五指毛桃鉴别及质量标准研究进展

五指毛桃作为药食同源中药材具有悠久的应用史,主要有健脾补胃、行气利湿等功效。近年来,由于过分采挖、种植品种混杂及茎枝等不同部位混用,导致五指毛桃质量良莠不齐,真假难辨。本综述查阅了国内外近20年来的文献资料,总结五指毛桃的功效、鉴别方法及现行质量标准,旨在为五指毛桃准确鉴别及标准化质量评价体系建立提供参考。

五指毛桃饮片的质量标准研究

目的:完善五指毛桃饮片的质量标准。方法:收集不同产地的五指毛桃饮片29批,对其进行外观性状、粉末鉴别和薄层鉴别,并测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的含量;采用HPLC法测定其补骨脂素、佛手柑内酯的含量;建立其HPLC特征图谱,以补骨脂素(4号峰)为参照,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)》进行相似度评价,并确定共有峰。结果:五指毛桃饮片呈类圆形或不规则的厚片,表皮灰棕色至红褐色,皮部与木部易分离,质硬而脆,断面纤维性;粉末灰黄白色,可见石细胞、草酸钙方晶、淀粉粒、木栓细胞等;薄层鉴别结果发现,供试品和对照品在薄层板相应的位置显相同颜色的斑点;其水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、补骨脂素和佛手柑内酯的含量分别为5.67%~11.29%、1.90%~3.85%、0.06%~0.69%、5.71%~19.17%、0.01%~0.36%和0.01%~0.18%,平均值分别为8.02%、2.47%、0.23%、12.16%、0.17%和0.05%,拟定其水分、总灰分和酸不溶性灰分的含量分别不得超过12.0%、4.0%、0.7%,水溶性浸出物、补骨脂素和佛手柑内酯的含量分别不得低于6.0%、0.02%和0.01%;其特征图谱的相似度大于0.900,共确认了11个共有峰,指认4、5号峰分别为补骨脂素、佛手柑内酯。结论:所建标准可为科学评价五指毛桃饮片的质量提供参考。

毛桃二陈饮治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期临床观察

目的观察毛桃二陈饮治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的临床疗效及对炎症指标、血气分析指标的影响。方法将60例AECOPD患者按照随机数字表法分为常规组与毛桃组各30例。常规组视病情给予吸氧、舒张支气管、抗炎等西医常规综合治疗。毛桃组在西医常规综合治疗基础上,给予中药内服毛桃二陈饮治疗。两组均治疗2周,2周后评价临床疗效、中医症状积分、炎症指标、血气分析指标的变化。结果治疗后毛桃组总有效率为90.00%,高于常规组的76.67%(P<0.05)。治疗后,两组咳嗽、咯痰、喘息、胸闷、乏力积分及总积分均较治疗前明显降低(P<0.01),且毛桃组咳嗽、咯痰、胸闷、乏力积分较常规组明显降低(P<0.05)。两组治疗后血清C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)均较治疗前明显降低(P<0.01),且毛桃组CRP、PCT、IL-6水平均较常规组显著下降(P<0.05)。治疗后,两组血气分析指标氧分压(PaO2)、二氧化碳分压(PaCO_(2))均较治疗前明显改善,且毛桃组较常规组改善更明显(P<0.05)。结论毛桃二陈饮联合西医常规综合疗法能有效改善AECOPD患者临床症状,降低炎症指标,改善血气分析指标,提高临床疗效。

基于指纹图谱结合化学计量学评价栽培与野生五指毛桃质量

目的 建立五指毛桃的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,结合化学计量学方法确定野生、栽培五指毛桃的质量差异标志物。方法 色谱柱为Hypersil ODS2柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为320 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。对10批栽培五指毛桃与21批野生五指毛桃样品进行分析,建立HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)进行相似度评价,确认共有峰,通过与对照品比对指认共有峰,并结合化学计量学方法对野生、栽培五指毛桃的质量及其控制方法进行评价。结果 建立了31批五指毛桃样品的HPLC指纹图谱,共标定19个共有峰,以10批栽培五指毛桃指纹图谱的共有模式作为五指毛桃标准指纹图谱,经与对照品比对指认了其中3个差异性成分,分别为补骨脂素、芹菜素和5-甲氧基补骨脂素;以栽培五指毛桃的共有模式为对照图谱,10批栽培五指毛桃及21批野生五指毛桃的相似度分别为0.847~0.947和0.503~0.594;层次聚类分析和主成分分析将31批五指毛桃基本分为栽培和野生五指毛桃;偏最小二乘法-判别分析筛选得到6个差异标志物,经与对照品比对指认了其中3个差异性成分,分别为芹菜素、补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素。栽培五指毛桃的芹菜素含量为每100 g药材含0.007 7 g,高于野生五指毛桃的0.000 8 g。结论 所建立的指纹图谱合理、有效、准确,结合化学计量学方法表征信息更全面,可为五指毛桃的质量控制与品质评价提供参考。

基于网络药理学和分子对接探究五指毛桃治疗重症肌无力的作用机制

目的:利用网络药理学和分子对接技术预测五指毛桃治疗重症肌无力(Myasthenia Gravis,MG)的活性成分和靶点,并探讨其潜在的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库平台(TCMSP)、SwissADME、OMIM、GeneCards等数据库获取五指毛桃作用靶点及MG的疾病靶点间的交集靶点,利用STRING数据库平台解析各靶点间的相互作用、构建PPI网络图。利用Cytoscape 3.9.0软件进行“活性成分-疾病靶点”网络分析,在此基础上采用David数据库进行GO与KEGG基因功能富集分析。筛选出五指毛桃关键活性成分和靶基因后,利用Autodock vina和PyMol软件将活性成分与重要靶点进行分子对接,验证结合活性。结果:从五指毛桃中筛选出具有作用靶点的8个有效活性成分,预测得到TNF、IL6、EGFR、IL1B等8个五指毛桃治疗重症肌无力的可能蛋白靶点,通过介导TNF、Toll样细胞受体、PI3K-Akt、MAPK等信号通路,产生抗炎、提高自身免疫能力的作用,从而达到对抗重症肌无力的发生及进展,且初步验证得到成分与靶点间活性皆较为良好。结论:通过网络药理学和分子对接技术揭示了五指毛桃在治疗重症肌无力时多成分、多靶点、多通路的作用特点,并挖掘出五指毛桃治疗重症肌无力的可能靶点及信号转导机制。

救必应水提物与抗菌药联用对产ESBLs细菌的抑制效果

【目的】探讨救必应水提取物与抗菌药联合诱导细菌传代的体外抑菌活性,为救必应的综合开发利用提供参考依据。【方法】采用96孔反应板二倍微量稀释法体外检测救必应水提取物与抗菌药的最小抑菌浓度(MIC),并以1/2 MIC的救必应水提取物与抗菌药联合诱导产超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrum beta-lactamases,ESBLs)细菌传代,然后用微量棋盘稀释法测定救必应水提取物与抗菌药联合作用后的部分抑菌浓度指数(FICI)。【结果】救必应水提取物的MIC为1.0 g/mL,以0.5g/mL的救必应水提取物与阿莫西林、左氧氟沙星、克林沙星、磺胺间甲氧嘧啶、加替沙星、头孢噻呋钠6种抗菌药联合诱导产ESBLs细菌传代后MIC显著降低,联用后的FICI分别为0.375、0.750、0.750、0.515、0.750和0.750。【结论】救必应水提取物可明显增强抗菌药对产ESBLs细菌的抗菌活性,且呈协同或相加作用。

黄柏水提物联合抗菌药对产ESBLs大肠杆菌的抑菌效果

【目的】探讨黄柏水提物与抗菌药联用对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌的抑制效果,为黄柏的综合开发利用提供参考依据。【方法】采用二倍微量肉汤稀释法测定黄柏水提物与抗菌药的最小抑菌浓度（MIC）,并采用微量棋盘稀释法测定黄柏水提物与抗菌药联用后的分级抑菌浓度指数（FICI）。【结果】黄柏水提物对产ESBLs大肠杆菌的MIC为500 mg/m L,黄柏水提物与头孢曲松钠、阿莫西林、痢菌净、磺胺间甲氧嘧啶、头孢噻呋钠、头孢他啶、氟苯尼考、环丙沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、克林沙星、加替沙星、头孢噻肟联用后的FICI为0.50~2.01,其中,黄柏水提物与阿莫西林、头孢曲松钠、头孢噻呋钠、头孢他啶、头孢噻肟、痢菌净联用存在相加作用,与氟苯尼考联用存在协同作用,与诺氟沙星、左旋氧氟沙星、克林沙星、磺胺间甲氧嘧啶间为无关作用,与环丙沙星、加替沙星联用呈拮抗作用。【结论】黄柏水提物与青霉素类、第三代头孢菌素、痢菌净、氟苯尼考联用是通过相加或协同作用提高药物对产ESBLs大肠杆菌的抑制效果,但不宜与喹诺酮类抗菌药联合用药。

16味蒙药对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O8的体外抑菌效果研究

为筛选对奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(S.aureus)和大肠杆菌O8(E.coli O8)具有良好抑菌作用的蒙药,本试验采用牛津杯法测定金银花、黄连、何首乌、地榆、五味子、秦皮、穿心莲、甘草、蒲公英、夏枯草、虎杖、柴胡、黄柏、苦参、石榴皮、板蓝根16味蒙药的抑菌圈直径,微量稀释法和平板法测定蒙药的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC),棋盘法测定敏感蒙药对E.coli O8和S.aureus的协同指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)。结果显示,黄柏、金银花、黄连、五味子、蒲公英、秦皮6味蒙药对S.aureus的抑菌圈直径为10.22～22.44mm,MIC为15.6～250mg/mL;五味子、金银花、黄连、秦皮4味蒙药对E.coli O8的抑菌圈直径为11.29～26.41mm,MIC为15.6～500mg/mL;黄柏与黄连联合用药对S.aureus的FICI为0.36,为协同作用,黄连与地榆联合用药对E.coli O8的FICI为0.48,为协同作用。综上所述,金银花、黄连、五味子、秦皮、蒲公英、黄柏6味蒙药对S.aureus综合抑菌效果达极敏或高敏;金银花、黄连、五味子、秦皮4味蒙药对E.coli O8综合抑菌效果达极敏或高敏,黄柏、黄连、秦皮在抑制S.aureus的组方中可优先考虑,黄连与地榆在抑制E.coli O8的组方中可优先考虑。

24种中药对雏鸡致病性金黄色葡萄球菌地方流行株体外抑菌试验

为分析中药对雏鸡致病性金黄色葡萄球菌地方流行株体外抑菌效果,试验采用水提法提取24种中药有效成分,中药药液的浓缩为1 g生药/mL,利用平板打孔法和试管二倍稀释法分别测定24种中药对雏鸡致病性金黄色葡萄球菌体外抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC),采用微量肉汤棋盘稀释法测定2种敏感中药组合后的体外抑菌的联用抑菌指数(FICI)。结果显示:五味子、金银花、诃子、蒲公英、鱼腥草等5种中药的外抑菌效果较好,其抑菌圈直径在16.4~19.6 mm之间,其MIC在15.65~31.25 mg/mL之间,对其他药物存在不同程度的敏感性;诃子+金银花、金银花+蒲公英2种中药组合具有显著协同作用;诃子+五味子、金银花+五味子2种中药组合具有协同作用;诃子+蒲公英、诃子+鱼腥草2种中药组合具有相加作用;金银花+鱼腥草组合有拮抗作用。试验结果为进一步中药防治雏鸡致病性金黄色葡萄球菌病提供研究基础。

覆盆子提取物联合唑类药物抗真菌活性研究

目的探讨中药覆盆子提取物联合唑类药物的体外抗真菌作用。方法采用CLSI公布的M27-A方案微量液基稀释法和棋盘式微量稀释法,测定覆盆子提取物单用及联合唑类药物对不同念珠菌的MIC值和FICI指数。结果覆盆子不同溶液提取物与氟康唑均表现出协同关系,以覆盆子醇提物为例,单用对念珠菌的MIC80测定值范围主要集中在0.16～1.25 mg/mL,与氟康唑合用后表现出协同关系(FICI≤0.5),且MIC80测定值范围降至0.01～0.04 mg/mL;合用后的氟康唑抗真菌活性也明显增强。另外,覆盆子醇提物与不同唑类药物合用后均有协同关系,其MIC80测定值由单用时大于10 mg/mL降至0.04 mg/mL。结论覆盆子醇提物和唑类药物单用时对耐药念珠菌的抑菌作用较弱,但二者合用后表现出明显的协同关系,对耐药念珠菌的抑菌作用明显增强。

迷迭香酸与抗菌药联合对含fosA3基因细菌抑菌效果的研究

试验旨在探讨迷迭香酸与抗菌药联合体外抗含fosA3耐药基因大肠杆菌的效果。本试验对临床分离的细菌进行鉴定,确定细菌所含耐药基因种类,用牛津杯法测定迷迭香酸的抑菌活性,平板涂布法测定迷迭香酸的杀菌活性,采用96孔反应板二倍微量稀释法分别检测迷迭香酸与抗菌药的最小抑菌浓度(MIC),再用微量棋盘稀释法测定迷迭香酸与抗菌药联合作用后的分级抑菌浓度指数(FICI)。结果显示,分离到含fosA3耐药基因大肠杆菌;迷迭香酸的MIC为640μg/mL,迷迭香酸与环丙沙星、左旋氧氟沙星、黏杆菌素、加替沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢噻呋钠联合应用后其FICI≤0.5,有协同作用;与头孢曲松钠、诺氟沙星、痢菌净联合应用后0.5<FICI≤1,有相加作用;与阿莫西林、磷霉素、氟苯尼考联合应用后1<FICI≤2,存在无关作用。结果表明,迷迭香酸对含fosA3基因大肠杆菌有一定的抑菌活性和杀菌活性,其与部分抗菌药联合应用后,抗菌药体外抗菌活性显著增强。

微量显色法测定五指毛桃抑菌活性

[目的]采用微量显色法评价五指毛桃水提物对常见食源性致病菌的抑菌活性,并与传统抑菌测定方法比较,探讨其灵敏度。[方法]以五指毛桃根为材料,采用微量显色法、滤纸片扩散法和倍比稀释法研究五指毛桃水提取物的抑菌活性。[结果]噻唑蓝法检测五指毛桃水提物抑菌活性条件优化:菌液初始浓度105～106CFU/ml,噻唑蓝终浓度0.5 mg/ml;在该试验条件下,五指毛桃水提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,最低抑菌浓度分别为11.21和14.07 mg/ml。滤纸片法和倍比稀释法检测出五指毛桃水提物具有抑菌活性。[结论]噻唑蓝法比传统抑菌测定方法的灵敏度高,更适用于颜色较深的植物提取物的抑菌活性检测。

16味蒙药对3种血清型牛源致病性大肠杆菌体外抑菌及联合抑菌效果的研究

为研究蒙药对3种血清型牛源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)的体外抑菌效果,采用牛津杯法测定16味蒙药对受试菌株的抑菌圈直径,利用微量稀释法结合平板法测定最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),采用棋盘法测定敏感蒙药的协同指数(FICI)。结果表明,乌里史古—达兰—哈力苏、协日—洪连、乌拉勒吉嘎纳对3种血清型大肠杆菌的抑菌圈直径为16.10～29.64 mm,MIC为7.81～31.25 mg/mL,MBC为15.63～125 mg/mL。联合抑菌试验结果表明,乌拉勒吉嘎纳与协日—洪连,舒布格日—希木勒德格与呼仍—图如对E. coli O26的FICI为0.50,乌拉勒吉嘎纳与乌里史古—达兰—哈力苏对E. coli O83的FICI为0.50。结果提示,乌里史古—达兰—哈力苏、协日—洪连、呼仍—图如、乌拉勒吉嘎纳、阿纳尔对3种血清型大肠杆菌的综合抑菌效果较好;舒布格日—希木勒德格与呼仍—图如在抑制E. coli O26时表现为协同作用,组方时可优先考虑;乌拉勒吉嘎纳与乌里史古—达兰—哈力苏在抑制E.coli O83时表现为协同作用,组方中可优先考虑。

原儿茶酸或绿原酸与抗菌药联用对鱼源链球菌的抑菌效果

【目的】探讨原儿茶酸或绿原酸与抗菌药联用对鱼源链球菌的抑菌效果,为鱼源链球菌病的综合防治提供参考依据。【方法】采用微量二倍稀释法测定原儿茶酸、绿原酸及各种抗菌药对鱼源链球菌的最小抑菌浓度(MIC),并以1/2MIC的原儿茶酸或绿原酸分别联合抗菌药诱导鱼源链球菌进行传代培养,然后使用微量棋盘稀释法测定原儿茶酸或绿原酸与抗菌药联合作用后的部分抑菌浓度指数(FICI)。【结果】原儿茶酸和绿原酸对鱼源链球菌的MIC分别为2500和6000μg/m L,以1250μg/m L的原儿茶酸和3000μg/m L的绿原酸分别与痢菌净、阿米卡星、粘菌素、磺胺间甲氧嘧啶钠、克林沙星和磷霉素等抗菌药联合诱导鱼源链球菌传代后,除磺胺间甲氧嘧啶钠外,其他5种抗菌药对传代获得菌株的MIC明显降低。原儿茶酸与抗菌药配伍后的FICI分别为0.500、0.750、0.516、1.125、0.140和0.516,绿原酸与抗菌药配伍后的FICI分别为0.501、0.625、0.501、>2.000、0.140和0.501。依据FICI的判定标准可知,原儿茶酸与痢菌净和克林沙星配伍呈协同效应,与阿米卡星、粘菌素和磷霉素配伍呈相加效应,与磺胺间甲氧嘧啶钠配伍表现为无关效应;绿原酸与阿米卡星和克林沙星配伍呈协同效应,与痢菌净、粘菌素和磷霉素配伍呈相加效应,与磺胺间甲氧嘧啶钠配伍则呈拮抗效应。【结论】原儿茶酸或绿原酸与抗菌药配伍后能增强大部分抗菌药对鱼源链球菌的抑菌活性,呈协同或相加作用,可在水产养殖生产中推广应用。

爬山虎水提液与抗菌药联用对含fosA3基因大肠杆菌的抑菌效果

【目的】探讨爬山虎水提液与抗菌药联用对含fos A3基因大肠杆菌的抑菌效果,为爬山虎的综合开发利用提供参考依据。【方法】从病猪的肠道组织分泌物中分离菌株,对其进行鉴定和fos A3基因检测,采用二倍微量稀释法检测爬山虎水提液与不同抗菌药的最小抑菌浓度（MIC）,然后用微量棋盘稀释法测定爬山虎水提液与抗菌药联用的抑菌浓度指数（FICI）。【结果】分离获得的菌株为含fos A3基因大肠杆菌,爬山虎水提液对含fos A3大肠杆菌的MIC为500g/m L。以500 g/m L爬山虎水提液与头孢曲松钠、磷霉素、粘杆菌素、痢菌净、磺胺间甲氧嘧啶、阿米卡星、头孢噻呋钠、氟苯尼考、头孢噻肟等9种抗菌药联用的FICI为0.188~1.000,其中,爬山虎水提液与粘杆菌素、氟苯尼考间存在协同作用,与头孢曲松钠、磷霉素、痢菌净、磺胺间甲氧嘧啶、阿米卡星、头孢噻呋钠、头孢噻肟呈相加作用。【结论】爬山虎水提液可增强部分抗菌药对含fos A3大肠杆菌的抗菌活性,且呈协同或相加作用。

五指毛桃镇咳及平喘作用研究

目的:观察五指毛桃镇咳及平喘的作用。方法:通过小鼠浓氨水引咳法、豚鼠枸橼酸引咳法、豚鼠组胺-乙酰胆碱超声雾化法、离体豚鼠气管平滑肌痉挛法及豚鼠过敏性休克法观察五指毛桃的镇咳平喘作用。结果:五指毛桃能明显减少氨水引发小鼠及枸橼酸引发豚鼠咳嗽反应的次数,并延长咳嗽潜伏期,对抗组胺-乙酰胆碱引起的豚鼠支气管哮喘,对磷酸组胺所致豚鼠离体气管平滑肌收缩有拮抗作用,并具有抗豚鼠过敏性休克的作用。结论:五指毛桃具有良好的镇咳及平喘作用。

HPLC法测定五指毛桃中补骨脂素和芹菜素的含量

目的建立五指毛桃中补骨脂素和芹菜素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法对五指毛桃药材中补骨脂素和芹菜素进行含量测定。色谱柱:YMC C18柱(250mm×4.60mm,5μm);流动相:甲醇-0.2%磷酸,梯度洗脱;流速:1.0mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:补骨脂素245nm,芹菜素338nm;进样量:10μL。结果补骨脂素在0.0836～1.0450μg范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率100.43%,RSD%=0.45%(n=9);芹菜素在0.0656～0.8200μg范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率100.41%,RSD%=0.34%(n=9)。结论所建立的方法简便、快捷,重现性好,可用于该药材的质量评价。

五指毛桃不同采收部位挥发油及醇提物成分的分析

【目的】确定五指毛桃不同采收部位的质量。【方法】应用气相色谱 质谱联用 (GC MS)法分别对五指毛桃不同采收部位中挥发油的含量和成分以及醇提物的成分进行分析。【结果】五指毛桃根皮中挥发油的含量高于根木质部 ;五指毛桃根皮与根木质部所含的化学成分相似 ,挥发油成分以十六酸、油酸 +亚油酸、亚油酸酰胺、软脂酸酰胺、硬脂酸酰胺、邻苯二甲酸二丁酯为主 ;其乙醇提取物中以补骨脂素、十六酸、十六酸乙酯、佛手内酯、油酸、亚油酸为主。根皮中补骨脂素的含量高于木质部。【结论】五指毛桃不同采收部位所含化学成分相似 ,其中根皮部的挥发油成分和补骨脂素含量均高于木质部。

五指毛桃质量标准的研究

目的研究五指毛桃的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对五指毛桃中的补骨脂素进行定性鉴别,并用反相高效液相色谱法测定补骨脂素含量。结果补骨脂素在(0.0772～0.386)μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好(r=0.99997),平均回收率为99.2%,RSD=2.15%。方法精密度(RSD)为2.50%(n=6)。结论所用方法简便、准确、可靠,能有效地控制五指毛桃的质量。

五指毛桃及其混淆品的鉴别研究

目的:五指毛桃为广东地区习用药材,商品中存在较多混淆品。该文拟对五指毛桃及其可能的混淆品进行鉴别研究。方法:采用TLC法对五指毛桃及其混淆品进行定性鉴别,同时采用HPLC法进行定量分析,以及利用ITS2序列进行DNA条形码鉴定。结果:TLC鉴别检出五指毛桃和琴叶榕中均含有补骨脂素,而变叶榕、对叶榕和构树中则未检出补骨脂素;建立了基于HPLC法检测五指毛桃及其混淆品中补骨脂素、佛手柑内酯与芹菜素的定量方法;建立了基于ITS2序列的五指毛桃及其混淆品的DNA条形码,NJ树显示五指毛桃及其混淆品可从分子水平上得以区分。结论:综合运用不同的鉴定方法可对五指毛桃及其混淆品进行准确和全面的鉴定,为五指毛桃的鉴别提供新的科学依据。