桥本甲状腺炎UGRP1与Fas介导的凋亡通路的相关性研究

目的探讨桥本甲状腺炎(HT)中子宫球蛋白相关蛋白1(UGRP1)与Fas介导的凋亡通路的相关性。方法免疫组化(IHC)法检测正常人、HT患者甲状腺细胞UGRP1的表达。在体外用质粒转染大鼠甲状腺细胞(FRTL-5细胞),分别为空载体质粒组、UGRP1质粒组、Fas质粒组,采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)方法检测各组细胞Fas、UGRP1基因表达水平的变化。结果HT患者甲状腺细胞UGRP1表达呈阳性,正常人甲状腺细胞UGRP1表达呈阴性。转染UGRP1质粒组的Fas基因表达水平较空载体质粒组无明显变化(1.0850±0.1249 vs1.0210±0.1139),转染Fas质粒组的UGRP1基因表达水平较空载体质粒组显著升高(P<0.0001,5.8070±0.3232 vs0.7527±0.0760)。结论桥本甲状腺炎UGRP1高表达可能与Fas介导的凋亡通路相关。

Changes of expression of Fas and FasL protein in rats after renal ischemia/reperfusion injury

AIM：To study the relationship between the expression of Fas/FasL protein and apoptosis in rats after renal ischemia/reperfusion.METHODS:Establish the models of renal ischemia/reperfusion injury in rat and SABC immunohistochemical methods were used to detect the changes of expression of Fas/FasL protein.Pathomorphological changes in renal ischemia/reparfusion injury were observed.RESULTS:The expression of Fas/FasL proteins was negative in the sham operated group.Fas/FasL proteins were increased in renal in ischemia/reperfusion group,and gradually upregulated with the duration of ischemia or reperfusion and peaked at 72h of reperfusion.The expression of Fas/FasL proteins was stronger in 60min ischemia group than 30min ischemia group and they were mainly expressed in renal tubule.We observed local necrosis and inflammatory cells infiltration around infracted areain ischemia/reperfusion group by HE dyeing methods.And the necrosis area was mainly occurred around proximal convoluted tubule.CONCLUSIONS:These findings suggested that Fas/FasL proteins were over expressed after ischemia/reperfusion injury in rats renal.And Fas/FasL system was involved in the process of renal ischemia/reperfusion injury.

复方丹参滴丸对培养的乳鼠心肌细胞缺氧及缺氧/复氧时Fas/FasL蛋白表达的影响

探讨复方丹参滴丸 (DanShenPill,DSP)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧及缺氧 /复氧时凋亡相关基因Fas/FasL蛋白表达的影响。方法 :按常规培养新生 4d乳鼠心肌细胞 ,于培养 2 4h后进行缺氧及缺氧 /复氧实验 ,以免疫组织化学方法检测心肌细胞Fas/FasL蛋白表达的变化。结果 :缺氧 4 5h及 10 5h后 ,心肌细胞Fas/FasL蛋白的阳性表达指数 (positiveexpressionindex ,PEI %)均显著高于对照。 10 5h组与 4 5h组无明显差异。复方丹参滴丸组PEI明显低于缺氧组 (P <0 0 5 )。缺氧 30min后再给氧 4h与 10h ,心肌细胞Fas/FasL蛋白的PEI显著高于对照 ,复氧 10h组与 4h组无明显差异 ,复方丹参滴丸组PEI低于缺氧复氧组 (P <0 0 5 )。结论 :缺氧及缺氧 /复氧时均有凋亡相关基因Fas及其配体FasL蛋白表达的增强 ,复方丹参滴丸可通过下调Fas/FasL蛋白表达以减少凋亡从而减轻缺氧损伤及缺氧 /复氧损伤。

参附注射液对心肌细胞缺氧及缺氧/复氧时Fas/FasL表达的影响

目的探讨参附注射液(SF)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧及缺氧/复氧时凋亡相关基因Fas/FasL蛋白表达的影响。方法按常规培养新生4 d乳鼠心肌细胞,于培养24 h后进行缺氧及缺氧/复氧实验,以免疫组织化学方法检测心肌细胞Fas/FasL蛋白表达的变化。结果缺氧4.5 h及10.5 h后,心肌细胞Fas/FasL蛋白的阳性表达指数(positive expression index,PEI)均显著高于对照。10.5 h组与4.5 h组无明显差异。参附注射液组PEI明显低于缺氧组(P<0.05)。缺氧30 min后再给氧4 h与10 h,心肌细胞Fas/FasL蛋白的PEI显著高于对照,复氧10 h组与4 h组无明显差异,参附注射液组PEI低于无SF组(P<0.05)。结论缺氧及缺氧/复氧时均有凋亡相关基因Fas及其配体FasL蛋白表达的增强,参附注射液可通过下调Fas/FasL蛋白表达,减少凋亡从而减轻缺氧损伤及缺氧/复氧损伤。

大鼠实验性肾缺血/再灌注引起肾小管上皮细胞凋亡及其与Bcl-2,Fas/FasL表达变化的关系

目的 :探讨大鼠实验性肾缺血再灌注引起肾脏损伤、肾小管上皮细胞凋亡情况及其与Bcl 2 ,Fas/FasL表达变化的关系 .方法 :建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型 ,在不同时间点处死动物取肾组织石蜡包埋切片 ,HE染色分析肾组织病理损伤程度 ,用TUNEL法标记检测肾小管上皮细胞凋亡的变化 ,SABC免疫组化方法检测Bcl 2 ,Fas与FasL蛋白表达的变化 .结果 :缺血再灌注后肾组织的病理损伤主要发生在肾小管 ,肾小管上皮细胞凋亡指数增加 ,且随缺血再灌注时间延长而进一步上升 ,4 8h达高峰 (P <0 0 5 ) .Bcl 2蛋白在对照组呈弱阳性表达 ,缺血 3 0min ,60min后再灌注 0h有少量表达 ,再灌注 2 4 ,4 8及 72h呈阳性表达 ,4 8h达高峰 (P <0 0 5 ) ,并以远曲小管为主 .Fas,FasL蛋白在对照组呈阴性表达 ,缺血 3 0 ,60min后再灌注 0h有少量表达 ,再灌注 2 4 ,4 8及 72h呈阳性表达 ,以 72h时达高峰 (P <0 0 5 ) ,多表达在远曲小管 .HE染色可见肾缺血再灌注后各组均有不同程度的肾小管上皮组织片状坏死灶 ,以近曲小管为主 ,坏死灶周围有炎性细胞浸润 .结论 :肾缺血再灌注可诱导肾小管上皮细胞凋亡 ,Bcl 2 。

脑缺血再灌流后Fas及FasL在脑内表达的变化和氟桂嗪的抑制作用

目的 观察全脑缺血再灌流后Fas和FasL基因在脑内表达的变化及氟桂嗪的影响。方法 用大鼠 4血管结扎全脑缺血 30min再灌流模型和免疫组织化学染色法。结果 脑缺血再灌流 6h在皮质及海马区即出现Fas表达阳性细胞 ,2 4～ 48h时达高峰 ;FasL则在 12h后出现 ,48～ 72h时达到高峰。ip氟桂嗪 10mg·kg-1和 2 0mg·kg-1则Fas和FasL的表达明显低于不给药的缺血再灌流对照组 ,并呈剂量依赖性。结论 脑缺血再灌流可诱导促凋亡基因Fas和FasL在缺血易感部位表达 。

补肾、活血复方对老年大鼠T细胞凋亡相关基因Fas、FasL转录的影响

目的 :探讨补肾复方下调老年大鼠T细胞凋亡的分子机理。方法 :采用RNA酶保护技术 ,测定各组Fas、FasL基因的mRNA水平 ,并以GAPDH为内对照基因 ,对各组Fas、FasL基因的转录进行半定量分析。结果 :老年对照组Fas/GAPDH、FasL/GAPDH的积分光密度值分别为 0 81± 0 17、0 84± 0 12 ;年轻对照组分别为 0 36± 0 16、0 2 6± 0 12。两组比较差异有显著性。活血复方组Fas/GAPDH、FasL/GAPDH的积分光密度值分别为 0 99± 0 36、0 94± 0 33,与老年对照组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5) ;两个补肾组Fas/GAPDH为 0 78± 0 11和 0 78± 0 2 0 ,与老年对照组比较差异无显著性 (P >0 0 5) ;而两个补肾组FasL/GAPDH的积分光密度值为 0 71± 0 2 1和 0 68± 0 15,低于老年对照组 (P <0 0 1)。结论 :补肾复方对T细胞FasL基因的转录具有一定的负调控作用 。

槲皮素对多柔比星致乳大鼠心肌细胞抗氧化酶活性及Fas/FasL表达变化的影响

目的探讨槲皮素对多柔比星致乳大鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法原代培养乳大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、多柔比星1.72μmol·L-1损伤组和多柔比星+槲皮素25,50及100μmol·L-1组。槲皮素与心肌细胞培养3h后,加入多柔比星继续培养24h,正常对照组仅加等量DMEM培养液。倒置显微镜下观察细胞生长状态,比色法检测培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,用RT-PCR和Western印迹法检测Fas和FasL的mRNA和蛋白的表达。结果与正常对照组相比,多柔比星损伤组心肌细胞生长状态差,GSH-Px和SOD的活性降低,Fas和FasL的mRNA和蛋白的表达均升高。槲皮素25,50及100μmo·lL-1均可拮抗多柔比星所致的上述变化:GSH-Px分别为(76±3),(73±4),(71±3)vs(69±3)kU·L-1;SOD活性分别为(31±2),(29±2),(29±2)vs(26±2)kU.L-1;Fas mRNA:0.61±0.11,1.04±0.12,1.29±0.11 vs 1.61±0.16;FasL mRNA:0.81±0.07,1.24±0.10,1.57±0.09vs1.79±0.11;Fas蛋白:1.08±0.12,1.54±0.10,1.89±0.11 vs 2.15±0.15;FasL蛋白:1.51±0.08,1.70±0.12,2.20±0.09 vs 2.41±0.26。结论槲皮素可减轻多柔比星致乳大鼠心肌细胞凋亡,Fas和FasL蛋白表达的减少是其可能机制之一。

Fas/FasL基因多态性与乳腺癌发生的相关性

目的：探讨Fas/FasL基因多态性与汉族人群乳腺癌发病风险的关联性。 方法：提取250例乳腺癌患者和250例体检健康者外周血基因组DNA，用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析技术对Fas基因1377G〉A,670A〉G和FasL基因844T〉C位点多态性进行基因分型，用非条件Logistic回归方法计算风险比（OR）及95%可信区间（95%CI）。 结果：与Fas 1377多态性位点GG基因型相比，GA、AA基因型显著降低乳腺癌的发病风险［校正OR（95%CI）分别为0.44（0.29~0.68），0.29（0.17~0.48），P均〈0.01］。与Fas 670多态性位点AA基因型相比，AG、GG基因型显著降低乳腺癌的发病风险［校正OR（95%CI）分别为0.63（0.42~0.94）和0.36（0.21~0.60），P均〈0.01］。与FasL 844多态性位点CC基因型相比，TC基因型显著降低乳腺癌的发病风险［校正OR（95%CI）为0.58（0.40~0.84），P=0.012）。 结论：Fas-FasL基因多态性与乳腺癌发病风险相关。

大肠癌组织中Fas/FasL系统、nm23表达与转移的关系

目的 :探讨Fas、FasL和nm2 3蛋白在大肠癌组织中表达与淋巴结转移和远处肝转移的关系及临床意义。方法 :应用S P免疫组化法检测 80例大肠癌组织和 2 0例正常肠黏膜组织中Fas、FasL及nm2 3的表达情况。结果 :5 5 %大肠癌有不同程度的Fas表达 ,低于正常肠黏膜组织中的表达 ,其表达与Dukes分期密切相关。分期越高 ,Fas表达率越低 ,有淋巴结转移的C期和有远处肝转移的D期Fas阳性表达率低于无转移的A期和B期 ,其中D期显著低于AB期 ,但C期与AB期、C期与D期的表达差异无显著性。大肠癌组织FasL和nm2 3的表达率分别为 6 8 75 %和 5 7 5 0 % ,高于正常组织中的表达 ,表达与有无淋巴结转移或肝转移均无相关性。Fas/FasL系统与nm2 3表达亦无相关性。结论 :Fas/FasL系统中Fas可作为反映大肠癌生物学行为和判断预后的重要指征 ,nm2 3表达增加可能在大肠癌进展早期而不是在进展播散期起重要作用 ,与其转移与预后无关。

非小细胞肺癌Fas/FasL基因蛋白的表达及其临床意义

目的 :研究Fas/FasL基因蛋白在非小细胞肺癌 (NSCLC)的表达及其临床意义。 方法 :应用链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法染色技术测定 6 5例NSCLC组织标本Fas/FasL基因蛋白的表达水平 ,并分析其与病理类型、区域淋巴结转移、病理分级及TNM分期之间的关系。 结果 :NSCLC组织中Fas基因蛋白表达率显著低于正常肺组织 (46 .15 %vs 80 .0 0 % ,P <0 .0 5 ) ,而FasL基因蛋白表达率显著高于正常肺组织 (49.2 3%vs13.33% ,P <0 .0 5 ) ;FasL的表达与肺癌区域淋巴结转移有关 ,但Fas/FasL与肿瘤病理类型、病理分级及TNM分期无关。 结论 :Fas/FasL基因蛋白可能参与了非小细胞肺癌细胞凋亡的调节 ;检测FasL基因蛋白的表达有可能为临床判断NSCLC区域淋巴结转移。

中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠Fas/FasL基因表达影响的实验研究

目的:通过研究异位宁对Fas/FasL蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法:取雌性Wistar大鼠,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、异位宁高、低剂量组及西药丹那唑对照组;造模成功后各给药组灌胃给药1个月后,观察各组子宫内膜局部组织中Fas及FasL蛋白的表达情况。结果:治疗后异位宁高、低剂量组以及西药对照组Fas、FasL表达增多,染色较深,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:异位宁具有诱导Fas、FasL基因表达,提高异位内膜凋亡能力,使异位病灶得以萎缩、消失的作用。

固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达

【目的】探讨固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达。【方法】应用免疫组织化学技术和Leica显微图像处理系统,对细胞凋亡基因Fas和FasL在固始鸡免疫器官内的动态表达进行研究。【结果】Fas在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达,但表达量均不相同,呈波浪样动态变化;Fas表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜和细胞质,不表达于细胞核;Fas表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同,呈散在或簇团状分布:法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴小结与淋巴小结之间区域、淋巴小结边缘,淋巴小结内少量淋巴细胞也有Fas表达;胸腺内主要分布于胸腺小叶髓质,极少出现在皮质内;脾脏内主要分布于红髓和边缘区、淋巴小结周围和动脉周围淋巴鞘周围的区域,动脉周围淋巴鞘极少有Fas表达,淋巴小结无Fas表达。FasL在固始鸡免疫器官内的表达与Fas相似,但表达量与Fas相比较少。【结论】细胞凋亡基因Fas和FasL参与了固始鸡免疫器官内淋巴细胞发育分化过程中的凋亡调控,并对免疫器官的稳定发挥重要作用。

绞股蓝总黄酮对缺氧/复氧心肌细胞TNF-α浓度，Fas/FasL蛋白表达的影响

目的:探讨绞股蓝总黄酮(TFG)对培养的缺氧/复氧(H/R)乳鼠心肌细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度,凋亡相关基因Fas/FasL蛋白表达的影响。方法:利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立心肌细胞H/R模型,实验分6组:①对照组;②H/R组;③15mg·L^(-1)TFG+H/R组;④45mg·L^(-1)TFG+H/R组;⑤105mg·L^(-1) TFG+H/R组;⑥105mg·L^(-1)TFG对照组。用ELISA法测定心肌细胞TNF-α,免疫组化法检测Fas/FasL蛋白表达。结果:H/R后,心肌细胞Fas/FasL蛋白阳性表达指数(PEI)显著高于对照,TFG组PEI低于(H/R)组;TFG能抑制心肌细胞产生TNF-α。结论:H/R时凋亡相关基因Fas及其配体FasL蛋白表达增强,TFG对H/R心肌具有保护作用,其机制与减少TNF-α的生成,下调Fas/FasL蛋白表达,减少凋亡有关。

PML基因诱导角质形成细胞凋亡及其Fas,Fasl和Bcl-2表达

目的探讨PML基因在银屑病发病机制中的作用。方法通过流式细胞仪及Annexin V法检测经PML基因转染的角质形成细胞凋亡;采用免疫组织化学、基因探针杂交测定经PML基因作用后的角质形成细胞Fas,Fasl和Bcl-2表达。结果 PML基因上调角质形成细胞Fas及Fasl表达(P<0.01),抑制Bcl-2基因表达,诱导角质形成细胞凋亡。结论 PML基因可能通过上调角质形成细胞Fas抗原及Fasl表达,抑制Bcl-2基因表达,进而诱导角质形成细胞凋亡而参与银屑病的发病。

问号钩端螺旋体诱导J774A．1细胞FasL／Fas表达上调及FasL／Fas相关细胞凋亡的研究

目的:了解FasL/Fas途径参与问号钩端螺旋体(简称钩体)诱导细胞凋亡及其FasL/Fas表达水平变化。方法:建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核-巨噬细胞J774A.1模型。采用DAPI染色法观察问号钩体56601株感染细胞凋亡的形态学特征,流式细胞术定量检测感染细胞的凋亡率及FasL中和抗体对细胞凋亡的阻断作用。PE标记抗小鼠FasL或Fas单克隆抗体染色法,观察问号钩体56601株感染细胞FasL/Fas表达情况。采用流式细胞术定量检测感染细胞的FasL/Fas表达水平。结果:问号钩体56601株感染J774A.1细胞4h时,部分细胞出现染色质浓缩及边缘化现象;感染24h时上述病变现象更加明显且有部分细胞核裂解。问号钩体56601株感染J774A.1细胞4h和24h的凋亡率分别为53.6%和64.31%。FasL中和抗体预处理细胞后,问号钩体56601株感染细胞4h或24h的凋亡率分别为10.27%和15.90%。J774A.1细胞被问号钩体56601株感染后4和24h,FasL表达率分别从感染前的4.19%上升至21.69%和65.70%,Fas表达率分别从感染前的12.88%上升至91.96%和88.01%。结论:诱导细胞凋亡是问号钩体56601株损伤J774A.1细胞的重要机制。问号钩体可上调靶细胞FasL/Fas表达水平,并通过FasL/Fas途径诱导J774A.1细胞凋亡。

大肠癌中Fas、FasL、bcl-2蛋白的表达及意义

目的 探讨Fas、FasL、bcl 2在大肠癌中表达及意义。方法 用免疫组化S P法检测 15例大肠腺瘤、4 0例大肠腺癌及 15例大肠正常组织Fas、FasL、bcl 2蛋白表达 ,以TUNEL法测定细胞凋亡。结果 腺瘤和腺癌凋亡指数高于正常组织 ,腺瘤组高于腺癌组 (P <0 .0 5 )。在大肠正常组织、腺瘤、腺癌中Fas阳性率下降 ,FasL阳性率上升 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。腺瘤组和腺癌组bcl 2表达高于正常组 (P <0 .0 5 )。bcl 2阳性组FasL阳性率高于bcl 2阴性组 (P <0 .0 5 )。结论 瘤细胞Fas FasL表达异常使肿瘤逃脱机体自身免疫攻击 ,促使肿瘤的发生、发展 ,对预测大肠癌的预后有重要参考价值。bcl 2高表达是癌变过程中的早期事件 ,有利肿瘤的早期诊断。

潜阳育阴颗粒含药血清对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及fas/fasL蛋白表达的影响

目的研究潜阳育阴颗粒(鬼针草、何首乌、山茱萸、玄参、泽泻、川牛膝)含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及fas/fasL蛋白表达水平的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组、缬沙坦组、潜阳育阴颗粒组,每组4只,灌胃给药,制备含药血清。人脐静脉内皮细胞分为5组,每组3个样本。除正常组外,其余组均采用10-6mol/L AngⅡ诱导处于对数生长期的人脐静脉内皮细胞建立细胞凋亡损伤模型。造模后,分别给予相应含药血清DMEM培养液干预:正常组(16%空白血清培养液)、模型组(16%空白血清培养液)、缬沙坦组(16%缬沙坦血清培养液)、潜阳育阴颗粒低剂量组(8%潜阳育阴颗粒血清培养液+8%空白血清培养液)、潜阳育阴颗粒高剂量组(16%潜阳育阴颗粒血清培养液)。采用流式细胞术检测人脐静脉内皮细胞凋亡率,Western Blot检测fas/fasL蛋白表达。结果与正常组比,模型组人脐静脉内皮细胞凋亡率及fas、fasL蛋白表达明显升高;与模型组比,缬沙坦组和潜阳育阴颗粒组均可显著降低人脐静脉内皮细胞凋亡率及fas、fasL蛋白表达。结论潜阳育阴颗粒可以拮抗AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡效应,其机制可能与调节fas和fasL蛋白表达有关。

牦牛Fas和FasL基因克隆及其在主要组织器官中的表达

为了进一步理解Fas/FasL系统,本研究拟克隆牦牛Fas和FasL基因,并对2个基因在各组织器官中的表达进行检测。采用RT-PCR方法克隆牦牛Fas和FasL基因,并利用相关软件进行生物信息学分析,结合RTPCR方法及免疫组织化学方法对2个基因在牦牛主要组织器官中的表达进行检测。克隆得到了2 605bp的牦牛Fas基因cDNA和1 572bp的FasL基因cDNA序列,与黄牛的相应序列有很高的同源性(分别为99.1%和99.4%)。除了在心中只检测到Fas mRNA外,Fas和FasL mRNA共同表达于所有检测的组织中,且2个基因均在肝、脾、肾、淋巴结、胸腺和睾丸中强表达。免疫组化检测发现FasL蛋白存在于多种体细胞的胞浆中。结果表明,除了在淋巴器官和免疫赦免位点外,Fas和FasL还强表达于其他器官如肾和肝,表明Fas/FasL系统比以前所了解的要复杂。