单克隆抗体竞争ELISA和FAVN检测狂犬病病毒免疫抗体的对比

为对比狂犬病荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和单克隆抗体竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的相关性,用2种血清抗体检测方法分别检测在深圳市收集的798份宠物犬血清样品,利用McNemar检验和Kappa一致性检验对比研究2种方法的检测结果。结果显示:以FAVN方法检测结果为标准,单克隆抗体竞争ELISA方法的符合率为96.7%(95%CI:95.3%~97.8%),敏感性为97.6%(95%CI:96.2%~98.5%),特异性为84.9%(95%CI:72.9%~92.7%),约登指数为0.825。经McNemar检验,2种血清抗体检测方法的检测结果差异不具有统计学意义(P=0.078>0.05);经Kappa一致性检验,2种血清抗体检测方法检测结果不一致是小概率事件(P<0.001),且两者的检测结果一致性高(Kappa系数=0.758)。结果表明,用单克隆抗体竞争ELISA方法代替FAVN用于犬狂犬病病毒免疫抗体的大规模监测具有一定的可行性。

ELISA与FAVN方法检测犬狂犬病抗体的比较

比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与细胞培养病毒中和试验(FAVN)检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体。将40只犬免疫兽用狂犬病疫苗后,第14d静脉采血分离血清,分别采用ELISA法和国际贸易指定试验FAVN法检测血清样品,试验犬免疫第21d攻击狂犬病毒BD06株。结果表明,两种方法检测结果差异不显著(p≥0.05,p=0.19),FAVN、ELISA法检测狂犬病抗体与攻毒试验结果的阳性符合率均为100%。

RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒对狂犬病抗体检测的比较研究

为了比较RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒(RVNA Kit)等四种方法对狂犬病抗体的检测效果,对65份狂犬病疫苗免疫前、免疫后临床血清样本,分别使用RFFIT、FAVN、ELISA及RVNA Kit方法对狂犬病病毒特异性抗体进行测定,并对检测结果的阳性符合率、相关性及重复性进行分析。检测结果显示,RFFIT、FAVN及RVNA kit的阳性符合率为100%,三种方法与ELISA试剂盒的阳性符合率为95.38%,对0.5IU/mL^10IU/mL的血清样本进行阳性符合率分析显示,四种方法的阳性符合率为100%;相关性研究结果表明,RFFIT、FAVN及RVNA Kit之间任意两种方法检测结果的相关系数均超过0.97,但ELISA与其他三种方法检测结果的相关系数均低于0.86;同一份样品的重复性检验结果显示,RVNA Kit和ELISA比RFFIT和FAVN具有更好的重复性,而RVNA Kit的重复性最好,其变异系数仅6%。研究结果表明,RFFIT、FAVN及RVNA Kit等三种方法可通用于血清中抗狂犬病病毒中和抗体的检测,而ELISA检测结果与中和抗体效价有一定差距,但在经过优化、校验后ELISA也可以在有效范围内用于狂犬病抗体的检测。

ELISA和FAVN检测广州地区家养犬狂犬病免疫水平的结果比较

2012-2013年随机采集广州9个区家养犬血清160份,采用ELISA、FAVN方法测定狂犬病病毒抗体效价,以比较免疫水平检测结果。结果显示,广州不同区家养犬的狂犬病病毒中和抗体平均水平存在着差异,最高达19.23±36.41,最低为0.45±0.09,平均抗体保护水平阳性率(≥0.5IU/mL)合格;ELISA与FAVN检测结果比较,检测结果阴、阳性判断方面一致性较高(阳性符合率为92.59%,阴性符合率为69.57%,总符合率为82.00%);在测定具体的抗体滴度方面仍有较大的差距,两种方法检测出的抗体滴度差异极显著(t=11.862,P<0.01)。

狂犬病中和抗体检测FAVN方法的建立、应用和CMA资质认证

狂犬病荧光抗体病毒中和试验(FAVN)为细胞水平的病毒中和试验,检测的敏感性、特异性和重复性均较好,是世界动物卫生组织(OIE)推荐进行动物狂犬病中和抗体定量检测的标准方法而广泛应用。本单位严格依照《OIE陆生动物检测与免疫手册》狂犬病章节的2.1.13.2.a,建立了动物狂犬病荧光抗体病毒中和试验(FAVN)方法,内部稳定运行后,又依据相关要求,先后3次与长春兽医研究所OIE狂犬病参考实验室进行平行比对,符合率100%,重复性良好。并以此获得广东省质量技术监督局实验室资质认定证书(CMA),FAVN方法正式纳入本单位的CMA资质检测项目,可面向社会出具相应资质检测报告,为狂犬病综合防控,临床检测等提供帮助和服务。

猪瘟抗体检测技术的研究现状及发展趋势

简要叙述了FAVN、NPLA、ELISA、兔体中和等猪瘟抗体检测技术的原理及其应用现状,并通过对猪瘟抗体检测技术发展趋势的介绍,显示了猪瘟参考血清等相关标准物质在猪瘟抗体检测技术应用与发展中的价值及其今后的发展前景。

狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒的初步应用

以灭活纯化的狂犬病毒SRV9株作为包被抗原，制备了5批次狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒中试产品。与FAVN法、商品化进口试剂盒相比，该试剂盒与二者总符合率为90.80%和94.25%，且敏感性较高。5批次试剂盒批内变异系数为1.47%~8.34%，批间变异系数为2.05%~8.64%，说明该试剂盒重复性良好，可用于血清中狂犬病毒抗体常规检测。

我国部分城乡犬狂犬病中和抗体水平调查

以国际兽疫局(OIE)推荐的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对随机采自广东、河北、北京等地区的573份犬血清进行了狂犬病病毒中和抗体效价的测定,以确定犬群中狂犬病的免疫状况。结果显示,在不同地区或不同城市的动物防疫区域中,犬体内狂犬病病毒中和抗体平均水平存在着明显的差异,城市犬的中和抗体水平较高,有的中和抗体保护水平(0.5IU/mL)阳性率高达100%,少数则达不到保护水平,不同防疫区域狂犬病中和抗体水平为(0.08±0.03)^(4.39±1.45)IU/mL,平均保护水平阳性率为46.3%;乡村看家犬病毒中和抗体水平普遍较低,大部分犬体内无中和抗体,只有个别犬体内存在水平较低的中和抗体,平均保护水平阳性率为1.8%。

应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平的探讨

为了解应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测犬狂犬病抗体水平的效果,对东莞市采集的54份犬血清应用ELISA进行检测,采用Synbiotics软件进行分析,同时将该批血清送至军事医学科学院军事兽医研究所作荧光抗体病毒中和试验(FAVN)比较。ELISA检出阳性数35份,阳性率为64.82%,与军事医学科学院军事兽医研究所的测定结果差异不显著,符合率为85.19%。证明应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平定性检测具有较高的准确率,适合在短时间内监测大批量的血清样品。

新型狂犬病病毒中和抗体检测方法的建立

目的建立一种安全、快速、经济的新型狂犬病病毒中和抗体的检测方法。方法在狂犬病病毒弱毒株HEP-Flury基因组Ψ区插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein eGFP)基因,利用反向遗传技术,拯救重组病毒rHEP-eGFP,分别采用荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定及电镜观察等方法对rHEP-eGFP病毒进行鉴定;分别绘制rHEP-eGFP和亲本毒株HEP-Flury的生长动力学曲线;将rHEP-eGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,测定各代次rHEP-eGFP的滴度,荧光显微镜下观察eGFP的表达;采用TCID50法检测狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11和rHEP-eGFP的毒力;以rHEP-eGFP病毒为抗原,建立新型荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibodyvirus neutralization,FAVN)-eGFP,对25份犬血清的抗体效价进行测定,并与标准FAVN检测结果进行比较。结果经荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定和电镜观察表明,成功拯救出rHEP-eGFP病毒;重组病毒rHEP-eGFP与亲本病毒HEP-Flury的生长特性相似;rHEP-eGFP连续传代9次,均能稳定表达eGFP;CVS-11的毒力为108TCID50/ml,rHEP-eGFP的毒力为107.3TCID50/ml;FAVN-eGFP与FAVN测定25份犬血清抗体效价的结果具有良好的一致性。结论建立的新型狂犬病病毒中和抗体检测方法(FAVN-eGFP)准确度高,特异性好。