鸡FGL2基因的克隆分析及原核表达

【目的】克隆鸡纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein 2,FGL2)基因,并进行生物信息学分析和原核表达,为鸡FGL2蛋白的功能研究奠定基础。【方法】采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术扩增鸡FGL2基因,克隆至pMD19-T载体,测序后对鸡FGL2基因及其编码的蛋白进行生物信息学分析。构建原核表达质粒pET-32a-FGL2,将其转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。【结果】成功克隆了鸡FGL2基因的CDS区,序列全长为1320 bp,编码439个氨基酸。生物信息学分析显示,鸡FGL2氨基酸与火鸡、雉鸡、珍珠鸡、鹌鹑等禽类的同源性高,达96%以上;与哺乳类动物的同源性较低,其中与犬的同源性仅有64.8%。FGL2蛋白由439个氨基酸组成,理论分子质量为50.24 ku,分子式为C_(2221)H_(3451)N_(615)O_(673)S_(22),理论等电点(pI)为8.63,为不稳定的亲水性分泌型蛋白,无跨膜区。成功构建了原核表达质粒pET-32a-FGL2,其在大肠杆菌BL21(DE3)可表达以包涵体形式为主的FGL2融合蛋白,分子质量约为70 ku。【结论】成功克隆出了1320 bp的鸡FGL2基因,明确了其编码蛋白的生物学信息,经诱导表达后获得FGL2重组蛋白。

FGL2基因启动子多态性与HBV感染关联研究

目的 探讨FGL2基因启动子（位点-1285T／A）多态性与HBV感染有否关联存在。方法 选择传染科门诊及住院部2002-2004年诊治的重庆地区汉族居民2600人，采用聚合酶链反应（PCR）及限制性内切酶技术检测FGL2基因启动子（-1285T／A）多态性，SPSS软件x^2检验及以非条件Logistic回归进行统计检验。结果 Hardy-Weinberg平衡检验P〉0．05，表明拟合度优良；各组间等位基因频率差异无显著性（P〉0．05）；以非条件Logistic回归校正年龄及性别因素进行分层分析，表明该位点SNP与HBV感染之间无关联存在（P〉0．05）。结论 FGL2基因启动子（一1285T／A）多态性与HBV感染有之间无关联。

人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域cDNA的扩增、克隆和鉴定

目的 :扩增人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域 (FRED)cDNA ,构建原核表达质粒。方法 :从外周血单核细胞 (PBMNC)中提取细胞总RNA后 ,应用RT PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶FRED段cDNA ,酶切后与pET2 2b(+)原核表达载体连接 ,然后经酶切和测序鉴定。结果 :从PBMNC中扩增了 72 7bp长的PCR产物 ,构建的重组原核表达质粒经酶切和测序鉴定与设计的相符。结论 :成功地从PBMNC中扩增了人fgl2凝血酶原酶FRED段cDNA ,构建了FRED pET2 2b(+)原核表达质粒 ,为进一步的研究奠定了基础。

凝血因子fgl2凝血酶原酶研究现状

fgl2凝血酶原酶是一种直接激活凝血酶原的凝血因子。反式因子通过与小鼠fgl2凝血酶原酶基因启动子中正性调控结构域结合而对其表达进行调控,人fgl2凝血酶原酶基因的表达调控可能之相似。作为一种免疫-凝血的中介物,fgl2凝血酶原酶在病毒引起的肝损伤、自发性流产及移植排斥反应等病理过程中发挥重要的作用。

Fgl2-shRNA基因沉默对糖尿病大鼠心功能的改善及心肌病理形态变化

目的探讨慢病毒介导的纤维介素(fgl2)基因沉默对糖尿病(DM)大鼠心功能的影响及其在心肌组织中的表达。方法雄性SD大鼠腹腔注射STZ建立DM模型,随机分组为fgl2基因沉默组、GFP空载体组、DM模型组(DM组),基因沉默及GFP空载体组分别尾静脉注射慢病毒载体1×109 IU,DM组注射生理盐水;另设对照组(各组8只)。14周后超声检测左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(即缩短分数,FS)、心率(HR)等,心肌组织进行HE染色观察病理形态及免疫组化染色检测fgl2表达。结果 DM组大鼠LVEF、FS降低,HR减少;HE染色示心肌纤维排列紊乱、纵横纹模糊、部分区域变性等;免疫组化fgl2染色示微血管内及周围大量棕黄色絮状染色。fgl2基因沉默组LVEF、FS、HR较DM组提高,差异有统计学意义(P<0.05);病理形态学表现为心肌纤维排列稍紊乱;免疫组化结果显示微血管内少量棕黄色絮状染色,较DM组明显减少,灰度值差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Fgl2基因沉默下调DM大鼠心肌fgl2表达,改善病理形态,抑制心室重构,保护心脏功能。

女性糖尿病周围神经病变相关基因筛选及生物信息学分析

目的通过对GEO数据库中糖尿病周围神经病变(DPN)相关基因芯片进行生物信息学分析,获取DPN关键基因及信号通路。方法在GEO数据库中下载DPN相关基因芯片,利用R语言分析DPN女性患者与正常对照组的差异基因(DEGs)并进行可视化,根据基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)对差异基因进行注释,预测其功能与相关通路,利用STRING数据库构建蛋白质相互作用网络筛选核心基因。结果分析芯片GSE95849获取差异基因4746个,其中上调基因2218个,下调基因2528个。其中TFAP2C、ESR1、CX3CR1、FGL2处于蛋白质相互作用核心位点。结论差异基因主要参与MAPK通路,通过血糖稳态、炎症作用、神经元发育等参与DPN发病过程,为DPN的诊断及治疗提供新的思路。