SYVN1介导FASN泛素化降解促进骨肉瘤细胞失巢凋亡

目的探讨FASN在骨肉瘤远处转移过程中受调控的机制。方法应用骨肉瘤失巢凋亡抵抗模型,通过在线预测、蛋白组学测序以及CO-IP实验等,筛选出与FASN相互作用的E3连接酶;Western blot、泛素化实验检测FASN蛋白的泛素化水平;应用流式细胞术,肿瘤成球实验、裸鼠原位骨肉瘤肺转移模型等,探讨FASN泛素化在骨肉瘤远处转移中的调控机制。结果FASN在失巢凋亡抵抗细胞中泛素化水平降低而表达升高,预测结果提示SYVN1是FASN泛素化的E3连接酶;过表达SYVN1可以诱导骨肉瘤细胞失巢凋亡,并降低骨肉瘤原位成瘤和远处转移能力。结论E3连接酶SYVN1在骨肉瘤失巢凋亡抵抗过程中降低,导致FASN泛素化下降而表达升高,过表达SYVN1可抑制骨肉瘤进程。

AZGP1通过FASN/Wnt/β-catenin通路对食管鳞癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的探究锌-α2-糖蛋白1(AZGP1)对食管鳞癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的调控作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测AZGP1在人正常食管上皮细胞(Het-1A)和人食管鳞癌细胞(TE11、EC9706、HCE7、EC109、KYSE150)中的表达。构建AZGP1过表达质粒并转染至EC9706细胞,分为对照组、过表达对照组(Ov-NC组)、AZGP1过表达组(Ov-AZGP1组);将AZGP1过表达质粒与脂肪酸合酶(FASN)过表达质粒共转染至EC9706细胞或将AZGP1过表达质粒单独转染至经Wnt通路激活剂Wnt agonist 1处理的EC9706细胞,分为对照组、Ov-AZGP1组、Ov-AZGP1+Ov-FASN组、Ov-AZGP1+Wnt agonist 1组。。CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖;TUNEL实验检测细胞凋亡;CCK-8法和TUNEL实验检测顺铂和5-氟尿嘧啶化疗敏感性;Western blotting检测凋亡及FASN/Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果AZGP1在食管鳞癌细胞中表达降低(P<0.05),AZGP1过表达可抑制细胞增殖(P<0.05)、促进细胞凋亡(P<0.05)并增加顺铂和5-氟尿嘧啶化疗敏感性(P<0.05)。AZGP1过表达可抑制FASN/Wnt/β-catenin信号通路(P<0.05),FASN过表达或Wnt agonist 1可逆转AZGP1对EC9706细胞增殖(P<0.05)、凋亡(P<0.05)及化疗敏感性的作用(P<0.05)。结论AZGP1可通过抑制FASN/Wnt/β-catenin通路进而抑制食管鳞癌细胞增殖、诱导细胞凋亡并增加化疗敏感性。

贵州黑山羊不同肌肉组织FASN基因表达与肌内脂肪含量相关性分析

为探究FASN基因在贵州黑山羊不同肌肉组织中调控脂肪沉积的作用,采集12月龄公、母贵州黑山羊胸肌、背最长肌、肱三头肌、臂股二头肌,运用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测FASN基因表达量,酸水解法测定肌内脂肪(IMF)含量,并通过Pearson分析FASN基因表达量与IMF含量相关性。结果显示,FASN基因在公、母羊不同组织中表达量均为臂股二头肌>胸肌>肱三头肌>背最长肌,其中公羊臂股二头肌显著高于背最长肌,母羊臂股二头肌极显著高于背最长肌;相同组织比较,母羊胸肌、肱三头肌、臂股二头肌表达量均高于公羊,背最长肌表达量低于公羊,但均未达到差异显著水平。IMF含量测定发现,公、母羊4个组织中IMF含量均为臂股二头肌>胸肌>肱三头肌≥背最长肌,同性别各组织之间比较差异不显著;相同组织比较,母羊4个组织中IMF含量均高于公羊。FASN基因表达量与IMF含量相关性分析表明,公、母羊FASN基因表达量与胸肌IMF含量呈正相关,与背最长肌、肱三头肌、臂股二头肌IMF含量呈负相关。

德宏奶水牛FASN基因乳腺组织表达及生物信息学分析

【目的】研究德宏奶水牛乳腺组织FASN基因表达水平及水牛FASN蛋白的生物学特性。【方法】用乳成分分析仪测定乳脂率,并按照乳脂率将德宏奶水牛分为高(H)、中(M)、低(L)组;运用qPCR法测定乳腺组织FASN基因的表达水平,分析其与乳脂率的相关性;运用生物信息学方法分析水牛FASN蛋白的理化性质及结构特征。【结果】H组德宏奶水牛乳腺组织的FASN基因表达水平极显著高于L组和M组(P<0.01),M组极显著高于L组(P<0.01),其mRNA表达水平与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。水牛FASN蛋白的分子式为C_(12188)H_(19327)N_(3363)O_(3631)S_(109),分子质量为274.56 ku,蛋白不稳定;在细胞内主要分布于细胞核;具有2个结构域,均与脂类合成代谢有关;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主;进化树及同源性分析显示:水牛FASN蛋白与牦牛和家牛的亲缘关系较近,序列同源性较高;FASN主要与ACACB、ACACA和ACLY互作较为紧密。【结论】德宏奶水牛乳腺组织中FASN基因表达可能促进乳脂率提高。

脑膜瘤FASN、HER-2的表达与术后复发的关系

目的探讨脑膜瘤脂肪酸合成酶(FASN)、人表皮生长因子受体2(HER-2)的表达与术后复发的关系。方法回顾性分析2017年9月至2020年9月手术治疗的121例脑膜瘤的临床资料。免疫组化染色检测脑膜瘤组织FASN和HER-2表达水平,术后1年复查影像学检查判断肿瘤复发情况。结果121例中,WHO分级2级84例,3级37例;术后肿瘤复发52例(43.0%),未复发69例。复发组脑膜瘤组织FASN、HER-2表达水平明显高于未复发组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,FASN、HER-2高表达是间变性脑膜瘤术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论间变性脑膜瘤FASN、HER-2呈高表达,与术后复发相关。

基于网络药理学分析丹参抑制FASN表达治疗膀胱癌的分子机制研究

目的应用网络药理学思路与方法研究丹参的有效成分及潜在分子靶点,揭示丹参治疗膀胱癌的分子机制。方法研究时间为2022年1月至2023年6月。基于中药系统药理学数据库分析平台(TCMSP)分析丹参中生物利用度(OB)≥30%,类药性指数(DL)≥0.18的活性成分,进而获得活性成分的下游靶点进行基因本体论(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能富集分析,并纳入癌症基因图谱(TCGA)数据库中膀胱癌数据集进行风险回归分析,结合风险基因表达水平与生存预后信息筛选丹参在膀胱癌中的潜在治疗靶点,并在膀胱癌细胞系中进行验证与体外治疗实验。结果丹参中65个活性成分可作用于下游270个靶蛋白,其功能富集分析集中在氮代谢、膀胱癌、内分泌抵抗、前列腺癌、神经活性配体-受体相互作用等通路上,提示丹参具备治疗膀胱癌的潜力,膀胱癌患者测序数据显示其中44个基因在膀胱癌中具有预后价值(P<0.05),研究进一步基于其中18个基因成功构建了风险回归模型[曲线下面积(AUC)=0.819],结合基因在癌与癌旁中的表达水平筛选获得MMP9、MAOA、PSMB5、HCAR及脂肪酸合成酶(FASN)作为丹参治疗膀胱癌的分子靶点,其中的FASN风险系数最高(core=0.007412)。细胞实验表明FASN在膀胱癌细胞系J82中表达明显增高,而经过丹参(IC50=10 mg/L)处理后,膀胱癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力均明显减弱,且FASN蛋白也表达减少。结论本研究揭示了丹参的有效活性成分及其治疗膀胱癌的分子靶点,为临床应用丹参治疗膀胱癌提供了必要的实验依据与理论基础。

α-常春藤皂苷调控SREBP1/FASN通路抑制非小细胞肺癌的恶性表型

目的探讨α-常春藤皂苷对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的调控作用及其相关分子机制。方法采用梯度浓度α-常春藤皂苷分别处理A549和HCC-1833细胞24和48 h后,CCK8法检测细胞活力值(OD_(450nm))并计算半数抑制浓度(IC50)。根据IC50值将A549细胞和HCC-1833细胞分为空白对照组和α-常春藤皂苷组。EdU试剂盒检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Transwell检测细胞迁移率,划痕实验检测细胞侵袭率,Western blot检测SREBP1和FASN蛋白表达水平,油红O染色检测细胞脂质积累。结果肺癌细胞的存活率随α-常春藤皂苷的浓度升高显著降低,48 h对应的A549细胞和HCC-1833细胞的IC50分别为15μg/ml和25μg/ml。与对照组相比,α-常春藤皂苷处理后,细胞的增殖、迁移被显著抑制,细胞阻滞于G1/S期,细胞凋亡率增加,SREBP1和FASN的蛋白表达和细胞脂质积累都显著降低。结论α-常春藤皂苷可抑制NSCLC细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G1/S期,通过下调SREBP1和FASN的表达,减少细胞脂质积累,阻碍非小细胞肺癌恶性进程。

鸡FASN基因2个位点的多样性及其与体重、脂肪沉积性状的相关性

研究了脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FASN)基因最后1个内含子2个突变的多样性,并运用资源参考家系研究了这2个突变对鸡体重、脂肪沉积性状的影响,结果表明:(1)红色原鸡HaeⅢ-PCR-RFLP位点B基因频率为最高(0.85),泰和鸡及余干乌黑鸡为最低(0.21),品种间差异较大,但未发现肉用与蛋用鸡种间的差异;在PstI-PCR-RFLP位点上,A基因频率在崇仁麻鸡中表现为最高(0.5),在裸颈鸡为最低(0.19),品种间差异较小。(2)HaeⅢ-PCR-RFLP位点表现为CC型个体体重最小,大部分阶段有显著性差异(P<0.05);PstI-PCR-RFLP位点表现为差异不显著。2位点合并基因型中,以BC/GG体重为最高,大部分阶段有显著性差异(P<0.05)。(3)HaeⅢ-PCR-RFLP位点表现为BB型比其它基因型有更强的脂肪沉积能力(P<0.05),而PstI-PCR-RFLP位点不同基因型间未表现出脂肪沉积能力的差异,合并基因型中以BB/GG脂肪沉积能力最强(P<0.05)。(4)2位点在脂肪沉积和体重上均表现一定的互作效应。

FASN基因与牦牛肌内脂肪酸组成的相关性研究

为研究牦牛肌肉中脂肪酸组成特征及其形成机制,以牦牛和黄牛背最长肌为材料,利用气象色谱-质谱联用仪(GC-MS)进行脂肪酸的定性定量分析,并通过Real-time PCR技术检测FASN基因在牦牛和黄牛背最长肌中mRNA的表达水平,同时分析了其与脂肪酸组成的相关性。结果发现,牦牛背最长肌中单不饱和脂肪酸(MUFA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)含量均极显著高于黄牛(P<0.01),而饱和脂肪酸(SFA)显著低于黄牛(P<0.05)。牦牛背最长肌中FASN基因的mRNA表达水平极显著高于黄牛(P<0.01)。牦牛FASN基因mRNA表达量只与牦牛C10:0呈极显著正相关(P<0.01),与黄牛脂肪酸组成无显著的相关性(P>0.05)。

中国荷斯坦牛FASN基因部分序列PCR-SSCP多态性与泌乳性状的相关性

【目的】研究奶牛脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FASN)基因多态性对产奶量和乳成分的影响,为中国荷斯坦牛的优化育种提供相应的分子遗传学依据。【方法】以464头中国荷斯坦牛为研究材料,参照奶牛生产性能测定(Dairy herd improvement,DHI)方法采集产奶量和乳成分数据;采集试验牛血样,提取DNA,PCR扩增FASN基因,用单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)技术并结合测序确定基因型;用最小二乘法进行基因多态性与泌乳性状的关联性分析。【结果】FASN基因外显子34存在2个等位基因、2种基因型,A、B等位基因频率分别为0.813 9和0.186 1,试验群体在这一位点上极显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.01),遗传杂合度(He)和多态信息含量(PIC)分别为0.372 3和0.257 0。测序结果显示,与普通黄牛FASN基因序列(GenBank登录号:AF285607)相比,B等位基因在第16 024和16 039位核苷酸处分别发生了A→G和C→T碱基突变,其中A→G突变导致苏氨酸变成丙氨酸,C→T突变导致精氨酸变为色氨酸;A等位基因与AF285607序列相同。最小二乘法分析表明,AA型个体305d乳脂量显著高于AB型个体(P<0.05),等位基因A为高乳脂量优势基因。【结论】FASN基因外显子34突变位点可作为高乳脂的分子遗传标记应用于中国荷斯坦牛的标记辅助选择育种中。

中国荷斯坦奶牛FASN基因遗传多样性及其与泌乳性能的相关性分析

哺乳动物脂肪酸合成酶(FASN)基因在脂肪酸合成中起至关重要的作用。研究利用PCR-SSCP方法检测109头中国荷斯坦奶牛FASN基因第2、4、26、34外显子遗传多态性,并对多态性与泌乳性状进行相关性分析。结果表明:仅第34外显子(g.16009)存在A/G多态性,其余3个外显子均未发现多态性;第34外显子有2个等位基因为A(突变点为G)/B(突变点为A),基因频率0.8802/0.1198;最小二乘分析表明,第34外显子不同基因型对乳脂率、体细胞评分(SCS)效应显著(P<0.05)。为进一步探索牛奶中乳脂率调控机制奠定一定基础。

惠阳胡须鸡LPL、FASN基因多态性的研究

以惠阳胡须鸡为研究对象,分别以LPL、FASN基因为脂肪性状相关的候选基因,采用限制片段长度多态性(RFLP)检测这2个候选基因在惠阳胡须鸡中的多态性。研究结果表明,(1)用限制性内切酶HinfⅠ对LPL基因第8内含子进行RFLP分析,发现76.3%为已报道的BB型,另发现了两种新的基因型,分别占1.7%和22%,无AA型;(2)用限制性内切酶HaeⅢ对FASN基因进行RFLP分析,发现BB基因型比例为64.8%,BC型12.24%,CC型基因型比例23.4%。B等位基因频率为0.7041,C等位基因频率为0.2959,B等位基因频率明显高于C等位基因频率。

延边黄牛和延黄牛脂肪组织FASN基因mRNA表达水平与肉质的关系

为了探讨不同品种牛不同脂肪沉积部位FASN基因mRNA表达水平与肉质的关系,采用荧光定量PCR技术检测延边黄牛和延黄牛皮下脂肪、腹部脂肪、肾周脂肪与其他器官的FASN基因mRNA表达水平。结果表明,2个牛品种的FASN基因mRNA在不同脂肪组织中表达量均高于背最长肌,而延黄牛皮下脂肪和腹部脂肪中FASN基因mRNA表达量都高于延边黄牛。通过对肺、小肠、肾脏、肝脏和心脏中FASN基因mRNA研究发现,延边黄牛和延黄牛肺中FASN基因mRNA的表达量高于其他脏器。由此可见,FASN是影响脂肪酸合成的关键酶,与肉质相关,其中皮下脂肪和腹部脂肪是脂肪酸合成的主要部位。

牦牛FASN基因多态性及其与肉质性状的相关性研究

利用PCR-SSCP技术,对甘南牦牛、大通牦牛和天祝白牦牛的FASN基因第3内含子进行SNPs筛选,并将筛选到的突变位点与牦牛部分肉质性状进行相关性分析。结果发现,3个牦牛群体在第3内含子检测到g.5477 C→T的突变,由此产生3种基因型:HH、HG、GG。相关性分析表明,HH基因型和HG基因型个体的脂肪含量显著高于GG基因型个体(P<0.05)。HH、HG、GG 3种基因型对失水率、熟肉率、pH24值和剪切力的影响差异不显著(P>0.05)。

脂肪酸合成酶基因(FASN)的研究进展

在哺乳动物中,脂肪酸合成酶在脂肪酸合成中起着至关重要的作用。它含有7个活性位点,在还原型辅酶Ⅱ的存在下,FASN负责乙酰辅酶A(acetyl-CoA)和丙二酰辅酶A(malonyl-CoA)从头合成一种长链软脂酸(棕榈酸酯)的所有催化步骤。脂肪酸合成酶是脂肪合成的关键酶,并且在腹脂肪组织重变异及相关性状变异中起着重要作用。综述了FASN及其基因在生命活动中的地位、作用、定位、结构及FASN基因的遗传变异与生产性状关系的研究进展。

中国荷斯坦牛FASN基因单核苷酸多态性对脂肪酸含量的影响

奶牛脂肪酸合成酶(FASN)在乳脂肪酸合成中起至关重要的作用。本研究利用PCR-SSCP方法检测了318头中国荷斯坦牛FASN基因第2、4、26、34外显子的单核苷酸多态性(SNP),并对FASN基因SNP对脂肪酸含量的影响进行分析。结果表明仅第34外显子(g.16009)存在A/G多态性,基因频率分别为0.4481和0.5519,其基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。方差分析表明,FASN基因SNP对短链脂肪酸相对含量有显著影响(P<0.05),AA和AB基因型短链脂肪酸相对含量显著高于BB型。该结果为奶牛脂肪酸合成的调控和选种、选育提供了理论基础。

FASN基因的功能及调控机制研究进展

脂肪酸合酶(Fatty Acid Synthase,FASN)是哺乳动物脂肪酸合成过程中的关键酶,在机体复杂的代谢调控过程中起着极其重要作用。以往有关其功能及作用机制的研究多集中于转录组mRNA水平,而随着现代分子生物学技术的发展,真核生物转录后水平的基因表达调控越来越受到人们的关注。在综述了近些年FASN基因参与调控家畜乳脂、肉质、脂肪沉积等生产和屠宰性状,以及人类癌症发生、发展的基础上,对该基因在转录和转录后水平上的表达调控机制研究进行总结,为FASN基因影响机体生长发育的网络调控机制研究提供依据。

miR-143通过靶向FASN抑制肝癌HepG2细胞脂质形成

目的研究miR-143对肝癌Hep G2细胞脂质形成的影响及其分子机制。方法应用qRT-PCR方法检测miR-143在临床肝癌和癌旁组织以及肝癌细胞系和正常肝细胞系中的表达。通过油红O染色实验检测miR-143对肝癌细胞脂质形成的影响。Western blotting检测miR-143对肝癌细胞中脂肪酸合成酶(FASN)表达的影响。通过报告基因实验检测miR-143及其抑制子对报告基因载体FASN-CDS活性的影响。结果 qRTPCR结果表明在临床肝癌组织和Hep G2细胞中miR-143的表达显著低于癌旁组织和Chang liver肝细胞系(P<0.01)。油红O染色实验结果显示,miR-143能显著降低肝癌细胞中脂质的形成。qRT-PCR和Western blotting结果证实,miR-143可以显著下降FASN的mRNA和蛋白表达水平。报告基因检测结果表明,在Hep G2细胞中miR-143可以显著降低FASN-CDS报告基因的活性(P<0.01);相反,miR-143抑制子可以显著升高FASN-CDS的活性(P<0.01)。在Hep G2细胞中miR-143抑制子可以上调FASN的表达并促进脂质形成。结论 miR-143可以通过抑制FASN的表达阻碍肝癌细胞脂质形成。

鸽FASN基因的部分序列测定及其与家鸡同源序列的比较

以鸡的FASN基因序列为参照,通过设计和合成引物扩增出鸽的FASN基因片段,应用基因工程技术通过与pMD18-T载体重组,转化E.coliDH5α感受态细胞,蓝白斑法和PCR法双重鉴定筛选出阳性克隆,进行测序,并将测定的序列与genebank中的鸡FASN基因序列进行比对,结果表明,扩增、测定的鸽FASN基因序列片段长1281bp,GC含量42.00%,AT含量58.00%.测序片段为鸽FASN基因序列的最后一个内含子片段.鸽序列与基因库中家鸡同源序列的保守性为60.52%,比鸡同源序列少154个碱基.

基于SWChen系统预测靶向林麝(Moschusberezovskii)FASN、HMGCR和CYP11A1基因miRNAs的研究

【目的】预测靶向林麝(Moschus berezovskii)FASN、HMGCR和CYP11A1基因的miRNAs,为麝香的生物合成机制研究提供参考。【方法】通过林麝麝香的代谢组学测序,获取麝香中的主要化学组分,确定相应化学组分合成的关键酶;通过转录组测序获取林麝基因mRNA序列及miRNAs序列,利用自主编写的离线SWChen系统对调控关键酶基因表达的miRNA进行预测,并以人FSAN基因对系统准确性进行验证,同时以牛(Bos taurus)、山羊(Capra hircus)和绵羊(Ovis aries)预测结果进行比较和集合论分析,获取调控林麝基因的候选miRNAs。【结果】麝香的化学成分主要包括脂肪酸碳链类衍生物、芳香族、固醇类和甾类等衍生物质;预测调控FASN基因表达的miRNA主要为miR-24-3p和miR-30b-3p,调控HMGCR基因表达的为miR-29b、miR-146a、miR-181b-3p和miR-429家族,调控CYP11A1基因表达的为miR-532-3p和let-7家族,共同调控3个基因表达的主要为miR-205家族和miR-143家族。【结论】上述miRNAs为靶向调控林麝FASN、HMGCR和CYP11A1基因表达的候选miRNAs,对解析林麝麝香的生物合成机制具有参考价值。