不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白表达的影响

目的探讨不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,f HBP)表达的影响。方法运用PCR方法将B群脑膜炎奈瑟菌f HBP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)、脂蛋白-28(lipoprotein-28,LP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)P4外膜蛋白信号肽,并将其分别连接至p ET-30a表达载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达水平。结果替换了P4、LP和MLP信号肽的重组B群脑膜炎奈瑟菌f HBP表达量较带原始信号肽的B群脑膜炎奈瑟菌f HBP相比,分别提高了2.68、1.94和2.91倍。结论替换MLP信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌f HBP蛋白表达的影响最大,为提高B群脑膜炎奈瑟菌f HBP表达量的研究工作提供了新思路。

中国B群流脑菌株不同变异群H因子结合蛋白保护性抗原的筛选

目的筛选中国流行B群流脑菌株不同变异群的H因子结合蛋白(factor H binding protein,fHbp)的保护性抗原。方法根据中国流行病学数据选择6条中国流行B群流脑菌株不同变异群的fHbp抗原基因序列,优化合成后克隆构建原核表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,表达fHbp蛋白,经镍柱亲和纯化后,免疫BALB/c小鼠,检测其诱导产生的结合抗体和杀菌抗体反应。结果成功构建6个fHbp基因的原核表达质粒,纯化后的fHbp蛋白纯度均超过85%。6个抗原均可诱导产生平均抗体滴度超过1∶40000的结合抗体免疫反应,其中fHbp V2.18、fHbp V3.31和fHbp V3.94抗原可诱导针对fHbp V3.94菌株的杀菌抗体反应,fHbp V2.16和fHbp V2.18抗原可诱导产生针对fHbp V2.16菌株的杀菌抗体反应;确证试验显示,fHbp V2.18和fHbp V3.94抗原均可诱导产生针对fHbp V2.16和f Hbp V3.94菌株的杀菌抗体反应,肌肉免疫诱导产生的杀菌抗体反应高于腹腔免疫,其中fHbp V2.18抗原肌肉免疫诱导的针对f Hbp V2.16和fHbp V3.94菌株的平均杀菌抗体滴度分别为1∶134.4和1∶56,fHbp V3.94抗原肌肉免疫诱导的针对f Hbp V2.16和fHbp V3.94菌株的平均杀菌抗体滴度分别为1∶200和1∶1280。结论通过抗原筛选获得了可诱导杀菌抗体的中国流行B群流脑菌株的fHbp V2和V3抗原各2个,可用于后续B群流脑疫苗的研究。