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FHL2通过NF-κB信号通路调节THP-1巨噬细胞泡沫化
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作者 陈卫卫 廖煌 +1 位作者 史振鸿 罗颖 《基础医学与临床》 2024年第2期204-209,共6页
目的 明确4个半LIM结构域蛋白(FHL2)是否能够通过调节核因子κB(NF-κB)信号通路影响巨噬细胞泡沫化。方法 构建FHL2过表达质粒及合成FHL2小干扰RNA(si-FHL2),分别转染至人单核/巨噬细胞系THP-1中,Western blot检测FHL2表达;使用氧化低... 目的 明确4个半LIM结构域蛋白(FHL2)是否能够通过调节核因子κB(NF-κB)信号通路影响巨噬细胞泡沫化。方法 构建FHL2过表达质粒及合成FHL2小干扰RNA(si-FHL2),分别转染至人单核/巨噬细胞系THP-1中,Western blot检测FHL2表达;使用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激细胞,ELISA检测细胞IL-6、IL-1β、TNF-α等细胞因子的表达;油红O染色检测细胞泡沫化程度;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 转染过表达FHL2质粒的细胞中FHL2表达量升高(P<0.01),而转染si-FHL2的细胞表达量降低(P<0.05);敲低FHL2能够下调炎性细胞因子的分泌(P<0.01);FHL2下调能够缓解THP-1巨噬细胞泡沫化;同时,FHL2下调抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05),而在过表达FHL2组中结果呈相反趋势。结论 下调FHL2的表达可通过抑制NF-κB信号通路活化,降低炎性细胞因子的分泌,缓解巨噬细胞的泡沫化。 展开更多
关键词 4个半LIM结构域蛋白(fhl2) NF-ΚB信号通路 THP-1 巨噬细胞泡沫化
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FHL2与LDHA相互作用促进胶质瘤细胞的增殖
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作者 吴国庆 张婷 +3 位作者 宋小锋 朱婷 李娜 李明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期976-983,共8页
目的:探讨四个半LIM结构域2(FHL2)蛋白对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制。方法:利用TCGA和CGGA数据库分析胶质瘤组织中FHL2 mRNA表达水平与患者预后的关系。通过WB法检测人胶质瘤组织标本及人胶质瘤细胞U87、T98G、U251、SNB19、GSC2... 目的:探讨四个半LIM结构域2(FHL2)蛋白对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制。方法:利用TCGA和CGGA数据库分析胶质瘤组织中FHL2 mRNA表达水平与患者预后的关系。通过WB法检测人胶质瘤组织标本及人胶质瘤细胞U87、T98G、U251、SNB19、GSC23、A172、LN229、G267和星形胶质细胞NHA中的FHL2蛋白表达水平。利用慢病毒载体构建稳定敲低FHL2的U87细胞和过表达FHL2的SNB19细胞,即U87-shGFP、U87-shFHL2-1#、U87-shFHL2-4#和SNB19-3flag、SNB19-3flag-FHL2组。通过CCK-8法、克隆形成实验检测敲低和过表达FHL2对细胞增殖的影响,免疫共沉淀(Co-IP)和液相色谱-串联质谱(LC/MS)法筛选FHL2在胶质瘤细胞中的相互作用蛋白,并用Co-IP和免疫荧光法验证它们的结合作用和共定位情况。使用酶标仪检测敲低和过表达FHL2细胞内乳酸产量和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化,WB法分析FHL2、LDHA及p-LDHA在正常脑组织和胶质瘤组织中的蛋白表达差异及其相互关系。在过表达FHL2的SNB19细胞中使用LDHA的小分子抑制剂AT-101,通过CCK-8实验和酶标仪比色法验证FHL2在胶质瘤乳酸代谢中的作用,验证AT-101在胶质瘤中潜在的治疗效果。结果:Co-IP和LC/MS检测发现,FHL2与LDHA在胶质瘤细胞中存在相互作用。FHL2过表达可提高LDHA活性和乳酸生成(均P<0.001),进而促进胶质瘤细胞增殖(P<0.001)。相反,敲低FHL2会降低LDHA活性和乳酸产量(P<0.001或P<0.05)并抑制细胞增殖(P<0.001)。AT101能抑制LDHA活性,并显著抑制FHL2促进胶质瘤细胞的增殖,同时恢复磷酸化LDHA(Y10)水平(P<0.01或P<0.001)。结论:FHL2与LDHA蛋白相互作用,FHL2通过激活p-LDHA(Y10)的表达促进LDHA活性和乳酸产生,进而促进胶质瘤细胞的增殖,靶向这种相互作用可能成为治疗胶质瘤的潜在策略。 展开更多
关键词 四个半LIM结构域2 乳酸脱氢酶A 胶质瘤 U87细胞 SNB19细胞 增殖
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牦牛FHL2基因的克隆、组织表达与蛋白定位分析 被引量:1
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作者 龚三你 蒋旭东 +2 位作者 马瑶 卢建远 字向东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期146-156,共11页
旨在获得牦牛FHL2基因序列,阐明该基因序列、蛋白质结构与性质、mRNA的组织表达模式、在雌性生殖器官及颗粒细胞的蛋白表达特性。本研究以5头健康空怀成年母牦牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管组织及5头妊娠2个月左右母牦牛... 旨在获得牦牛FHL2基因序列,阐明该基因序列、蛋白质结构与性质、mRNA的组织表达模式、在雌性生殖器官及颗粒细胞的蛋白表达特性。本研究以5头健康空怀成年母牦牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管组织及5头妊娠2个月左右母牦牛的子宫、输卵管和卵巢为研究材料,利用逆转录PCR(RT-PCR)技术克隆FHL2基因,并使用在线分子生物学软件分析其生物信息学特性;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析FHL2基因的组织表达特性;应用免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)技术检测FHL2蛋白在雌性生殖器官的分布和颗粒细胞上的亚细胞定位。结果发现,FHL2基因CDS区全长840 bp (ON456866),编码279个氨基酸,FHL2蛋白属于弱碱性亲水不稳定蛋白,没有跨膜结构。不同物种的FHL2氨基酸序列比对和进化树分析表明,FHL2基因编码区在物种进化中比较保守。RT-qPCR结果显示,FHL2基因在检测的组织都有表达,在心的表达量极显著高于其他检测组织(P<0.01);在肺、卵巢、输卵管和子宫中的表达量极显著高于肝、脾和肾(P<0.01)。FHL2基因在妊娠期子宫中的表达量极显著高于空怀期(P<0.01),在卵巢中妊娠期的表达量极显著低于空怀期(P<0.01)。IHC结果表明,在生殖器官中FHL2蛋白主要在卵泡颗粒细胞、子宫内膜和输卵管黏膜表达;IF定位结果显示,FHL2蛋白主要分布在卵泡颗粒细胞的细胞核中。综上所述,牦牛FHL2基因在动物进化过程中比较保守,在心、肺、卵巢、输卵管和子宫中表达量高,可能在参与牦牛低氧适应性、卵泡发育和妊娠维持等生理功能的调控中发挥重要作用。 展开更多
关键词 牦牛 fhl2基因 表达特性 实时荧光定量PCR 免疫组化
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FHL2通过MGMT影响胶质母细胞瘤U87细胞对替莫唑胺的耐药性
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作者 陈丽莉 代晶 +1 位作者 郑彦文 李明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期20-27,共8页
目的:探讨干扰四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)的表达对胶质母细胞瘤U87细胞中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)表达的影响,以及对U87细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法:利用慢病毒感染技术分别将携带不同FHL2干扰序列的慢病毒(shFHL2-1... 目的:探讨干扰四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)的表达对胶质母细胞瘤U87细胞中O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)表达的影响,以及对U87细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法:利用慢病毒感染技术分别将携带不同FHL2干扰序列的慢病毒(shFHL2-1#、shFHL2-4#)及其阴性对照(shN)感染U87细胞,分别命名为shFHL2-1#、shFHL2-4#和shN组;采用siRNA转染技术将siMGMT-1#、siMGMT-4#和siN转染至U87细胞,为siMGMT-1#、siMGMT-4#和siN组,qPCR和WB法验证FHL2或MGMT的敲低效果。用TMZ处理上述各组细胞(以DMSO处理组为对照),随后以CCK-8法和细胞克隆形成实验检测TMZ处理前后FHL2或MGMT敲低组细胞的增殖情况,FCM检测TMZ处理前后FHL2敲低组细胞的凋亡情况,WB法和免疫荧光法检测敲低FHL2对U87细胞中MGMT表达的影响,WB法检测TMZ处理对各组细胞中FHL2和MGMT表达水平的影响。结果:成功构建敲低FHL2或MGMT表达的U87细胞。与shN组相比,shFHL2-1#、shFHL2-4#组U87细胞的增殖能力减弱、凋亡水平升高(均P<0.01),MGMT表达水平明显降低(均P<0.01)。经TMZ处理后,与相应的DMSO处理组相比,shN组细胞中FHL2和MGMT的表达水平显著升高(均P<0.05),而细胞的增殖和凋亡均无显著变化(均P>0.05);shFHL2-1#、shFHL2-4#组细胞中FHL2和MGMT的表达水平无显著改变(均P>0.05),但细胞增殖能力进一步显著降低、凋亡水平进一步显著升高(均P<0.01)。敲低MGMT使U87细胞增殖减慢(P<0.01),而siMGMT-1#、siMGMT-4#组细胞经TMZ处理后增殖能力进一步降低(均P<0.01)。结论:干扰FHL2表达使得U87细胞增殖减慢而凋亡加剧、MGMT表达下调,提示FHL2可能通过影响MGMT的表达调控U87细胞对TMZ的耐药性。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 U87细胞 四个半LIM结构域蛋白2 替莫唑胺 耐药性 O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶
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FHL2抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭生长的机制探讨 被引量:2
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作者 李沛雨 赵亚力 +3 位作者 刘娜 伍志强 司艺玲 韩为东 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期572-574,共3页
目的探讨FHL2对分化抑制蛋白1(Id1)的转录调控活性及Id1促乳腺癌细胞侵袭生长效应的影响。方法采用共转染双荧光素酶相对活性检测方法检测乳腺癌MCF-7细胞中FHL2对Id1介导的转录抑制功能的影响,MTT方法检测细胞的增殖能力,Transwell方... 目的探讨FHL2对分化抑制蛋白1(Id1)的转录调控活性及Id1促乳腺癌细胞侵袭生长效应的影响。方法采用共转染双荧光素酶相对活性检测方法检测乳腺癌MCF-7细胞中FHL2对Id1介导的转录抑制功能的影响,MTT方法检测细胞的增殖能力,Transwell方法观察细胞的侵袭能力。结果Id1对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子E47介导的转录激活功能具有显著抑制作用,而FHL2明显削弱了该效应,并呈现出对FHL2转染剂量的依赖性;与空载体转染组比较,Id1明显促进了MCF-7细胞的增殖速率与侵袭能力,而该效应可被FHL2显著削弱(P<0.05)。结论FHL2可通过抑制Id1的功能活性来抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭生长,为深入研究FHL2-Id1信号途径在乳腺癌发生发展中的功能效应奠定了基础。 展开更多
关键词 fhl2 分化抑制蛋白1 功能抑制蛋白 MCF-7细胞 细胞增殖
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siRNA抑制FHL2对胃肠癌细胞β-catenin活性的影响 被引量:2
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作者 张文静 郭蒸 +4 位作者 夏国盛 王玮 牛凌云 姜泊 王继德 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期992-995,共4页
目的本研究旨在调查通过siRNA抑制FHL2表达后对β-catenin活性及其下游基因sur-vivin表达的影响,探讨两者在肠癌发生中的协同作用。方法 (1)PCR扩增含有β-catenin作用位点、长为340bp的survivin基因启动子片段,克隆入PGL3-basic载体,... 目的本研究旨在调查通过siRNA抑制FHL2表达后对β-catenin活性及其下游基因sur-vivin表达的影响,探讨两者在肠癌发生中的协同作用。方法 (1)PCR扩增含有β-catenin作用位点、长为340bp的survivin基因启动子片段,克隆入PGL3-basic载体,构建荧光素酶报告质粒pluc340。(2)脂质体瞬时转染法将β-catenin活性报告质粒pTOPFLASH、pFOPFLASH和pluc340转染入胃肠癌及正常细胞株,双荧光素酶法测定其启动子活性,并评价其对fhl2siRNA的反应。(3)RT-PCR方法检测基因表达。结果成功构建了survivin启动子片段pluc340;荧光素酶活性检测显示:β-catenin转录活性在胃肠癌细胞明显高于正常细胞;siRNA抑制FHL2表达后,β-catenin转录活性下降,survivin表达降低。结论抑制FHL2的表达能够降低β-catenin转录活性及下游癌基因的表达,干扰Wnt信号通路,说明fhl2有望成为肠癌治疗的新靶点。 展开更多
关键词 fhl2 Β-CATENIN SURVIVIN 肠癌
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FHL2通过相互作用抑制Id2的功能活性 被引量:2
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作者 韩为东 赵亚力 +4 位作者 伍志强 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期810-817,共8页
分化抑制蛋白2(Id2)通过抑制碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)类转录因子的功能活性调控多种组织细胞的分化发育,并参与人类多种肿瘤的发生与进展.Id2相互作用蛋白可能调控其翻译后的功能活性.本研究以HLH结构域缺失的Id2作为诱饵蛋白,采用酵母... 分化抑制蛋白2(Id2)通过抑制碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)类转录因子的功能活性调控多种组织细胞的分化发育,并参与人类多种肿瘤的发生与进展.Id2相互作用蛋白可能调控其翻译后的功能活性.本研究以HLH结构域缺失的Id2作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法对MCF-7 cDNA文库进行筛选,识别了1个新的Id2相互作用蛋白FHL2(属于LIM蛋白家族的一员),哺乳动物双杂交实验系统验证了Id2与FHL2之间的相互作用,同时证实,该作用不依赖于Id2中的HLH结构域;GST-pulldown、免疫共沉淀方法,进一步证实FHL2/Id2之间的相互作用;免疫荧光共定位实验结果证实,FHL2/Id2相互作用主要发生在细胞核内;共转染实验结果发现,FHL2通过相互作用阻抑了Id2对bHLH类转录因子E47的功能抑制活性.总之,本研究识别了1个新的Id2相互作用蛋白FHL2,通过直接的相互作用,FHL2抑制了Id2的功能活性,FHL2可能参与调控Id2介导的细胞分化与发育过程,并可能参与肿瘤的发生与进展. 展开更多
关键词 fhl2 分化抑制蛋白2(Id2) 相互作用 抑制子
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FHL2抗体的制备及其在癌细胞和组织中表达的检测 被引量:2
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作者 丁丽华 熊志红 +5 位作者 王朝云 朱翠 程龙 张寅炜 吕秋军 叶棋浓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期765-766,共2页
目的:制备FHL2特异性的多克隆抗体,并检测FHL2在癌细胞和组织中的表达。方法:在大肠杆菌中融合表达GST-FHL2蛋白,纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体。采用Western blot检测抗体的特异性,并检测FHL2在乳腺癌细胞、肝癌细胞和小鼠组织中的表... 目的:制备FHL2特异性的多克隆抗体,并检测FHL2在癌细胞和组织中的表达。方法:在大肠杆菌中融合表达GST-FHL2蛋白,纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体。采用Western blot检测抗体的特异性,并检测FHL2在乳腺癌细胞、肝癌细胞和小鼠组织中的表达。结果:获得了可特异识别FHL2,而不识别FHL家族其他成员的多克隆抗体;FHL2蛋白在乳腺癌和肝癌细胞株中表达;FHL2在心脏、肌组织、乳腺、前列腺和肝脏组织中都有表达。结论:成功地得到可特异识别FHL2的多克隆抗体,且发现FHL2在癌细胞和更广泛地正常组织中都有表达,为进一步研究FHL2在凋亡、癌变、分化等生命过程中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 fhl2 多克隆抗体 癌症
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GST-FHL2融合蛋白的表达及纯化 被引量:2
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作者 沈秀张 林吉进 +3 位作者 武君 黄瑞燕 刘树楷 李妍妍 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2008年第6期337-340,共4页
目的高效表达和纯化可溶性GST-FHL2融合蛋白。方法(1)PCR法扩增FHL2 (Four and a half LIM domains 2)基因的编码片段,分别在5'端和3'端加上EcoR I和Xho l酶切位点,并克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;(2)利用异丙基硫代-β-D-半... 目的高效表达和纯化可溶性GST-FHL2融合蛋白。方法(1)PCR法扩增FHL2 (Four and a half LIM domains 2)基因的编码片段,分别在5'端和3'端加上EcoR I和Xho l酶切位点,并克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;(2)利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-FHL2在大肠杆菌B121(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;(3)超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-FHL2融合蛋白;(4)通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-FHL2的表达。结果(1)成功构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,测序结果证明FHL2与载体的GST在同一读框;(2)0.1 mmol/L的IPTG在23℃的条件下能诱导可溶性GST-FHL2融合蛋白高效表达;(3)在Western blot分析中,GST-FHL2能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-FHL2的分子量相符。结论正确构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,在大肠杆菌BL21中高效表达GST-FHL2融合蛋白,经谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性GST-FHL2融合蛋白。 展开更多
关键词 fhl2 谷胱甘肽-S-转移酶 融合蛋白 原核表达 纯化
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慢性心房颤动心房肌中FHL2的表达 被引量:1
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作者 陆平兰 曾祥君 +3 位作者 黄焕雷 吴岳恒 武长礼 肖学钧 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1846-1849,共4页
目的研究风湿性心脏病合并慢性心房颤动心房肌中FHL2蛋白水平的变化,探讨FHL2改变在慢性心房颤动中的作用。方法按性别、年龄、二尖瓣狭窄程度、左房大小及肺动脉压力配对,收集接受瓣膜置换手术的风湿性二尖瓣狭窄患者共28例(窦性组14例... 目的研究风湿性心脏病合并慢性心房颤动心房肌中FHL2蛋白水平的变化,探讨FHL2改变在慢性心房颤动中的作用。方法按性别、年龄、二尖瓣狭窄程度、左房大小及肺动脉压力配对,收集接受瓣膜置换手术的风湿性二尖瓣狭窄患者共28例(窦性组14例,房颤组14例)。在建立体外循环时采取右心耳组织及部分慢性心房颤动患者左心耳组织(7例),用Western blot法检测FHL2蛋白在心房肌中的表达水平。结果在右心耳水平,房颤组FHL2蛋白(0.68±0.28 vs 0.51±0.18,t=2.488,P=0.027)表达水平较窦性组明显上调。房颤组FHL2蛋白的表达量在右心耳与左心耳差异无统计学意义(0.58±0.22 vs 0.50±0.13,t=0.984,P=0.363)。结论 FHL2蛋白在风湿性心脏病合并慢性心房颤动心房肌中表达上调,其可能参与慢性心房颤动的发生及维持。而FHL2蛋白在慢性心房颤动左、右心房肌的表达无明显差异,表明右心耳标本替代左心耳在本研究中的结果是可信的。 展开更多
关键词 风湿性心脏病 慢性心房颤动 fhl2蛋白 KV1 5钾通道
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利用RNAi抑制FHL2基因的表达 被引量:1
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作者 王朝云 周蕾 +3 位作者 丁丽华 吕秋军 杨晓 叶棋浓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1149-1151,共3页
目的:构建FHL2基因的siRNA真核表达载体,观察其对FHL2蛋白表达的影响。方法:利用RNAi干扰技术,设计并合成了两条针对FHL2基因的siRNA,将其克隆到siR-NA表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上。将重组质粒和带FLAG标签的FHL2共转染293T人胚肾细... 目的:构建FHL2基因的siRNA真核表达载体,观察其对FHL2蛋白表达的影响。方法:利用RNAi干扰技术,设计并合成了两条针对FHL2基因的siRNA,将其克隆到siR-NA表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上。将重组质粒和带FLAG标签的FHL2共转染293T人胚肾细胞,通过Western blot实验检验RNAi干扰效应。结果:经过酶切和测序证明,成功构建了FHL2 siRNA真核表达载体。通过Western blot证明,构建的siRNA能有效抑制FHL2基因的表达。结论:成功地构建了FHL2基因的siRNA真核表达载体,转染细胞后能有效地抑制FHL2基因的表达。 展开更多
关键词 fhl2 SIRNA 基因表达
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FHL2蛋白与心脏Kv1.5钾通道相互作用的研究 被引量:1
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作者 余宏 马青艳 林吉进 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第11期1125-1128,共4页
目的目前认为KCNA5通道蛋白是治疗房颤的一个理想靶点,文中旨在验证FHL2蛋白与KCNA5基因编码的心脏Kv1.5钾通道是否存在相互作用。方法①质粒构建:应用PCR法构建质粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2;②基因转染:应用Lipofectam... 目的目前认为KCNA5通道蛋白是治疗房颤的一个理想靶点,文中旨在验证FHL2蛋白与KCNA5基因编码的心脏Kv1.5钾通道是否存在相互作用。方法①质粒构建:应用PCR法构建质粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2;②基因转染:应用Lipofectamine 2000将pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5质粒和pcDNA3.0-FHL2质粒共转染HEK293细胞;③免疫共沉淀:应用抗FHL2抗体和Protein A/G Plus-Agarose沉淀目的蛋白,应用抗Myc抗体进行Western blot分析;④免疫荧光细胞化学分析:应用抗FHL2一抗和标记有FITC的二抗检测FHL2蛋白,应用抗Myc一抗和标记有Cy3的二抗检测KCNA5-Myc融合蛋白。结果①酶切和测序结果表明质粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2构建正确;②抗FHL2抗体能够将KCNA5从总蛋白中沉淀下来;③KCNA5蛋白和FHL2蛋白共定位于细胞膜上。结论初步证实FHL2蛋白与KCNA5蛋白存在相互作用。 展开更多
关键词 fhl2 KCNA5 钾通道 免疫共沉淀 免疫荧光细胞化学
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FHL2通过相互作用抑制分化抑制蛋白家族成员的转录抑制活性 被引量:1
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作者 韩为东 赵亚力 +4 位作者 伍志强 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《生物技术通讯》 CAS 2008年第6期791-794,共4页
目的:探讨FHL2与Id(分化抑制蛋白)家族蛋白之间的相互作用及FHL2对Id蛋白功能的调控效应。方法:用GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测FHL2与Id家族蛋白成员之间在体内外的相互作用;用共转染与报告基因驱动的萤光素酶方法检测FHL2... 目的:探讨FHL2与Id(分化抑制蛋白)家族蛋白之间的相互作用及FHL2对Id蛋白功能的调控效应。方法:用GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测FHL2与Id家族蛋白成员之间在体内外的相互作用;用共转染与报告基因驱动的萤光素酶方法检测FHL2对Id蛋白介导转录抑制效应的调控作用。结果:FHL2与Id家族的4个蛋白均存在直接的相互作用关系,表位分析结果显示FHL2蛋白中的第2个LIM结构域在FHL2/Id相互作用中是必需的,Id蛋白N端结构域在介导FHL2/Id相互作用中是必需的,FHL2/Id相互作用不依赖于Id蛋白中的螺旋-环-螺旋结构;通过相互作用,FHL2阻止了Id蛋白对碱性螺旋-环-螺旋转录因子E47转录活性的抑制作用。结论:FHL2是一个新识别的Id蛋白广谱的相互作用因子,通过对Id蛋白功能活性的抑制效应,FHL2可能参与Id介导的多种生物学效应以及肿瘤发生与进展。 展开更多
关键词 fhl2 分化抑制蛋白 相互作用 抑制子
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FHL2蛋白对心血管系统的调控作用 被引量:1
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作者 余宏 马青艳 林吉进 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期3662-3664,共3页
由4个半LIM 结构域组成的FHL家族蛋白(four and a half LIM domains protein)包括FHL1、FHL2、FHL3、FHT4 和ACT.FHL2蛋白参与多种蛋白质的相互作用以及多种转录因子、骨架蛋白、酶等的调控作用.这些作用已经发现在包括心律失常、心... 由4个半LIM 结构域组成的FHL家族蛋白(four and a half LIM domains protein)包括FHL1、FHL2、FHL3、FHT4 和ACT.FHL2蛋白参与多种蛋白质的相互作用以及多种转录因子、骨架蛋白、酶等的调控作用.这些作用已经发现在包括心律失常、心肌肥厚、动脉粥样硬化和心血管新生成等方面充当各种重要的角色.而心血管系统是一个精细而复杂的调控系统,心肌拥有复杂、内在的机制来调控相应的心肌重构.很多类型的蛋白,包括结构和信号网络,用于维持机体内稳态以及对环境压力的响应. 展开更多
关键词 心血管系统 调控作用 L2蛋白 动脉粥样硬化 fhl2 心肌肥厚 家族蛋白 转录因子
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放射诱导基因FHL2在人群中表达水平的检测 被引量:1
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作者 王凌雪 徐小洁 +4 位作者 蔺静 丁丽华 秦玺 程龙 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2009年第6期792-794,共3页
目的:分析FHL2基因在健康人群个体间表达的差异,评估FHL2作为一种新的辐射生物剂量计的可行性。方法:收集20例健康人血液样本,提取白细胞RNA进行反转录,以β-actin作为内参,利用实时定量PCR方法,检测人群中FHL2基因相对表达水平,并分析... 目的:分析FHL2基因在健康人群个体间表达的差异,评估FHL2作为一种新的辐射生物剂量计的可行性。方法:收集20例健康人血液样本,提取白细胞RNA进行反转录,以β-actin作为内参,利用实时定量PCR方法,检测人群中FHL2基因相对表达水平,并分析其差异。结果:FHL2和β-actin基因的实时定量PCR熔解曲线均为单峰,所得到的Ct值与相应的PCR产物呈良好的线性关系;20例血液标本中FHL2表达水平之间存在较大差异,且其表达水平与性别无关。结论:公认的放射诱导基因FHL2可能不适合作为辐射生物剂量计。 展开更多
关键词 fhl2基因 基因表达 生物剂量计
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与HERG钾通道相互作用的FHL2蛋白对该通道功能的调控 被引量:1
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作者 沈秀张 林吉进 +1 位作者 武君 黄瑞燕 《心脏杂志》 CAS 2009年第2期155-160,共6页
目的筛选与心脏人类果蝇相关基因(HERG)的编码蛋白钾通道存在相互作用的蛋白质,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的调控作用。方法①以带有编码人类心脏HERG钾通道的cDNA为模板,通过PCR方法得到编码人类心脏HERG钾通道氨基末端(... 目的筛选与心脏人类果蝇相关基因(HERG)的编码蛋白钾通道存在相互作用的蛋白质,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的调控作用。方法①以带有编码人类心脏HERG钾通道的cDNA为模板,通过PCR方法得到编码人类心脏HERG钾通道氨基末端(404个氨基酸)的DNA片段。将该片段克隆入pGBKT7载体,构建"诱饵"质粒pGBKT7-HERG-NT。②应用酵母双杂交技术筛选人类心脏cDNA文库。③以PCR法扩增4个半LIM结构域(FHL2)基因的开放读框片段(ORF),并克隆入pcDNA3.0载体。④以pcDNA3.0-herg转染HEK293细胞,应用G418筛选得到HEK293/HERG细胞株。以pcDNA3.0-FHL2转染HEK293细胞,筛选得到HEK293/FHL2细胞株后,再将pcDNA3.0-herg转染入该细胞株。⑤应用膜片钳技术,研究FHL2对HERG通道功能的影响。结果①用酵母双杂交技术筛选得到37个阳性克隆,其中含有表达FHL2蛋白的克隆。②膜片钳检测发现,FHL2蛋白在增加HERG电流幅度的同时并调节其激活过程。结论FHL2蛋白能与HERG氨基末端相互作用而影响HERG钾通道的功能。 展开更多
关键词 酵母双杂交 HERG fhl2 膜片钳技术
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FHL2基因与肿瘤的关系 被引量:1
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作者 杨洲 严文辉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第3期517-519,共3页
我国肿瘤的发病率呈逐年增高的趋势。目前的治疗手段主要是以手术治疗为主.辅以局部或全身的放疗及化疗等方法均未能使其疗效得到明显的提高。随着分子生物学技术的迅速发展和对肿瘤发病机制认识的不断深入.肿瘤的基因治疗也越来越受... 我国肿瘤的发病率呈逐年增高的趋势。目前的治疗手段主要是以手术治疗为主.辅以局部或全身的放疗及化疗等方法均未能使其疗效得到明显的提高。随着分子生物学技术的迅速发展和对肿瘤发病机制认识的不断深入.肿瘤的基因治疗也越来越受到人们的重视。肿瘤分子生物学和分子遗传学的研究表明原癌基因的激活、抑癌基因的失活和细胞凋亡基因的缺失是许多肿瘤的发生机制。 展开更多
关键词 肿瘤分子生物学 基因治疗 fhl2 分子生物学技术 细胞凋亡基因 手术治疗 分子遗传学 发病机制
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FHL2对心脏钾离子通道调控的研究进展 被引量:1
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作者 陆平兰 肖学钧 《心脏杂志》 CAS 2013年第1期100-103,共4页
FHL2蛋白是分子结构中仅含有4个半LIM结构域的蛋白质家族成员。LIM结构域是蛋白质——蛋白质相互作用的主要结构之一,可与多种蛋白结合成复合物发挥生物学功能。研究发现,FHL2能与多种蛋白质相互作用,如受体蛋白、结构蛋白、转录因子、... FHL2蛋白是分子结构中仅含有4个半LIM结构域的蛋白质家族成员。LIM结构域是蛋白质——蛋白质相互作用的主要结构之一,可与多种蛋白结合成复合物发挥生物学功能。研究发现,FHL2能与多种蛋白质相互作用,如受体蛋白、结构蛋白、转录因子、信号转导蛋白及代谢酶类等。FHL2对某些基因的表达发挥调控作用。新近研究发现,FHL2蛋白参与了一些心脏钾离子通道的调控。本文就FHL2的结构特点、分布表达及其参与心脏钾离子通道调控的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 fhl2 蛋白质-蛋白质相互作用 转录调控 钾离子通道
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FHL2与Id蛋白相互作用的表位分析
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作者 韩为东 赵亚力 +4 位作者 伍志强 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第2期206-208,共3页
目的:鉴定FHL2与Id家族蛋白成员之间的相互作用及分子表位。方法:GST-pulldown方法检测。结果:FHL2与Id家族的4个成员蛋白均存在直接的相互作用关系,FHL2蛋白中的第二个LIM结构域在FHL2/Id相互作用中是必需的,Id蛋白N端结构区域在介导FH... 目的:鉴定FHL2与Id家族蛋白成员之间的相互作用及分子表位。方法:GST-pulldown方法检测。结果:FHL2与Id家族的4个成员蛋白均存在直接的相互作用关系,FHL2蛋白中的第二个LIM结构域在FHL2/Id相互作用中是必需的,Id蛋白N端结构区域在介导FHL2/Id相互作用中是必需的。结论:FHL2是一个新识别的Id蛋白广谱相互作用因子,FHL2可能参与Id介导的多种生物学效应以及肿瘤发生与进展。 展开更多
关键词 fhl2 ID 基因表达调控 蛋白质相互作用图
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FHL2调控Id2功能活性的研究
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作者 伍志强 韩为东 +4 位作者 赵亚力 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第2期197-199,共3页
目的:探讨FHL2对Id2蛋白功能的调控效应。方法:将E47、5xE-Box-Luc、pRL-SV40、Id2以及FHL2表达载体分别共转染MCF-7、293T以及SH-SY5Y细胞,双荧光素酶报告基因方法检测不同转染组细胞中的相对荧光素酶活性。结果:三个细胞系中E47均显... 目的:探讨FHL2对Id2蛋白功能的调控效应。方法:将E47、5xE-Box-Luc、pRL-SV40、Id2以及FHL2表达载体分别共转染MCF-7、293T以及SH-SY5Y细胞,双荧光素酶报告基因方法检测不同转染组细胞中的相对荧光素酶活性。结果:三个细胞系中E47均显著上调了报告基因的表达,Id2抑制了E47的转录激活活性,而FHL2通过与Id2相互作用显著消弱了Id2对E47功能的抑制效应。结论:通过相互作用FHL2抑制了Id2蛋白的功能活性,FHL2是一个新的Id2蛋白功能抑制子。 展开更多
关键词 fhl2 ID2 蛋白质相互作用域和基序 阻遏蛋白质类
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