FDFT1基因的泛癌表达分析、与癌症预后的关联性分析及其对几种肿瘤细胞增殖的影响

目的探究FDFT1(farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1)基因在不同肿瘤中的表达差异及其对肿瘤预后与肿瘤微环境的影响,及FDFT1过表达对几种肿瘤细胞增殖的影响。方法利用TCGA联合GTEx数据库分析FDFT1 mRNA在不同肿瘤组织与正常组织之间的表达差异;绘制K-M生存曲线,评估FDFT1基因表达与癌症预后的关系;利用细胞增殖实验探索FDFT1过表达对几种肿瘤细胞增殖的影响。结果与正常组织相比,在肾上腺皮质癌(adrenocortical carcinoma,ACC)等16种肿瘤组织中FDFT1 mRNA表达显著上调;在肾透明细胞癌(kidney renal cell carcinoma,KIRC)等8种肿瘤组织中FDFT1 mRNA表达下调。癌症预后相关性分析显示,FDFT1的高表达在ACC、胰腺癌(pancreatic adenocarcinoma,PAAD)、口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)及肝细胞癌(liver hepatocellular carcinoma,LIHC)中有较差的预后意义;而在KIRC中FDFT1的高表达与较好的预后有关。免疫浸润分析结果显示,与FDFT1基因低表达组相比,高表达组的ACC、OSCC、KIRC组织中活化的树突状细胞(activated dendritic cell,aDC)浸润评分较低;而在PAAD癌组织中,aDC浸润评分差异无统计学意义。细胞增殖实验结果显示FDFT1过表达促进人胰腺癌细胞(PANC-1)等细胞的增殖。结论FDFT1基因在ACC等16种肿瘤组织中mRNA表达上调,在KIRC等8种肿瘤组织中表达下调。FDFT1高表达在PAAD、OSCC和LIHC中与较差的预后有关,在KIRC中与较好的预后有关。FDFT1过表达慢病毒促进PANC-1等细胞的增殖。

FDFT1基因重组慢病毒表达载体的构建及其表达测定

目的构建法尼基二磷酸法尼基转移酶1(farnesyl diphosphate farnesyl transferase 1,FDFT1)基因重组质粒并在人胚肾上皮细胞(293T)验证质粒表达。方法设计FDFT1基因引物并经两次PCR扩增获取FDFT1目的基因;用相应的限制性内切酶将pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP(pCDH-GFP)质粒线性化;FDFT1基因及线性化载体经纯化后以同源重组反应连接构建重组质粒;重组质粒通过菌落PCR、双酶切验证并测序做进一步验证;在293T细胞中利用三质粒共转染法包装FDFT1目的质粒并收集含病毒的上清液;以病毒液感染293T细胞验证FDFT1基因表达。结果菌落PCR及双酶切说明目的基因成功插入载体质粒,测序结果说明重组质粒中FDFT1基因与NCBI中登记的相应基因同源。构建成功的pCDH-GFP-FDFT1质粒包装为慢病毒后感染293T细胞,可检测到细胞中FDFT1基因表达与对照病毒感染相比升高15.13倍。结论本研究成功构建高表达FDFT1基因的重组慢病毒表达载体,为进一步研究FDFT1基因在肿瘤中的作用机制提供了实验基础。

FDFT1基因shRNA和过表达载体的构建及在牛胎儿成纤维细胞中的验证

构建了带有绿色荧光标记的法尼基二磷酸法尼基转移酶1（farnesyl—diphosphate farnesyltransferase1，FDFT1）基因shRNA干扰载体以及过表达载体，将其转染牛胎儿成纤维细胞（bovine fetal fibroblasts，BFF），采用荧光定量PCR和Westernblot的方法，检测FDFT1基因mRNA和蛋白的表达水平，在细胞水平验证了shRNA干扰载体的干扰效率和过表达载体的有效性。结果显示：shRNA组FDFT1-Bos-520的FDFT1基因mRNA表达水平降低至shRNANC组的40．7％（P〈0．01），蛋白质表达水平降低至shRNANC组的39．61％（P〈0．01）；而FDFT1基因pBI-CMV3-FDFT1过表达组FDFT1基因mRNA的表达水平为pBI-CMV3空载体组的137．9倍（P〈0．01），蛋白表达水平升高至空载体组的2．34倍（P〈0．01）。本试验通过荧光定量PCR和Western blot的检测方法验证了FDFT1基因过表达载体及干扰栽体转染BFF后，FDFT1基因表达量的变化，为进一步研究FDFT1基因对胆固醇代谢和脂质代谢的影响和作用机制提供了实验材料及分子依据。

洪水不可控特性对水库防洪安全的影响

针对洪水进入不可控阶段给水库防洪安全水平带来的影响,主要探讨了水库洪水调度中反映安全水平的调洪最高水位、最快下泄时间两个参数,重点分析了起调水位、入库洪水量级和洪水是否可控的相互关系,提出判别洪水是否可控的条件,在此基础上提炼了最快下泄时间这个影响防洪安全的综合参数,并分析起调水位、洪水量级、调度方式对其影响的变化情况。实例应用结果表明,起调水位较洪水量级对最快下泄时间的影响大,且预泄对其影响也较为显著,为进一步构建水库洪水调度安全度量化评价系统提供了依据。

交流量高精度测量的微机实现方案

准确、快速地对电力系统交流信息量进行测量是十分必要的,本文提出1种以高速A/D转换和高精度DSP处理器芯片为硬件基础的,基于快速离散傅立叶变换(FDFT)的高精度测量方案。