在无血清条件下TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路对FBJ细胞生长的调控作用

目的研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)在无血清条件下作为生长因子促进FBJ细胞生长的信号通路。方法用细胞活性检测法分析细胞的活性;分别用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction,RT-PCR)法和免疫印迹法检测细胞中TNFα的表达以及胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk)、p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的磷酸化水平。结果在无血清培养基培养条件下,经TNFα(10μg.L-1)处理的FBJ细胞明显对抗无血清条件下诱发的细胞死亡,TNFαsense cD-NA转染的FBJ-LL和FBJ-S1细胞均能提高其在正常培养基以及无血清培养基中的生长速度,TNFα是FBJ细胞中重要的生长因子之一;蛋白酶N1(protein kinase N1,Pkn1)siRNA可明显沉默目的基因Pkn1的表达,同时降低TNFα的含量;Pkn1沉默的细胞在无血清条件下的生长明显被抑制;TNFα处理的细胞能迅速刺激Erk的磷酸化,Erk沉默的FBJ-LL细胞的生长速度明显降低,TNFα通过Erk信号通路诱发细胞生长;TNFα亦能诱导另一有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-ac-tivated protein kinase,MAPK)家族p38的磷酸化;神经节苷脂GD1a可降低TNFα在FBJ细胞中的表达,TNFα诱发的无血清条件下的生长速度也被神经节苷脂GD1a抑制。结论在无血清条件下,TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路调控小鼠骨肉瘤FBJ细胞的生长。

细胞质唾液酸酶(Neu2)通过Cdk2通路抑制FBJ-LL细胞生长

目的研究细胞质唾液酸酶(neuraminidase 2,Neu2)调控FBJ-LL细胞生长的作用机制。方法利用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞内Neu2及周期蛋白依赖性激酶2(cyclin dependent kinase 2,Cdk2)的mRNA表达水平,采用酶活性检测法检测细胞内总唾液酸酶的活性,细胞活性法检测细胞的生长情况,碘化丙啶染色法辅助流式细胞仪分析处于不同细胞周期的DNA含量分布。结果Neu2 sense cDNA转染的FBJ-LL细胞中Neu2 mRNA的表达显著升高,其总唾液酸酶的活性也随之升高。FBJ病毒诱导的小鼠骨肉瘤(FBJ-LL)细胞中Neu2的过量表达可以抑制该细胞的生长,升高该细胞中处于细胞周期G1期细胞的相对数量,同时抑制了该细胞中的Cdk2的mRNA表达水平。结论Neu2通过抑制细胞周期分子Cdk2的表达来阻碍FBJ-LL细胞DNA合成,从而实现对FBJ-LL细胞的生长抑制。

窖蛋白1在无血清状态下诱导FBJ细胞死亡

目的研究无血清状态下,FBJ-S1细胞较FBJ-LL细胞更易死亡的原因。方法用细胞活性检测法分析细胞的活性,分别用HPTLC法、逆转录PCR法和免疫印迹法检测细胞中GD1a和窖蛋白1(caveolin-1)的含量。结果研究表明,在无血清培养基培养条件下,富含神经节苷脂GM3和GD1a的低转移性的FBJ-S1小鼠骨肉瘤细胞趋向死亡,但对含有几乎相同量GM3而无GD1a表达的高转移性的FBJ-LL细胞的生长却未见明显影响。同时发现:a.FBJ-S1细胞富含窖蛋白1,而FBJ-LL细胞中窖蛋白1表达量则较低;b.利用小干扰基因沉默技术在FBJ-S1细胞中沉默窖蛋白1的表达,结果使细胞存活率升高;c.使用GD1a处理FBJ-LL细胞导致其趋向死亡,通过免疫印迹法检测窖蛋白1发现其蛋白表达量增加。结论在无血清培养条件下,窖蛋白1诱导FBJ细胞的死亡。

丙泊酚对谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的探讨丙泊酚对谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用10 mmol·L^(-1)谷氨酸损伤PC12细胞48 h,并分为模型组和丙泊酚低、中、高剂量组。取正常生长的PC12细胞作为对照组。对照组和模型组予以不含药物培养基培养48 h,丙泊酚低、中、高剂量组分别予以12.5,25.0,50.0μmol·L^(-1)丙泊酚培养48 h。通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞凋亡,用紫外分光光度法检测Caspase-3活性,用反转录聚合酶链式反应法和Western blot检测即刻早基因(c-fos)与早期生长反应因子基因-1(Egr-1)mRNA及蛋白水平。结果与对照组比较,模型组的细胞活力显著下降(P<0.01),凋亡率显著提高(P<0.01),Caspase-3活性显著上升(P<0.01),c-fos mRNA及蛋白水平显著下调(P<0.01),Egr-1 mRNA及蛋白水平显著上调(P<0.01)。与模型组比较,丙泊酚低、中、高剂量组的细胞活力显著提高(P<0.01),细胞凋亡率显著下降(P<0.01),Caspase-3活性显著降低(P<0.01),c-fos mRNA及蛋白水平显著上调(P<0.01),Egr-1 mRNA及蛋白水平显著下调(P<0.01)。结论丙泊酚可显著抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制与调节c-fos及Egr-1的表达有关。