinia) f1-v融合蛋白 攻毒 亚单位疫苗
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中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析
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作者 房婷 任军 +5 位作者 张金龙 尹可欣 杨秀旭 于蕊 张晓鹏 于长明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期95-104,共10页
重组F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50μmol/LIPTG,25℃诱导表达5h。通过硫酸铵... 重组F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50μmol/LIPTG,25℃诱导表达5h。通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化,最终得到纯度为99%、回收率大于20%且各项检测指标合格的蛋白。在此基础上,将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附,在小鼠体内进行了免疫原性研究。ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度。比较融合蛋白免疫组(rF1-V)与单一抗原免疫组(rF1、rV)以及联合抗原免疫组(rF1+rV)之间体液免疫反应的差异。结果显示:20μgrF1-V免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组,抗V抗体滴度与其他组相比没有显著差异。表明本工艺制备的rF1-V抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 重组f1-v融合蛋白 发酵 分离纯化 免疫原性 亚单位疫苗
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Protection against lethal subcutaneous challenge of virulent Y. pestis strain 141 using an F1-V subunit vaccine
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作者 WANG Dong JIA Nuan +2 位作者 LI Peng XING Li WANG XiLiang 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2007年第5期600-604,共5页
In this study,we designed and engineered a two-component recombinant fusionprotein antigen as a vaccine candidate against the possible biological threat of Yersinia pestis.Therecombinant F1-V protein was formulated wi... In this study,we designed and engineered a two-component recombinant fusionprotein antigen as a vaccine candidate against the possible biological threat of Yersinia pestis.Therecombinant F1-V protein was formulated with Alhydrogel.A four-time injection with a dosage of10,20 and 50 ug/mouse in about two months was adopted for vaccination.Serum antibodies and subclassof T helper cells were measured and analyzed.After the final vaccination,the mice were challenged by141 strain with 25- 600 LD50.In conclusion,the recombinant vaccine was capable of inducingprotective immunity against subcutaneous challenge.The level of serum IgG was supposed to be a mainfactor that affected the final protection of challenge.20 ug recombinant protein could induce anendpoint titre of serum IgG as high as 51200,which was enough to afford 100% protection against 400LD50 virulent 141 challenge.The antibody isotype analysis showed that the vaccine inducedpredominantly an lgG1 rather than lgG2a response.Flow cytometric analysis revealed that Alhydrogelsignificantly helped induce a stronger humoral immunity instead of CTL cellular response.Thesefindings suggested that the plague F1-V subunit vaccine is promising for the next plague vaccine. 展开更多
关键词 Yersinia pestis f1-v fusion protein CHALLENGE subunit vaccine
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鼠疫耶尔森氏菌核酸疫苗的构建及其免疫学评价 被引量:3
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作者 韩岳 王希良 +5 位作者 何凤田 摆茹 董梅 赵光宇 王英 曾政 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期474-477,481,共5页
目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEMT连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS7细胞。用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达... 目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEMT连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS7细胞。用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒加GMCSF免疫Balb/c小鼠,观察免疫效果。结果F1和V均在COS7细胞中表达;免疫鼠体内产生特异性抗体,pVAX1/V所诱导的抗体水平比pVAX1/F1高;通过抗体亚型分析、细胞因子和CD分子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并且均具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠疫杆菌 f1抗原 V抗原 DNA疫苗 免疫应答
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鼠疫亚单位疫苗研究进展 被引量:6
13
作者 刘斌 郑文岭 罗立新 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第8期6-8,共3页
鼠疫 ,由于其强烈的传染性和极高的致死率 ,使得人们在应对它时 ,必须侧重于早期的防治。传统疫苗存在安全隐患 ,且存在效率低 ,接种反应率高以及不能保护人体免受肺鼠疫侵害等缺陷。近年来生物技术的迅速发展 ,为开展对鼠疫传统疫苗的... 鼠疫 ,由于其强烈的传染性和极高的致死率 ,使得人们在应对它时 ,必须侧重于早期的防治。传统疫苗存在安全隐患 ,且存在效率低 ,接种反应率高以及不能保护人体免受肺鼠疫侵害等缺陷。近年来生物技术的迅速发展 ,为开展对鼠疫传统疫苗的改进和新疫苗的研究创造了条件 ,而这些研究当中 ,成果最为丰富的当属亚单位疫苗。目前鼠疫亚单位疫苗的研究大多围绕对鼠疫杆菌免疫原性起决定作用的两种主要抗原成分 (F1抗原和V抗原 )展开 。 展开更多
关键词 鼠疫 鼠疫耶尔森菌 鼠疫杆菌 fl抗原 V抗原 亚单位疫苗
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鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒的研制 被引量:5
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作者 常娅莉 席仲兴 +10 位作者 吴智远 徐秉臣 彭林锋 胡丽娜 热娜 雷刚 韩少波 张正雷 卜培英 袁浩嘉 王秉翔 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1632-1636,共5页
目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清,经50%饱和硫酸铵盐析2次后,再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化,作为包被抗体;制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水,并进行纯化,... 目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清,经50%饱和硫酸铵盐析2次后,再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化,作为包被抗体;制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水,并进行纯化,用HRP标记单抗,作为酶标抗体;建立鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、灵敏度、线性范围、特异性、重复性、准确性和稳定性验证。结果制备的试剂盒检测精密性参比品的板内变异系数为5.2%,板间变异系数为8.23%;试剂盒的线性范围为3.91~62.5ng/ml,最低检测限为3.0ng/ml;试剂盒检测鼠疫菌菌液的结果为阳性,而与近缘假结核耶尔森菌无交叉反应;试剂盒检测高、中、低3种浓度Fl抗原含量的变异系数为4.54%~8.4%,回收率在104%-108%之间;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年。结论成功制备了鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,为鼠疫的临床诊断及流行病学监测提供了一种快速检测手段,也为新型鼠疫组分疫苗F1抗原含量的检测提供了方法。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 f1抗原 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定
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鼠疫组分疫苗诱导小鼠体液免疫应答研究
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作者 魏东 常雅莉 +4 位作者 卢锦标 胡丽娜 焦磊 王秉翔 王国治 《中国医药生物技术》 2013年第3期184-187,共4页
目的通过检测鼠疫组分疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答,对其免疫原性进行评价。方法将小鼠随机分成4个实验组,免疫后5周内眦采血,检测血清中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体;充分暴露气管,沿气管上端剪一楔形口,用PBS冲洗肺泡制备肺冲洗液... 目的通过检测鼠疫组分疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答,对其免疫原性进行评价。方法将小鼠随机分成4个实验组,免疫后5周内眦采血,检测血清中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体;充分暴露气管,沿气管上端剪一楔形口,用PBS冲洗肺泡制备肺冲洗液,检测肺冲洗液中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体。结果血清中可产生较高效价的抗F1抗原和rV抗原IgG抗体以及较低效价的抗F1抗原IgA抗体。肺冲洗液中可检测到抗F1抗原和rV抗原的IgG抗体,但无特异性IgA产生。结论鼠疫组分疫苗能诱导小鼠产生较强的血清抗体应答,肺冲洗液可检测到一定的IgG抗体,该疫苗有希望成为我国新一代鼠疫疫苗。 展开更多
关键词 鼠疫 抗体生成 组分疫苗 f1抗原 rV抗原
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AnnexinA7、ERCC1、HLA-F在鼻咽癌演进过程中的表达水平研究 被引量:4
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作者 陶维平 彭亚 李湘胜 《重庆医学》 CAS 2022年第15期2570-2574,共5页
目的探讨膜联蛋白A7(AnnexinA7)、核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、人类白细胞抗原F(HLA-F)在鼻咽癌演进过程中的表达水平。方法选取2020年4月至2021年3月在该院进行手术治疗的78例鼻咽癌患者癌组织、癌旁组织标本进行免疫组织化... 目的探讨膜联蛋白A7(AnnexinA7)、核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、人类白细胞抗原F(HLA-F)在鼻咽癌演进过程中的表达水平。方法选取2020年4月至2021年3月在该院进行手术治疗的78例鼻咽癌患者癌组织、癌旁组织标本进行免疫组织化学染色,检测各组标本组织中AnnexinA7、ERCC1、HLA-F表达情况,分析AnnexinA7、ERCC1、HLA-F在鼻咽癌演进过程中的表达水平。结果癌组织中AnnexinA7、ERCC1、HLA-F表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。AnnexinA7、ERCC1、HLA-F在不同性别、年龄的鼻咽癌中表达水平无统计学差异(P>0.05);在不同组织学类型、T分期、N分期差异具有统计学意义(P<0.05)。与Ⅱ期鼻咽癌患者比较,Ⅲ、Ⅳ期管鼻咽癌患者AnnexinA7、ERCC1、HLA-F表达水平明显升高(P<0.05);与Ⅲ期鼻咽癌患者比较,Ⅳ期管鼻咽癌患者AnnexinA7、ERCC1、HLA-F表达水平明显升高(P<0.05)。与AnnexinA7、ERCC1、HLA-F单一指标检测比较,AnnexinA7、ERCC1、HLA-F联合检测对鼻咽癌的预测价值明显增高(P<0.001)。对鼻咽癌组织中AnnexinA7、ERCC1、HLA-F表达相关性进行分析,鼻咽癌组织中AnnexinA7与ERCC1、HLA-F表达水平呈正相关(r=0.537、0.652,P=0.001);ERCC1与HLA-F表达水平呈正相关(r=0.479,P=0.001)。结论AnnexinA7、ERCC1、HLA-F在鼻咽癌患者中表达水平明显升高,且与肿瘤的分期、淋巴结转移有关,三者可能共同参与了鼻咽癌的发生、发展过程。 展开更多
关键词 鼻咽癌 癌组织 膜联蛋白A7 核苷酸切除修复交叉互补基因1 人类白细胞抗原f
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力学定理探讨
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作者 闫赤元 《办公自动化》 2018年第14期21-23,共3页
本文通过相对论中质速关系式m=m_0/√[1-(v/c)~2]和万有引力定律在实际运用分析,并结合E=mc^2进一步分析得出新的质速关系式◎v=◎_0(1+v1/c^2)v。当v1=1米/秒,则有v趋近于c时lim◎v=e◎_0(e为常数)。这一结论否定了爱因斯坦关于物体的... 本文通过相对论中质速关系式m=m_0/√[1-(v/c)~2]和万有引力定律在实际运用分析,并结合E=mc^2进一步分析得出新的质速关系式◎v=◎_0(1+v1/c^2)v。当v1=1米/秒,则有v趋近于c时lim◎v=e◎_0(e为常数)。这一结论否定了爱因斯坦关于物体的运动速度趋近于光速时,质量无限制增大的结论。在对物体相互作用分析中发现物体间相互作用存在两种力,一种是作用物体所施的力,另一种是被作用物体所受的力。物体在运动学中,由于速率变化,施力物体的性质,决定了受力物体所受力永远不存在恒定。从而得出被作用物体的加速度表达式为a(v)=(m/△t)(V_0-v)/◎_0(1+v_1/c^2)v进而得出受力物体所受力的表达式F(v)=◎va(v),为今后用力学研究物质运动准备了新的工具。 展开更多
关键词 质速关系式m=m0/√[1-(v/c)^2] 万有引力定律 质能关系式E=mc^2 作用力f=(m/△t)V0 被作用受力fV=(m/△t)(V0-v) 新的质速关系式◎v=◎0(1+v1/c2)^v 新加速度表达式a(v)=(m/△t)(V0-v)/◎0(1+v1/c2)^v 新力学定理表达式f(v)=◎va(v)
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