GSK3抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除小鼠的自主活动的干预作用

目的:探讨GSK3抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除小鼠的自主活动的干预作用及机制。方法:通过对90只30日龄FMR1基因敲除小鼠连续腹腔注射不同剂量氯化锂5d,行自主活动行为学实验,观察能否改善KO鼠的过度活动的表型;同时利用免疫印迹技术检测KO及WT鼠的海马和皮层的GSK3β和P-GSK3β的变化。结果:在自主活动行为学实验中,KO鼠的活动次数比WT鼠的活动次数增多而站立次数比WT鼠减少,差异具有统计学意义(P<0.05);使用氯化锂后,KO鼠的活动次数明显减少及站立次数明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05);免疫印迹实验结果:KO鼠P-GSK3β表达比WT鼠少,用氯化锂后,KO鼠P-GSK3β的表达增多。KO鼠和WT鼠使用氯化锂后,总的GSK3β无明显改变(P>0.05)。结论:GSK3β的抑制剂氯化锂能改善KO鼠的活动过度的表型,可能与氯化锂导致的P-GSK3β的表达增加有关,对FMR1基因敲除小鼠有治疗作用。

氯化锂对FMR1基因敲除小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用

目的探讨糖原合成酶激酶3(GSK3)抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除(KO)小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用及机制。方法给90只30日龄FMR1基因敲除小鼠连续5d腹腔注射不同剂量的氯化锂,用药第6天进行高架十字迷宫行为学实验,通过录像机录像,然后用Smart软件分析录像,观察能否改善KO鼠的高架十字迷宫的表型;同时通过免疫印迹技术检测KO及野生型(WT)鼠的海马和皮层中GSK3β和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)的变化。结果在高架十字迷宫实验中,与WT组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显增强,且KO组小鼠在开放区域的活动时间、次数以及路程均明显高于WT组。KO鼠用氯化锂后,在开放区域的活动时间、次数以及路程均减低,差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫印迹实验结果显示,KO鼠p-GSK3β表达比WT鼠少;用氯化锂后,KO鼠p-GSK3β表达增加。WT鼠用氯化锂后,开放区域活动时间、次数以及路程有较少改善,p-GSK3β表达也有增加。未使用氯化锂的KO鼠与WT鼠相比,总GSK3β表达无明显差异,KO鼠和WT鼠使用氯化锂后,总GSK3β无明显改变,P>0.05。结论 GSK3β的抑制剂氯化锂能改善KO鼠的高架十字迷宫表型,对KO鼠有治疗作用,其机制可能与氯化锂导致的p-GSK3β表达增加有关。

基于子代基因型鉴定技术研究FMR1敲除对C57BL/6小鼠繁殖性能的影响

为探讨FMR1基因敲除对C57BL/6小鼠繁殖性能的影响,将FMR1基因敲除杂合子小鼠饲养于SPF环境,依照遗传学规则进行繁育,并采用PCR法利用小鼠尾部组织鉴定子代小鼠的基因型。结果表明,PCR技术可以检测小鼠的基因型,且具有方便快捷、直观可靠的特点。子代经过检测可得野生型、杂合子和纯合子3种基因型;在此鉴定基础上,挑选10周龄C57BL/6 FMR1 KO和同源SPF级C57BL/6种鼠各10对,采取1:1全同胞兄妹近亲繁殖的方法,测定各对第2胎仔鼠的繁殖性能,并进行比较分析。结果显示,C57BL/6 FMR1 KO小鼠在窝产仔数、离乳率、初生鼠体重和体长、离乳体长及雌雄比例等数值偏低,但均差异不显著(P>0.05);而两者的离乳体重差异极显著(P<0.01)。

雌性Fmr1基因敲除小鼠生殖功能的初步研究

目的初步研究敲除Fmr1基因对动物生殖功能的影响。方法6～8周龄雌性Fmr1基因敲除小鼠24只，分为对照组、春季超排组和冬季超排组，每组8只，进行超排，用放射免疫分析法测定超排前后血清雌二醇（E2）、孕酮（P）、促黄体生成素（LH）和促卵泡生成素（FSH）含量，以及不同季节的超排卵数，并进行统计学处理和分析。结果超排后小鼠血清中P和LH含量明显增加[（24．43±13．33）比（1．60±0．46）；（173．86±112．09）比（0．36±0．23）．P〈0．0ll。与冬季（11．44±5．93）比较，春季（37．25±13．91）的超排卵数明显增加（P〈0．01）。结论雌性Fmrl基因敲除小鼠的生殖系统功能没有明显异常。与正常小鼠一样，Frm1基因敲除小鼠机体内P和LH的分泌随动物的生理发育时期而变化。其超排效果随季节而有显著不同。

加味甘麦大枣汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠的旷场行为的影响

目的探讨加味甘麦大枣汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠的旷场行为的影响。方法选用4周龄KO和WT小鼠各45只。各分为3组:生理盐水对照组,加味甘麦大枣汤挥发油高浓度组和低浓度组。所有的小鼠腹腔注射打药加味甘麦大枣汤挥发油30 min后做场行为的实验。结果未用药的WT组和KO组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显高于WT组小鼠;KO鼠使用加味甘麦大枣汤挥发油用药2个剂量组与生理盐水(0 mg/kg)组比较,KO鼠进入各区的速度、时间、次数和路程均有明显减少(P<0.05),WT鼠用药后,与0剂量组比较,高剂量组减少差异有统计学意义(P<0.05);加味甘麦大枣汤挥发油治疗使KO鼠路程的活动时间和进入次数减少,接近WT鼠的探索行为方式。结论加味甘麦大枣汤挥发油能够有效地逆转脆性X综合征基因敲除小鼠旷场行为。

α-细辛醚对FMR1基因敲除小鼠旷场行为的干预作用

目的探讨α-细辛醚对FMR1基因敲除小鼠的旷场行为的干预作用。方法通过对30日龄FMR1基因敲除小鼠连续腹腔注射不同剂量α-细辛醚5天,用药第5天进行旷场行为实验,观察能否改善KO鼠过度活动的表型。结果在旷场行为实验中,与WT鼠相比,未使用α-细辛醚的KO鼠的总运动长度及总跨格次数,中央格（区4）活动时间,中央格（区4）进入次数均比WT鼠多,P〈0.05;使用α-细辛醚后,KO鼠α-细辛醚6-24 mg/kg剂量组与生理盐水（0 mg/kg）组比较,旷场实验运动长度及跨格次数均有减少（P〈0.05）。结论 6-24mg/kgα-细辛醚能改善KO鼠活动过度的表型,可能对FMR1基因敲除小鼠有治疗作用。

基于轮廓分析的电针命门穴对FMR1基因敲除小鼠不同脑区CREB蛋白表达的影响

目的:观察电针命门穴对FMR1基因敲除小鼠不同脑区环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)及p-CREB表达的影响,以探讨其空间分布特征。方法:采用随机数字表法将适龄FMR1基因敲除小鼠分为空白组、非经非穴组和命门组,每组8只。空白组仅模拟抓取动作。命门组选取小鼠命门穴,非经非穴组选取小鼠后海穴旁开约1 cm的部位,每天固定时间电针干预,频率2 Hz,强度2 mA,连续波,每天30 min,连续干预14 d。采用Western blot法检测小鼠小脑、皮质及海马区CREB及p-CREB蛋白表达。结果:与空白组比较,命门组及非经非穴组海马区CREB蛋白表达升高(P<0.05)。与同组皮质区比较,各组小鼠小脑及海马区CREB蛋白表达均升高(P<0.05)。不同脑区间CREB蛋白表达趋势相同,趋势变化程度不同。与空白组比较,非经非穴组小脑及皮质区p-CREB蛋白表达降低(P<0.05)。与同组小脑比较,非经非穴组海马区p-CREB蛋白表达升高(P<0.05);与同组皮质区比较,命门组、非经非穴组海马区p-CREB蛋白表达升高(P<0.05),不同脑区间p-CREB蛋白表达趋势不同。与非经非穴组比较,命门组各指标差异无统计学意义。结论:电针命门穴在不同脑区中能相应地强化FMR1基因敲除小鼠海马区CREB的磷酸化,促进大脑功能的重组和代偿。

柴胡桂枝汤挥发油对脆性X综合征基因敲除小鼠旷场行为和氨基酸递质影响

目的探讨柴胡桂枝汤挥发油对脆性X综合征基因敲除小鼠旷场行为和氨基酸递质的影响。方法采用不同浓度柴胡桂枝汤挥发油对脆性X综合征基因敲除小鼠小鼠进行处理,分析了柴胡桂枝汤挥发油对小鼠旷场行为和氨基酸递质的影响。结果未用药的WT组和KO组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显高于WT组小鼠。随着柴胡桂枝汤挥发油浓度的增加,KO和WT小鼠的平均速度、运动轨迹及穿越中央格次数均逐渐降低。WT空白组小鼠脑组织中γ-氨基丁酸水平和甘氨酸明显降低,而谷氨酸水平则明显升高,此差异有统计学意义;与此同时WT空白组小鼠与WT用药组小鼠比较,WT空白组小鼠脑组织中谷氨酸水平明显高于WT用药组(P<0.05)KO空白组小鼠与KO对照组小鼠比较,KO空白组小鼠脑组织中γ-氨基丁酸水平明显降低,此差异有统计学意义;与此同时KO空白组小鼠与KO用药组小鼠比较,KO空白组小鼠脑组织中谷氨酸水平明显高于KO用药组。结论柴胡桂枝汤挥发油能够有效地逆转脆性X综合征基因敲除小鼠旷场行为,其机制可能与柴胡桂枝汤挥发油降低兴奋性氨基酸/抑制性氨基酸的比值有关。

FMR1基因敲除对C57BL/6小鼠部分生物学特性的影响

为探讨脆性X智力障碍1（FMR1）基因敲除对C57BL/6小鼠（Mus musculus domesticus）部分生物学特性的影响,使用全自动动物血细胞分析仪和全自动生化仪分别检测8-10周龄的FMR1基因敲除小鼠（C57BL/6 FMR1 KO）及同源背景C57BL/6小鼠的血液生理生化指标、电解质等,并进行统计学分析。C57BL/6 FMR1 KO小鼠与野生型C57BL/6小鼠比较,血液生理指标中雌性及雄性组间的中性粒细胞计数（MEUT#）、中性粒细胞百分比（MEUT）和淋巴细胞百分比（LY）存在显著性差异（P〈0.05）;雄性组间的红细胞总数（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）和平均血红蛋白浓度（MCHC）存在显著性差异（P〈0.05）;雌性组间的白细胞（WBC）、淋巴细胞计数（LY#）存在显著性差异（P〈0.05）;而非性别因素影响两类小鼠组间的红细胞总数（RBC）、红细胞压积（HCT）、中性粒细胞计数（MEUT#）、中性粒细胞百分比（MEUT）和淋巴细胞百分比（LY）存在显著性差异（P〈0.05）;血清生化指标中雄性组间的谷草转氨酶/谷丙转氨酶（AS/AL）存在显著性差异（P〈0.05）;雌性组间的肌酐CR、肌酸磷酸激酶CK和钙离子浓度Ca^2＋存在显著性差异（P〈0.05）;而非性别因素影响两类小鼠组间的谷草转氨酶/谷丙转氨酶（AS/AL）、肌酐CR和肌酸磷酸激酶CK存在显著性差异（P〈0.05）;其他各项指标差异不显著（P〉0.05）。研究表明,FMR1基因敲除可影响小鼠的部分生理生化指标水平,这为今后研究和应用C57BL/6 FMR1 KO小鼠模型提供了实验依据。

高压氧对脆性X综合征小鼠异常行为影响的初步观察

目的探究高压氧(HBO)对脆性X综合征(FXS)模型小鼠异常行为的影响,为下一步HBO治疗FXS提供理论依据和实验支持。方法将20只Fmr1基因敲除小鼠采用数字表法随机分为HBO治疗组和对照模型组,每组10只。对HBO治疗组小鼠进行共20次HBO干预;对照模型组小鼠不作任何处理,正常饲养。21 d后对2组小鼠进行高架十字迷宫实验、旷场实验和三箱社交实验。结果HBO治疗组小鼠与对照模型组小鼠相比,在高架十字迷宫实验中,进入闭臂次数[(14.44±4.53)vs.(26.90±5.23)次]和进入闭臂次数百分比[(30.06±3.37)%vs.(57.73±7.97)%]显著减少(P<0.01),进入开臂次数[(35.00±5.25)vs.(19.45±3.61)次]和进入开臂次数百分比显著增加[(69.94±7.77)%vs.(42.27±7.97)%](P<0.01);在旷场实验中,旷场外周区活动路程[(12254.39±1860.08)vs.(7446.85±1292.22)cm]和活动总路程[(13014.37±1944.84)vs.(8051.60±1420.88)cm]显著增加(P<0.01);在三箱社交实验中,与熟悉小鼠接触次数[(37.55±19.13)次]与陌生小鼠接触次数[(18.64±10.60)次]相比显著增加[(46.45±15.65)vs.(18.57±17.83)次](P<0.01)。结论HBO能使FXS模型小鼠异常的焦虑与社交行为得到显著改善,提示HBO治疗有望成为治疗FXS的新手段。