CRABP-Ⅱ、FABP-5在颅咽管瘤中的表达

目的检测颅咽管瘤中CRABP-Ⅱ、FABP-5的表达,分析其与颅咽管瘤关系,探讨维甲酸靶向治疗颅咽管瘤的分子机制.方法采用荧光免疫组织化学技术(Fluorescent Immunostaining)分别检测39例AE、10例SP两种亚型颅咽管瘤及20例正常脑组织中CRABP-Ⅱ、FABP-5蛋白表达情况,分析2种类型颅咽管瘤细胞及正常脑组织细胞中其表达有无差异.结果 (1)49例颅咽管瘤与20例正常脑组织中CRABP-Ⅱ,FABP-5的表达差异无统计学意义(P>0.05);(2)在颅咽管瘤亚型中CRABP-Ⅱ及FABP-5表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 CRABP-Ⅱ、FABP-5不能作为RA作用颅咽管瘤细胞的靶点,CRABP-Ⅱ/FABP-5稳态在本实验中不存在.

FABP-5基因沉默对宫颈癌SiHa细胞生物学特性的影响

背景:研究发现肿瘤相关基因以及肿瘤基因通路的改变在肿瘤的形成与发展中起重要作用。目的:探讨siRNA干扰技术沉默FABP-5基因表达对人宫颈癌SiHa细胞生物学特性的影响。方法:以人宫颈癌SiHa细胞为研究对象,根据FABP-5 mRNA编码序列设计并合成干扰si RNA序列,瞬时转染SiHa细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测FABP-5基因的表达;流式细胞技术检测各组细胞周期的变化;CCK-8法测定细胞体外增殖能力;细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力;TUNEL染色检测各组细胞的凋亡情况。结果与结论:与转染空病毒阴性对照组和未转染空白对照组比较,FABP-5 siRNA组FABP-5 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G_0/G_1期,S期细胞数减少,细胞侵袭力显著下降,细胞凋亡率明显升高。结果说明siRNA技术可以成功诱导FABP-5基因沉默,从而影响宫颈癌SiHa细胞的的生长、增殖和凋亡。

双向调控FABP-5表达对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的经过临床病理学标本检测人卵巢癌组织表皮型脂肪酸结合蛋白(FABP)-5蛋白异常高表达后,探讨上调和下调FABP-5基因表达对卵巢癌细胞株SKOV3细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测30例卵巢癌及癌旁组织中FABP-5 mRNA和蛋白表达水平,通过电穿孔法分别将FABP-5 siRNA和重组表达载体pcDNA3.1-FABP-5转染卵巢癌SKOV3细胞后,G418筛选得到稳定转染细胞系。转染48 h后采用RT-PCR和Western印迹行细胞中FABP-5 mRNA和蛋白检测,细胞计数试剂盒(CCK)-8检测细胞增殖,克隆形成实验观察上调和下调FABP-5表达对卵巢癌细胞株SKOV3的放射敏感性的影响,末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;裸鼠移植瘤实验检测调节FABP-5表达联合X射线照射对卵巢癌细胞的影响。结果 FABP-5蛋白在人卵巢癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),FABP-5下调组SKOV3细胞FABP-5基因水平明显降低(P<0.05),FABP-5上调组明显升高(P<0.05)。FABP-5下调组SKOV3细胞放射敏感性显著升高(P<0.05),FABP-5上调组SKOV3细胞放射敏感性显著降低(P<0.05)。FABP-5下调组SKOV3细胞增殖被显著抑制,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);FABP-5上调组SKOV3细胞凋亡率显著降低(P<0.05),FABP-5下调组较对照组裸鼠移植瘤平均体积明显缩小(P<0.05);FABP-5上调组较对照组裸鼠移植瘤平均体积明显增大(P<0.05)。20 Gy X射线照射后FABP-5下调组瘤体平均体积较照射前明显减小(P<0.05);而上调组裸鼠种植瘤平均体积较照射前变化不大(P>0.05)。结论下调FABP-5表达能抑制人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体的放射敏感性,上调FABP-5表达则使肿瘤辐射抗拒。

沉默FABP-5基因对人肝癌HepG2细胞的影响

目的:研究RNA干扰技术的重组慢病毒载体沉默人肝癌Hep G2细胞中表皮脂肪酸结合蛋白-5(fatty acid binding protein-5,FABP-5)基因对其增殖、凋亡和侵袭力的影响及作用机制.方法:构建3个靶向FABP-5基因sh RNA载体,并筛选出最有效的靶点.将Hep G2细胞分为3组:实验组用FABP-5基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-sh RNA-FABP-5)感染HepG2细胞;阴性对照组用空载慢病毒颗粒(LV-sh RNANC组)感染Hep G2;空白对照组正常培养.应用RT-PCR、实时荧光定量PCR检测FABP-5基因m RNA的表达;Western blot技术检测各组细胞FABP-5蛋白的相对表达;MTT法测定细胞体外增殖能力;Giemsa染色法检测细胞的克隆形成;细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力;流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞增殖和凋亡的变化情况.结果:通过测序验证构建的FABP-5-shRNA表达载体,感染人肝癌HepG2细胞,荧光显微镜观察到细胞感染率>90%.Real-time PCR和Western blot结果得出:相比空白对照组和阴性对照组,实验组的3种靶点FABP-5-sh RNA干扰序列中,LV-sh RNA-FABP-5(1)靶点中FABP-5表达的敲减率最高(P<0.05),筛选出此组为最佳靶点;MTT法结果提示:实验组细胞490 n m处的吸光度(A)值在转染后第1-5天时均低于阴性对照组、空白对照组,差别有统计学意义(P<0.05).Giemsa染色法结果显示:稳定转染Hep G2细胞后细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);细胞侵袭小室实验显示:与空白对照和阴性对照组相比,实验组细胞的侵袭力明显受到抑制(P<0.05);流式细胞技术检测发现实验组的细胞相对于阴性对照组出现了明显的凋亡(P<0.05).实验组较阴性对照组、空白对照组G2/M期延长,G1期缩短,差别具有统计学意义(P<0.05).结论:人肝癌Hep G2细胞中沉默FABP-5基因可以有效抑制其表达,能够降低肝癌细胞的侵袭力,抑制肝癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G2/M期,使其凋亡显著增加.

黄药子醇提物对人胃癌细胞凋亡及FABP-5表达的影响

目的:探讨黄药子醇提物对人胃癌MGC-803细胞的侵袭、凋亡及FABP-5表达的影响。方法:制备黄药子醇提物,以人胃癌细胞MGC-803细胞为研究对象,根据细胞培养液所含黄药子醇提物的不同浓度,将实验分为空白对照组(等量无菌水)、黄药子醇提物低浓度组(60 mg/L)和高浓度组(120 mg/L)。分别以CCK-8法检测体外细胞增殖能力;流式细胞技术观测细胞周期及凋亡的情况变化;TUNEL染色观察各组细胞的凋亡情况;细胞侵袭小室法观测体外细胞的侵袭力变化,以RT-PCR法和Western blot法从mRNA水平和蛋白水平对FABP-5基因的表达进行检测,每组实验重复3次。结果:黄药子醇提物高浓度组和低浓度组MGC-803细胞的生长速度明显减缓,G1期细胞比例降低,S期和G2/M期比例增高;与空白对照组相比,高浓度组和低浓度组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01),增殖、侵袭能力显著下降(P<0.05),高浓度组和低浓度组细胞相比促进凋亡和抑制FABP-5表达的作用更明显(P<0.05)。RT-PCR和Western blot显示,黄药子醇提物高浓度组和低浓度组较空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白表达都明显下降。结论:黄药子醇提物可加快人胃癌MGC-803细胞的凋亡,抑制其增殖力和侵袭能力,并对FABP-5 mRNA和蛋白的表达起到抑制作用,提示此机制可能使其参与了抗肿瘤的作用。

FABP-5基因沉默联合放疗对人食管癌细胞株EC9706的抑制作用

目的探讨脂肪酸结合蛋白-5(fatty acid binding proteins-5, FABP-5)基因沉默联合放疗对人食管癌细胞株EC9706的影响。方法根据FABP-5 mRNA编码序列设计并合成干扰SiRNA序列,转染入EC9706细胞,实验分为四组:空白对照组(Control)、转染FABP-5沉默组(FABP-5-SiRNA)组、放疗组(RT)、转染FABP-5沉默组+放疗组(FABP-5-SiRNA+RT)。免疫组织化学染色检测FABP-5在人食管癌组织的表达情况,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测FABP-5、Caspase-3蛋白表达。结果 FABP-5在人食管癌组织呈高水平表达。与Control组相比,FABP-5-SiRNA组、RT组、FABP-5-SiRNA+RT组三组抑制率、凋亡率及Caspase-3蛋白表达依次增加,且FABP-5-SiRNA+RT组对细胞的抑制作用最明显(P<0.01)。结论 FABP-5基因沉默联合放疗对人食管癌细胞株EC9706的生长有协同抑制作用,与促进细胞凋亡有关。