尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ与活化凝血因子Ⅹ的结合性质

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ (ACFⅡ )与活化凝血因子Ⅹ (FⅩa)在钙离子作用下形成了 1∶1的复合物 ,从而延长凝血时间 .这个复合反应是依赖于钙离子的 ,ACFⅡ在没有钙离子存在条件下不能与FⅩa形成复合物 .ACFⅡ是凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合蛋白家族中一个新发现的成员 ,其相对分子质量为 2 946 8 1.ACFⅡ分子中含有 2 5 1个氨基酸残基 ,其氨基酸组成与这一家族中其他成员十分相似 .ACFⅡ在抗凝血反应中存在一临界浓度 (12nmol/L) ,只有在高于其临界浓度时 。

猪凝血因子Ⅹ及凝血因子Ⅹa的制备工艺研究

目的从猪血中制备猪凝血因子Ⅹ(FⅩ)及凝血因子Ⅹa(FⅩa)。方法采用柠檬酸钡吸附、硫酸铵分级沉淀、DEAE 纤维素离子交换色谱等方法制备FⅩ,并优化FⅩ的激活条件,从而制备FⅩa。通过SDS PAGE进行FⅩ和FⅩa的检测。结果建立了FⅩ和FⅩa的制备工艺,收率分别为每1ml血浆34,12 μg;采用胰蛋白酶激活FⅩ,激活条件为:0 .0 2 %酶浓度、pH 8.0、37℃下作用70min。结论此工艺操作简单,收率高。

慢性重型肝炎凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的动态变化及临床意义

探讨慢性重型肝炎患者血清中凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ水平的动态变化及临床意义。方法:78例慢性重型肝炎患者分为死亡组和存活组,前者分为早期、中期、晚期,后者分为早期、恢复期,采用血凝法动态检测两组各期及对照组中患者凝血因子Ⅴ、Ⅵ、Ⅹ的水平,并比较它们之间的差异。结果:慢性重型肝炎患者死亡组早期凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ水平分别为34.64±2.89、20.96±2.23、42.62±3.28,中期分别为22.81±2.28、14.40±1.63、32.67±2.70,晚期分别为14.25±1.76、9.90±1.48、25.76±2.44,均显著低于正常对照组,且随肝功能受损程度加剧而呈进行性降低,其中19因子下降最明显。存活组早期3种因子水平分别为45.58±8.69、21.96±6.61、42.27±12.25,均显著低地正常对照组。恢复期中Ⅶ因子为68.85±31.74,Ⅹ因子为64.12±11.65,仍低于正常对照组(P<0.05),但Ⅴ因子与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。在存活组与死亡组的早期Ⅴ因子的活性有显著性差异(t=2.44,P<0.05),而Ⅶ因子、Ⅹ因子差异无显著性(t值分别为0.38、0.09,P>0.05)。结论:动态观察凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ水平的变化,对慢性重型肝炎的早期诊断和判断预后有一定价值。Ⅶ因子是较灵敏的指标,Ⅴ因子是判断预后的最好指标,由于凝血酶原时间(PT)和凝血酶原活动度(PTA)

首批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂国家标准品协作标定

目的协作标定首批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂国家标准品。方法用世界卫生组织 98 590批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂国际标准品 ,采用一期法标定我国首批人凝血因子Ⅱ和Ⅹ浓制剂国家标准品 ,将标准品分别于4℃、2 2℃、37℃保存 5个月 ,进行稳定性考查。结果人凝血因子Ⅱ和Ⅹ国家标准品的效价分别为 1 6 .1IU 支和 1 2 .1IU 支 ,稳定性良好。

2种F10基因新突变导致凝血因子Ⅹ缺陷症的分子发病机制研究

目的:探讨1个凝血因子Ⅹ(FⅩ)缺陷症家系的分子发病机制。方法:对先证者及家系成员凝血、抗凝及纤溶功能筛查以及凝血因子活性及抗原含量检测进行表型诊断;以Western Blotting检测血浆中FⅩ抗原含量和分子量大小;以中和试验检测FⅩ的抑制物。以PCR方法对F10基因所有外显子及侧翼序列和5’端非翻译区进行扩增,产物纯化后直接测序进行基因诊断;构建F10基因突变表达质粒,瞬时转染HEK293T细胞,测定表达产物的FⅩ促凝活性(FⅩ:C)和FⅩ抗原含量(FⅩ:Ag)。结果:先证者FⅩ:C和FⅩ:Ag分别为<1%和53.36%,中和试验结果阴性,诊断为交叉反应物质阳性(CRM+)的FⅩ缺陷症。F10基因分析发现2个杂合突变:IVS5+1G>A和Asp368del。Asp368del体外表达显示FⅩ:C和FⅩ:Ag分别为(0.52±0.04)%和(85.9±5.0)%,为CRM+突变。结论:F10基因双重杂合突变IVS5+1G>A和Asp368del导致该家系遗传性FⅩ缺陷症。剪接位点突变IVS5+1G>A导致内含子无法正常剪接,影响FⅩ正常表达。Asp368del突变蛋白能够正常表达,但功能降低。

蝰蛇(缅甸亚种)毒凝血因子Ⅹ激活物FⅤe-1的分离纯化与理化活性的研究(英文)

【目的】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种凝血活性因子Ⅹ激活物FⅤe-1,并研究其理化性质、序列测定以及凝血活性。【方法】应用阳离子交换层析、分子凝胶过滤层析分离纯化蛇毒,采用MALDI质谱测定法测定分子质量,等电聚焦电泳测定等电点,Edman降解法测定蛋白N末端氨基酸序列,发色底物法和SDS-PAGE等方法测定FⅤe-1的酶学特征和凝血活性。【结果】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离得到的FⅤe-1为单体蛋白,相对分子质量为13 808,等电点4.6,0.5 mg FⅤe-1的凝血活性与1.5625 u的凝血酶或与54.93 ng RVVⅩ的凝血活性相当;可激活FⅩ,但对凝血酶和纤维蛋白原无作用;酶活性的适宜pH为6.5～7.5,适宜温度为25～60℃;为钙依赖性,凝血活性可被EDTA和DTT抑制;FⅤe-1的N端序列为NH2-N-L-Y-Q-F-G-E-M-I-N;具有呈剂量依赖性的促血浆凝固作用。【结论】从蝰蛇(缅甸亚种)毒纯化出一种FⅤe-1是一个凝血因子Ⅹ的激活物,可激活凝血因子Ⅹ,但对凝血酶和纤维蛋白原的作用微弱。

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞ⅩⅧ型胶原表达的影响

目的 探讨转化生长因子 β1(TGF β1)对ⅩⅧ型胶原在大鼠肾小球系膜细胞中表达的影响 ,以及两者在大鼠抗Thy 1肾小球肾炎中的相互关系。方法 采用RT PCR、Westernblot法观察外源性TGF β1对大鼠肾小球系膜细胞中ⅩⅧ型胶原表达的影响 ;制备大鼠抗Thy 1肾小球肾炎模型 ,应用免疫组织化学ABC方法分别观察TGF β1和ⅩⅧ型胶原在大鼠肾组织中的表达 ,并对其染色强度作图像定量分析。结果 外源性TGF β1作用后 ,大鼠肾小球系膜细胞中ⅩⅧ型胶原的表达升高 ,并显示出一定的时间与浓度依赖性。大鼠抗Thy 1肾小球肾炎中TGF β1的表达在 1、3和 5d仅有微量表达 ,第 7天开始其表达明显且随时间增强 ;ⅩⅧ型胶原和Ⅳ型胶原的表达趋势都与TGF β1吻合 ,ⅩⅧ型胶原的表达与TGF β1的表达间具有显著的相关性。结论 ⅩⅧ型胶原的表达与TGF β1的作用相关 ,可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程 。

凝血因子Ⅸ/凝血因子Ⅹ结合蛋白家族的研究进展

凝血因子Ⅸ /Ⅹ结合蛋白家族是近来发现的C型动物凝集素超家族中一个亚家族 .它们存在于蝰科蛇毒中 ,不具有酶活性 ,通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合来延长凝血时间 .在钙离子存在下结合在凝血因子Ⅸ /Ⅹ分子中γ 羧基谷氨酸区域 .它们彼此之间具有很高的序列同源性 ,都是由两条同源的肽链通过一对二硫键相连 .两条肽链都具有C型糖识别区的二硫键构型 ,各含一个钙离子结合位点 .其中habu凝血因子Ⅸ /Ⅹ结合蛋白的晶体结构已经测定 ,除掉相互交叠的中心环外 。

MODS抗凝治疗中凝血因子Ⅹ检测的意义

目的探讨多器官功能障碍综合症(MODS)患者在低分子量肝素抗凝治疗过程中凝血因子Ⅹ和凝血参数监测的意义。方法采用ACL200血凝仪连续监测(0,1h,24h,48h,96h)MODS患者血浆凝血因子Ⅹ活性、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)的变化,分别将使用低分子量肝素抗凝后1h,24h,48h,96h血浆凝血因子Ⅹ活性、PT、APTT与用药前比较。结果使用低分子量肝素抗凝治疗后1h,PT、APTT均延长,凝血因子Ⅹ活性明显下降;低分子量肝素维持量(第24h,48h,96h)时,凝血因子Ⅹ活性各测定值之间无显著性差异(P>0.05),但与用药前比较,具有非常显著性差异(P<0.01),而PT、APTT与用药前比较无显著性差异。结论在低分子量肝素抗凝治疗过程中,监测凝血因子Ⅹ和凝血参数非常必要,且监测凝血因子Ⅹ较监测PT、APTT更为有用。检测血浆凝血因子Ⅹ活性是监测MODS患者低分子量肝素抗凝治疗过程中十分有用的方法。

6个遗传性凝血因子Ⅹ缺陷症家系的表型与基因型诊断

目的:探讨6个遗传性凝血因子Ⅹ(factor Ⅹ, FⅩ)缺陷症家系的分子发病机制,并采用凝血酶生成试验(thrombin generation test, TGT)评估FⅩ缺陷症患者的出血风险。方法:收集6例先证者及相关家系成员的临床资料,凝固法检测内源性、外源性以及共同途径激活的FⅩ活性(FⅩ∶C),酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测FⅩ抗原(FⅩ∶Ag),采用蛋白印迹法检测血浆中的FⅩ相对分子质量及含量,直接测序法检测FⅩ基因(F10)突变,采用TGT检测6例先证者及部分家系成员血浆中的凝血酶生成。结果:在6例先证者中共发现了10种F10突变,其中5种(p.Cys246Ser, p.Tyr319Cys, p.Leu252Phe, p.Arg313Gln以及IVS5-2A>G)为新突变,其余5种(p.Phe71Ser, p.Val338Met, p.Gly406Ser, p.Gly365Ser, p.Cys151Arg)为已报道突变。TGT显示凝血酶生成潜力(endogenous thrombin potential, ETP)及峰值这2个参数与FⅩ缺陷症患者临床出血表现的严重程度具有一定关联。结论 :共发现5种F10基因新突变;5例遗传性FⅩ缺陷症患者由F10双杂合突变所致,1例由F10单杂合突变所致;在浓度为1 pM(1 pmol/L)组织因子(tissue factor,TF)激活下的TGT中,测得的ETP及峰值这2个参数可用于评估FⅩ缺陷症患者的出血倾向,对于了解该病患者的临床出血风险有一定的参考价值。

低分子量肝素治疗的临床实验监测

目的 进一步探讨活化的部分凝血活酶时间 (APTT)对低分子量肝素 (LMWH)治疗的实验监测价值。方法 对LMWH治疗前及治疗后的 2 6 2份血浆标本进行了APTT和抗 Ⅹa的测定 ,观察不同抗 Ⅹa活性水平的LMWH对APTT的影响。结果 当LMWH的抗 Ⅹa活性在 0 .8～ 1.2U/ml时 ,APTT中度延长 ,当LMWH的抗 Ⅹa活性大于 1.2U/ml时 ,APTT明显延长。结论 当使用治疗剂量的LMWH ,特别是剂量≥ 1mg/kg体重时 ,须常规监测APTT作为安全用药的实验检测指标。

急性心肌梗死患者血浆凝血因子的变化

目的研究凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅺ的活性在急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction,AMI)的变化,并探讨其临床意义。方法采用一期法测定AMI组(80例)和对照组(80名)因子Ⅴ促凝活性(factorⅤcoagulantactivity,FⅤC)、因子Ⅶ促凝活性(factorⅦcoagulantactivity,FⅦC)、因子Ⅷ促凝活性(factorⅧcoagulantactivity,FⅧC)、因子Ⅹ促凝活性(factorⅩcoagulantactivity,FⅩC)、因子Ⅺ促凝活性(factorⅪcoagulantactivity,FⅪC)。结果①AMI组血浆FⅤC、FⅦC、FⅧC、FⅩC、FⅪC分别为(134±25)%、(187±32)%、(212±64)%、(140±29)%和(193±64)%,均高于健康对照组(均为P<001),而AMI组凝血因子超过其临界值的发生率分别为63%、77%、90%、64%、81%;②AMI组中再发病例各凝血因子水平明显高于初发组(均为P<001);③不同年龄患者各凝血因子促凝活性有差异。结论AMI患者存在多个凝血因子活性水平增高,其中以FⅤC、FⅦC、FⅧC、FⅩC、FⅪC增高明显,存在着高凝状态,可能与AMI的发病相关,因此定期检查凝血因子活性对于及早发现高凝倾向,并加以预防和治疗均具有一定的参考价值。

国产冻干人凝血酶原复合物质量标准的研究

目的通过对国产人凝血酶原复合物 (PCC)质量的研究 ,建立与国际接规的质量标准。方法用人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ (FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ )浓制剂国家标准品 ,采用一期法测定国内用不同原料制备的PCC中FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ的效价 ;用正常人血浆作标准 ,用凝固法检测PCC的总效价及PCC中的肝素。结果用血浆作原料提纯制备的PCC ,FⅣ的效价能达到 1 0IU/ml以上 ,FⅦ效价最低 ;用组分Ⅲ作原料 ,FⅣ活性损失很大 ,只有 2 / 7批次能达到 1 0IU/ml;而FⅦ效价最高。无论用何种原料 ,FⅡ和FⅩ活性均能保持在一定水平。结论从血浆中直接提纯制备PCC ,能有效地保持FⅣ活性 。

氯化钙溶液对家兔凝血系统的影响

采用凝血酶原时间（ＰＴ－期法）测定、白陶土非特异性粘附试验及加入活化因子等指标，观察了氯化钙抗凝血剂对家兔内、外源凝血系统的影响。结果表明，用０．７２ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２作为抗凝剂，血液凝血酶原时间延长，即外源性凝血系统受抑制。白陶土不能激活内源性凝血系统而诱发凝血，即内源性凝血系统亦受到抑制。

肝素涂层管道对围体外循环期间凝血-抗凝血酶的作用

目的 观察常规剂量肝素体外循环 (CPB)中 ,使用肝素涂层CPB管道对围体外循环期间凝血 抗凝血酶的变化 ,确定肝素涂层装置对CPB的血液保护作用。方法 机械瓣膜置换术患者随机分为HCC组 (n =8)和对照组 (n =1 5 )。分别在CPB前、CPB6 0min、中和后 30min和 6 0min ,及手术后 1 2h测定血小板计数 (PLC) ,血浆α颗粒膜蛋白 1 4 0 (GMP 1 4 0 )的浓度 ,及血浆凝血因子Ⅹ (FⅩa)和抗凝血酶Ⅲ (AT Ⅲa)活性。记录手术后 1 2h胸管引流量。结果 对照组PLT在转流中、后显著低于HCC组 (P <0 .0 5 ) ;且血浆GMP 1 4 0浓度在转流 6 0min ,中和后 30min和 6 0min显著高于HCC组 (P <0 .0 5 ) ,但手术后 1 2h没有显著性差异 ;HCC组Ⅹa活性在围术期较对照组有较好的保持 (P <0 .0 5 ) ,而AT Ⅲa在两组没有明显差异。HCC组手术后 1 2h出血量较对照组少 (P <0 .0 5 )。结论 HCC在围CPB期间对血小板、凝血酶活性具有保护作用 。

线虫抗凝肽的研究进展

线虫抗凝肽(NAP)是自犬钩口线虫成虫分离得到的一系列具有抗凝作用的小分子多肽类 物质,含有约75-85个氨基酸,拥有22％的共同序列。NAP抗凝作用强,药效持久,成本低,临床 应用前景好,现已进入Ⅲ期临床试验评估阶段。就其研究进展做一综述。

凝血因子Ⅹ基因两种新的突变导致的遗传性凝血因子Ⅹ缺陷症

目的 探讨 1个遗传性凝血因子Ⅹ (FⅩ )缺陷症家系的分子发病机制。方法 测定活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、FⅩ促凝活性以及FⅩ抗原进行表型诊断 ;用PCR方法对先证者的FⅩ基因 8个外显子及其侧翼序列和 5′端非翻译区 (5′UTR)序列进行扩增 ,产物纯化后直接测序检测其基因突变。应用等位基因特异性PCR验证测序所发现的突变。结果 先证者表型诊断为FⅩ缺陷症 (Ⅱ型 ) ;FⅩ基因分析发现 2个杂合突变 :第 1内含子 5′端剪接位点供位GT→AT(IVS1+1G→A)和第 8外显子 1185G→A(Arg347His)。 结论 双重杂合性突变IVS1+1G→A和Arg347His是导致该例遗传性FⅩ缺陷症的原因。

获得性凝血因子Ⅹ缺乏症三例报告并文献复习

目的 加深对获得性凝血因子Ⅹ缺乏症的认识.方法 对3例获得性凝血因子Ⅹ缺乏症患者的临床资料进行分析,并复习相关文献.结果 例1,男,57岁,诊断为多发性骨髓瘤轻链型、继发性淀粉样变、获得性凝血因子Ⅹ缺乏症,表现为自发性皮肤黏膜出血,凝血因子Ⅹ活性（FⅩ∶C）1.8％,予以MP（马法兰＋曲安西龙）方案联合沙利度胺及对症治疗,FⅩ∶C未见升高,因原发病进展死亡.例2,男,41岁,以颅内出血入院,FⅩ∶C 26.8％,予以补充叶酸、维生素B12、维生素K,并输注红细胞、血小板及新鲜冰冻血浆治疗,颅内出血好转.例3,女,63岁,因反复发作四肢关节出血4个月入院,FⅩ∶C 6.1％,给予凝血酶原复合物、甲泼尼龙、硫唑嘌呤、利妥昔单抗治疗,FⅩ∶C未见明显升高,关节腔出血仍反复发作.结论 获得性凝血因子Ⅹ缺乏症临床表现具有异质性,诊断依赖病史和实验室检查,治疗包括控制出血和治疗原发病,预后与患者基础疾病相关.

3例自身免疫性血友病样凝血因子缺陷症ⅩⅢ患者诊断流程的初步建立及文献回顾

目的 :对3例疑似自身免疫性血友病样凝血因子ⅩⅢ缺陷症(autoimmune haemorrhaphilia factorⅩⅢ,AHⅩⅢ)患者进行检测,明确其临床诊断、治疗及随访资料,建立完整的AHⅩⅢ实验诊断流程。方法:收集3例AHⅩⅢ患者的临床信息,通过氨释放法检测其凝血因子ⅩⅢ(factorⅩⅢ, FⅩⅢ)活性,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测FⅩⅢ-A抗原(FⅩⅢ-A:Ag)、FⅩⅢ-B:Ag。抗FⅩⅢ抗体检测包括混合实验检测抗FⅩⅢ中和抗体的存在、Bethesda法测定抗FⅩⅢ抗体滴度、ELISA法检测抗FⅩⅢ-A亚基抗体等。结果:3例患者的尿素法FⅩⅢ定性试验均为阳性,FⅩⅢ活性<5%,FⅩⅢ-A:Ag<3%,FⅩⅢ-B:Ag分别为65.40%、116.28%、138.81%。3例患者混合实验均为阳性,Bethesda法测定抗FⅩⅢ中和抗体滴度分别为1.83 BU、1.67 BU、1.75 BU,免疫法检测结果提示均存在抗FⅩⅢ-A亚基抗体。结论:建立了完整的ⅩⅢ的诊断流程,并回顾了其诊断、治疗及预后相关文献。经诊断,本研究3例患者均为低滴度抗FⅩⅢ-A亚基抗体导致的AHⅩⅢ。

首个用于遗传性凝血因子X缺乏症的孤儿药coagadex

遗传性凝血因子Ⅹ缺乏症是一种罕见出血性疾病,因血液中缺乏凝血因子Ⅹ引起。coagadex来自于浓缩的人血浆凝血因子Ⅹ,用于12岁以上患者的出血控制和有轻度遗传凝血因子Ⅹ缺乏症患者的围手术期出血处理。本品的获批对于患有这种罕见而且严重的疾病的患者具有重要意义。各项研究表明本品对遗传性凝血因子Ⅹ缺乏症患者安全、有效。