中国汉族人FUT2基因点突变初步研究

目的 了解中国汉族人分泌型基因 (FUT2 )点突变的情况。方法 采用直接测序法及分子克隆测序法对 4 1名中国汉族个体的FUT2基因进行检测 ,并与Kelly报道的分泌型基因的序列作比较分析。 结果 4 1名中国汉族个体中未见G4 2 8A突变 ,但发现A385T和C35 7T突变 ,其中 2 4人有A385T突变 ,17人无A385T突变 ,而所有个体都有C35 7T的同义突变。结论 在 4 1名中国汉族人群中没有发现在非洲和高加索人非分泌型中常见的G4 2 8A点突变 ,但存在着A385T、C35 7T两种不同于白种人的FUT2基因点突变。

类孟买型的FUT1和FUT2等位基因突变的分析

目的分析类孟买型个体的FUT1和FUT2位点基因突变的分子生物学基础。方法采用PCR扩增产物直接测序法,对2例类孟买型个体的FUT1和FUT2位点的等位基因进行序列检测。结果1例类孟买型个体FUT1位点547～552位的3个重复连续的AG中缺失1个AG,使得氨基酸序列发生182框码移位;另1例FUT1位点880～882位3个重复连续的T中缺失2个T,使得氨基酸序列发生294框码移位,而2例类孟买型的FUT2位点均为正常野生型。结论FUT1位点的移码突变是导致H抗原缺乏,形成类孟买型的原因之一。

猪FUT2基因沉默对其所在通路基因表达及小肠上皮细胞E.coliF18黏附能力的影响

旨在细胞水平上进一步探讨FUT2基因的功能及其在猪小肠上皮细胞受到F18大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)侵染时的调控机制,为提高仔猪对F18大肠杆菌病抵抗力的分子选育提供理论基础。运用Real-time PCR方法检测分析FUT2基因在大肠杆菌F18ab、F18ac感染和脂多糖(LPS)诱导小肠上皮细胞前后的mRNA表达差异,并采用Western blotting方法检测大肠杆菌F18ab、F18ac感染小肠上皮细胞前后FUT2的蛋白表达差异;同时设计并构建猪FUT2基因慢病毒干扰载体,筛选并获得FUT2基因稳定沉默的小肠上皮细胞系,检测FUT2基因沉默对其所在球系列鞘糖脂生物合成通路其他关键基因(FUT1、ST3GAL1、HEXA、HEXB、B3GALNT1、NAGA)表达以及小肠上皮细胞E.coli F18黏附能力的影响。结果表明,在F18大肠杆菌感染和LPS诱导小肠上皮细胞后,FUT2基因的mRNA相对表达水平均极显著升高(P<0.01),同时大肠杆菌感染后小肠上皮细胞的FUT2蛋白表达上升。此外,本研究成功构建FUT2基因慢病毒干扰载体,并获得FUT2基因稳定沉默的小肠上皮细胞系;FUT2基因沉默后,其所在的球系列鞘糖脂生物合成通路其他关键基因的表达都存在不同程度的下降,其中FUT1基因表达水平显著下调(P<0.05),ST3GAL1、HEXA和HEXB基因表达水平极显著下调(P<0.01),而B3GALNT1和NAGA基因表达水平未发生显著变化,同时FUT2基因沉默后F18大肠杆菌对小肠上皮细胞的黏附能力显著降低。结果显示,FUT2基因低表达可能不利于仔猪大肠杆菌受体的形成,以增强猪小肠上皮细胞抵抗E.coli F18感染的能力,本试验结果同时为球系列鞘糖脂生物合成通路在仔猪抗大肠杆菌感染过程中的作用机制研究提供一定的理论基础和依据。

中国新疆维吾尔族人群FUT2基因结构的研究

目的 研究中国新疆地区维吾尔族人群的FUT2基因分子结构。方法 对 4 0人份的维吾尔族人群随机供者血样进行DNA抽提 ,并进行FUT2基因测序分析。结果 共发现维吾尔族人群的FUT2有 35 7、385、4 2 8、7394处位置上存在突变 ,它们的基因频率分别为 :35 7T =71.2 5 % ,35 7C =2 8.75 % ,385A =77.5 0 % ,385T =2 2 .5 0 % ,4 2 8G =70 % ,4 2 8A =30 % ,739G =72 .5 0 % ,739A =2 7.5 0 %。结论 新疆维吾尔族人群的FUT2基因结构的特点提示新疆维吾尔族人群与台湾地区中国人和白种人间存在着一定程度的亲缘关系。

H-抗原缺乏分泌型个体FUT1及FUT2等位基因的分子基础

一例H-缺乏分泌型个体被发现。其血清学表现为：红细胞上无A、B、H抗原；唾液中有B、H抗原分泌；血清中检出了抗A抗体。推测其为类孟买OHmB型。在该个体FUT1等位基因编码区上发现两处单碱基突变（T460C、G1042A）。这两个点变异，将导致两个氨基酸的置换（Y154H、E348K）。同时也破坏了限制性内切酶RsaⅠ和AvaⅠ的作用部位。用PCR－RFLP法可检出此两种变异。用PCR－RFLP法证实，该个体为T460C、G1042A变异的纯合子。在136例随机个体中未能查出上述变异。将该FUT1基因转染COS－7细胞未能检出α2－FUT活性及证实H抗原的表达。该个体的FUT2基因与野生型一致。

FUT2/01基因座在中国北方汉族人群中的多态性

目的调查STR基因座FUT2/01在中国人群中的基因结构特征及其在中国人群中的多态性分布特点,并对其法医学应用前景进行探讨。方法应用PCR方法扩增FUT2/01基因,DNA测序确定所有等位基因的序列;常规聚丙烯酰胺凝胶电泳调查中国人群中FUT2/01基因座的多态性分布,同时应用荧光标记引物进行自动化检测分析和基因型鉴定。结果DNA测序结果仅显示核心序列的重复数目变化所导致的长度差异;在所调查的中国汉族人群162例个体中共发现9种等位基因和28种基因型,系统的个体识别率为0.9639,父权排除率为0.6266。此外,荧光标记引物经自动化检测可对该基因座进行良好的分型。结论FUT2/01基因座在中国汉族人群中表现出高度的杂合性和个体特异性,在法医学鉴定中具有较高的应用价值。

中国汉族人群FUT2基因385位点突变与Lewis表型的相关性

目的 分析中国汉族人群分泌型基因 ( FUT2 ) 3 85位点突变与 Lewis表型的相关性。方法 对 73例中国汉族人进行 Lewis血型血清学鉴定。采用 SSP法对 73例标本的 FUT2基因进行 3 85位点突变筛检 ,并用测序法验证。结果 3 85 T突变发生率为 5 4.79%。个体 FUT2基因 3 85 T为纯合子且 Lewis为阳性时 ,其 Lewis表型为 Le( a+b+)和 Le( a+b-) ,Le( a+b-)表型占总数的 1 7.8% ,Le( a+b+)占 8.2 %。结论 FUT2基因 A3 85 T的纯合子突变是 Le( a+b+)和Le( a+b-)表型的遗传基础。

中国人唾液血型物质与FUT2、FUT3基因多态性初步研究

目的分析36例中国各地区健康随机人群的FUT2、FUT3及唾液ABH血型物质效价,计算FUT2、FUT3基因型检出数量及频率,唾液血型物质效价,比较不同FUT2、FUT3基因之间唾液血型物质的效价。得到FUT2、FUT3基因对于唾液血型物质效价高低的影响,并尝试探索2个基因之间的连锁关系。方法采用中和抑制试验检测唾液中的ABH血型物质。采用基因测序方法检测FUT2、FUT3基因。计算不同FUT2、FUT3基因型唾液血型物质的均值和SD值,使用t检验比较不同FUT2、FUT3基因之间唾液血型物质的效价。结果 36例标本中,FUT2基因测序检出Se Se、Se Sew、SewSew,未发现se基因单倍型。FUT3基因测序检出LeLe、Lele、lele。唾液血型物质效价n分布在-2. 2—15. 5之间（2n）。结论 Se基因对于唾液血型物质效价影响较大,Se基因能够影响个体体液中血型物质的分泌,无论纯合或杂合,影响力无显著差异。而Le基因的影响力远小于Se基因。

FUT2基因单核苷酸位点多态性与母乳中性寡糖水平关联性研究

目的检测产后2周母乳中性寡糖水平,并分析母亲FUT2基因SNP位点rs1047781多态性与母乳中性寡糖水平的关系。方法选取健康足月儿及计划产后3个月内至少75%以母乳喂养婴儿的母亲为研究对象。产后2周收集母乳及母亲唾液。采用已验证的高效液相色谱分析法检测母乳9种中性寡糖水平,计算其中3种α1,2连接岩藻糖基寡糖的总水平。采用基因测序法进行SNP位点rs1047781多态性的检测。结果 2008年3～12月在上海国际和平妇婴保健院产科住院的健康母亲110名进入研究。78/110名进行了母乳中性寡糖水平检测。根据母乳中性寡糖水平分类,母亲的Lewis表型中Le(a-,b-)占21.8%(17名),Le(a-,b+)占51.3%(40名),Le(a+,b-)占26.9%(21名)。105名母亲的唾液样本成功提取DNA,进行了SNP位点rs1047781多态性检测。SNP位点rs1047781基因型AA、AT和TT频率分别为26.7%(28名)、48.6%(51名)和24.8%(26名)。60名母亲同时进行了母乳中性寡糖水平和SNP位点rs1047781多态性检测,3种基因型母亲母乳中α1,2连接岩藻糖基寡糖水平差异有统计学意义(P<0.01)。结论母乳中性寡糖Lewis表型与Lewis血型在中国人群分布相似。母亲FUT2的SNP位点rs1047781存在基因多态性,是中国母乳浕1,2连接的岩藻糖基寡糖的关键控制位点。

云南傈僳族FUT2、FUT3基因多态性研究

目的:了解云南少数民族人群FUT2、FUT3基因多态性,同时探讨与汉族人群的差异。方法:随机选取149例云南地区傈僳族人群,利用血型血清学方法分析其Lewis表型;利用直接测序法,对其FUT2、FUT3进行基因检测,采用卡方检验比较各等位基因频率在傈僳族人群与汉族人群间的差异。结果:149例云南傈僳族人群的各表型频率分别为Le(a-b+)46.3%、Le(a+b-)34.9%、Le(a-b-)18.7%,FUT2基因发现1例白种人中常见的G428A突变,但其与A171G、C357T、A385T、G739A突变同时发生;FUT3基因发现7个突变位点,其中C762A为首次发现的突变位点。单倍体分析显示,除功能性的Le等位基因外,还发现可疑为功能性等位基因Le732(732C>T)1种,非功能性的等位基因8种;云南傈僳族人群与汉族人群比较,Se357、se357,385、se385、se357,571、se171,428,739,960、le59、le1067、le508、le59,508阳性率的差异均存在统计学意义(P<0.05)。结论:中国云南傈僳族人群FUT2、FUT3等位基因具有广泛的遗传多态性。

猪FUT2基因密码子使用偏好性分析及优化

为了揭示猪α-(1,2)岩藻糖转移酶2(FUT2)基因密码子使用特性并提高其在外源宿主内的表达量,本研究综合运用EMBOSS Explorer网站和CodonW软件包分析了猪FUT2基因的密码子使用偏好性的相关参数,并与3种模式生物(大肠杆菌、酵母菌和果蝇)基因组密码子使用模式进行比较,最后参照与之最为相近的模式生物基因组密码子使用方式,利用JCat和OPTIMIZER两个密码子优化网站对猪FUT2基因密码子进行优化。结果显示,猪FUT2基因表达水平不高,存在24种偏好密码子,且这24种偏好密码子中有23种以G/C结尾;猪FUT2基因与果蝇基因组密码子使用模式的差异小于大肠杆菌和酵母基因组,表明果蝇更适合猪FUT2基因的外源表达;根据果蝇基因组密码子使用模式优化猪FUT2基因密码子,优化后其适应指数有了明显提高,而整体GC含量没有明显变化,说明在理论上猪FUT2基因优化成功。本研究从翻译水平上揭示了猪FUT2基因的密码子使用特性,为其在遗传改良中选择最佳外源表达系统及提高其在宿主细胞内的表达水平提供一定的理论依据。

FUT2基因座4个新变异等位基因的分析

目的 探讨FUT2基因座新变异等位基因的结构、检测方法与表达状态。方法 应用PCR、RFLPs、基因重组、DNA序列检测及基因表达技术,对4种FUT2基因座新变异等位基因进行分析。结果在新几内亚人个体中,发现了3种新的FUT2等位基因,分别由错义突变C664T、G868A和G760A所致。经基因表达证实:3种基因编码的α2-FUT酶蛋白缺乏相应的糖基转移酶活性;在中国汉族个体中,发现1例同义突变A660T。C664T和A660T改变了限制性内切酶Sac Ⅰ的识别序列,可以用RFLPs方法进行检测。在应用DNA序列分析技术检测杂合子时,可能会漏检显示弱峰的变异,RFLPs技术不能确定内切酶识别序列内部的具体变异点。结论 C664T、G868A和G760A突变所形成的FUT2基因为非分泌型基因,序列多态性的检测应使用2种以上的方法相互验证。

广州地区类孟买型个体FUT1和FUT2基因的分子遗传学研究

目的类孟买型个体的主要血型血清学特征是红细胞表面缺乏或部分缺乏H抗原,但是其唾液中含有ABH血型物质。中国人群中,福建台湾地区类孟买型个体的频率大约在1∶8000～1∶8500之间。迄今为止,中国人群中类孟买个体共报道过16种FUT1等位基因和4种FUT2等位基因。本研究中,对广州地区收集的8名的类孟买血型个体,进行了FUT1和FUT2基因分析。方法通过传统的血型血清学方法对类孟买血型表型进行鉴定。PCR扩增FUT1和FUT2基因的编码区域,并对PCR产物进行直接测序。采用Inno-train的ABO血型试剂盒,利用PCR-SSP方法对类孟买个体进行ABO血型基因分型。

海南五指山猪FUT2基因SNP检测及生物信息学分析

为了研究五指山猪FUT2基因,获得基因序列并分析基因结构和相关遗传变异,试验采用PCR扩增猪FUT2基因组序列,通过DNA测序寻找基因中的SNP位点。结果显示:在猪FUT2基因组中共发现11处突变位点,分别位于该基因的启动子区、第1内含子和第2外显子中。此外,猪FUT2基因启动子区域存在1个Cp G岛。该研究成功获得五指山猪FUT2基因序列信息,为下一步五指山猪FUT2基因的功能研究奠定基础。

中国新疆维吾尔族人群与汉族人群FUT2基因结构的比较研究

目的 探讨中国新疆地区维吾尔族和汉族人群的FUT2基因分子结构。方法 对 4 0例的维吾尔族和 4 1例汉族人群随机供者血样进行DNA抽提 ,并进行FUT2基因测序分析。结果 共发现维吾尔族人群的FUT2有 35 7,385 ,4 2 8,739四处位置上存在突变。它们的基因频率分别为 :35 7T =71 2 5 % ,35 7C =2 8 75 % ,385A =77 5 0 % ,385T =2 2 5 0 % ,4 2 8G =70 % ,4 2 8A =30 % ,739G =72 5 0 % ,739A =2 7 5 0 %。中国汉族人群的FUT2基因不存在 4 2 8和 739两处突变 ,但是存在 35 7和 385两处位置的突变。它们的基因频率分别为 :35 7T =90 2 4 % ,35 7C =9 76 % ,385A =5 8 5 4 % ,385T =4 1 4 6 %。结论 根据中国新疆维吾尔族人群的FUT2基因结构的特点 。

太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)类FUT2基因的克隆与组织表达

通过同源克隆的方法获得太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)类FUT2基因的c DNA序列,分析其在牡蛎中的组织表达差异。研究结果表明,太平洋牡蛎类FUT2基因c DNA全长为1941 bp,包含180 bp的5'非翻译区、1086 bp的编码361个氨基酸的开放阅读框及675 bp的3'非翻译区。分子进化聚类分析结果显示,太平洋牡蛎类FUT2基因与家鼠(Mus musculus)等哺乳动物的FUT2基因聚为1个分支。此外,类FUT2基因m RNA在太平洋牡蛎成贝的肝胰脏、闭壳肌、外套膜、唇瓣、鳃等5个组织中均有分布,其中在唇瓣中的表达量最低,在其余4个组织中的表达量差异不显著。本研究表明,牡蛎中类A型组织血型抗原HBGA很可能存在与人A型HBGA相似的合成途径,可为进一步探索牡蛎特异性富集诺如病毒No V的分子机制奠定研究基础。

不同日龄苏太仔猪FUT2基因的组织表达谱和表达差异分析

目前有研究表明FUT2基因是仔猪大肠杆菌F18受体形成的关键候选基因,探讨FUT2基因在仔猪出生至断奶期间的m RNA表达变化,可为进一步研究该基因对F18大肠杆菌致病的相关性提供一定的理论依据。本试验挑选4个日龄(8、18、30日龄和35日龄)苏太仔猪各4头,通过利用Real-time PCR方法分别比较分析了FUT2基因在各个体11个组织(心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、胸腺、淋巴结、十二指肠、空肠)中的表达规律。结果表明:FUT2基因在不同日龄苏太猪11个组织中均有表达,其中在肺、肾、胃、胸腺、淋巴和十二指肠中呈现较高表达,在肝、脾、空肠中呈现中度表达,在心和肌肉中呈现低表达。FUT2基因在8日龄个体空肠组织上的表达水平显著的高于其他3个日龄(P<0.05),而不同日龄仔猪十二指肠中的FUT2基因表达水平间没有显著差异(P>0.05)。由此推测,8日龄左右FUT2基因的高表达可能有利于仔猪空肠组织中F18大肠杆菌受体的快速形成,需进一步对仔猪8日龄至18日龄间FUT2基因的表达变化做进一步细致的检测。

FUT2基因多态性与新疆地区维吾尔族、汉族胃腺癌发病的相关性研究

目的探索FUT2基因多态性与新疆地区维吾尔族、汉族胃腺癌发病风险的相关性。方法运用PCR聚合酶链反应和DNA测序法相结合的方法进行基因分型,探讨PUT2基因G739A、A385T、C375T位点的单核苷酸多态性与两民族胃腺癌发生的关系。综合评价各因素与两民族胃腺癌的关系采用多因素logistic回归分析。结果病例组中现吸烟患者为47.5%,显著高于对照组的37.8%(x^2=6.431,P=0.040);饮酒阳性或HP检测阳性者患胃腺癌的风险分别是阴性者的1.681、2.810倍(95%CI=1.192~2.371,P=0.003);95%CI=2.035~3.881,P<0.001)。携带G739A位点A等位基因的汉族、维吾尔族个体分别是相对应民族非携带者患胃腺癌风险的1.655倍和1.430倍(95%CI=1.227~2.233,P=0.001;95%CI=1.026~1.992,P=0.035);A385T位点TT基因型在汉族及维吾尔族分别为4.2%、9.1%,显著高于相同民族对照组的0.5%及2.0%(x^2=12.271,P=0.002;x^2=7.212,P=0.027);C357T位点T等位基因在汉族及维吾尔族病例组和对照组中的差异均无统计学意义(P=0.640,P=0.229)。多因素回归分析显示含G739A位点A等位基因且现在还在吸烟者或者饮酒者或HP检测阳性,患胃腺癌风险均显著升高(P=0.006,OR=2.035;P<0.001,OR=2.360;P<0.001,OR=3.815)。结论新疆地区汉族、维族胃腺癌的发生与PUT2基因G739A、A385T位点多态性有关,吸烟、饮酒、HP感染亦可增加胃腺癌的患病风险。

大肠杆菌刺激和LPS诱导条件下猪小肠上皮细胞FUT1和FUT2基因表达变化

本实验运用Real-time PCR方法检测分析α-(1,2)岩藻糖转移酶1(FUT1)和α-(1,2)岩藻糖转移酶2(FUT2)基因在大肠杆菌(E.coli)F18ab、F18ac感染以及内毒素(LPS)诱导小肠上皮细胞(IPEC-J2)前后的mRNA表达差异,在细胞水平上进一步验证FUT1、FUT2基因的功能并探讨其在抗E.coli F18侵染过程中的作用机制。结果表明:FUT1、FUT2基因在E.coli感染和LPS诱导细胞后的mRNA表达水平均极显著升高(P<0.01),且FUT2基因的上升趋势要高于FUT1基因。由此推测,FUT1和FUT2基因的表达水平与仔猪抵抗E.coli F18感染的能力密切相关,FUT2基因可能发挥着比FUT1基因更重要的调控作用。

东串猪FUT2基因CDS扩增、序列分析及组织表达谱检测

猪α-(1,2)岩藻糖转移酶2(FUT2)基因为鞘糖脂生物合成—球系列通路中的重要基因,可能在断奶仔猪抵抗大肠杆菌F18侵染过程中发挥着调控作用。为探究猪FUT2基因的序列结构及其生物学功能,试验采用PCR扩增得到地方猪品种东串猪FUT2基因的CDS全序列,进而预测和分析FUT2基因的蛋白质序列及其功能区域,同时对其在8头35日龄东串断奶仔猪11个组织中的表达水平进行检测与分析。结果显示,FUT2基因的CDS序列全长为1 023bp,共编码340个氨基酸,FUT2蛋白为脂溶性的亲水蛋白,蛋白结构不稳定,该蛋白存在1个跨膜螺旋结构,但不存在信号肽,表明FUT2蛋白为膜蛋白;FUT2蛋白存在2个N-糖基化位点(185和305位氨基酸),无O-糖基化位点,此外该蛋白还存在14个潜在的磷酸化位点,包括6个Ser、2个Thr和6个Tyr,对其功能区域进行分析发现,FUT2蛋白存在1个超级家族保守结构域:FUT1-FUT2-like(58-319位氨基酸);系统进化树结果显示,猪与牛的亲缘关系相对较近,与人、黑猩猩、大鼠和小鼠等亲缘关系相对较远;FUT2基因在东串断奶仔猪11个组织中均有表达,在消化道和免疫组织中表达水平较高。试验结果推测FUT2基因在断奶仔猪抵抗大肠杆菌F18中可能具有一定的作用,且可能是通过合成岩藻糖转移酶间接发挥其抵抗大肠杆菌F18的作用。