疏水作用FPLC一步法制备级纯化抗人肝癌单抗HAb18F(ab')_2片段

目的 制备符合人用标准的肝癌单抗 HAb1 8F(ab') 2 片段 .方法 用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,胃蛋白酶与抗体在 p H3.5 0 .1 mol· L- 1柠檬酸条件下 ,经不同反应时间 ,收集样品 ,上 FPL C(快速蛋白液相色谱 )Phenyl- Sepharose HP疏水柱纯化并进行质检 .结果 按上述条件消化 2 h,95 %以上的 Ig G裂解为 F(ab') 2 片段 ,经Phenyl- Sepharose HP疏水柱纯化后 F(ab') 2 片段纯度可达98.8% .纯化时间仅 5 0 m in,一次制备量可达 5 0 0 mg,回收率>5 0 % ,免疫活性为 1∶ 80 0 0 ,细菌、热原质检测结果为阴性 .结论 该法操作简便 ,周期短 ,易于质控 ,是大量、快速、高产率制备 F(ab') 2 片段的有效方法 .

用FPLC系统提纯可溶型Ⅱ型胶原蛋白

目的采用 FPL C系统提取纯化可溶型 型胶原蛋白 (C )。方法采用鸡剑突软骨 ,经胃蛋白酶消化离心 ,再使用 FPL C系统进行 DEAE Sepharose FF高效液相离子交换层析和脱盐柱脱盐 ,得到纯化的 C 。结果自提的 C 纯品与C 标准品电泳结果带型一致。结论本法提纯蛋白效率高 ,重复性好 ,快速简便。

利用FPLC系统结合自装层析柱纯化兔血清IgG

为了建立一种简便、成本低的纯化兔血清IgG的实用方法 ,采用FPLC系统结合实验室常规手段填充的Sephacryl-S2 0 0凝胶柱和DEAE -SephadexA - 5 0离子交换柱进行兔血清IgG的纯化 ,结果表明 ,在流速为 0 .5ml/min时 ,此方法可以纯化得到高纯度的兔IgG ;脱盐柱SephadexG - 2 5重复实验证明此实验方法具有很好的稳定性 ;并且与商品化的层析柱相比 ,成本大为下降 ;此方法主要的不足之处是层析柱的流速较低 ,为 0 .5ml/min左右。

本科生FPLC实验教学管理模式的探索与实践

快速蛋白液相(FPLC)是近十几年来发展起来的,专门用于分离蛋白质、多肽及多核苷酸的现代液相色谱系统,是一类进口贵重仪器,将其引入我校本科生生物技术综合大实验教学,本文在教学实践的基础上,就实验的具体实施和教学效果,探索了实验教学模式及其管理模式。

FPLC法纯化单克隆抗体中的热原质控制

ＦＰＬＣ法纯化单克隆抗体中的热原质控制刘成刚，陈志南，刘智广，隋延仿，米力（第四军医大学病理教研室，西安７１００３２）单克隆抗体技术的发展为肿瘤的临床诊断和体内定向治疗提供了新的手段。应用于体内诊断和治疗的单克隆抗体（ＭＣＡｂ）除纯度、活性等指标符合...

利用FPLC技术建立重组碱性蛋白酶的快速纯化方案

在构建了以地衣芽孢杆菌为宿主的产碱性蛋白酶的工程菌BA0 71以后 ,为了给探索重组酶的性质及其稳定性奠定基础 ,利用快速蛋白液相层析 (FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸氨沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后较好地得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76.2倍。SDS PAGE显示重组碱性蛋白酶分子质量为 2 8ku。

HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白(HSA)

为研制新型三、四天线半乳糖肝受体功能显像剂,须将三、四天线半乳糖与人血清白蛋白(HSA)偶联,故必须制备较纯净人血清白蛋白(HSA)。在FPLC上用HiTrapQ柱快速纯化人血清白蛋白(HSA)。经PAGE和SDS-PAGE鉴定只有一条带。在FPLC上用HiTrapQ柱纯化HSA有速度快、纯化量大且方法较为简便等特点。

FPLC系统测定人红细胞HbA_1c的方法

采用快速蛋白液相层析系统（ＦＰＬＣ）及ＭｏｎｏＳ柱，建立人血红细胞中糖化血红蛋白组份ＨａＡ１ｃ的测定方法。用本法重复测定３份样品，平均批内变异系数为２．５％，平均批间变异系数为４．８％；与常用的微柱法比较，两者呈正相关（ｒ＝０．４１３０，Ｐ＜０．０５，ｎ＝３６）。本法操作简单，重复性好，自动化程度高。

用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化文昌鱼酸性磷酸酶

从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶，用快速蛋白液相层析法（ＦＰＬＣ）的Ｓｕ－ｐｅｒｏｓｅ１２柱和ＭｏｎｏＳ柱对其进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２柱鉴定为单一纯的酶制剂．它的分子量为５２０００，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体．酶的提纯倍数为６１２．５２．

稀土生物效应研究(Ⅰ)──正常人血浆中稀土含量及其物种分布

采用ＩＣＰＭＳ及ＦＰＬＣ等技术研究了正常人血浆中稀土含量及其物种分布．结果表明，正常人血浆中含有痕量的稀土（总量为１４１３３μｇ／Ｌ），每种稀土含量与其天然丰度一致；稀土物种主要集中于大分子蛋白组分中，与免疫球蛋白Ｇ（ＩｇＧ）、运铁蛋白（Ｔｆ）、血清白蛋白（Ａｌｂ）等均有作用。

梭子蟹变应原的分离、纯化与鉴定

目的：对梭子蟹（Portunus pelogicus（Linnaeus））变应原进行分离,鉴定其主要及次要变应原,采用蛋白纯化技术获取梭子蟹天然的主要变应原并进行鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法：取常规方法制备梭子蟹浸出液,经SDS-PAGE分离,测定各组分的相对分子量;同时用26例对蟹过敏的病人血清进行Western blot,鉴定其主要及次要变应原;利用快速制备液相色谱（FPLC）纯化技术（凝胶过滤层析和离子交换层析）获取主要变应原并作鉴定.结果：SDS-PAGE显示梭子蟹有19条可辨蛋白带,分子量在13 000～90 000之间,其中主带有9条,分子量是20 900、24 200、27 100、29 200、33 700、38 900、48 700、74 700、89 100;Western blot结果表明,26例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74 400、48 700的是主要变应原,阳性反应率均为100%;纯化后获取了74400、48700的主要变应原;经过免疫鉴定证实其具有免疫活性.结论：梭子蟹74 400和48 700的变应原为主要变应原,层析技术可以对分子量为74400和48700的主要变应原成分进行纯化.

棉花黄萎病菌株VD8外泌毒蛋白的生化特性

棉花黄萎病菌株ＶＤ８外泌毒蛋白的生化特性１陈旭升２陈永萱１黄骏麒（１江苏省农业科学院经济作物研究所，南京２１００１４；２南京农业大学微生物系，南京２１００９５关键词：棉花；黄萎菌株ＶＤ８；毒蛋白；ＦＰＬＣ技术中图法分类号：Ｓ４３５．６２Ｂｉｏｃｈｅｍ...

天麻多肽的分离纯化研究

目的:研究生物多肽对生物机体的生命活动有益或生理作用。方法:对天麻(Gastrodiae elataB1.)初提液两次超滤(3kDa和1kDa超滤膜),凝胶过滤和快速蛋白液相色谱(FPLC)分离纯化,以及反相高效液相色谱(RP-HPLC)对目标肽进行分析检测。结果:由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析肽液,得到各肽组分的相对分子质量分布范围。FPLC和RP-HPLC分析第二峰结果表明,此多肽组分分别只由一种肽组成。结论:此多肽相对分子质量在2500Da左右,具有很好的亲水性。

毛细管电泳法检测结核杆菌蛋白多肽类抗原活性成分研究

采用毛细管电泳法分离检测结核杆菌耐热抗原样品中的活性成分。熔融石英毛细管55cm(40cm处检测窗口)×50μm i.d.;缓冲液:0.15mol·L-1硼酸盐(含5g·L-1PEG-4000,pH=10.92);分离电压:+12 kV;进样压力:0.5 psi(3.45 kPa),进样时间3.0s;分离温度:25℃;UV-Vis检测器检测波长:200nm。本方法能分离溶菌酶标准蛋白和牛血清白蛋白标准品,根据分子量大小能有效分离结核杆菌耐热抗原样品活性成分,线性回归方程相关系数r2在0.99673以上,定量限在19.47μg·mL-1左右。样品加标回收率在96.09%左右,相对标准偏差小于8.13%,本方法与快速蛋白液相色谱法结果一致。该方法简便、灵敏、快速、可靠、重现性好,能用于结核杆菌耐热抗原样品中活性成分测定。

幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白与麦芽糖结合蛋白融合表达产物rMBP-NAP的分离纯化

目的 :从E .coliTB1(pMAL c2x napA)细菌中分离纯化与麦芽糖结合蛋白融合表达的重组幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白rMBP NAP ,筛选幽门螺杆菌口服疫苗抗原组分。方法 :0 .3mmol/LIPTG在 37℃ ,2 30r/min条件下诱导基因工程菌E .coliTB1(pMAL c2x napA) 3h。 4℃ 4 0 0 0g离心 2 0min收获细胞。过柱缓冲液重悬细胞 ,-2 0℃冻存过夜 ,在冰水浴中超声破碎工程菌 ,4℃ ,90 0 0g离心 30min ,十二烷基磺酸钠 聚炳烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析工程菌中rMBP NAP可溶性 ;低相对分子质量蛋白Marker做标准对照 ,GeneTool测定诱导蛋白相对分子质量。FPLC分子排阻层析法分离rMBP NAP ;SDS PAGE凝胶扫描法测纯化蛋白质的纯度 ,Bradford法检测蛋白质含量。结果 :E .coliTB1(pMAL c2x napA)诱导表达的rMBP NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中 ,占上清中蛋白总量的 39.35 % ,相对分子质量约为 5 70 0 0 ,与预期结果一致 ;分子大小排阻层析一步法纯化rMBP NAP纯度可达 91% ,含量可达 0 .12 1g/L。结论 :FPLC分子排阻层析可从大肠工程菌超声菌液中快速纯化rMBP NAP。

棉花黄萎病菌致萎毒素的分离纯化方法

利用快速蛋白质液相色谱技术 (Fast Protein Liquid Chromatography,FPLC) ,对棉花 3个黄萎病菌 (Verticilliumdahliae)菌系外泌毒素的某些理化性质进行了分析。结果显示 :黄萎病菌毒素有两个致萎峰 ,大分子峰 毒蛋白致萎力较弱 ,致萎症状属黄斑型 ;而小分子峰 毒蛋白其致萎力极强 ,致萎症状属青枯型。透析试验表明 ,可透 80 0 0～ 1 0 0 0 0 Da的透析袋会使小分子峰 丢失。热稳定试验表明 :峰 、峰 毒蛋白皆可耐 1 0 0℃高温水浴热煮而不发生沉淀 ,并保持致萎活性。根据以上研究结果 ,本文提出了黄萎病毒素分离纯化新方法。

培养方式对蜜环菌胞内多糖合成与抗眩晕症活性影响的研究

对蜜环菌在不同液态培养方式下胞内多糖的合成、组成以及抗眩晕症活性进行比较。结果显示,蜜环菌在摇床培养条件下形成菌丝球,菌丝多糖(AMP)和生物量在第8d达到最高产量,分别为124.32mg/L和10.85g/L,蜜环菌在静置培养条件下形成菌索,菌索多糖(ARP)与生物量在20d时达到最高,分别为588.40mg/L和37.17g/L,静置培养对蜜环菌胞内多糖的合成有利;两种多糖在多糖含量、蛋白质含量、糖醛酸含量以及皂苷含量等组成成分上基本一致;AKTA-purifier快速层析纯化系统(FPLC)检测显示,AMP与ARP有四个相同的多糖组分,ARP另多出一个组分;抗机械旋转所致小鼠眩晕症试验表明AMP与ARP活性相似,均能显著缩短眩晕小鼠逃避电击所用的时间(P<0.01),增加小鼠眩晕后的进食量,因而对机械旋转所致眩晕症具有一定疗效。

小麦种子中与抗赤霉病性相关的生化成分分析

用FPLC方法分析了抗小麦赤霉病程度不同的8个小麦品种种子的水溶性组分。结果表明,所有小麦品种都有1个保留时间为9min的吸收峰(P9),且抗病品种中该吸收峰的高度明显高于感病品种。种子水溶液经过氧化氢温育处理后,P9明显升高,表明有大量的P9生成。因此,推测P9可能是1种与小麦抗赤霉病性相关的生化成分,在小麦抗赤霉病的过程中起作用。

贲门癌患者术前短期服用氟脲嘧啶多相脂质体的临床病理研究

根据不少作者的统计分析，贲门癌患者术后５年生存率仅在２０％左右。为寻求提高其远期生存率的途径，采用术前短期服用氟脲嘧啶多相脂质体（ＦｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌｉＰｏｌｙｐｈａｓｅＬｉｐｏｓｏｍｅＣｏｍｐｏｓｉｔａＰｒｏＯｒａｌｅ—ＦＰＬＣ）进行探讨。１材...

抗人IgMμ链单克隆抗体的一步纯化法

本文应用快速蛋白液相色谱法(FPLC)直接从小鼠腹水中一步纯化抗人IgMμ链单克隆抗体(McAb),其纯度经全自动快速平放电泳检定为单一区带,优于DEAE—纤维素法。在具备FPLC仪器的情况下,本法分变率高,分离速度快,具有实用价值。