关元命门序贯针刺激活FSHR/cAMP/PKA通路促进早发性卵巢功能不全模型大鼠颗粒细胞增殖的机制研究

【目的】观察关元命门序贯针刺方案对早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将雌性SD大鼠分为空白组、模型组、蛋白激酶A(PKA)抑制剂(H89)+针刺组、针刺组各12只。除空白组,其他3组大鼠采用雷公藤多苷片灌胃制备POI模型。模型成功建立后,空白组和模型组每日捆绑一次;针刺组大鼠在动情间期取关元穴针刺,在动情前期取命门穴针刺;H89+针刺组按照针刺组针刺方案干预,在每次针刺前30 min内腹腔注射H89。连续干预20 d。各组大鼠分别在干预后第1个动情间期和动情前期取材。酶联免疫吸附分析(ELISA)检测动情间期促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)水平,Western Blot法检测动情间期促卵泡激素受体(FSHR)、芳香化酶P450(P450arom)蛋白表达,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测动情间期和动情前期颗粒细胞活性,免疫组织化学法检测动情前期增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平。【结果】(1)与空白组比较,模型组和H89+针刺组血清FSH水平显著升高(P<0.01),E2水平显著降低(P<0.001);H89+针刺组FSH水平与模型组无差异(P>0.05),E2水平低于模型组(P<0.05);针刺组FSH水平低于模型组和H89+针刺组(P<0.05),与空白组无差异(P>0.05),E2水平显著高于模型组和H89+针刺组(P<0.01),仍低于空白组(P<0.05)。(2)模型组和H89+针刺组FSHR、P450arom蛋白表达均低于空白组(P<0.01);H89+针刺组FSHR蛋白表达水平与模型组无差异(P>0.05),P450arom蛋白表达水平低于模型组(P<0.05);针刺组FSHR、P450arom蛋白表达水平均高于模型组和H89+针刺组(P<0.05),但仍低于空白组(P<0.05)。(3)模型组和H89+针刺组GCs活性和PCNA平均光密度值均低于空白组(P<0.05);H89+针刺组GCs活性和PCNA平均光密度值均低于模型组(P<0.05);针刺组的GCs活性和PCNA平均光密度值显著高于模型组和H89+针刺组(P<0.05或P<0.01)。【结论】关元命门序贯针刺方案可通过上调促卵泡激素受体(FSHR)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路FSHR、P450arom蛋白的表达,调控性激素水平,提高GCs活性和促进GCs细胞增殖,从而改善POI。

黄牛FSHR基因的生物信息学分析

利用生物基因组学数据库,对黄牛FSHR基因进行生物信息学分析,以预测FSHR基因编码产物的理化性质、结构与功能,同时构建FSHR同源系统进化树.结果表明:FSHR基因编码产物为疏水性跨膜蛋白,具有明显的信号肽,其切割位点位于17～18位的氨基酸之间,二级结构主要以α-螺旋与无规则卷曲为主,并主要在质膜中发挥生物学作用,跨膜区域分为跨膜域、胞外域和胞内域3个部分.序列分析表明,FSHR编码产物可能具有离子通道、运载体、受体、信号转导和阳离子通道等功能,在离子跨膜与信号传递过程中发挥重要作用,并对黄牛的激素调节有影响.FSHR基因编码产物系统进化树表明,黄牛FSHR与水牛、成都麻羊、绵羊等物种FSHR遗传距离较近,具有高度同源性.

波尔山羊FSHR5’端序列的SNP多态性及超排效果分析

为探索波尔山羊超排个体排卵数差异与个体遗传特性的相关性,对波尔山羊的FSHR基因(950 bp),分成四段分别设计引物进行PCR-SSCP多态性分析,结果发现一个SNP位点,导致5-’1出现两种基因型。序列分析显示该突变位点位于转录起始点上游-739bp处,属于远端转录启动调控区。统计分析表明AA型个体的平均排卵数与AB型个体的平均排卵数差异极显著(P<0.01),平均胚胎可利用率差异显著(P<0.05),这说明个体的超排潜力可能与其本身的FSHR基因的遗传特性有关。

莱芜黑山羊卵巢FSHr、LHr的免疫组化定位研究

为从形态学角度理解内分泌调节过程,揭示促性腺激素(GTH)对雌性哺乳动物卵巢调节作用机制,对处于非繁殖季节的莱芜黑山羊卵巢中FSHr、LHr分布进行免疫组化SABC方法定位.分别选取相邻的6张连续阳性切片,光镜观察、图像分析.结果显示:FSHr、LHr阳性细胞主要分布于卵泡颗粒细胞、膜细胞、卵母细胞、血管周围间质,尤其以在卵泡颗粒细胞、膜细胞的胞质中分布最多.原始卵泡卵母细胞中便有两种受体阳性物质分布,在各级卵泡中两种受体阳性细胞数量、染色强度随卵泡发育水平呈正向增加趋势.

牛FSHR基因第10外显子单核苷酸多态性及其与双胎性状的关系

以秦川牛和荷斯坦奶牛的双胎母牛和单胎母牛为实验材料 ,以牛的FSHR基因的第 10个外显子作为标记牛双胎性状的候选基因 ,用SNP法进行了多态检测 .结果发现 ,在秦川牛的双胎母牛中突变率 6 0 % (6 10 ) ,而在单胎母牛中突变率为 2 0 % (2 10 ) ;在荷斯坦奶牛中 ,双胎母牛突变率为31 2 5 % (5 16 ) ,单胎母牛突变率为 6 6 7% (1 15 ) ;由此可见双胎牛和单胎牛二者之间FSHR基因的第 10个外显子的突变率差异明显 .这表明 ,选择FSHR基因的第 10个外显子有可能作为双胎性状的候选基因 .序列分析发现 ,在FSHR基因的第 15 0 6位碱基发生了突变 (T→C) ,但氨基酸没有发生变化 .

文昌鸡FSHR基因多态性及其对繁殖性状的遗传效应

【目的】寻找与文昌鸡繁殖性能相关的遗传标记。【方法】以促卵泡素受体(FSHR)基因作为影响鸡繁殖性状的候选基因,采用PCR-SSCP技术结合测序分析,对FSHR基因所有外显子及部分内含子区域进行单核苷酸多态性(SNPs)检测,收集文昌鸡繁殖性能指标,分析FSHR基因多态性与繁殖性状的关系。【结果】共发现4个区域存在SNPs位点,分别为:区域4中exon 4编码区43bp处的T→C突变,但没有导致翻译后氨基酸序列的改变;区域2中exon 2编码区5′端-49bp处的C→T突变;区域6中exon 6编码区3′端+12bp处的A→G突变;区域9中exon 8编码区3′端+38bp处的G→T突变。对以上4个区域不同基因型与繁殖性状的相关性分析表明,文昌鸡FSHR基因第4外显子呈现的3种基因型(CC/CD/DD)多态性,与文昌鸡300日龄产蛋数及平均联产天数显著相关(P<0.05)),而且CD杂合基因型的300日龄产蛋数及平均联产天数显著高于其他基因型(P<0.05)。【结论】FSHR基因可作为影响文昌鸡产蛋数的候选基因。

文昌鸡促卵泡素受体(FSHR)基因外显子区域SNPs分析

寻找与鸡繁殖性能相关的遗传标记,为高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。本研究以促卵泡素受体(FSHR)基因作为影响鸡繁殖性状的候选基因,采用PCR-SSCP技术结合测序对FSHR基因部分包括所有外显子区域进行单核苷酸多态性检测和分析。结果发现,在区域2、区域4、区域6、区域9共4个区域存在SNPs位点。exon4编码区43bp处T→C突变,但没有导致翻译后氨基酸序列的改变,在exon2中编码区5′端—49bp处的C→T突变;exon6编码区3′端+12bp处的A→G突变;exon8编码区3′端+38bp处的G→T突变。促卵泡素受体(FSHR)是促卵泡素(FSH)的特异性受体,这些位点的单核苷酸多态性为下一步研究探讨FSHR基因对文昌鸡繁殖性能的遗传效应奠定了基础。

子宫内膜息肉组织中FSHR和LHR的表达及意义

目的探讨卵泡刺激素受体(Follicule stimulating hormone receptor,FSHR)、黄体生成素受体(Luteinizing hormone receptor,LHR)与子宫内膜息肉发生的相关性.方法运用实时荧光定量PCR方法(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)以及免疫印迹方法(Southwestern blotting,WB)从基因水平以及蛋白水平测定2016年12月~2017年11月在我院行宫腔镜下子宫内膜息肉摘除术患者子宫内膜息肉及其旁正常子宫内膜中FSHR、LHR的表达差异.结果通过real-time PCR结果显示子宫内膜息肉组织中FSHR基因表达量0.0496(0.0431,0.0656),其旁正常子宫内膜组织中FSHR基因表达量0.0002(0.0001,0.0002),差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜息肉组织中LHR基因表达量(0.00012293±0.00004748),其旁正常子宫内膜组织中LHR基因表达量(0.00001931±0.00000380),差异有统计学意义(P<0.05);通过WB结果显示子宫内膜息肉组织中FSHR蛋白表达水平0.4093(0.3925,0.4789),其旁正常子宫内膜组织蛋白表达水平0.2235(0.1093,0.3285),差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜息肉组织中LHR蛋白表达水平0.4379(0.4062,0.4503),其旁正常子宫内膜组织蛋白表达水平0.2235(0.1093,0.3278),差异有统计学意义(P<0.05).结论 FSHR及LHR存在于人子宫内膜组织中,其在子宫内膜息肉组织中的表达高于其旁正常子宫内膜组织,得出子宫内膜息肉的发生不仅与雌激素受体及孕激素受体表达失调有关,与FSHR及LHR表达失衡亦有关.

德国牧羊犬FSHR基因第1外显子SNP T89C与产仔数关系研究

为了研究FSHR基因与产仔数的关系,试验以警用德国牧羊犬种母犬基因组为模板,应用PCR技术克隆FSHR基因第1外显子,测序检测单核苷酸多态性(SNP)T89C位点,并进一步分析基因型对产仔数的影响。结果表明:FSHR基因第1外显子SNP T89C CC基因型个体产仔数显著少于TT基因型个体产仔数(P<0.05),说明SNP T89C位点与德国牧羊犬产仔数存在相关性。

北极狐FSHR基因多态性与产仔数关联分析

为了研究北极狐FSHR基因的多态性与北极狐产仔数的相关性,试验采用PCR-SSCP技术检测北极狐FSHR基因多态性,用最小二乘法分析其多态性对北极狐产仔数影响的遗传效应。结果表明:FSHR基因在北极狐中存在多态性,A等位基因为优势等位基因。对于初产母狐,BB基因型母狐的总产仔数(TNB)和产活仔数(NBA)比AA基因型母狐分别多1.08头和1.58头(P<0.05);对于经产母狐,BB基因型母狐的TNB和NBA比AA基因型母狐分别多1.72头和1.03头(P<0.05)。在北极狐群中,北极狐FSHR基因处于Hardy-Weinberg平衡状态。说明北极狐FSHR基因B等位基因对北极狐产仔数性状有显著影响。

LPS对兔下丘脑、输卵管上FSHR和LHR表达的影响

【目的】检测促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)蛋白在下丘脑、输卵管的分布,以及LPS诱导后母兔下丘脑、输卵管上FSHR和LHR的表达变化。【方法】36只雌性新西兰白兔随机分为9组(n=4),一组不注射作为0h组,LPS处理组按0.5mg/kg体重耳缘静脉注射LPS,对照组注射等量的生理盐水,在注射后0、1.5、3、6和12h后处死,收集下丘脑和输卵管,采用荧光定量PCR和免疫组化在转录水平和蛋白水平分析FSHR和LHR的表达。【结果】结果显示:FSHR和LHR主要定位于输卵管黏膜层和肌层,在间质层未检测到FSHR和LHR;LPS诱导下,LPS不影响FSHR和LHR mRNA在下丘脑的转录,但下调FSHR和LHR mRNA在输卵管的表达。蛋白水平上,LPS改变了FSHR在下丘脑和LHR在输卵管黏膜层的表达模式,对LHR在下丘脑和输卵管肌层有下调作用,对FSHR在输卵管黏膜层和肌层有上调作用。【结论】LPS影响FSHR和LHR蛋白在下丘脑的表达,表明免疫-繁殖系统可以在下丘脑发生相互作用,进而影响动物生殖。

LHCGR、FSHR、YAP1DNA多态性与多囊卵巢综合征发病间的相关性研究

目的研究黄体生成素/人绒毛膜促性腺激素受体(LHCGR)、卵泡刺激素受体(FSHR)、Yes相关蛋白1(YAP1)DNA多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的相关性。方法选取2019年10月-2021年2月新疆医科大学第一附属医院生殖医学中心PCOS患者59例为PCOS组,以同期健康体检者59例为对照组。采取聚合酶链反应及焦磷酸测序法测定两组LHCGR、FSHR、YAP1DNA多态性,对比两组一般资料及上述基因多态性位点基因型分布频率,采用Logistic回归方程分析PCOS发病的相关因素。结果与对照组比较,PCOS组LH、T指标升高,FSH指标降低,差异有统计学意义(P<0.05);PCOS组rs13405728位点基因型TT、TC、CC频率分别为69.49%、28.81%、1.69%;rs1394205位点基因型AA、AG、GG频率分别为59.32%、22.03%、18.64%;rs11225161基因型AA、AG、GG频率分别为18.64%、59.32%、22.03%;对照组rs13405728位点基因型TT、TC、CC频率分别为50.85%、27.12%、22.03%;rs1394205位点基因型AA、AG、GG频率分别为55.93%、20.34%、23.73%;rs11225161基因型AA、AG、GG频率分别为44.07%、47.46%、8.47%。两组rs13405728位点基因型频率、rs11225161基因型分布频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结果显示,rs13405728位点基因型、rs11225161位点基因型多态性均与PCOS发生有关(P<0.05)。结论LHCGR、YAP1DNA是PCOS的易感基因,其中rs13405728位点T/C多态、rs11225161位点A/G多态与PCOS易感性存在关联性。

经皮穴位电刺激对IVF中POI患者卵母细胞质量及FSHR表达的影响

目的观察经皮穴位电刺激(TEAS)对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中早发性卵巢功能不全(POI)患者卵母细胞质量及卵泡刺激素受体(FSHR)表达的影响。方法选取2018年5～10月在南方医科大学附属深圳妇幼保健院生殖医学中心接受IVF治疗的POI妇女66例,采用随机数表法分为TEAS组和对照组,每组33例。TEAS组自促性腺激素(Gn)启动日至绒促性素(hCG)注射日给予电子针疗仪治疗,隔日1次,对照组自Gn启动日起给予安慰针治疗,治疗时间、疗程及穴位选择均与TEAS组相同。比较两组患者的获卵数、受精率、优质胚胎率及临床妊娠率的差异,采用Western blot法检测取卵日颗粒细胞FSHR蛋白的表达。结果 TEAS组患者的临床妊娠率为51.52%,明显高于对照组的27.28%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,TEAS组和对照组的获卵数分别为(3.33±1.05)个、(2.73±1.21)个,优质胚胎率分别为54.29%和34.15%,颗粒细胞FSHR蛋白表达分别为0.75±0.17、0.55±0.12,两组上述指标比较差异均有统计学意义(P<0.05);TEAS组和对照组的受精率分别为75.79%和73.23%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TEAS疗法可能通过调控卵巢颗粒细胞FSHR的表达,促进卵母细胞发育,提高卵母细胞质量,改善IVF中POI患者的妊娠结局。

阿拉瑞林免疫影响FSHR表达及FSHR生物信息学分析

目的：探讨阿拉瑞林主动免疫绵羊对垂体和卵巢FSHR表达的作用，分析绵羊FSHR的生物信息学特点。方法：42只5～6月龄母绵羊随机分为6组（n＝7），EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0 d和14 d皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg；EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg，0、7、14、21 d各一次，共4次；对照组在0 d和14 d皮下注射抗原溶媒2.0ml。于70 d（实验结束时）屠宰动物，无菌采集垂体和卵巢。从绵羊垂体中提取FSH，进行PCR扩增、克隆和测序，荧光定量PCR分析，将得到的序列运用生物信息学软件行分析，用Western blot检测卵巢FSHR蛋白表达。结果：实验组垂体FSHR mRNA的2^-ΔΔCt均低于对照组， EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的2^-ΔΔCt值逐渐下降；而且EG-Ⅳ低于EG-Ⅰ，EG-Ⅴ低于EG-Ⅱ，即注射阿拉瑞林4次后FSHR mRNA的2^-ΔΔCt值分别低于注射2次后的值。各实验组卵巢FSHR蛋白表达量随阿拉瑞林注射剂量的增加而逐渐增加，EG-IV和EG-V卵巢FSHR蛋白显著高于对照组相比（P＜0.01）。 FSHR序列为1091 bp，开放阅读框（0RF）780 bp，位于41～820位点，其半衰期、理论等电点、不稳定指数、疏水性平均值和脂肪指数分别为1.2 h、5.05、47.75、0.836和30.61。结论：阿拉瑞林免疫可抑制垂体FSHR mRNA的表达，但是增加卵巢FSHR蛋白表达；FSHR蛋白为不稳定的疏水性蛋白。

德国牧羊犬FSHR基因第1外显子的克隆与序列分析

为了研究德国牧羊犬卵泡刺激素受体(FSHR)基因多态性,试验以警用德国牧羊犬的基因组为模板,根据GenBank报道的拳师犬FSHR基因第1外显子序列设计引物,应用PCR技术,克隆和测定FSHR基因第1外显子序列,并进行BLAST比对分析。结果表明:30只受试犬基因遗传同源性高达100%,6只受试犬基因遗传同源性达99.6%,存在1处有义突变(SNP T89C)。

卵泡刺激素受体在大鼠下颌下腺及胃的定位和分布研究

目的研究卵泡刺激素受体(FSHR)在大鼠下颌下腺和胃的定位、分布。方法采用免疫组织化学ABC法。结果大鼠下颌下腺浆液性腺上皮细胞,颗粒曲管及大于颗粒曲管的导管上皮细胞以及胃底腺壁细胞均呈FSHR免疫反应阳性,阳性物质主要位于细胞质内,细胞核呈阴性反应。结论大鼠下颌下腺、胃底腺壁细胞存在FSHR,卵泡刺激素可能通过FSHR的介导对上述两个器官功能进行调控。

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)促性腺激素受体在雄性生殖周期中的表达

采用RT-PCR方法,研究了促性腺激素受体(FSHR和LHR)基因在雄性半滑舌鳎繁殖周期中的季节表达规律。结果表明,FSHR mRNA在雄鱼精巢、脑和脾中及LHR mRNA在雄鱼的精巢和脾中均呈季节规律性变化。3月份样品中,FSHR mRNA在精巢表达量最低,12月份,表达量最高;FSHR mRNA在脑中表达模式与精巢相反,3月份表达量最高,12月份达到最低值;FSHR mRNA在脾中表达模式和精巢相同。在6月份精巢样品中,LHR mRNA表达量最低,12月表达量最高;在脾中,LHRmRNA在3月份表达量最低,12月份表达量最高。在精巢中,FSHR mRNA和LHR mRNA都是在排精时表达量达到最大值,说明这两种受体在雄性半滑舌鳎排精时发挥重要作用。

鸡促卵泡素及其受体基因在多个非繁殖组织中的表达研究

本研究利用PCR和免疫组化等方法,对FSHR和FSH基因在鸡多个非繁殖系统的组织器官中的mRNA和蛋白水平的表达以及相关性进行了分析。结果显示:在心脏、肝脏、肾脏、肺和十二指肠中FSHR mRNA和蛋白以及FSH蛋白水平具有相同的表达趋势,表达丰度从大到小依次为肝脏、心脏、肾脏、肺和十二指肠。而在脾脏、胃、腿肌和胸肌中未检测到FSHR mRNA和蛋白以及FSH蛋白水平的表达;在检测的9个组织中,均无FSHmRNA的表达。相关性分析结果表明,在肝脏、心脏、肾脏、肺和十二指肠中各组织器官质量与组织中的FSH蛋白水平具有显著或极显著的正相关(P<0.05或P<0.01);各组织中的FSHR mRNA和蛋白水平均与FSH蛋白水平存在显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01)。本研究初步证明,机体其他部位表达分泌的促卵泡素,在多个非繁殖组织器官(肝脏、心脏、肾脏、肺和十二指肠)中通过调控促卵泡素受体基因的表达来影响北京油鸡不同组织的发育。

半滑舌鳎促滤泡激素受体基因克隆及其在雌鱼生殖周期中的表达

通过简并引物扩增及RACE技术,首次克隆了半滑舌鳎促滤泡激素受体(FSHR)基因cDNA全长序列。该基因全长3105bp,编码704个氨基酸,含有典型的跨膜螺旋结构区域(TMhelix),属于糖蛋白激素受体(GHR)家族。该基因编码区共有19个Ser,4个Thr和5个Tyr磷酸化位点;3个潜在的N基端糖基化位点,分别是62NISS,226NGIK和356NSTS;441T为潜在的PKC位点。基酸序列比对结果表明,半滑舌鳎FSHR含有GpHR家族的特殊信号序列,如82CCAF,481ERW,594FTD和667NPFLY,含有10个LRRs(LRR1-10)。组织表达分析表明,FSHR表达广泛,除在性腺中大量表达外,其他非性腺组织也有表达,尤其以脾、肾、头肾表达最较高。采用125Ⅰ标记放射免疫分析法(RIA)测定雌鱼血清中E2含量的季节变化,发现4月时E2含量最低,10月时含量最高。卵巢中FSHR mRNA在10月表达量最高,1月最低。

FSH受体基因单核苷酸多态性与卵巢功能

卵泡刺激素在人类生殖过程中有重要作用,其对卵巢的作用主要是通过与颗粒细胞表面的特异性卵泡刺激素受体结合来发挥的。与卵泡刺激素受体基因突变较为罕见相比,卵泡刺激素受体基因单核苷酸多态性更为常见。目前认为卵泡刺激素受体基因单核苷酸多态性可能是不孕症治疗的相关基因标志,由于其与卵巢储备、卵巢反应和卵巢肿瘤发生之间存在一定的关联,将可能为促排卵治疗的个体化选择提供依据。但目前仍需更多样本和种族的前瞻性资料以及基础研究来明确卵泡刺激素受体基因单核苷酸多态性与卵巢功能之间的关系。