用Far-Western印迹技术筛选人肝组织中与乙肝病毒表面抗原PreS1相互作用的蛋白

目的:利用Far-Western印迹技术从正常人肝组织中筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原PreS1结合蛋白,为阐明HBV的感染致病机理提供依据。方法:提取正常人肝组织细胞膜蛋白,双向电泳展示后转膜,对表达纯化获得的PreS1的重要片段与GST的融合蛋白PreS/1-48myr-GST进行Far-Western印迹实验,对筛选获得的蛋白点切胶,质谱鉴定。结果:对PreS/1-48myr-GST融合蛋白进行Far-Western-2D筛选,共获得22个蛋白点,经质谱鉴定获得15个候选相互作用蛋白,其中膜蛋白Ezrin可能在HBV感染致病过程中具有重要作用。结论:Ezrin蛋白能够与乙肝病毒表面抗原PreS1结合,其在HBV感染致病过程中的重要作用值得探索。

CpOGA^(D298N)与核心链霉亲和素Stv13融合表达用于检测蛋白质O⁃GlcNAc修饰

氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用,也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径,但是常用于O-GlcNAc蛋白检测的抗体特异性或者检测分子量范围仍存在问题且耗时(~36 h)过长,对后续研究造成困扰。在本研究中,我们设计构建了产气荚膜梭菌OGA(O-GlcNAcase)突变体(CpOGA^(D298N))与核心链霉亲和素Stv13融合表达质粒pET28a-CpOGA^(D298N)-Stv13。将质粒pET28a-CpOGA^(D298N)-Stv13转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,获得了融合蛋白质CpOGA^(D298N)-Stv13。通过CpOGA^(D298N)特异性结合O-GlcNAc的能力及生物素-亲和素特异性亲和作用,设计了Far-Western blot(Far-WB)用于检测蛋白质O-GlcNAc修饰,利用sOGT(short form O-GlcNAc transferase)、去O-GlcNAc修饰sOGT、细胞裂解液样本及人肝细胞核因子1A(hepatocyte fuclear factor 1A,HNF1A)对该方法进行验证。本研究成功构建了一种蛋白质O-GlcNAc修饰检测方法,耗时相对O-GlcNAc特异性抗体缩短至5~7 h,丰富了蛋白质O-GlcNAc修饰的检测方法,为其后续研究奠定了基础。

胃癌中BORIS的表达及其临床意义

目的检测胃癌组织中BORIS的表达,探讨其临床意义。方法采用RT-PCR及Western-blot技术检测39例胃癌及18例正常胃组织中BORIS的表达。结合胃癌的临床生物学特性分析BORIS表达与胃癌组织学类型、淋巴结转移等因素的关系。结果BORIS在正常胃组织中无表达,而在胃癌组织中均有表达,其表达量的多少与患者的性别、年龄无关,而与组织学分级及有无淋巴结转移有关。结论BORIS在胃癌中表达异常可能与胃癌的发生有关,可能作为一种新的肿瘤标记物在胃癌的诊断中起一定作用。

波形蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究波形蛋白(v im entin)在肾细胞癌组织中的表达,从细胞骨架蛋白角度阐述肾细胞癌侵袭转移的可能机制。方法:应用W estern印迹法检测52例肾细胞癌组织及26例癌旁正常肾组织中v im entin的表达差异情况,并分析其与肾细胞癌分级、分期之间的关系。结果:肾细胞癌组织中v im entin的表达阳性率显著高于癌旁正常肾组织。对v im entin蛋白条带的灰度值分析显示,v im entin的相对表达水平与肾细胞癌的分级与分期均显著相关,随着肾细胞癌分级、分期水平的增高,其相对表达量也逐渐增多。结论:v im entin可能在肾细胞癌的进展和转移过程中发挥重要作用,并可能为早期监测肾细胞癌发生及判断预后提供依据。

δ阿片受体在急性全脑缺血再灌注中的表达变化

目的:观察δ阿片受体(DOR)在急性全脑缺血及再灌注时的表达变化,以评价其与脑复苏时再灌注损伤的关系。方法:30只健康雄性SD大鼠随机分成假手术组、全脑缺血组和缺血再灌注组,分别建立急性全脑缺血及再灌注大鼠模型模拟心跳骤停引起的全脑缺血与再灌注损伤,采用Western blotting(Western印迹法)方法研究全脑缺血及再灌注大鼠脑组织中DOR的表达变化。结果:缺血组DOR的表达低于假手术组(下调),而缺血再灌注组中的DOR表达高于假手术组(上调)。结论:全脑缺血的机制可能涉及δ阿片受体的下调;DOR可能通过上调自身的缺血预处理作用以减轻全脑缺血再灌注损伤而起保护作用。

对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP41的研究

VP41蛋白质是对虾白斑综合症病毒的一种结构蛋白,该蛋白质由病毒基因组上的wsv242开放阅读框(ORF)所编码,分子量为41 ku.根据vp41基因的序列,通过PCR扩增获得了该全长基因,将其克隆在载体pET-His上,以E.coliBL21为宿主菌,成功表达并纯化了含His标记的目的蛋白VP41,并制备了特异性鼠抗血清.当纯化的病毒粒子经去污剂处理后,VP41蛋白质被发现完全存在于病毒WSSV囊膜部分,Western blot杂交实验也证实该结果,表明VP41蛋白质是该病毒的一个囊膜蛋白质.通过Far-Western方法还发现VP41具有蛋白聚合作用.

对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP110部分重组表达及其与对虾鳃细胞膜蛋白结合分析

将VP110基因的部分序列克隆到pET-28a载体中构建pET28a-vp110b重组质粒并进行原核表达,获得重组表达的蛋白rVP110-B;用rVP110-B注射凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei后,经WSSV感染,实验表明,该蛋白注射使凡纳滨对虾感染WSSV的半数死亡时间比对照组延长了20%。用表达纯化的该重组蛋白制备了兔抗rVP110-B多克隆抗体,该抗体用于凡纳滨对虾鳃细胞膜蛋白与rVP110-B的Far-western分析显示,凡纳滨对虾鳃细胞膜蛋白中除90 kDa左右的血蓝蛋白外,在41.7 kDa存在结合条带,经质谱分析表明这条鳃细胞膜蛋白是肌动蛋白。

对虾白斑综合征病毒非结构蛋白ICP11的研究

白斑综合征病毒(WSSV)是一种对虾养殖业中危险极大的传染性病原体,它是一种双链环状DNA杆状型病毒.ICP11是WSSV感染宿主后产生的一种高丰度表达蛋白,根据icp11基因的序列,通过PCR扩增获得了该全长基因,将其克隆在载体pET-His上,以E.coliBL21为宿主菌,成功表达并纯化了含His标记的目的蛋白,并制备了特异性鼠抗血清.Western blot杂交实验结果显示,该蛋白不存在于纯化的病毒粒子的结构蛋白中,只存在于病毒感染的虾中肠组织的总蛋白中.这说明ICP11是WSSV的一种非结构蛋白.通过Far-western blot杂交分析,发现重组表达的ICP11会发生自身蛋白的聚合作用.凝胶过滤色谱层析法进一步证实ICP11蛋白可以聚合为二聚体.

西部地区农村中小学现代远程教育管理的现状及其对策

"农远管理"指农远管理人员通过对农远工程设备、资源和过程的计划、组织、领导、协调及监督来优化其组合和运作,以提高系统整体功效、实现工程目标的一种活动,包括农远资源管理、农远过程管理以及农远评价。针对西部地区"农远管理"的现状,对参加甘肃省2007年农村中小学现代远程教育项目培训的第7、8期的老师进行了调查,并就存在的问题提出了对策。

Dicer蛋白与Wig-1蛋白的相互作用的研究

Dicer是RNA干扰中起核心作用的一种dsRNase,Wig-1是受p53诱导的、与dsRNA特异结合的一种锌指蛋白。本研究初步证实了Dicer蛋白与Wig-1蛋白存在相互作用。GST pull-down实验表明Dicer蛋白能与GST-Wig-1结合,而Wig-1蛋白能竞争性干扰Dicer与GST-eIF2C1的结合;Far-western分析证实Dicer蛋白可以与结合在硝酸纤维素膜上的GST-Wig-1蛋白结合;进一步发现Wig-1能有效促进重组Dicer的dsRNase酶切活性。这些结果揭示Dicer蛋白和Wig-1蛋白很可能通过相互作用共同参与了dsRNA调控相关的生理过程。

真核细胞起始因子4E在喉鳞癌中的表达

目的通过检测真核细胞起始因子4E(eIF4E)在喉鳞癌中的表达,探讨其与喉鳞癌的关系。方法采用免疫组织化学法检测52例喉鳞癌组织、20例喉黏膜不典型增生组织、30例喉良性增生组织及10例正常喉黏膜组织中eIF4E基因蛋白的表达情况;用Western-blot法检测20例新鲜喉鳞癌标本的癌中心区(TC)、过渡区(TR)及病理证实的无癌区(TF)中eIF4E的表达情况。结果eIF4E在喉鳞癌中表达的阳性率为100%,显著高于对照组。eIF4E在喉鳞癌的无癌区、过渡区及中心区的表达水平呈进行性增高。结论过度表达的eIF4E是喉鳞癌恶性改变及判断其恶性程度的一个分子标志。

中西医结合治疗重度带状疱疹22例疗效观察

目的 :观察中西医结合治疗重度带状疱疹的临床疗效。方法 :对 2 2例重度带状疱疹患者给予中药加西药治疗。西药采用抗病毒、抗感染、营养神经、纠正水及电解质平衡、止痛等综合治疗。中药按辨证论治治疗。结果 :2 2例患者中基本痊愈 4例 ,显效 6例 ,有效 12例 ,总有效率 10 0 .0 %。结论 :中西医结合治疗能缩短重度带状疱疹的病程 ,减轻带状疱疹后遗神经痛 ,有助于提高疗效。

朱自清、朱光潜的写作理论

在现代写作理论史上 ,朱自清、朱光潜的研究成果是很有价值的理论遗产。“二朱”身为著名作家、学者 ,兼具中西学术、语文的深厚修养 ,在写作理论方面的建树更具视野开阔、见解深刻的特色。当前写作理论界应认真研究 ,从中汲取营养。

中国西部市场化发展程度评估及其培育研究

在综合国内外相关研究成果的基础上,根据西部地区特殊的市场背景,选取了多个评价指标,运用主成分分析的方法,对我国东西部及全国经济的市场化程度进行了综合比较,测度结果表明西部地区的市场化程度与东部地区与全国平均水平相比较皆存在较大差距,促进西部文化发展的培育路径有制度创新、人才体制创新、全方位扩大对外开放。

RD细胞肠道病毒71型受体的筛选

目的筛选和鉴定RD细胞能与肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白结合的受体蛋白,为进一步深入研究EV71病毒受体特性和功能提供实验依据。方法提取RD细胞膜蛋白,双向凝胶电泳分离RD细胞膜蛋白后,通过Far-western印迹实验筛选能与EV71病毒VP1蛋白相互作用的RD细胞膜蛋白,同时设立阴性对照,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),对特异性结合的蛋白点进行鉴定。结果通过Far-western印迹检测,从RD细胞筛选到4个能与EV71结合的蛋白点;质谱分析仅鉴定出一个膜蛋白,即stomatin-like protein2(SLP-2)。结论至少有4个蛋白可以与EV71的VP1蛋白相互作用,其中RD细胞膜上的SLP-2蛋白能够与EV71病毒的VP1特异性结合,可能是EV71病毒候选受体或受体辅助分子之一,其在EV71病毒感染RD细胞过程中的作用有待进一步研究。

博尔纳病病毒感染与神经胶质瘤相关性研究

目的探讨博尔纳病病毒(BDV)感染与神经胶质瘤发生的可能相关性。方法用Western-blot方法,对23例神经胶质瘤患者和23例脑外伤患者血清中BDV-p24/p40特异性抗体进行检测。结果 23例神经胶质瘤患者血清中BDV-p24/p40抗体阳性4例,阳性率为17.4%;脑外伤患者血清标本中无BDV-p40抗体检出,阳性率为0%。结论神经胶质瘤患者血清中存在博尔纳病病毒的感染。

靶向结缔组织生长因子shRNA慢病毒表达载体的构建及病毒包装

目的构建靶向结缔组织生长因子（CTGF）的shRNA慢病毒载体并检测其介导的RNA干扰（RNAi）对人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）CTGF表达的影响，为进一步研究CTGF在增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）中的功能奠定基础。方法设计并合成三对针对CTGF的siRNA，通过WesternBlot筛选有效靶点，合成有效靶点的Oligo DNA，退火形成双链DNA，与线性化的pGC-LV-GFP载体连接，通过PCR筛选阳性克隆并进行DNA测序鉴定；将重组CTGFshRNA的质粒与病毒包装的辅助质粒共转染295T细胞，将包装产生的慢病毒感染ARPE-19细胞，WesternBbt检测CTGF的表达。结果通过双酶切和基因测序证实靶向CT-GF的shRNA慢病毒载体构建成功，Western Blot证实经慢病毒感染后的ARPE-19细胞中的CTGF的蛋白水平明显减低。结论成功构建了靶向CTGF的shRNA慢病毒表达载体，体外感染ARPE-19细胞可有效降低CTGF蛋白的表达，为深人研究CTGF在PVR中的功能提供了有力的工具。

西方制裁背景下俄罗斯远东地区发展战略与中俄区域合作

2014年西方制裁对俄罗斯经济产生了严重影响,促使俄罗斯加快实施远东地区发展战略,更加积极地转向与亚太地区的经济合作。俄罗斯制定了新的远东地区发展战略,加大远东地区基础设施建设,在远东地区首先建立了跨越式社会经济发展区,为吸引亚太地区国家投资创造更加优惠和更有竞争力的发展环境。俄罗斯新的远东地区发展战略为深化中俄区域合作提供了有利的机遇和平台,中俄两国将在能源资源、铁路和海港等基础设施建设、林业加工、金融和投资等各领域积极开展区域合作。