Figla基因过表达促进小鼠胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化

生殖系a因子(Figla)是最早表达的生殖细胞特异性转录因子之一,对卵泡的发育、Zp基因的表达和透明带的形成具有调节作用.Figla基因异常会引起卵巢早衰的发生.本研究通过PCR自小鼠基因组中扩增出Figla基因,将其克隆到真核报告载体pDsRed1-N1,构建了携带609 bp的Figla重组载体pDsRed1-N1-Figla.用该载体转染小鼠胚胎干细胞(mESCs)系J1、小鼠成纤维细胞系NIH-3T3、小鼠畸胎瘤细胞P19和小鼠精原细胞系GC1,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白(RFP)在细胞中的表达,同时检测转染细胞中Figla基因及其它生殖细胞特异性基因的表达.结果显示,转染2 d,mESCs内Figla总表达量明显增加,且内源性表达量亦有所提高,即转入的外源性Figla基因可以促进内源性Figla的启动和表达.免疫荧光染色显示,表达RFP的细胞同时表达生殖特异性基因Vasa,减数分裂特异性基因Stra8、Scp3及卵母细胞标志基因Zp3.通过QRT-PCR检测发现,在转染3 d的细胞中,Vasa、Scp3和Zp1的表达较对照组均有明显上调,而Oct4和Stra8的表达量下降.研究表明,Figla基因对生殖特异性基因的表达具有调控作用,可以激活雌性生殖基因表达,为更清楚地了解Figla基因在生殖细胞生长发育过程中的调控机制,以及发现该基因在生殖细胞中的新功能奠定了基础.

湘西黄牛超数排卵和冲胚效果与卵巢Figla基因表达水平之间的关系

利用real-time PCR和原位杂交技术分析了Figla(factor in the germline alpha)基因在湘西黄牛卵巢中的相对表达量与定位表达情况。结果显示:能冲出较多优质胚胎的湘西黄牛个体,卵巢组织中Figla基因mRNA水平的表达量要显著高于对照组(P<0.05)。Figla基因mRNA在牛卵巢组织中的初级卵泡、次级卵泡和成熟的有腔卵泡都有表达。而且Figla基因在有腔卵泡的卵母细胞中的胞质中表达,但在细胞核中没有表达。结果说明:湘西黄牛超数排卵和冲胚效果与卵巢Figla基因表达水平之间存在一定的关系,Figla基因可能是卵泡和早期胚胎发育的双重关键基因。