土拉弗朗西斯菌FopA单抗阻断ELISA抗体检测方法的建立

目的建立一种基于FopA单抗的阻断ELISA抗体检测方法。方法以pET-32a为载体表达土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白,并以其免疫BALB/c小鼠制备单抗,以LVS超声裂解液为包被抗原、HRP标记FopA单抗为阻断抗体,建立直接阻断ELISA方法,利用阴性血清平均值+2SD或3SD确定该方法临界值,测定该方法特异性、敏感性、重复性及其与平板凝集试验的符合率,并利用该方法检测攻毒小鼠血清抗体变化趋势。结果筛选获得1株稳定分泌IgG1(κ型)单抗的杂交瘤细胞,并基于该单抗建立阻断ELISA方法,包被抗原最优浓度为3μg/mL、HRP标记FopA单抗最优稀释度为1∶4000、待检血清最优稀释度为1∶10,阴性临界值为27%、阳性临界值为41%、可疑区间为27%~41%,该方法的特异性、敏感性、重复性和符合率均良好,可检出攻毒9 d后小鼠血清抗体。结论成功制备FopA单抗,并基于该单抗建立一种快速、准确和高通量抗体检测的阻断ELISA方法,为我国土拉弗朗西斯菌流调和防控提供技术支撑。

TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测土拉弗朗西斯菌

目的建立TaqMan探针实时荧光定量PCR方法(QF-PCR),快速检测土拉弗朗西斯菌。方法针对土拉弗朗西斯菌的外膜蛋白fopA基因,利用Primer 5.0设计引物及TaqMan探针,人工合成fopA基因保守片段,克隆到载体作为阳性标准品,进行荧光定量检测,制作定量标准曲线,并以合成fopA基因为模板,PF、PR为引物,研究其灵敏度、特异性和准确性。结果构建了含fopA基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在103～107拷贝数之间有较好的线性关系。灵敏度试验表明,该方法可检测到30.6个拷贝数的重组质粒,比普通PCR灵敏度高;特异性试验表明,能选择性检测土拉弗朗西斯菌,而与其他病原菌无交叉反应,与普通菌落PCR结果一致;重复性试验表明,拷贝数为3.06×106样品5次平行试验,标准差为0.201,变异系数为0.88%。结论本研究建立了TaqMan探针QF-PCR快速检测技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可用于快速、实时、定量检测土拉弗朗西斯菌,为快速检测生物战剂级微生物建立了一种人工合成特异基因TaqMan探针实时荧光定量PCR新方法。

土拉弗朗西斯氏菌LAMP快速检测方法的应用

旨在应用环介导恒温扩增技术(LAMP)检测土拉弗朗西斯氏菌。针对土拉弗朗西斯氏的FopA基因设计LAMP引物,优化LAMP反应条件,并对其特异性、灵敏度进行评价。结果显示,(1)对12种细菌和蜱的DNA(含大量假单胞菌属细菌)进行LAMP扩增,仅土拉弗朗西斯氏菌发生了扩增反应;(2)土拉弗朗西斯氏菌纯培养物检出限为4.9×102 pg/mL;克隆株质粒检出限为10 copies/μL,低于普通PCR的最低检出值1×103 copies/μL;(3)土壤模拟样本检出限为44 CFU/g;(4)和进口荧光定量PCR试剂对比检测24份(8个稀释度)土拉弗朗西斯氏菌污染土壤样本,在灵敏度范围内,均能准确检测。LAMP技术检测土拉弗朗西斯氏菌特异性强、灵敏度高、高效,对土拉热的病原学诊断具有应用价值。

光纤参量放大器增益特性的理论与仿真分析

为了优化光纤参量放大器的增益特性,利用理论分析,对FOPA在不同光纤长度、不同泵浦光功率及不同光纤非线性系数下的增益与带宽特性进行了比较与分析。结果表明:使用较长的高非线性光纤、较大的泵浦光、或较大的非线性系数,均可提高FOPA的增益,增益带宽也可随着泵浦光功率和非线性系数的增大而增大。此外,利用仿真模拟对理论分析结果进行了验证。虽然,仿真结果与理论分析结果间略有偏差,但仿真结果依然较好的验证了理论结果的正确性与可行性。

全光自动增益钳制FOPA在HPON中的应用研究

介绍了光纤参量放大器的基本工作原理,针对混合无源光网络的应用需求提出了全光自动增益钳制光纤参量放大器,设计了放大器对混合无源光网络系统的下行信号同时进行放大的架构,利用仿真软件搭建系统模型,对理论分析结果进行了验证,并针对其性能进行了仿真分析。实验结果较好地验证了理论分析和数值仿真结果的正确性,测试结果表明,可实现多用户接入,接入距离可达60km,达到混合无源光网络系统要求。

重组土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的融合表达及抗原性分析

目的:探索一种大量表达功能性土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的方法。方法:采用SignalP 3.0 Server进行信号肽预测,将土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA信号肽的基因序列(75bp)去除,将1107bp的核心序列克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。结果:构建了pET32a-fopA载体,重组蛋白FopA表达量约占菌体总蛋白量60%,Western blot分析显示重组FopA蛋白有较好的抗原性。结论:获得了高效表达FopA的pET32a-fopA表达载体,为下一步土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA应用研究奠定了基础。

东盟高等教育区域化发展路径与成效研究

区域化是东盟高等教育发展的重要特征。本文以简·奈特的高等教育区域化发展的FOPA模型为分析框架分析东盟高等教育区域化发展的路径,以高等教育区域化发展程度为工具分析东盟高等教育区域化发展程度。研究结果表明:东盟通过功能路径、组织路径以及政治路径三个方面推动高等教育区域化发展,三个路径相辅相成、相互补充,共同推动高等教育的区域化发展。东盟高等教育的区域化发展程度目前正处于融合与和谐发展阶段,并向一体化、共同体和相互依存阶段迈进。东盟高等教育区域化发展,为加强我国与东盟的高等教育合作与交流提供了新的视角。

职业资格互认区域一体化的发展路径与发展趋势——以粤港澳大湾区为例

职业资格互认是区域一体化建设的重要内容。文章基于简·奈特的FOPA模型,以粤港澳大湾区为例,对职业资格互认区域一体化的发展路径进行分析,认为功能路径作用于三地职业资格体系的整合与标准化,组织路径突显不同组织在推动资格互认方面的作用,政治路径则作用于促进职业资格互认政策的制定和立法环境的优化。这三种路径共同促进区域合作与经济一体化,体现了粤港澳三地合力推动职业资格互认的政府意愿和战略协作。当前粤港澳大湾区职业资格互认处于建立合作伙伴关系阶段,三地应鼓励同类组织的负责人异地交换办公;探索多种协同共进的互认模式,鼓励不同组织合作;统一粤港澳职业资格互认协议,构建有序的伙伴关系网络,进一步提高区域间合作成效,推动粤港澳职业资格互认区域一体化向纵深发展。

基于FOPA模型的武汉城市圈高等教育一体化发展研究

本文对比分析了国内外城市圈高等教育一体化发展现状,指出国内高等教育区域合作存在的问题,而武汉 城市圈区域协调相对容易,处于可以大有作为的有利地位。详细分析了简·奈特的高等教育区域一体化发展的 FOPA 模型四个层次的具体差别和三个路径的不同定位。提出了武汉城市圈高等教育一体化发展的目标。从政治路径, 组织路径和功能路径上,提出具体的建议。

采用全矢量有限元法设计光子晶体光纤

阐述了基于光子晶体光纤(PCF)的光纤参量放大器(FOPA)的工作原理,对FOPA所需的PCF特性进行了讨论和设计。采用带混合节点/棱边元三角形单元的全矢量有限元法(FEM),计算了PCF中非线性系数、色散斜率和色散零点与空气孔半径、孔间距和空气填充比等结构参数间的关系。计算结果表明在确保PCF光纤高非线性的前提下,通过灵活设计PCF的结构参数就可以实现色散控制,得到PCF的超宽波长范围内可调的零色散波长、近零超平坦色散和极低的色散斜率,从而为FDPA获得高增益、宽带宽等性能创造必要前提。

检测土拉弗朗西斯菌的生物素—亲和素ELISA法的建立

〔目的〕建立一种快速、敏感、特异检测土拉弗朗西斯菌的免疫学方法。〔方法〕应用生物素-亲和素标记系统,建立双抗体夹心ELISA方法,检测土拉弗朗西斯菌,并进行"模拟样品"的检测判定其定量检测能力。〔结果〕建立的生物素—亲和素ELISA检测土拉弗朗西斯菌的方法具有很好的敏感性和特异性,检测FopA蛋白的灵敏度达到6ng/ml;批内变异系数1.96%～6.64%,批间变异系数8.94%～10.02%,重复性好;检测不同浓度马秋波GP2蛋白、天花M1R蛋白、黄热YF-E-D3蛋白、禽流感NP蛋白、登革病毒Deng-E-D3蛋白和普氏立克次体120N蛋白,未发现交叉反应;对"模拟样品"中土拉弗朗西斯菌FopA蛋白的检测回收率为91.7%～125.0%。〔结论〕应用生物化的FopA多抗与酶标亲合素结合,建立了检测土拉弗朗西斯菌的生物素—亲和素放大酶联免疫吸附法(BSA-ELISA),具有较好的灵敏度和特异性,在病原菌的识别、快速检测、应对生物恐怖威胁中具有广阔的应用前景。

土拉弗朗西斯菌两种不同长度的外膜蛋白FopA抗原和抗体的制备

目的:根据外膜蛋白FopA的序列信息,建立土拉弗朗西斯菌FopA蛋白全长(FopA-L)和部分(FopA-S)的特异性抗原的BL21表达系统,获得高活性的重组FopA-L、FopA-S蛋白并制备相应的多克隆抗体,为土拉菌的监测、诊断和治疗提供依据。方法:通过pET100质粒构建FopA-L及FopA-S的表达载体,转化大肠杆菌BL21细胞并诱导表达FopA-L及FopA-S蛋白,螯合镍离子次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲合层析纯化FopA蛋白,用重组蛋白免疫大耳白兔制备多克隆抗体,通过ELISA、Western印迹、胶体金免疫层析技术等方法进行检测。结果:构建了FopA-L及FopA-S的表达载体,获得相应的高表达目的蛋白BL21细胞株,用表达的蛋白为抗原成功制备了FopA特异性的抗体,效价皆在1∶100000以上且特异性良好。结论:FopA-S与FopA-L两种抗原和相应抗体的制备为建立土拉菌快速检测方法奠定了基础。

土拉弗朗西斯菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

目的建立胶体金免疫层析技术快速定量检测土拉弗朗西斯菌。方法利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立土拉弗朗西斯菌的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测。在面粉、饼干、果冻、梨汁等食品样品中添加土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白模拟污染样品,评价该方法对固体、半固体、液体等食品样品的检测能力。结果该法可在10min内完成定性和定量检测,灵敏度为750ng/ml,线性范围750～24000ng/ml、回收率为56.7%～89.2%。结论所建立的检测土拉弗朗西斯菌的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的土拉弗朗西斯菌,适用于现场快速检测。