1例FLG基因复合杂合突变所致寻常型鱼鳞病的临床及遗传学分析

目的检测一个寻常型鱼鳞病家系FLG基因的突变情况。方法根据典型的临床表现,1例先证者诊断为寻常型鱼鳞病。提取患者及其家系外周血DNA,采用遗传性皮肤病多基因芯片对先证者进行高通量测序,确定突变位点,再采用Sanger测序法对先证者和家系的DNA进行双向验证。结果先证者FLG基因发生c.3321delA及c.6950_6957delCATCCCAT复合杂合突变。家系中其余4人为其中1个突变的携带者。对这2个突变位点进行功能预测显示,c.3321delA及c.6950_6957delCATCCCAT复合杂合突变,导致编码氨基酸发生p.G1109Efs*13及p.S2317*改变,最终影响FLG基因编码的中间丝相关蛋白原的功能。结论FLG基因复合杂合突变是先证者的致病突变。

FLG基因及相关疾病研究进展

丝聚蛋白(filaggrin,FLG)基因位于人类染色体1q21.3,其翻译表达产物与维持皮肤屏障和细胞分化功能密切相关。研究发现FLG基因的多态性与特应性皮炎、银屑病、寻常型鱼鳞病等多种疾病发病相关,本文对近年关于FLG基因及与其相关疾病的研究进行了综述。

全反式维A酸对HaCaT细胞中皮肤屏障相关因子Flg及Klf4的影响

目的研究全反式维A酸作用于人角质形成细胞HaCaT细胞后,通过分子水平检测Flg及Klf4的变化,以明确维A酸对皮肤屏障相关因子的影响及可能分子机制。方法 1μmol/L的全反式维A酸作用HaCaT 36h后,检测Flg,Klf4在基因及蛋白水平的变化。结果全反式维A酸作用HaCaT细胞36h后,实时定量PCR法及免疫印迹技术结果显示实验组Flg,Klf4表达下降。结论全反式维A酸作用于HaCaT细胞后,引起Flg及Klf4在基因及蛋白水平表达的下调,从分子生物学角度提示全反式维A酸可引起皮肤屏障的破坏。

中国北方特应性皮炎儿童FLG基因突变检测

目的探讨FLG基因突变与中国北方儿童特应性皮炎（AD）的相关性。方法采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性技术,检测59名年龄为6个月~12岁临床确诊的AD患者和169名健康人中E2422X、S2554X、S2889X、S3296X和R4307X这5个FLG突变位点的突变情况。结果 AD患者和健康对照者均未检测出FLG阳性突变结果。结论 FLG突变和本组AD患者的发病无关。FLG突变可能存在地域和种族人群的差异,但阴性结果也可能和样本量过少有关。

中国寻常型鱼鳞病患者FLG基因变异的研究

目的在中国寻常型鱼鳞病患者中验证FLG基因已知的突变,并期望发现FLG基因新的变异。方法收集4个寻常型鱼鳞病家系与95份散发病例的外周静脉血,并采集52名无血缘关系健康志愿者的外周静脉血,采用PCR及DNA直接测序的方法,对已报道的FLG基因18个突变位点进行检测。结果发现了7个频发致病突变,包括4个无义突变E2422X、Q2417X、R2447X和R4307X及3个移码突变441delA、1249in-sG和7945delA,并发现FLG基因3个新的变异Q1790X、Q1745X和7877delC。结论寻常型鱼鳞病存在明显的遗传异质性,中国寻常型鱼鳞病患者在FLG基因上有其特异的突变位点。

长链非编码RNA FLG-AS1对宫颈癌细胞侵袭、迁移和STAT3/VEGF通路的影响

目的探讨长非编码RNA丝聚蛋白反义RNA 1(FLG-AS1)对宫颈癌细胞侵袭、迁移和信号转导和转录激活因子3(STAT3)/血管内皮生长因子(VEGF)通路的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测宫颈上皮细胞End1/E6E7及宫颈癌细胞(CaSki、C-33A、HeLa和SiHa)的FLG-AS1水平,脂质体法向SiHa细胞转染FLG-AS1过表达载体(pcDNA3.1-FLG-AS1组)和空载体(pcDNA3.1组),并设仅经脂质体处理的对照组,MTT比色法评估细胞增殖活力,划痕实验和Transwell小室实验检测划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测FLG-AS1、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)和VEGF水平。结果宫颈癌细胞的FLG-AS1水平均低于End1/E6E7细胞(P<0.05)。与对照组(1.009±0.121)和pcDNA3.1组(0.994±0.123)的FLG-AS1水平相比,pcDNA3.1-FLG-AS1组SiHa细胞的FLG-AS1水平明显升高(44.634±5.108),差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-FLG-AS1组SiHa细胞转染48、72 h的增殖活力降低(P<0.05)。pcDNA3.1-FLG-AS1组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(39.817±1.385)%和(160.574±16.492)个,低于对照组的(82.601±4.383)%和(327.106±28.539)个及pcDNA3.1组的(79.518±3.526)%和(348.558±19.861)个(P<0.05)。与对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-FLG-AS1组的p-STAT3和VEGF水平均降低(P<0.05),而STAT3变化的差异无统计学意义(P<0.05);对照组和pcDNA3.1组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论FLG-AS1在宫颈癌细胞中低表达,过表达其水平可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,可能通过STAT3/VEGF信号途径来发挥抑癌作用。

FLG基因与特应性皮炎

特应性皮炎是一种慢性、复发性、炎症性皮肤病,以皮肤干燥和剧烈瘙痒为特征。特应性皮炎的发病被认为与表皮通透屏障功能缺陷及免疫失调相关,目前争论的焦点在于哪一个作为其发病的始动因素。FLG基因对维持皮肤屏障功能的角质层的形成和水合起关键作用,FLG基因的失功能性突变可能是影响特应性皮炎临床表现型和病情严重性的重要因素,但特应性皮炎患者中由于FLG基因突变引起的特征目前尚未确定,提示FLG基因的失功能性突变可能并非特应性皮炎的特异性突变。

Flg22诱导的海带孢子体防御反应初步研究

以鞭毛蛋白N端一个保守的22个氨基酸多肽（flg22）为激发子,研究其诱导海带孢子体防御反应的特征,以丰富植物分子病理学理论。采用Evans blue染色方法发现,flg22诱导后2 h内,未能观察到海带孢子体细胞死亡现象,诱导后4~10 h,观察到大量死亡的细胞。TUNEL（TdT-mediated dUTP-biotin nick and labeling）检测方法证实,受flg22诱导后海带孢子体有DNA断裂现象,而且3’-OH末端断裂的数量随诱导时间的延长而增多,并有从诱导部位向外扩散的趋势。运用Luminol荧光检测方法检测到受flg22诱导后海带孢子体H2O2释放量迅速增加,至3 h时达到峰值,约为20μmol/L。应用荧光染料2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠（DCFH-DA）进行ROS组织学检测,发现flg22诱导后1 h即观察到绿色的荧光信号,信号强度随诱导时间的延长而增加,诱导后3 h信号最强,随后绿色荧光信号的强度逐渐减弱。ROS的产生趋势与Luminol荧光检测方法的结果相一致。结果表明,flg22也是诱导海带孢子体防御反应的有效激发子。

Ce掺杂LaMnO3/PS-FLG催化剂低温脱硝性能研究

以农业废弃物花生壳衍生少层石墨烯(PS-FLG)为载体,采用水热法制备负载型催化剂,对其NH3-SCR脱硝性能进行了测试。通过XRD,FTIR,SEM等测试手段初步探明了活性组分Ce在A位进行掺杂增强催化活性的内在机制。结果表明,在250℃-350℃时催化剂活性都能达到90%以上并保持稳定,且催化剂5%La0.5Ce0.5MnO3/PS-FLG表现出最好的低温催化活性。金属氧化物更均匀地分散在少层石墨烯表面,使其表现出更好的脱硝活性。

FLG基因及其突变与婴幼儿哮喘相关性研究进展

丝聚蛋白(FLG,filaggrin)基因是位于人类染色体1q21.3的一个基因,有多个突变位点,并突变点有明显的种族以及人群差异性。多项研究指出:FLG突变与鱼鳞病、特应性皮炎、过敏性鼻炎、哮喘等特应性疾病相关。哮喘(asthma)是儿科中最常见的慢性呼吸道疾病,并且哮喘的发病率和死亡率均有逐渐增加的趋势。近年来,哮喘的候选基因研究已经不断完善,FLG基因就是新发现的一个哮喘易感基因。通过对FLG基因与婴幼儿哮喘相关性的研究,可进一步认识哮喘的发病机制,并能为哮喘的早期诊断及早期干预提供新思路,为哮喘的基因诊断及治疗开辟新道路。

中医综合诊疗方案对脾虚湿盛型银屑病患者皮损组织FLG、K17蛋白表达及皮肤屏障功能的影响

目的:探讨中医综合诊疗方案对脾虚湿盛型银屑病患者皮损组织丝聚蛋白(FLG)、角蛋白17(K17)蛋白表达及皮肤屏障功能的影响。方法:设立以口服甲氨蝶呤片,外用卡泊三醇乳膏,NB-UVB光疗为主的对照组和口服健脾解毒汤,外用中药药浴、普连乳膏和走罐疗法为主的治疗组,两组全部接受4周治疗。对两组治疗前后靶皮损组织FLG、K17蛋白的表达与皮肤屏障功能[经皮水分散失(TEWL)、角质层含水量]、银屑病面积与严重程度指数(PASI)评分比较,以观察其临床疗效及对皮肤屏障功能的影响。结果:两组患者治疗后,PASI评分较治疗前显著降低(P<0.01),皮损组织内FLG蛋白几乎均表达于角质层,分布均匀,表达量较治疗前显著增多(P<0.01),K17蛋白表达极弱甚至不表达。两组治疗后角质层含水量较治疗前显著增加(P<0.01),同时TEWL丢失显著减少(P<0.01)。治疗组疗效显著优于对照组(P<0.05)。结论:中医综合诊疗方案治疗脾虚湿盛型银屑病,可以减轻皮损症状,影响皮损组织FLG、K17蛋白的表达,改善皮肤屏障功能,提高临床治疗效果。

寻常型鱼鳞病两家系的FLG基因新的错义突变

目的检测两个中国汉族寻常型鱼鳞病（ichthyosis vulgaris，IV）家系的基因突变，明确其遗传学病因。方法应用聚合酶链反应扩增家系中患者及正常成员FLG基因的全部外显子及外显子一内含子交界区域，并进行DAN测序，以100名无亲缘关系的正常个体作为对照。结果DNA直接测序结果显示，家系1的患者均存在FLG基因第3外显子c．1360A〉G突变，导致第454位苏氨酸被丙氨酸替代（p．T454A）；家系2的患者均存在FLG基因第3外显子c．10363G〉T突变，导致第3455位天冬氨酸被酪氨酸替代（P．D3455Y）；而两个家系中正常成员及100名无亲缘关系的正常对照均未检测到相应突变。结论FLG基因的c．1360A〉G和c．10363G〉T错义突变可能导致编码蛋白质的结构和功能发生改变，分别是这两个家系患病的遗传学缺陷基础。

10个中国汉族寻常型鱼鳞病家系的FLG基因突变分析

目的对10个寻常型鱼鳞病（ichthyosisvulgaris，IV）家系的FLG基因进行突变检测，并分析中国汉族人IV患者FLG基因的突变热点。方法用聚合酶链反应扩增10个IV家系的所有患者及正常成员FLG基因的全部外显子，对扩增产物直接进行DNA测序检测突变，同时选取100名无亲缘关系的正常人作为对照。结果在7个家系中发现了3种FLG基因的致病突变，包括C．3321delA、C．5757delccAG和C．8138C〉T（P．$2706X），其中有两例患者的突变类型为3321delA的纯合突变，在另外3个家系中未发现FLG基因的突变。所有家系的正常成员和100名正常对照均未发现c．5757delCCAG和C．8138C〉T（P．S2706X），而在2名正常对照中发现其携带C．3321delA杂合突变。结论在中国汉族IV家系检测到3种FLG基因的突变类型，其中C．332ldelA是最常见的突变类型（46．9％）。首次发现C．5757delCCAG和C．8138C〉T（P．$2706X）突变与IV相关。部分家系未检测到FLG基因突变，推测可能由其他致病基因导致。

上海某中学青少年特应性皮炎和鱼鳞病FLG基因型的研究

目的探讨青少年FLG基因型、了解特应性疾病患病率、发展进程及其FLG基因的关系。方法上海某中学334例11—19岁青少年作为研究样本，进行鱼鳞病、特应性皮炎（AD）、哮喘、鼻炎等特应性疾病的临床病史及体征观察、记录。285例进行了外周血采样及FLG基因高频突变筛查。5年后，进行样本人群随访，观察并记录各特应性疾病的临床症状及体征。结果5年前，334例青少年中AD19例（5．69％），寻常性鱼鳞病14例（4．19％），过敏性鼻炎36例（10．78％），哮喘4例（1．20％）。在完成FLG基因测序的285例样本中，携带FLG基因高频突变者24例（8．42％）。5年后完成随访265例，失访69例（20．66％），AD、鱼鳞病、过敏性鼻炎及哮喘的患病人数分别为13例（4．89％）、15例（5．64％）、27例（10．15％）、1例（0．38％），原19例AD中6例进入完全缓解期，13例SCORAD评分明显下降，原36例过敏性鼻炎中9例症状消失。单纯AD、单纯鱼鳞病、AD合并鱼鳞病的FLG基因高频突变率分别为10．0％、55．6％、40．0％，且患鱼鳞病与FLG基因突变有关（P〈0．001）。结论青少年中，FLG基因高频突变率为8．42％。FLG基因是寻常性鱼鳞病的半显性遗传因素，中间丝聚合蛋白的表达受多因素影响。

flg22诱导的拟南芥转录组分析及芥子油苷代谢途径的变化

flg22是细菌鞭毛蛋白N端的一段保守性极高的区域,能够诱导植物天然的免疫反应,为全面了解植物在受到细菌性病原菌侵害后的系统响应,利用Illumina Hiseq2000对flg22处理和未处理的拟南芥幼苗进行转录组测序。对两组数据进行差异表达分析,共获得1 200个差异表达基因,包括290个下调基因和910个上调基因。对差异表达基因进行GO富集分析和KEGG pathway富集分析,结果显示,flg22处理后,拟南芥在能量代谢、氨基酸代谢及次生代谢产物的生物合成等方面产生了巨大变化。芥子油苷是一类在植物防御病原菌的天然免疫反应中起重要作用的次生代谢产物,因此对芥子油苷代谢途径的变化进行了深入分析。根据测序结果,Flg22处理后吲哚族芥子油苷合成途径的基因表达水平显著提高,而脂肪族芥子油苷代谢途径几乎没有变化,进一步对吲哚族芥子油苷合成途径的关键酶基因进行Real Time RT-PCR的分析,验证了测序结果的正确性,证明了吲哚族芥子油苷在植物抗病防御反应中的重要作用。这为深入理解病原菌诱导的植物防御性反应及吲哚族芥子油苷的抗病机制提供了大量参考数据。

FLG基因SNPs与延边朝鲜族特应性皮炎的相关性

目的探讨丝聚蛋白(FLG)基因单核苷酸多态性(SNPs)与延边地区朝鲜族特应性皮炎(AD)的关系。方法选择70例AD患者和90例正常对照人群作为研究对象,使用PCR法,分析FLG基因2个SNPs位点(rs11584340及rs3126085)的基因型与等位基因情况,探讨AD组及对照组等位基因、基因型频率分布情况。结果 FLG基因2个SNPs rs11584340(G)和rs3126085(G)等位基因频率、基因型频率在AD组、对照组之间均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05);在延边朝鲜族人群AD组与对照组之间rs11584340和rs3126085位点的等位基因频率、基因型频率差异无统计学意义(P>0.05);rs11584340与rs3126085为强连锁不平衡(D'=1.00,r^2=0.84);延边地区朝鲜族FLG基因2个SNPs的等位基因频率与Hap Map数据库(ss41111533,ss17361789)比较均存在差异,rs11584340-G等位基因频率显著低于非洲人(YRI)和欧洲人(CEU)(P<0.01);rs3126085-G等位基因频率显著低于CEU(P<0.01)。结论延边朝鲜族rs11584340和rs3126085为强连锁不平衡;FLG基因SNP存在种族差异和民族差异;FLG基因rs11584340和rs3126085多态可能与中国延边地区朝鲜族AD易感性不相关。

FLG基因单核苷酸多态性与儿童支气管哮喘的相关性研究

目的探讨丝聚蛋白(FLG)基因单核苷酸多态性(SNPs)与儿童支气管哮喘(哮喘)的发生及相关临床指标的关系。方法本研究为病例-对照研究。采用非随机抽样方法,选取2019年3月至2021年3月北部战区总医院诊治的101例哮喘患儿为病例组,同期在北部战区总医院体检正常的健康儿童77名为对照组。应用SNaPshot测序技术检测FLG基因rs11204981、rs1933064和rs146466242位点SNPs并分析单体型,探讨病例组和对照组3个位点SNPs/单体型对儿童哮喘易感性的影响,同时测定嗜酸粒细胞百分比(EOS%)、免疫球蛋白E(IgE)、呼出气一氧化氮(FeNO)和肺功能。结果(1)FLG基因rs11204981、rs1933064和rs146466242位点基因型及等位基因在病例组和对照组间的分布差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(2)FLG基因3个位点SNPs与病情严重程度和有无湿疹史病例组间的分布差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(3)FLG基因rs11204981位点携带次要等位基因的G/A和G/G基因型EOS%高于A/A基因型,G/A基因型IgE高于A/A基因型,差异均有统计学意义(P值均<0.05);rs146466242位点T/A基因型EOS%、IgE高于T/T基因型,T/A基因型最高呼气流量占预计值百分比(PEF%pred)低于T/T基因型,差异均有统计学意义(P值均<0.05);rs1933064位点不同基因型间EOS%、IgE、FeNO及肺功能差异无统计学意义(P>0.05)。(4)FLG基因rs11204981、rs1933064和rs146466242位点共构成3种单体型,单体型与罹患哮喘的风险差异无统计学意义(P>0.05)。结论FLG基因rs11204981、rs1933064和rs146466242位点并非为儿童哮喘及合并湿疹史儿童哮喘的易感位点,其构成的单体型与儿童罹患哮喘无相关性;rs11204981和rs146466242位点携带次要等位基因可能与EOS%和IgE的升高有关。

X连锁隐性鱼鳞病基因型表型分析

目的:分析4例X连锁隐性遗传性鱼鳞病(X-linked ichthyosis,XLI)患者的临床表现及遗传变异。方法:从中国汉族人群收集XLI患者,记录临床特征及家系信息,通过全外显子组测序分析患者基因上的单核苷酸变异(SNV)、插入和缺失(INDEL)及拷贝数变异(CNV)。结果:共收集4例XLI患者,均检测到STS基因缺失。其中1例患者同时伴有一个已报道的FLG基因无义突变:c.5368C>T(p.Gln1790Ter),该患者表现类似表皮松解性鱼鳞病症状。结论:XLI临床表现差异较大,全外显子组测序是一种诊断XLI的有效方法。携带FLG基因突变的XLI患者倾向于更重的临床表现。

绿梅香橼双菌发酵滤液对皮肤屏障的影响及其机理研究

通过CCK8实验研究绿梅香橼双菌发酵滤液(Green plum/citron double-strain fermentation filtrate,DSF)对角质形成细胞(HaCaT)增殖率的影响,q PCR研究DSF对十二烷基硫酸钠(SLS)模型中HaCaT细胞丝聚合蛋白(FLG)、兜甲蛋白(LOR)、封闭蛋白1(CLD1)的mRNA转录水平的影响,Elisa实验研究DSF对模型中HaCaT细胞上清液中TNF-α含量的影响。结果表明,DSF对HaCaT细胞没有毒性,能提升模型中HaCaT细胞中FLG、LOR、CLD1的mRNA转录水平,能降低模型中HaCaT细胞上清液中TNF-α含量,DSF具有一定的强化皮肤屏障的护肤功效。

高水平项目研究生学术英语写作案例调查与分析

通过问卷调查和半结构化访谈调查分析来自中国某985高校英语培训中心的51名不同学科的中国高水平项目(HLP)研究生在学术英语写作方面的困难和写作习惯,探讨了目前学术英语写作课存在的一些问题和亟待提高的写作技能,提出了有利于学术英语写作教学改革的建议,包括内容依托式语言教学(CBI)的学科英语读写能力的培养模式和功能语言分析法(FLG),以期提高我国现阶段HLP研究生的学术英语写作教学的水平。