靶向FBXL20基因的siRNA片段的筛选及其验证

在人结肠腺癌SW480细胞株及口腔鳞癌HSC3细胞株中,筛选有效干扰fbxl 20的siRNA片段.设计合成3对靶向fbxl 20 mRNA的小干扰RNA片段,通过阳离子脂质体介导转染SW480细胞和HSC3细胞.结果发现siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3均能抑制SW480细胞和HSC3细胞fbxl20 mRNA的表达,siRNA-2抑制作用最明显,抑制率分别为86.8%和100%.MTT试验显示:siRNA-2转染SW480细胞和HSC3细胞后,细胞增殖能力明显降低,细胞增殖抑制率分别为29.5%和43.4%.Transwell小室迁移实验表明,HSC3细胞在转染24 h后,细胞迁移能力明显减弱,迁移抑制率高达72.4%.流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:转染36 h后,SW480细胞实验组细胞凋亡率为21.9%;转染24 h后,HSC3细胞实验组细胞凋亡率为44.7%.本实验成功的筛选出了特异性的抑制fbxl 20基因的siRNA片段,并初步鉴定了fbxl 20基因的功能.

结直肠腺癌发病基因fbxl20和set的相关性研究

目的:通过半定量PCR技术,研究fbxl20基因与set基因与临床病理特征的关系及其表达水平间的相关性研究。方法:收集50例结直肠腺癌组织及癌旁正常组织,用半定量PCR技术检测fbxl20基因及set基因的表达水平并进行分析。结果:fbxl20基因及set基因在结直肠腺癌组织中的表达水平均显著高于癌旁组织;fbxl20基因与set基因在本实验50例结直肠腺癌组织中的表达水平无相关性。但是,在低分化肿瘤组织及D期肿瘤组织中,fbxl20基因与set基因的表达水平呈正相关。结论:fbxl20基因及set基因在结直肠腺癌组织中的表达水平显著升高,其可能与癌细胞的分化过程有关。

FBXL20在喉癌组织中的表达及意义

目的检测喉癌组织中FBXL20的表达,并探讨其与喉癌发生、发展的关系以及临床应用的潜在价值。方法用免疫组化SP法,检测30例喉癌组织和其对应的正常组织中FBXL20的表达情况。结果 FBXL20表达于正常组织和肿瘤组织的胞浆中,相对于肿瘤组织,FBXL20在正常组织中表达较高(P=0.010);其表达在有无侵犯淋巴结中,差异有统计学意义(P=0.042);其表达在正常组织与低分化肿瘤中,差异有统计学意义(P=0.018)。结论 FBXL20在喉癌的发生中可能发挥着一定作用,并且可能是喉癌发生过程中的抑制因子。

FBXL20在喉癌组织中的表达

目的研究FBXL20在喉癌组织中的表达,分析其在喉癌组织和癌旁组织中表达是否有差异,并分析FBXL20表达强度与喉癌临床病理特征:分化程度,有无淋巴结转移,性别,年龄之间的关系及研究与喉癌发生、发展、转移的关系,从而探索在临床应用上的潜在价值。方法采用免疫组化检测30例喉癌组织和癌旁组织中FBXL20的表达情况。结果 FBXL20在正常组织和肿瘤组织均有表达,其多集中于胞浆中,FBXL20在正常组织中阳性表达率较高于肿瘤组织,FBXL20在正常组织中的表达与肿瘤组织相比,差异有统计学意义(P=0.004),其表达在有无侵犯淋巴结中差异有统计学意义(P=0.044),与性别,年龄和分化程度无关。结论 FBXL20可能在喉癌的发生中发挥着一定作用。

FBXL20在原发性肺癌中的表达与临床特征及预后相关性分析

目的 分析F盒-富含亮氨酸重复蛋白20(F-box and leucine rich repeat protein 20,FBXL20)在原发性肺癌中的表达与临床特征及预后的关系。方法 选取2014年12月至2016年12月南阳市第二人民医院诊治的108例原发性肺癌作为研究对象,称为原发性肺癌组,并选取同期南阳市第二人民医院收治的56例肺部良性疾病和50例健康体检者作为对照,分别称为肺部良性疾病组和健康体检组。采用实时荧光定量PCR检测3组血液中FBXL20 mRNA表达水平;采用免疫组织化学(IHC)检测原发性肺癌组癌组织和癌旁正常组织FBXL20蛋白表达情况;并分析FBXL20 mRNA和蛋白与原发性肺癌临床特征及预后之间的关系。结果 3组血液中FBXL20 mRNA表达水平比较差异具有统计学意义(P<0.05),且表现为原发性肺癌组>肺部良性疾病组>健康体检组;原发性肺癌组癌组织FBXL20蛋白高表达率(70.37%)明显高于低表达率(9.26%),且差异具有统计学意义(P<0.05);经Spearman法分析,原发性肺癌组血液FBXL20 mRNA与蛋白高表达呈正相关(P<0.05),与蛋白低表达呈负相关(P<0.05);FBXL20 mRNA及蛋白在原发性肺癌细胞学类型、组织学分级及淋巴转移上差异具有统计学意义(P<0.05);经3年随访,108例原发性肺癌中70例生存,38例死亡;死亡组FBXL20 m RNA及蛋白高表达率均明显高于生存组(P<0.05)。结论 FBXL20在原发性肺癌中高表达,且与细胞学类型、组织学分级及淋巴转移密切相关,在预后预测上具有一定价值。

FBXL20在颞叶癫痫患者及癫痫大鼠模型中的表达变化

目的通过研究E3泛素连接酶FBXL20及其下游蛋白-神经元突触膜胞外分泌调节蛋白1(regulating synaptic membrane exocytosis 1,RIM1)在颞叶癫痫患者皮质及匹鲁卡品癫痫大鼠模型皮质、海马组织中的表达变化,探讨FBXL20在癫痫形成中的作用。方法以颞叶癫痫患者手术切除病灶标本(n=25)为癫痫组,以脑外伤减压手术所切皮质标本(n=10)为对照组。另取40只健康雄性SD大鼠腹腔注射氯化锂(127 mg/kg),20 h后腹腔注射匹鲁卡品(50 mg/kg),每30分钟重复给予1次匹鲁卡品(10 mg/kg),直到大鼠癫痫发作。2周后出现癫痫自发性发作的大鼠纳入癫痫组;2个月后仍未出现癫痫自发性发作的大鼠纳入对照组。采用免疫荧光对FBXL20的表达进行定位;免疫组化检测FBXL20的表达水平;Western blot检测FBXL20、RIM1的表达水平。结果免疫荧光检测结果显示FBXL20主要表达于神经元;免疫组化及Western blot检测结果均显示癫痫患者皮质、癫痫大鼠模型皮质与海马中FBXL20表达较对照组明显下降(P<0.05);同时Western blot检测结果显示RIM1表达较对照组明显升高(P<0.05)。结论 FBXL20在癫痫患者及大鼠模型中的表达水平明显降低,RIM1表达明显升高,提示FBXL20可能通过调控RIM1参与了癫痫的形成。

FBXL20对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的观察FBXL20(F-box and leucine rich repeat protein 20)对人非小细胞肺癌A549细胞生长的影响并初步探究其机制。方法采用慢病毒感染A549细胞,构建对照组(FBXL20-vector组)及干扰组(FBXL20-RNAi组),通过Western blot验证慢病毒敲减效率。利用CCK-8及集落形成实验观察FBXL20的下调对A549细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot分析周期蛋白的改变,基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探究FBXL20可能参与的生物学过程。结果干扰组FBXL20的蛋白表达(0.36±0.02)显著低于对照组(0.58±0.01)(P<0.01)。与对照组相比,干扰组的增殖能力增强(P<0.05),形成的集落数目也显著增加(100±20 vs 53±6)(P<0.05),且停留在G_2/M期的细胞比例明显降低(5.65±1.35 vs 9.94±1.44)(P<0.05)。Western blot结果显示Cyclin D1、ERK1/2蛋白表达无明显变化(P>0.05),CDK2、Cyclin E、CDK1、Cyclin A、Cyclin B1蛋白表达显著增加,而p-ERK1/2则显著降低(P<0.05)。GSEA结果显示FBXL20的低表达与G_2/M检查点呈正相关(P<0.01)。结论下调FBXL20可以加快A549细胞G_2/M期的进程,提高其生长能力。其机制可能是通过抑制p-ERK的激活,使得其下游周期蛋白CDK1、Cyclin A、Cyclin B1表达增加而实现的。

siRNA靶向沉默fbxl20基因对肝癌SMMC-7721细胞生物学行为的影响

目的:通过沉默fbxl20基因,以观察基因沉默后对SMMC-7721细胞的增殖、迁移和周期分布的影响。方法:通过脂质体Lipofectamine2000介导转染SMMC-7721细胞,靶向fbxl20基因的siRNA片段阻低肝癌SMMC-7721细胞株fbxl20 mR-NA表达。结果:siRNA能有效沉默SMMC-7721细胞fbxl20 mRNA的表达,沉默效率为71.49%。MTT试验实验显示:siRNA转染SMMC-7721细胞后,细胞增殖能力显著降低。Transwell小室和划痕愈合实验表明,fbxl20基因被沉默后,SMMC-7721细胞在迁移能力明显减弱,迁移抑制率高达62.03%。流式细胞术检测细胞周期结果显示:转染48 h后,SMMC-7721实验组细胞G1/G0期比率(81.21%)显著高于阴性对照组(71.49%)和空白对照组(67.90%)。结论:本实验运用RNA干扰技术成功抑制了SMMC-7721细胞中fbxl20基因的表达,并且发现fbxl20基因可能与肝癌细胞的增值和迁移相关。

FBXL20对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨FBXL20在胃癌细胞中的表达及其在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用和机制。方法 Western blot检测人胃癌细胞系(BGC-823、AGS、MKN-45)及胃黏膜上皮细胞系(GES-1)中FBXL20蛋白的表达。靶向FXBL20 shRNA慢病毒载体抑制AGS细胞中FBXL20表达,CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot检测抑制FBXL20后Wnt通路中相关蛋白水平变化。结果与胃黏膜上皮细胞系相比,胃癌细胞系中FBXL20的表达明显增加(P<0.05)。与对照组相比,抑制FBXL20的AGS细胞在增殖、迁移和侵袭能力方面明显降低(P<0.05)。抑制FBXL20能降低GSK-3β的泛素化降解,导致Wnt通路中GSK-3β、p-GSK-3βTyr216的表达增加,而β-catenin、p-β-catenin、Cyclin D1及E-cadherin的表达降低。结论 FBXL20可能通过调控Wnt通路促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

敲减FBXL20基因降低食管癌KYSE150细胞增殖

为了探究FBXL20（F-box and leucine rich repeat protein 20）基因对人类食管癌细胞株KYSE150的影响及机制,我们采用慢病毒转染技术,构建FBXL20基因的慢病毒载体,转染KYSE150细胞系;采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测细胞株中FBXL20基因m RNA和蛋白的表达量;采用Western blotting检测细胞株β-catenin、cyclin D1、c-myc的蛋白水平;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡。成功构建低表达FBXL20慢病毒转染KYSE150细胞后,与对照组（CON组）相比,低表达FBXL20组（FBXL20-RNAi组）的KYSE150细胞增殖能力显著降低,细胞被阻滞在G1期,凋亡能力显著增加,β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白水平显著降低。我们的实验证实FBXL20在人类食管癌中是一个致癌基因,通过激活Wnt通路促进癌症的发生和发展。