东北刺人参falcarindiol制备及其抗结肠癌作用机制研究

为建立一种快速高效的falcarindiol(FAD)制备程序并探讨其抑制结肠癌细胞HCT-116增殖作用与调控细胞周期阻滞相关基因之间的关系。研究使用硅胶柱色谱富集及制备HPLC分离纯化得到了FAD单体,依据波谱数据鉴定其结构;采用MTS法检测FAD对结肠癌细胞HCT-116的细胞毒活性,运用流式细胞术、RT-qPCR以及Westernblotting法分别检测FAD对结肠癌细胞HCT-116周期影响、周期阻滞基因β-catenin、cyclinD1和c-myc的mRNA水平及蛋白表达的作用。结果显示建立制备HPLC方法可以较快速稳定地得到较高纯度的FAD。FAD对结肠癌细胞HCT-116具有明显的细胞毒活性,与HCT-116细胞作用24、48、72h的IC50值分别为8.1±1.4、4.6±0.5、3.2±0.4μmoL/L。此外,FAD将HCT-116细胞周期阻滞在G2/M期,且能够显著下调Wnt/β-catenin通路中的β-catenin、cyclinD1和c-myc基因的转录及表达。据此推断FAD可能是通过调节Wnt/β-catenin信号通路阻滞HCT-116细胞生长周期进而抑制其细胞的增殖来产生抗结直肠癌的作用。

天然产物法卡林二醇与人类GABA_(A)受体相互作用的机制

通过分子动力学模拟、伞形采样模拟、结合自由能计算和分子对接等方法,研究了法卡林二醇在γ-氨基丁酸A型(GABA_(A))受体上结合作用的模式和对GABAA受体动态属性的影响,确定了3个有效结合位点均对此受体产生拮抗作用,为后续研究聚乙炔醇类化合物对GABA_(A)受体作用及相应药物开发提供了理论依据.

北沙参药材的薄层色谱指纹图谱研究

目的:建立北沙参的薄层色谱指纹图谱,用于对北沙参药材进行真伪鉴别及质量控制。方法:以法卡林二醇、东莨菪素、伞形花内酯、异欧前胡素为对照品,采用薄层色谱法对10批不同采集地的北沙参商品药材及3批山东莱阳北沙参药材进行定性鉴别。采用双波长扫描法,以260 nm为参比波长,300 nm为检测波长,荧光模式进行扫描,得出北沙参的薄层扫描轮廓图。结果:由轮廓扫描图发现13批北沙参药材有8个主要峰,其中4个为法卡林二醇、东莨菪素、伞形花内酯、异欧前胡素,并且山东莱阳产北沙参中4个化合物的含量均高于其他10批商品药材。结论:该方法稳定、简便可行,可用于北沙参的真伪鉴别及质量控制。

法卡林二醇单药及与其他药物联用对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨法卡林二醇(FAD)单药及与其他药物联用对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法选择乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468及正常乳腺细胞MCF-10A,每种细胞分为5组,分别加入0、3、6、12、24μmol/L FAD作用24 h,采用MTT法检测细胞增殖率。结果显示,两种乳腺癌细胞在0、3、6、12μmol/L FAD作用下细胞增殖率逐渐降低(P均<0.05);24μmol/L FAD作用下细胞增殖率低于0、3、6μmol/L FAD(P均<0.05),但与12μmol/L FAD作用下比较P>0.05。考虑到干预效果及节省试剂的原则,我们选择3μmol/L FAD进行后续研究。取对数生长期三种细胞,每种细胞随机分为FAD组和对照组,FAD组加入含3μmol/L FAD的培养基培养,对照组常规培养,培养24 h,收集细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。选择乳腺癌细胞MDA-MB-231,随机分为空白组、5-氟尿嘧啶组(5-Fu组)、FAD组、5-Fu+FAD组。空白组常规培养,5-Fu组加入含25μmol/L 5-Fu的培养基培养,FAD组加入含1μmol/L FAD的培养基培养,5-Fu+FAD组加入含25μmol/L 5-Fu及1μmol/L FAD的培养基培养,培养24 h,收集细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。将25μmol/L 5-Fu换为10 nmol/L硼替佐米(BRZ),重复上述试验。结果两种乳腺癌细胞的FAD组细胞凋亡率均高于其对照组(P均<0.01),MCF-10A细胞的FAD组细胞凋亡率与其对照组比较P>0.05。5-Fu组、FAD组、5-Fu+FAD或BRZ+FAD组细胞凋亡率均高于空白组(P均<0.01),5-Fu+FAD组或BRZ+FAD组细胞调亡率均高于5-Fu组和FAD组(P均<0.01),而5-Fu组与FAD组比较P>0.05。结论 FAD可促进乳腺癌细胞凋亡并抑制其增殖,但不影响正常乳腺细胞;FAD联合5-Fu或BRZ对促进乳腺癌细胞凋亡的效果优于FAD单药。

甲基丙烯酸酯整体柱毛细管电色谱法快速分析白芷中的主要活性成分

以甲基丙烯酸酯整体柱为分离柱,建立了一种快速分离、分析白芷药材提取物中的主要活性成分欧前胡素(imperatorin)、异欧前胡素(isoimperatorin)、珊瑚菜内酯(phelloptorin)和发卡二醇(falcarindiol)的毛细管电色谱(CEC)方法。在整体柱制备实验中对三元致孔剂组成成分的比例进行了系统的考察。在分离实验中对流动相的组成(包括有机相组成、缓冲液浓度和缓冲液的pH值)进行了优化。最终的优化条件为:流动相为乙腈-20mmol/L NaH2PO4(pH4.95)(50∶50,v/v),分离电压为-25kV。结果表明,所制备的甲基丙烯酸酯毛细管整体柱具有良好的渗透性和重现性;4种分析物的标准曲线线性关系良好(r2>0.997),检出限均小于0.34mg/L,加样回收率为95.18%～98.44%。该方法快速、简便、可靠。应用该方法对18个不同产地的白芷样品进行了测定,并对其药材质量进行了评价。

基于斑马鱼模型及网络药理学的晕痛定胶囊镇痛活性及作用机制探讨

目的基于斑马鱼模型探究晕痛定胶囊的镇痛活性,采用网络药理学方法预测晕痛定胶囊的镇痛作用机制。方法采用佛波酯构建斑马鱼疼痛模型,以阿司匹林为阳性对照,利用行为轨迹分析系统监测斑马鱼的运动轨迹,以运动次数、运动时间、运动距离、运动速度等运动状态为指标评价晕痛定胶囊及其组方药材的镇痛活性;同时运用网络药理学及分子对接技术预测晕痛定胶囊镇痛核心成分及潜在靶点;选取网络药理学预测的核心成分法卡林二醇和金色酰胺醇酯为实验药物,利用斑马鱼疼痛模型验证镇痛活性。结果斑马鱼疼痛模型镇痛活性评价实验中,晕痛定胶囊及其组方药材川芎、蜜环菌均能显著降低模型斑马鱼的快速运动和慢速运动(P<0.01),且晕痛定胶囊作用强于川芎和蜜环菌。网络药理学筛选得到晕痛定胶囊镇痛活性成分87个及其作用靶点159个,利用蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析得到法卡林二醇和金色酰胺醇酯等核心成分和MAPK1等核心靶点,分子对接结果显示核心成分及核心靶点间具有较好的结合活性。法卡林二醇和金色酰胺醇酯镇痛活性实验结果表明单独给药法卡林二醇和金色酰胺醇酯可以达到良好的镇痛效果,与网络药理学预测的核心成分结果相符。结论晕痛定胶囊能够缓解暴露于佛波酯中斑马鱼的疼痛状态,具有较明显的镇痛作用;预测其作用机制可能与减少神经损伤及其炎症反应和促进细胞凋亡等过程有关;且法卡林二醇和金色酰胺醇酯为其发挥镇痛作用的核心成分。

UPLC指纹图谱结合化学计量学方法比较当归和欧当归药材的成分差异

目的 建立当归Angelica sinensis和欧当归Levisticum officinal药材的指纹图谱,结合化学计量学方法寻找二者的成分差异,从而为建立欧当归掺伪当归的鉴别方法提供依据。方法 采用UPLC法建立指纹图谱,色谱柱为Waters Cortecs T3柱(100 mm×2.1 mm,1.6μm);流动相为0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;体积流量为0.4 mL/min;柱温35℃;检测波长为210 nm。采用相似度评价、主成分分析(principal component analysis,PCA)和层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)对2种药材的指纹图谱进行评价,寻找2者的成分差异。采用UPLC-MS/MS及NMR波谱等技术对主要差异性成分进行鉴定。结果 从当归和欧当归指纹图谱中分别识别出23个和19个共有峰,与当归指纹图谱共有模式相比,当归样品组内有3批样品相似度较低,为0.59~0.80,其余样品相似度均大于0.99,而欧当归与之相比,相似度在0.53~0.94,且组内差异较大。PCA和HCA结果显示,当归和欧当归可明显分为2组,对区分贡献较大的色谱峰有6个,鉴定为色氨酸、阿魏酸、E-藁本内酯、欧当归内酯A异构体、绿原酸和法卡林二醇,其中后2种成分在欧当归中含量较高,其余成分在当归中含量较高。结论 建立的UPLC指纹图谱结合化学计量学评价方法,简便可行,可有效区分当归和欧当归并揭示其差异性成分,为当归的质量控制及掺伪欧当归鉴别方法建立提供依据。同时首次从欧当归中分离得到法卡林二醇,该化合物为欧当归区别于当归的主要成分。

经典名方一贯煎的历史沿革、现代研究进展和质量标志物(Q-Marker)预测分析

经典名方一贯煎出自清代魏之琇所著《续名医类案》,为滋阴疏肝之良方。从历史沿革、化学成分和药理作用等方面对一贯煎的研究进展进行综述。根据中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)的“五原则”对一贯煎Q-Marker进行预测分析,结果显示花椒毒素、佛手柑内酯、补骨脂素、法卡林二醇、甲基麦冬高异黄酮A、甲基麦冬高异黄酮B、甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B、鲁斯可皂苷元、洋川芎内酯I、藁本内酯、阿魏酸、梓醇、地黄苷D、毛蕊花糖苷、甜菜碱和川楝素可作为一贯煎的Q-Marker,为其后续基准样品的制备和新药研发提供参考。

法卡林二醇通过线粒体途径和内质网应激途径诱导肺癌细胞凋亡的机制研究

目的研究法卡林二醇(FAD)通过线粒体途径和内质网应激途径诱导肺癌细胞凋亡的机制研究。方法将A549细胞分为对照组(不添加任何药物)和低、中、高剂量实验组(2.5,5.0,10.0μmol·L^(-1)法卡林二醇)。用噻唑蓝(MTT)法检测法卡林二醇对A549细胞增殖的影响;用Hoechst33342染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;用罗丹明123染色法检测细胞的线粒体膜电位变化;用蛋白质印迹(Western blot)法检测内质网应激及凋亡相关蛋白表达的影响。结果对照组和低、中、高剂量实验组细胞的生长抑制率分别为0,(14.42±1.30)%,(23.38±4.36)%和(53.52±5.43)%;细胞凋亡率分别为(4.73±1.08)%,(9.09±0.91)%,(15.76±1.54)%和(22.18±1.89)%;各组细胞的线粒体膜电位分别为404.88±12.52,317.75±25.76,269.39±19.36和217.53±29.11。低、中、高剂量实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,随着法卡林二醇剂量升高A549细胞内质网应激相关蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化的肌醇需求激酶-1α(p-IRE1α)及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶3(Cl-caspase-3)、细胞色素-C的表达水平逐渐升高;B细胞淋巴瘤-2表达水平逐渐降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论法卡林二醇通过线粒体途径和内质网应激途径,抑制A549细胞增殖,诱导肺癌细胞凋亡。

基于一测多评(QAMS)法联合化学计量学的参贝止咳颗粒综合质量评价

目的建立参贝止咳颗粒中重楼皂苷Ⅶ、Ⅵ、Ⅰ及白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡素E、法卡林二醇、人参炔醇、柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素、橘红素的高效液相色谱(HPLC)一测多评(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)方法,并结合聚类分析和主成分分析对参贝止咳颗粒进行综合质量评价。方法采用Venusil XBP C;色谱柱;乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长分别为203 mm(检测重楼皂苷Ⅶ、Ⅵ、Ⅰ)、321 nm (检测白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E)、254 nm (检测法卡林二醇和人参炔醇)和283 nm (检测柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素和橘红素);以白花前胡甲素为内参物,建立重楼皂苷Ⅶ、Ⅵ、Ⅰ及白花前胡乙素、白花前胡素E、法卡林二醇、人参炔醇、柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素和橘红素的相对校正因子(relative correctionfactor,RCF),利用RCF计算各成分含量并与外标法实测值进行比较,验证所建立的HPLCQAMS法的准确性和可行性;并采用SPSS 26.0统计软件对12批参贝止咳颗粒中12种成分定量测定结果进行聚类分析和主成分分析。结果参贝止咳颗粒中12种成分线性范围良好(0.999 1≤r≤0.999 7);重楼皂苷Ⅶ、Ⅵ、Ⅰ及白花前胡乙素、白花前胡素E、法卡林二醇、人参炔醇、柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素和橘红素的RCF耐用性良好;QAMS法与外标法含量测定结果无显著性差异;聚类分析和主成分分析结果一致,12批参贝止咳颗粒聚为2类,主成分1~4是影响参贝止咳颗粒质量评价的主要因子。结论以白花前胡甲素为内参物,建立的HPLCQAMS法可用于参贝止咳颗粒中多指标成分定量控制和综合质量评价。