circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移

目的鼻咽癌是一种来源于鼻咽上皮的恶性肿瘤,其临床特征之一是易发生淋巴转移,但是目前鼻咽癌转移的分子机制尚未阐明。circPVT1是由PVT1基因2号外显子反向拼接形成的环状RNA(circRNA),在多种肿瘤中表达上调,本文探讨了circPVT1在鼻咽癌侵袭迁移中的作用和分子机制。方法通过RT-qPCR检测circPVT1及其下游miRNA和FSCN1在鼻咽癌细胞的表达情况,Transwell和划痕愈合实验检测circPVT1对鼻咽癌细胞侵袭迁移的影响,RNA pull-down实验检测circPVT1结合的miRNA,双荧光素酶报告实验检测miR-24-3p和let-7a-5p靶向抑制FSCN1 mRNA表达。结果在鼻咽癌细胞中过表达circPVT1可以促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,而敲低circPVT1则可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭迁移。进一步研究发现,circPVT1可以通过竞争性吸附miR-24-3p和let-7a-5p,上调FSCN1的表达,从而促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移。结论circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,证实circPVT1是鼻咽癌发生发展过程中一个重要驱动因子。

FSCN1在乳腺癌发生发展中的作用及其调控机制

FSCN1是一种肌动蛋白结合蛋白,能够将肌动蛋白丝集成一束。FSCN1在几乎所有的转移性肿瘤中高表达,并与大部分肿瘤的不良预后密切相关。FSCN1在基底样和三阴性乳腺癌中高度表达。近年来关于FSCN1的报道愈发频繁,随着深入研究发现,FSCN1除了促进癌细胞的迁移、侵袭和转移定植,维持癌细胞自我更新和增强耐药性,还具有调控癌细胞的糖脂代谢及线粒体重塑等功能。本文从FSCN1的结构和调节形式,促进乳腺癌发生和转移的分子机制,以及其在乳腺癌中的作用及功能展开介绍,最后对FSCN1在临床上的价值进行了总结,为FSCN1在乳腺癌领域的研究提供重要的借鉴和参考。

槲皮素与FSCN1基因siRNA联合对卵巢癌生长抑制及免疫功能的影响研究

目的探讨槲皮素与FSCN1基因siRNA对卵巢癌细胞活力、凋亡及免疫功能的影响及机制。方法人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、NC组(转染阴性对照siRNA)、槲皮素组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染阴性对照siRNA)、si-FSCN1组(细胞转染靶向抑制FSCN1的siRNA)和槲皮素+si-FSCN1组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染靶向抑制FSCN1的siRNA),siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。各组细胞处理48 h,Western blotting检测FSCN1、β-catenin、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bax和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 SKOV3细胞转染si-FSCN1后FSCN1蛋白表达明显降低,与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。槲皮素组和si-FSCN1组细胞活力及β-catenin、cyclin D1和VEGF的蛋白表达均显著低于NC组,高于槲皮素+si-FSCN1组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于NC组,低于槲皮素+si-FSCN1组(P<0.05)。结论槲皮素或FSCN1基因siRNA均能抑制卵巢癌细胞活力,诱导细胞凋亡,抑制免疫抑制因子VEGF表达,联合使用效果更强,机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。

乳腺癌FSCN1表达及其对癌细胞增殖活性的影响

目的观察FSCN1在人乳腺癌及乳腺良性病变组织中的表达及其对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法采用免疫组化MaxVision两步法检测124例乳腺癌和27例乳腺良性病变组织中FSCN1蛋白的表达。用干扰RNA技术沉默人乳腺癌细胞株MCF-7中FSCN1基因的表达,通过MTT实验检测细胞增殖能力。结果 FSCN1蛋白在乳腺癌和乳腺良性病变组织中的阳性率分别为37.9%(47/124)和51.9%(14/27),差异无统计学意义(P>0.05);FSCN1蛋白阳性率随组织学分级的增高而增高(P<0.01);ER、PR阴性乳腺癌患者的FSCN1蛋白阳性率明显高于ER、PR阳性患者(P<0.05);转染FSCN1 siRNA后,MCF-7细胞的增殖活性较siRNA NC组明显降低(P<0.05)。结论 FSCN1对人乳腺癌细胞的增殖能力可能存在正性调控作用,有望成为乳腺癌潜在生物学标记物。

乳腺良恶性病变组织中FSCN1mRNA的表达及其意义

目的:研究FSCN1 mRNA在人乳腺癌及乳腺良性病变组织中的表达情况,探讨FSCN1 mRNA的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。方法:采用原位分子杂交法检测63例乳腺癌和30例乳腺良性病变组织中FSCN1 mRNA的表达。结果:FSCN1 mRNA在乳腺癌中的阳性率为65.1%,在乳腺良性病变中的阳性率为90.0%,差异有显著性(P<0.05)。FSCN1 mRNA的表达与乳腺癌组织学分级、ER、PR、核分裂计数、患者的年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、TNM分级及c-erbB-2表达均无显著相关性。乳腺癌中FSCN1 mRNA阳性患者总生存率为92.3%,阴性患者总生存率为82.2%,差异无统计学意义(P>0.05)。FSCN1 mRNA和蛋白在乳腺癌中表达具有显著相关性(rs=0.315,P<0.05)。结论:FSCN1在乳腺癌中表达下调,可能与乳腺癌发生过程有关。

miR-145对NSCLC细胞增殖和FSCN1蛋白表达的影响研究

目的研究miR-145在人非小细胞肺癌细胞A549中的表达及其对A549细胞增殖和靶蛋白FSCN1表达的影响。方法采用分子克隆实验构建pmR-mcherry/miR-145真核表达载体,瞬时转染A549细胞,QPCR法检测miR-145在细胞中的表达水平;Western blot检测miR-145对细胞中FSCN1蛋白表达水平的影响;细胞增殖实验检测miR-145对A549细胞增殖能力的影响。结果成功构建pmR-mcherry/miR-145真核表达载体,转染A549细胞后QPCR检测其可有效表达;Western blot结果显示过表达miR-145后,FSCN1的蛋白水平明显的下调;细胞增殖实验结果显示miR-145能明显抑制肺癌细胞A549的增殖。结论过表达miR-145可抑制A549细胞增殖并下调FSCN1基因的表达水平。

FSCN1与钌配合物在抗胃癌中的作用及相关性研究

目的探讨FSCN1在胃癌增殖中的作用,并研究FSCN1与钌配合物在胃癌中的相互作用。方法通过荧光定量PCR及Western blot法检测胃癌组织中FSCN1的表达水平;MTT、Ed U法检测干扰FSCN1后细胞增殖能力变化;用钌配合物处理SGC-7901后检测FSCN1 mRNA、蛋白表达水平及细胞的增殖能力;siRNA抑制FSCN1的表达,过表达FSCN1后检测钌配合物对细胞的增殖能力影响。结果荧光定量PCR及Western blot法均显示胃癌组织中FSCN1表达水平显著高于癌旁组织;MTT与Ed U法结果显示,与si NC组比较,干扰FSCN1后细胞的增殖受到明显抑制(P<0.01);钌配合物处理SGC-7901后,定量PCR结果显示,与si NC组比较,FSCN1表达水平受到抑制(P<0.01),MTT法结果显示,与si NC组比较,细胞增殖受到抑制(P<0.01);MMT法结果显示过表达FSCN1后抑制钌配合物对细胞增殖能力的影响。结论 FSCN1具有促进胃癌细胞增殖的能力,钌配合物通过抑制FSCN1的表达起抑癌作用。

Fscn1基因在NSCLC中的表达、生物学功能信号通路富集及其与患者预后的关系

目的探讨肌动蛋白结合蛋白(Fscn)1基因在非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织和癌旁组织中的表达及意义。方法采用生物信息分析方法分析人类肿瘤基因组(TCGA)数据库中Fscn1基因的表达情况。在STRING数据库中建立Fscn1基因及其相关蛋白互相作用网络,对网络中的蛋白进行功能富集。采用生存分析探讨Fscn1基因高低表达水平与NSCLC患者的预后关系。同时回顾性分析NSCLC患者51例,采用免疫组织化学法检测手术标本中NSCLC患者癌组织和癌旁正常组织中Fscn1基因编码蛋白表达水平,分析比较Fscn1基因编码蛋白表达与患者临床病理特征的关系。结果Fscn1基因在多种肿瘤中表达水明显高于对应的癌旁组织,且在NSCLC患者中Fscn1基因mRNA表达水平明显上调(P<0.05)。与Fscn1基因相互作用较为紧密的蛋白网络共有节点数共51个,相互作用关系446个,区域聚类指数为0.75,蛋白相互作用网络富集显著(P<0.05)。Fscn1基因及其相关蛋白功能主要富集于蛋白相互连接。Fscn1基因正相关表达最显著的基因为SPHK1基因(r=0.53);与Fscn1基因负相关表达最显著的基因为跨膜蛋白(TMEM)125(r=-0.38)。生存分析显示高低表达组总生存(HR=1.3,P<0.05)显著低于低表达组;但高低表达组患者无疾病进展生存无明显差异(HR=0.82,P>0.05)。进一步根据病理类型分为鳞癌和腺癌,结果显示肺腺癌中,Fscn1基因mRNA高表达患者总生存期显著低于低表达者(HR=1.6,P<0.05)。Fscn1基因编码蛋白在NSCLC患者癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为70.6%(36/51)和17.6%(9/51)。Fscn1基因编码蛋白在NSCLC患者癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。Fscn1基因编码蛋白在癌组织中的阳性表达与NSCLC患者的临床分期(P<0.05)和纵隔淋巴结转移有关(P<0.05)。结论Fscn1基因在NSCLC患者肿瘤组织中表达明显上调,且可能参与了肺癌的转移过程。通过靶向一致Fscn1基因表达,有望成为NSCLC治疗的新靶点。

Notch1和FSCN1在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的检测Notch1和FSCN1在乳腺癌中的表达及与乳腺癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学方法检测100例乳腺癌组织及30例癌旁正常乳腺组织中Notch1、FSCN1、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CerbB-2及ki-67的蛋白表达;采用RT-PCR检测60例新鲜乳腺癌组织及其癌旁组织中Notch1和FSCN1的mRNA表达。结果 100例乳腺癌组织及30例癌旁正常乳腺组织中Notch1阳性表达率为79.0%(79/100)和33.3%(10/30),FSCN1阳性表达率分别为68.0%(68/100)和30.0%(9/30),两者乳腺癌组织中的阳性率均明显高于癌旁正常乳腺组织(P<0.05)。乳腺癌中Notch1的阳性表达与年龄、ER及PR无明显相关性(P>0.05),而与腋窝淋巴结转移、临床TNM分期、病理学分级、CerbB-2及ki-67具有相关性(P<0.05);乳腺癌中FSCN1的阳性表达与年龄无相关性(P>0.05),而与腋窝淋巴结转移、临床TNM分期、病理学分级、ER、PR、CerbB-2及ki-67具有相关性(P<0.05);Notch1和FSCN1的蛋白表达呈正相关(r=0.225,P<0.05)。RT-PCR结果显示:乳腺癌组织Notch1和FSCN1的表达亦均高于癌旁正常乳腺组织,差异具有统计学意义(P<0.05),Notch1和FSCN1的mRNA表达呈正相关(r=0.446,P<0.05)。结论 Notch1和FSCN1在乳腺癌中均呈高表达,可能协同促进乳腺癌的发生和发展,且可能在乳腺癌的浸润、转移及预后中发挥了重要作用。

FSCN1蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Fascin-1(FSCN1)蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义,为临床诊治胃癌提供参考依据。方法选择均经病理诊断确诊的胃癌患者102例,男性68例,女性34例;年龄40~73岁,平均57.8岁;Ⅰ+Ⅱ期60例,Ⅲ+Ⅳ期42例;高分化15例,中分化21例,低分化为66例;淋巴结转移62例。20例癌旁组织(距离癌组织>5 cm)作为对照组。应用免疫组织化学法检测胃癌组织(胃癌组)、癌旁组织(20例,癌旁组织组)中FSCN1的表达阳性率。分析癌组织中FSCN1表达与胃癌转移、分期及预后的关系。结果胃癌组织FSCN1阳性表达率[55.9%(57/102)]高于癌旁组织[15.00%(3/20)],差异有显著统计学意义(χ^(2)=17.763,P=0.000)。胃癌组织中FSCN1表达与患者分化程度、淋巴结转移和TNM分期有显著相关性(均P<0.05)。FSCN1阳性组中位生存时间低于FSCN1阴性组[(28.00±2.20)个月vs(46.00±3.05)个月)(P=0.000);FSCN1阳性组5年生存率[24.7%(14/57)]低于FSCN1阴性组[55.6%(25/45)](χ^(2)=14.384,P=0.000)。多因素Cox回归分析显示,TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)、FSCN1高表达水平是胃癌患者随访5年期间预后的危险因素(P<0.05)。结论FSCN1在胃癌组织中高表达,与肿瘤的进展、预后有关。

大黄酸通过miR-29c-3p调节FSCN1的表达影响胃癌细胞的生物学行为

目的探讨大黄酸(Rhein)对人胃癌细胞(SGC-7901)增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其机制。方法通过qRT-PCR检测大黄酸处理后细胞中miR-29c-3p的表达以及miR-29c-3p的转染效率;miR-29c-3p mimics组、NC mimics组、Rhein+miR-29c-3p inhibitor组、Rhein+NC mimics组均使用脂质体转染试剂转染至SGC-7901细胞中,再使用50μM的大黄酸处理48h;CCK-8法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI和流式细胞术联合检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测细胞荧光活性;Western blot检测FSCN1蛋白表达。结果与NC组相比较,大黄酸处理后可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡;过表达miR-29c-3p可抑制细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡;抑制miR-29c-3p表达可逆转大黄酸对SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭的抑制和细胞凋亡促进作用。miR-29c-3p可靶向作用于FSCN1。结论大黄酸可抑制人胃癌细胞(SGC-7901)增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-29c-3p/FSCN1有关,为大黄酸用于治疗胃癌提供一定的科学依据。

miR-1271-5p靶向FSCN1对肺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的探讨miR-1271-5p靶向人肌动蛋白束蛋白(FSCN)1对肺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法RT-qPCR和Western印迹检测20例肺癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-1271-5p和FSCN1的表达水平。利用脂质体转染法将miR-1271-5p模拟物(miR-1271-5p mimics)、FSCN1小干扰RNA(si-FSCN1)分别转染A549细胞,构建过表达miR-1271-5p或干扰FSCN1表达的肺癌细胞株。四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western印迹检测细胞周期素(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达水平。双荧光素酶报告实验和Western印迹验证miR-1271-5p和FSCN1的靶向调控关系。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-1271-5p的表达水平显著降低,FSCN1的表达水平显著升高(P<0.05)。过表达miR-1271-5p或干扰FSCN1均可抑制CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,促进p21蛋白的表达,降低A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。FSCN1是miR-1271-5p的靶基因,miR-1271-5p负性调控FSCN1表达。过表达FSCN1可逆转miR-1271-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论miR-1271-5p通过靶向FSCN1抑制肺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。

FSCN1与Vimentin在结肠癌中的表达与意义

目的探讨FSCN1与Vimentin在人结肠癌中的表达与意义。方法采用免疫组化方法检测人结肠癌及癌旁组织中FSCN1与Vimentin的表达情况,并分析二者在结肠癌中的表达情况与临床病理参数的关系及二者表达的相关性。进一步检测人结肠癌SW-480细胞中FSCN1与Vimentin的调控关系,并研究FSCN1与人结肠癌细胞侵袭转移的关系。结果FSCN1、Vimentin在结肠癌组织中的表达均显著高于癌旁组织(P<0.001)。结肠癌中FSCN1与Vimentin表达呈显著正相关,FSCN1、Vimentin在结肠癌组织中的表达均与TNM分期、淋巴结转移、分化程度均呈正相关(P<0.001)。敲低SW-480细胞中的FSCN1后,VimentinmRNA与蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。FSCN1干扰后,SW-480细胞的侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05)。结论FSCN1、Vimentin在结肠癌组织中呈高表达,并均与结肠癌转移有关。FSCN1对Vimentin具有正向调控作用,FSCN1可能参与结肠癌细胞EMT过程进而调节结肠癌的转移。

miR-145靶向FSCN1的鉴定研究

miRNA 是参与机体许多生理功能调控的重要因素之一。本研究以miR-145 为研究对象,旨在通过三个靶基因预测软件(miRanda、PicTar 及TargetScan)进行miR-145 的靶基因的预测,以此来得到miR-145 可能靶向FSCN1 基因的结论。通过实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹检测和双荧光素酶报告试验多重验证筛选miR-145 靶基因。研究发现:在细胞水平中,miR-145 的过表达会导致FSCN1 的mRNA 显著下调,当miR-145 被抑制表达的时候,会导致FSCN1 的mRNA 水平显著上调。此外,荧光素酶报告试验显示,FSCN1 基因的3′UTR 存在着miR-145 的靶向结合位点,其在miR-145 的作用下可显著下调FSCN1 活性。研究结果将明晰miR-145 通过FSCN1 来发挥生物学功能,为探索人类及动物调控机理提供了可靠的参考价值。

宫颈癌中EGFR和FSCN1的表达及其相关性

目的:探讨宫颈癌中表皮生长因子受体1(EGFR)及Fascin-1(FSCN1)蛋白的表达及其相关性。方法:采用免疫组织化学En Vision法检测120例宫颈癌组织中EGFR及FSCN1蛋白的表达。结果:宫颈癌组织中EGFR蛋白阳性率为89.2%(107/120),FSCN1蛋白阳性率为99.2%(119/120),其中强阳性率为88.3%(106/120)。EGFR阳性表达与FSCN1强阳性表达呈显著正相关(P<0.01)。结论:宫颈癌中EGFR可能参与正性调控FSCN1表达。

组织芯片技术研究FSCN1蛋白在垂体腺瘤中的表达及意义

目的探讨Fascin-1（FSCN1）蛋白在垂体腺瘤组织中的表达变化，分析其与临床特征及预后的关系。方法采用组织芯片构建包含10例正常垂体组织和212例垂体腺瘤。垂体腺瘤按照是否侵袭分为侵袭组（97例）和非侵袭组（115例）。利用Leica BOND-Ⅲ系统检测FSCN1蛋白的表达情况。分析212例垂体腺瘤患者的临床资料，并电话随访。结果正常垂体核阳性比例为1／10；垂体腺瘤核阳性率为34．9％（74／212），胞质阳性率为20．8％（44／212）。其中侵袭组FSCN1核阳性率为54．6％（53／97），非侵袭组FSCN1核阳性率为18．3％（21／115）（Х^2=30．65，P=0．004）；侵袭组FSCN1胞质阳性率为37．1％（36／97），非侵袭组FSCN1胞质阳性率为6．9％（8／115）（Х^2=29．09，P=0．000）。在67例FSCN1高表达组中，肿瘤复发率为22．4％（15／67），在145例FSCN1低表达组中，肿瘤复发率为7．6％（11／145）（Х^2=9．3310，P=0．002）。结论FSCN1蛋白的表达水平同垂体腺瘤是否侵袭呈密切相关，是预测垂体腺瘤复发的候选基因。

干扰FSCN1基因表达对前列腺癌细胞凋亡、活性氧水平影响的研究

目的探讨干扰FSCN1基因表达对前列腺癌细胞凋亡、活性氧(ROS)水平影响及机制。方法以正常前列腺上皮细胞RWPE-1为对照细胞,通过RT-PCR及Western blot检测前列腺癌LNCaP、DU145和PC-3细胞中FSCN1 mRNA及蛋白表达;以LipofectamineTM 2000为载体,DU145细胞分为si-FSCN1组(靶向抑制FSCN1的小干扰RNAs转染DU145细胞)、阴性对照组(随机序列转染DU145细胞)及空白对照组(未转染的细胞),siRNA转染48 h,Western blot检测FSCN1、PCNA、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα和p-IKKα的蛋白表达。CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与RWPE-1细胞比较,LNCaP、DU145和PC-3细胞中FSCN1 mRNA(1比2.561±0.189、7.183±0.882、4.796±0.567、4.796±0.567)及蛋白表达(0.053±0.007比0.217±0.013、0.654±0.058、0.316±0.035)均升高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与阴性对照组比较,si-FSCN1组FSCN1表达(0.473±0.052比0.086±0.010)降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与si-FSCN1组比较,空白对照组、阴性对照组细胞活力(0.302±0.033比0.787±0.069、0.764±0.063)均升高,凋亡率(24.54﹪±1.47﹪比3.04﹪±0.36﹪、3.28﹪±0.40﹪)和ROS相对荧光强度(90.04±5.73比47.88±3.62、49.62±4.11)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与si-FSCN1组比较,空白对照组、阴性对照组PCNA(0.255±0.032比0.654±0.062、0.631±0.058)、NF-κB p65(0.092±0.011比0.296±0.032、0.318±0.037)、p-NF-κB p65(0.042±0.008比0.155±0.018、0.151±0.016)、IKKα(0.112±0.01比0.172±0.020、0.192±0.023)和p-IKKα的蛋白表达(0.051±0.005比0.102±0.011、0.091±0.009)均升高,Cleaved caspase3蛋白表达(0.206±0.018比0.074±0.009、0.085±0.010)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。阴性对照组与空白对照组细胞活力、凋亡率、ROS水平及FSCN1、PCNA、Cleaved caspase3、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα和p-IKKα的蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论干扰FSCN1基因表达可降低前列腺癌细胞活力及诱导凋亡,机制可能与ROS水平升高及NF-κB信号下调有关。

槲皮素联合si-FSCN1对胃癌MKN45细胞增殖与侵袭和凋亡的影响

目的探讨槲皮素联合si-FSCN1对胃癌MKN45细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法以0、10,20,40,80和160μmol·L^-1槲皮素作用于体外培养的MKN45细胞24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率并计算出槲皮素的半抑制浓度。将si-FSCN1和si-NC分别转染至MKN45细胞,分别命名为si-FSCN1组和si-NC组,未经转染的细胞作为空白组,采用逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测转染效果。以80μmol·L^-1槲皮素处理转染si-FSCN1和si-NC的MKN45细胞,分别命名为槲皮素+si-FSCN1组和槲皮素+si-NC组,用噻唑蓝和克隆形成实验检测si-FSCN1组、si-NC组、槲皮素+si-FSCN1组和槲皮素+si-NC组细胞增殖,用Transwell小室实验检测细胞侵袭,用膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,用Western blot检测细胞中无翅基因(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、生存素(Survivin)蛋白的表达情况。结果槲皮素的半抑制浓度为85.60μmol·L^-1。si-NC组、si-FSCN1组、槲皮素+si-NC和槲皮素+si-FSCN1组细胞的存活率分别为(100.00±10.11)%,(51.72±3.28)%,(66.55±3.46)%和(38.95±2.35)%;克隆形成率分别为(36.48±4.05)%,(21.62±2.36)%,(28.81±2.42)%和(15.54±1.38)%,细胞凋亡率分别为(3.16±1.55)%,(20.28±3.05)%,(15.87±2.32)%和(33.45±3.28)%;侵袭细胞数分别为(88.85±6.28),(55.00±3.25),(62.68±4.52)和(36.76±3.02)个;β-catenin蛋白相对表达量分别为0.76±0.05,0.42±0.03,0.55±0.04和0.26±0.02;Cyclin D1蛋白相对表达量分别为1.21±0.22,0.72±0.06,0.84±0.06和0.32±0.03;MMP-9蛋白相对表达量分别为0.95±0.07,0.66±0.04,0.80±0.05和0.41±0.03;VEGF蛋白相对表达量分别为1.42±0.25,0.84±0.06,0.98±0.06和0.67±0.04;Survivin蛋白相对表达量分别为1.33±0.17,0.90±0.08,1.10±0.06和0.58±0.04。si-FSCN1、槲皮素+si-NC和槲皮素+si-FSCN1组分别与si-NC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),且槲皮素+siFSCN1组中各指标变化幅度明显大于si-FSCN1或槲皮素+si-NC组。结论槲皮素和si-FSCN1联合可协同抑制MKN45细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与共同抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。

circ_ACAP2对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡的影响及作用机制

目的分析环状RNA-ACAP2(circular RNA-ACAP2,circ_ACAP2)对胃癌细胞株BGC-823增殖凋亡的影响及作用机制。方法将体外培养的细胞分为si-NC组[不做处理的人胃上皮细胞(human gastric epithelial cells,GES-1)],si-circ_ACAP2(circ_ACAP2干扰的BGC-823细胞)、miR-NC组(转染miR-488-3p mimics)的阴性对照)、miR-488-3p组(转染miR-204-5p mimics)、si-circ_ACAP2+anti-miR-NC组(转染miR-488-3p inhibitor阴性对照),si-circ_ACAP2+anti-miR-488-3p组(转染miR-488-3p inhibitor),采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测GES-1细胞、胃癌细胞(BGC-823)中circ_ACAP2、微小RNA-488-3p(miR-488-3p)、肌成束蛋白(fascin-1,FSCN1)的表达量,构建抑制circ_ACAP2表达的BGC-823细胞,采用四甲基偶氮唑盐(Tetramethylazo salt,MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、p21、Bcl-2相关性蛋白X(Bcl-2-correlation protein X,Bax)表达情况。结果与GES-1组相比,BGC-823细胞中circ_ACAP、FSCN1表达水平升高,miR-488-3p表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组相比,si-circ_ACAP2组circ_ACAP2表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05),表明抑制circ_ACAP2表达的BGC-823细胞株构建成功。与si-NC组相比,si-circ_ACAP2组CyclinD1、OD值、Bcl-2降低,p21、Bax及凋亡率升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-488-3p组miR-488-3p表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),表明miR-488-3p过表达的BGC-823细胞株构建成功。与miR-NC组相比,miR-488-3p组CyclinD1、OD值、Bcl-2降低,p21、Bax、凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。双萤光素酶报告试验显示,与miR-NC组相比,过表达miR-488-3p可使WT-circ_ACAP2荧光素酶活性降低(P<0.05),对MUT-circ_ACAP2荧光素酶活性影响较小(P>0.05)。与si-NC组相比,抑制circ_ACAP2表达可使BGC-823细胞中miR-488-3p表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与si-circ_ACAP2+anti-miR-NC组相比,si-circ_ACAP2+anti-miR-488-3p组CyclinD1、OD值、Bcl-2升高,p21、Bax及凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论干扰circ_ACAP2表达可通过调控miR-488-3p/FSCN1表达,抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡。

Fascin-1蛋白在宫颈癌中的表达及其临床病理意义

目的 探讨Fascin-1（FSCN1）蛋白表达在宫颈癌发生、发展中的临床病理意义.方法 采用免疫组化En Vision二步法检测40例正常宫颈组织、40例低级别上皮内瘤变（CIN1级）、49例高级别上皮内瘤变[CIN2～3级）、120例宫颈癌组织中FSCN1蛋白的表达,并分析其与宫颈癌患者临床病理特征的关系.结果 正常宫颈鳞状上皮组织FSCN1蛋白阳性率为47.5％（19/40）,但其基底层细胞FSCN1蛋白阳性率为100.0％（40/40）.正常宫颈鳞状上皮组织、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变、宫颈癌组织中FSCN1蛋白阳性率分别为47.5％（19/40）、100.0％（40/40）、98.0％（48/49）、99.2％（119/120）.低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和宫颈癌组织中FSCN1蛋白阳性率显著高于正常宫颈鳞状上皮组织（均P＜0.01）;但低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和宫颈癌组织3者间FSCN1蛋白阳性率均无统计学差异（均P＞0.05）.在具有不同临床病理特征的患者间比较,FSCN1蛋白阳性率均无统计学差异（均P ＞0.05）.结论 在病变宫颈组织中FSCN1蛋白阳性率显著高于正常宫颈组织,提示其在宫颈癌发生的过程中起了重要作用,有望成为抗宫颈癌治疗的一个潜在生物学标志.