miR-155表达与FLT3-ITD^(+)急性髓系白血病细胞系药物敏感性的关系及机制研究

目的:研究miR-155的表达与FLT3-ITD^(+)急性髓系白血病细胞系药物敏感性的关系及潜在的调控机制。方法:通过CRISPR/Cas9基因编辑工具在FLT3-ITD^(+)AML细胞系MV411中实现miR-155编码基因敲除,筛选单克隆细胞,PCR及Sanger测序鉴定单克隆细胞的基因型,实时荧光定量逆转录PCR鉴定成熟miRNA的表达水平。MTT法计算半数抑制率,比较MV411细胞对多柔比星、奎扎替尼以及米哚妥林的药物敏感性。转录组测序分析miR-155敲除后MV411细胞mRNA水平的变化,基因集富集分析获得miR-155敲除后的信号通路的变化水平,Western blot验证信号通路关键分子的表达。结果:通过PCR初筛和Sanger测序获得了4个基因敲除的杂合子和1个基因插入的杂合子。实时荧光定量逆转录PCR结果显示,这些单克隆细胞中成熟miR-155的表达显著低于野生型克隆。MTT结果显示,与野生型相比,miR-155基因敲除后MV411细胞对多种抗FLT3-ITD^(+)AML的药物敏感性有了显著增加。RNA测序显示miR-155敲除后mTOR信号通路和Wnt信号通路受到抑制。Western blot结果显示,信号通路关键分子p-mTOR、Wnt5α、β-catenin的表达下调。结论:miR-155敲除后能显著提升MV411细胞对多柔比星、奎扎替尼和米哚妥林的药物敏感性,这与包括mTOR及Wnt信号通路在内的多条信号通路的抑制有关。

急性髓系白血病FLT3抑制剂及耐药机制的研究进展

FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine ki-nase 3,FLT3)基因突变在急性髓系白血病(AML)中发生率最高,且与不良预后相关。针对FLT3突变已经开发了多种靶向抑制剂,且取得了较好的临床疗效。但随之出现的耐药为FLT3靶向治疗AML带来新的挑战。本文将对FLT3突变在AML中的病理和预后作用、目前常用FLT3抑制剂(Ⅰ型和Ⅱ型)的研究进展、FLT3抑制剂耐药的机制及如何克服作一综述。

FLT3突变在急性髓系白血病中的研究进展

急性髓系白血病(AML)是起源于造血干细胞的一种具有异质性的血液系统肿瘤。FLT3是一种在细胞信号转导通路中重要的受体酪氨酸激酶,也是AML中常见的突变基因之一。AML患者伴FLT3-ITD突变提示预后差、易复发,因此早期识别FLT3基因突变,选择合适的治疗方案尤为重要。目前,小分子靶向药物的使用为FLT3-ITD突变的AML患者带来了新的治疗方法,但随之而来的耐药等问题亟待解决。本文对FLT3突变机制、FLT3突变对AML的临床意义、FLT3抑制剂及耐药机制作一综述。

成人急性淋巴细胞白血病患者中FLT3基因突变特点及其意义

目的 分析成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者FLT3基因突变特点与其意义。方法 选取123例成人ALL患者。运用聚合酶链式反应(PCR)扩增产物,以限制性酶切产物分析法了解成人ALL患者FLT3基因突变现象,探究FLT3基因与患者临床病理特征的关系;随访3年,探究该基因突变与此类患者预后的关系。结果 123例成人ALL患者内,FLT3基因突变的有14例,突变率为11.38%(14/123),突变类型内,FLT3-ITD突变3例(21.43%),FLT3-TKD突变11例(78.57%);FLT3基因突变与FLT3基因无突变患者的年龄、性别、血小板计数(PLT)、白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)、乳酸脱氢酶(LDH)、骨髓原始细胞比率、淋巴细胞绝对值(LYM)、外周血原始细胞比率相比,无统计学差异(P>0.05);FLT3基因突变71.43%(10/14)与FLT3基因无突变83.74%(103/123)患者的3年生存率相比,无统计学差异(P>0.05)。结论 FLT3基因突变在成人ALL患者中较为少见,且与患者的生存率无明显关系。

转位蛋白基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病疗效评估中的价值

目的:观察转位蛋白(TSPO)基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病(AML)疗效评估中的价值。方法:纳入2018年6月至2020年6月在宁波大学附属人民医院血液科住院治疗的初发AML患者76例,其中伴有FLT3-ITD突变34例,伴有DNMT3A R882突变27例,伴有FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变15例,对照组为同期住院治疗的免疫性血小板减少症(ITP)患者19例。骨髓穿刺留取骨髓3 ml,常规提取RNA,通过转录组测序方法检测TSPO基因的表达量(使用2^(-ΔΔCT)法计算)。结果:FLT3-ITD单突变组和DNMT3A R882单突变组初诊时TSPO基因表达量分别为2.02±1.04、1.85±0.76,均高于对照组的1.00±0.06,但比较差异无统计学意义(P=0.671,P=0.821);双突变组初诊时TSPO基因表达量为3.98±1.07,明显高于FLT3-ITD单突变组和DNMT3A R882单突变组(P=0.032,P=0.021);双突变组化疗后达到完全缓解的患者,达到完全缓解时的TSPO基因表达量为1.19±0.87,明显低于其初诊时的水平(P=0.011)。结论:TSPO基因或许可以作为评估FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变AML治疗疗效的一个指标。

维奈克拉联合阿扎胞苷治疗FLT3-ITD^(mut)复发难治急性髓系白血病的疗效分析

目的:探讨维奈克拉(VEN)联合阿扎胞苷(AZA)治疗FLT3-ITD突变复发难治急性髓系白血病(FLT3-ITD^(mut)R/R AML)的疗效,并分析患者的分子遗传学特征。方法:收集2018年11月至2021年4月期间深圳市第二人民医院血液科采用VEN联合AZA治疗的16例R/R AML患者的临床基线资料及随访数据,使用NGS或PCR方法检测患者突变基因,分析FLT3-ITD^(mut)AML患者的疗效及患者的分子遗传学特征。结果:FLT3-ITD^(mut)组CR/CRi患者占14.3%(1/7),FLT3-ITDwt组CR/CRi患者占22.2%(2/9),无显著性差异(P=0.69);FLT3-ITD^(mut)患者ORR(CR/CRi+PR)为42.9%(3/7),野生型患者ORR为44.4%(4/9),无显著性差异(P=0.95)。FLT3-ITD^(mut)患者中位生存期较野生型患者明显缩短,分别为130 d和300 d(P=0.02)。1例获得CR的FLT3-ITD^(mut)R/R AML患者合并IDH1突变;1例获得PR的FLT3-ITD^(mut)R/R AML患者合并SF3B1突变;3例合并NPM1突变的FLT3-ITD^(mut)R/R AML患者均未获得治疗反应。结论:VEN联合AZA方案对FLT3-ITD^(mut)R/R AML患者有一定疗效,但OS较短,需桥接移植。合并IDH1、SF3B1突变可能预示FLT3-ITD^(mut)R/R AML患者对治疗有反应,合并NPM1突变可能预示治疗反应不佳。

急性髓系白血病FLT3基因ITD、TKD突变的临床特征及预后比较

目的检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)突变、酪氨酸激酶结构域(TKD)突变,分析并比较不同种类的FLT3突变的临床特征及预后意义。方法采用一代测序法检测2010年7月至2015年10月收治的初诊AML患者骨髓细胞FLT3/ITD和FLT3/TKD的基因突变,收集并比较221例FLT3/ITD、FLT3/TKD突变患者以及ITD/TKD双突变患者的性别、年龄、WHO分型、白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓原始细胞比例、生存时间等资料。结果 221例FLT3基因突变AML患者中FLT3/ITD突变172例,FLT3/TKD突变44例,ITD/TKD双突变5例。FLT3/ITD突变、FLT3/TKD突变及ITD/TKD双突变患者的性别、年龄、WHO分型、白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓原始细胞比例、髓外浸润及首疗程完全缓解率差异无显著性(P>0.05)。FLT3/ITD突变患者3年RFS及OS累积生存率为21.4%和25.2%,分别较FLT3/TKD突变患者70.5%和72.7%低,差异均有显著性(P<0.001)。结论 AML患者FLT3基因ITD突变较TKD突变比例高,3年RFS及OS累积生存率均较TKD突变低,预后差。

伴孤立性i(17)(q10)和FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病1例并文献复习

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一组由造血系统中异常分化的髓系细胞恶性克隆增殖导致的高度异质性疾病,越来越多的证据表明,细胞遗传学和分子遗传学特征在AML的发病机制、分类和治疗中起着关键作用[1]。等臂染色体i(17q)是着丝粒断裂或异常分裂的产物,导致17号染色体长臂重复和短臂丢失[2]。i(17q)在血液系统肿瘤中往往同其他染色体异常一起出现,孤立性i(17q)染色体异常在血液系统肿瘤中较为少见。在AML中孤立性i(17q)罕见,截至目前,国内外仅见几十例报道,常提示患者预后极差[3]。

伴FLT3突变的AML的治疗进展

急性髓系白血病(AML)是一种来源于造血干细胞或祖细胞的恶性克隆性、增殖性疾病,致残率和致死率极高。大约30%的AML病人存在FLT3基因的突变,其中ITD是最主要的一种。FLT3-ITD基因突变可导致白细胞增多,且预后差。AML的治疗近年来取得较大进展,靶向治疗与高强度的化学药物结合,是一种有效挽救性治疗方法,并且可作为同种异体移植的桥梁。现简要综述伴FLT3突变的AML的治疗进展。

急性髓细胞白血病FLT3基因内部串联重复和点突变及治疗

FLT3受体是Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族中成员。FLT3突变是急性髓细胞白血病（AML）中一种最常见基因改变,1/3的AML患者有该基因突变,最主要的突变包括FLT3近膜区（JM）内部串联重复突变（ITD）和＂活化环＂处点突变（TKD）。这些突变导致FLT3下游信号通路持续活化和变异细胞增殖[1]。

恶性造血细胞表面Flt3受体的表达及其对Flt3配体的反应性研究

目的 :研究恶性造血细胞表面Flt3受体的表达 ,TNFα和地塞米松 (DXM )对Flt3受体表达的作用及重组人Flt3配体 (rhFL)对恶性造血细胞增殖的影响。方法 :用流式细胞仪测定 18株体外培养的恶性造血细胞株细胞表面Flt3受体 ,用MTT法测定rhFL对恶性造血细胞增殖的影响。结果 :5株细胞表面存在Flt3受体。B淋巴瘤细胞株Raji、Daudi及多发性骨髓瘤细胞株 82 6 6表达高水平Flt3受体 ;髓系白血病细胞株HL 6 0和多发性骨髓瘤细胞株XG 6表达低水平的Flt3受体。用 10 -6mol/LDXM培养 2 4h后 ,上述细胞Flt3受体表达降低 ;用2 0ng/mlTNFα培养 2 4h后 ,Raji和 82 6 6细胞Flt3受体表达降低 ,HL 6 0和XG 6细胞Flt3受体表达增高 ,Daudi细胞Flt3受体表达不受影响。rhFL在 10～ 10 0ng/ml浓度时 ,刺激Raji和HL 6 0细胞的增殖 (P <0 0 5 ) ,但对绝大多数的恶性造血细胞体外无刺激作用。结论 :多数恶性造血细胞不表达Flt3受体 ;rhFL也不引起此类细胞的增殖。地塞米松降低Flt3受体的表达 ,有可能用于防止或降低FL对部分恶性造血细胞的刺激作用 ,使FL的应用更为安全。

骨髓增生异常综合征患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变的检测及价值

目的 研究骨髓增生异常综合征 (MDS)患者DNA水平FLT3基因及FLT3 /ITD基因突变情况。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)联合单链构象多态性 (SSCP)分析 3 6例MDS患者FLT3基因及FLT3 /ITD基因突变。结果 3 6例MDS患者中 9例 ( 2 5 %)FLT3基因检测阳性 ,难治性贫血伴原始细胞增多 (RAEB)、慢性粒单细胞白血病和转变中的RAEB(RAEBT)组FLT3基因检测阳性率显著高于难治性贫血 (RA)和环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RAS)组 (P <0 0 2 5 )。FLT3基因检测阳性MDS转化为急性髓性白血病 (AML)时间显著短于FLT3检测阴性患者 (P <0 0 5 )。 3 6例MDS患者中有 2例 ( 5 6%)出现FLT3 /ITD基因突变 ,RAEB及RAEBT各 1例。结论 部分MDS患者可检测出FLT3基因表达和FLT3基因突变 ,FLT3基因及FLT3

PCR-SSCP检测急性髓系白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变

目的研究急性髓系白血病(AML)患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变。方法采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测43例不同免疫分型AML患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果43例AML患者经PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳FLT3基因检测全部阳性,未发现FLT3/ITD基因突变;SSCP电泳FLT3基因检测全部阳性,43例AML患者中有15例(35%)出现FLT3/ITD基因突变。结论PCR-SSCP适用于检测急性髓系白血病FLT3/ITD基因突变分析。

急性髓系白血病患者外周血细胞中FLT3基因表达与FLT3/ITD突变的关系及其意义

背景与目的:研究表明FLT3/ITD突变的急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者预后差,但关于AML患者FLT3基因的表达水平在预后中的作用及其与FLT3/ITD突变关系的研究尚不充分。本研究探讨初治AML患者FLT3基因的表达水平与FLT3/ITD突变的关系及其临床意义。方法:建立实时荧光定量PCR检测FLT3基因表达水平及PCR检测FLT3/ITD突变的方法,分析79例初治AML患者FLT3基因水平、FLT3/ITD突变及与预后的关系。结果:22.7%(18/79)的AML患者存在FLT3/ITD突变。92.4%(73/79)的患者标本中可检测到FLT3基因表达,FLT3基因表达水平为0～7320,中位数为312,正常对照组未检测到FLT3基因的表达。FLT3基因高表达及FLT3/ITD突变AML组的白细胞计数及骨髓白血病细胞均显著高于低表达和无突变AML组(P<0.05)。FLT3基因高表达的AML组FLT3/ITD突变率(25.6%)同低表达的AML组(20.0%)相比,差异无统计学意义(P>0.05),FLT3/ITD突变AML患者FLT3基因表达中位数与无突变组比较差异也无统计学意义。FLT3/ITD突变组的完全缓解率(58.8%)显著低于无FLT3/ITD突变组(82.1%)(P<0.05);FLT3基因高表达AML组FLT3/ITD的完全缓解率(68.6%)同低表达AML组(84.2%)相比差异无统计学意义(P>0.05),但无FLT3/ITD突变组中,FLT3基因高表达组完全缓解率(69.2%)显著低于低表达组(93.3%)(P<0.05)。结论:FLT3高表达与FLT3/ITD突变之间无明显相关性,FLT3高表达对于无FLT3/ITD突变AML患者可能是一个预后不良的指标。

FLT3靶向短发夹状干扰RNA体外转录合成及作用

FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,在大多数急性髓系白血病(AML)患者中持续激活,与患者预后差密切相关。为探讨3种FLT3靶向短发夹状干扰RNA(shRNA)对急性髓系白血病细胞株THP-1的沉默效应,设计和体外转录合成3个FLT3靶向shRNA(shRNA1、shRNA2、shRNA3),体外转染THP-1细胞;以RT-PCR法检测FLT3mRNA水平表达,用流式细胞术、免疫荧光测定法检测FLT3蛋白的表达。结果显示:shRNA1、shRNA3可显著下调FLT3mRNA的表达,其中shRNA1的抑制作用较强。25nmol/LshRNA1转染48小时对FLT3mRNA的抑制率是(72.95±2.07)%,作用可达72小时。5nmol/L及以上浓度的shRNA1对FLT3mRNA表达有下调作用,作用存在量-效关系。15nmol/LshRNA1的抑制率是(67.53±0.66)%。FLT3蛋白位于细胞膜上,shRNA1对其有较强的抑制作用,转染72小时蛋白抑制率达(79.67±0.66)%。结论:FLT3-shRNA1具有较好的FLT3基因靶向抑制作用,可作为进一步研究该基因作用机制及靶向治疗可能性的工具。

骨髓异常增生综合征酪氨酸激酶受体FLT3和c-KIT基因表达异常的研究

目的:本研究旨在检测骨髓异常增生综合征(MDS)患者骨髓中酪氨酸激酶受体FLT3、c-KIT基因表达水平及FLT3-LM,以讨论FLT3、c-KIT受体对于MDS患者的临床意义。方法:收集38例诊断明确的MDS患者及10例非恶性血液病患者的骨髓并提取单个核细胞,应用PCR检测FLT3基因表达水平及FLT3基因长度突变(FLT3-LM);应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-KIT基因表达水平。结果:38例MDS患者骨髓单个核细胞有11例检测到FLT3基因表达,而对照组均未有FLT3基因表达,2者差异有统计学意义(P<0.05)。11例FLT3受体表达阳性患者中有2例存在FLT3-LM,阳性率为18.2%,10例对照均未发现FLT3-LM。38例MDS患者中有7例检测到c-KIT基因表达,而10例对照组均未有c-KIT基因表达,阳性率为18.4%,2者差异有统计学意义(P<0.05),且FLT3-LM、c-KIT基因表达多为高危患者。结论:以上研究显示MDS患者存在FLT3、c-KIT基因表达异常,且FLT3-LM、c-KIT(+)多发生在高危患者。提示酪氨酸激酶受体FLT3、c-KIT基因表达异常对于MDS患者病情及预后判断中有重要作用。

急性髓系白血病FLT3基因突变的研究

目的:检测初发AML患者FLT3基因突变,探讨其在AML疾病特征和预后评估中的意义。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测54例初发成人AML患者的骨髓标本FLT3基因突变。结果:54例初发成人AML患者中FLT3-ITD突变检出率为22.22%,发生FLT3-ITD基因阳性的AML患者中伴染色体正常核型10例(占83.3%),复杂异常核型2例(占16.7%)。FLT3-ITD基因突变阳性的AML患者的白细胞及骨髓白血病细胞比例显著高于未发生突变者(P<0.05),但在性别、年龄、诱导化疗第1疗程CR率、生存率等方面两组之间差异无统计学意义。2例出现FLT3-TKD基因突变的患者与FLT3-TKD阴性AML患者相比,在初诊时性别、年龄、白细胞计数、骨髓原始细胞比例以及第1疗程CR率差异均无统计学意义。结论:FLT3-ITD突变阳性在染色体正常核型AML患者中比例较高;FLT3-ITD突变的阳性组在外周血白细胞数量和骨髓原始细胞数量方面明显高于该突变阴性组患者。

FLT3-ITD突变在儿童急性髓性白血病中的表达及其与多药耐药的关系

为了研究FLT3内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变在儿童急性髓系白血病(AML)中的表达、该类患儿的临床特征及其与多药耐药基因mdr1表达的关系,应用RT-PCR技术检测81名初发儿童AML骨髓标本,FLT3-ITD突变及mdr1基因的表达,并分析患儿骨髓细胞遗传学及免疫表型。结果表明:在AML患儿中FLT3-ITD突变率为9.88%(8/81),均为杂合突变。突变患儿年龄较无此突变者明显偏大,但与性别、细胞免疫分型等无关。突变组就诊时白细胞数及骨髓原始细胞数较无突变组显著升高(p=0.001和p=0.041),且突变组患儿表现为正常染色体居多。突变组患儿预后较差,首次诱导缓解率仅为25.00%,而无突变组为76.71%。RT-PCR法检测mdr1基因显示,27名患儿表达该基因,但在FLT3-ITD阳性的8名患儿中只有3人是同时表达mdr1基因,此结果提示FLT3-ITD发生与多药耐药基因的表达无相关性。结论:FLT3-ITD突变是儿童AML中发生频率较高的一类突变,但突变率较成人为低,此类患儿预后差,首次诱导缓解率低,但FLT3-ITD突变与多药耐药基因的表达无相关性,提示耐药调节剂可能对该类患儿无效。

PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义(英文)

目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果63例ALL患者经PCR扩增发现41例(65.1%)FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为93.3%(14/15),77.8%(14/18),41.7%(5/12)和28.6%(4/14);前前B细胞ALL和前B细胞患者ALLFLT3基因检测阳性率84.8%,显著高于成熟B细胞ALL(41.7%,P<0.005);B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为73.3%,显著高于T细胞系ALL患者(28.6%,P<0.001)。63例ALL患者中仅有2例(3.2%)出现FLT3/ITD基因突变,均为伴有两种髓系抗原表达、免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例,预后较差。结论B细胞系ALL和T细胞系ALL患者DNA水平均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低。ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断。

急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变的检测及临床意义

目的:研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法:采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测76例不同免疫分型ALL患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果:76例ALL患者经PCR扩增发现46例(60.5%)FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为88.2%(15/17),73.9%(17/23),40.0%(6/15)和23.5%(4/17);前前B细胞ALL和前B细胞患者ALL FLT3基因检测阳性率80.0%,显著高于成熟B细胞ALL(40.0%)(P<0.01);B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为69.1%,显著高于T细胞系ALL患者(23.5%)(P<0.01)。76例ALL患者中仅有2例(2.6%)出现FLT3/ITD基因突变,此2例均为伴有2种髓系抗原表达,免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例及预后较差。结论:B细胞系ALL和T细胞系ALL患者均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低。ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断。