水飞蓟宾抑制Fas/FasL信号通路对肺结核大鼠炎症损伤及巨噬细胞凋亡的影响

目的:探究水飞蓟宾对肺结核(TB)大鼠肺部炎症损伤、巨噬细胞凋亡的影响,及对死亡受体Fas及其配体FasL的调控作用。方法:采用尾静脉注射结核分枝杆菌(Mtb)法制备TB大鼠模型,并随机分为模型组、水飞蓟宾组、Fas过表达重组蛋白(pcDNA-Fas)组、pcDNA-Fas阴性对照(pcDNA-NC)组、水飞蓟宾+pcDNA-Fas组,每组15只,另取15只大鼠为正常对照组。抗酸染色检测肺组织感染情况;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6表达;Annexin VFITC/PI双染结合流式细胞术检测肺泡巨噬细胞凋亡率;Western blot检测Fas、FasL、caspase8、caspase3、巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠肺组织炎症因子表达、肺泡巨噬细胞凋亡率升高,肺组织Mtb感染及干酪样坏死严重,Fas/FasL介导的caspase8/3凋亡途径活化(P<0.05)。与模型组相比,水飞蓟宾组大鼠肺组织炎症因子表达、肺泡巨噬细胞凋亡率降低,肺组织Mtb感染及干酪样坏死缓解,Fas/FasL介导的caspase8/3凋亡途径活性降低(P<0.05)。pc-DNA-Fas可进一步激活Fas/FasL介导的caspase8/3凋亡途径活化,加重肺组织Mtb感染及干酪样坏死,促进肺组织炎症损伤及巨噬细胞凋亡,并减弱水飞蓟宾发挥的抗Fas/FasL活化、抗炎及抗巨噬细胞凋亡作用(P<0.05)。结论:水飞蓟宾可能通过抑制Fas/FasL信号通路发挥抗Mtb感染、抗肺组织巨噬细胞凋亡及抗肺部炎症损伤作用。

穿心莲内酯通过抑制Fas/FasL信号轴降低子宫内膜癌Ishikawa/DPP细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨穿心莲内酯(Andro)调节脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)信号轴对子宫内膜癌Ishikawa细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法:采用0、5、10、20μg/mL DDP分别处理Ishikawa细胞和顺铂耐药的Ishikawa/DPP细胞,0、5、10、25、50μmol/L Andro处理Ishikawa/DDP细胞,MTT法检测细胞增殖情况并为后续实验选择合适的给药剂量。将Ishikawa/DDP细胞随机分为对照组、DDP组(DDP干预)、Andro组(DDP、Andro干预)、pcDNA3.1-NC组(转染pcDNA3.1+DDP、Andro干预)、pcDNA3.1-Fas/FasL组(转染pcDNA3.1-Fas/FasL+DDP、Andro干预),24 h后,采用qPCR法检测Fas、FasL mRNA的表达,平板克隆形成实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞克隆能力、细胞迁移与侵袭和细胞凋亡,WB法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、BAX、Bcl-2、MMP-2、PD-L1、多药耐药蛋白-1(MDR-1)及Fas、FasL蛋白表达。结果:DDP以剂量依赖的方式抑制Ishikawa和Ishikawa/DPP细胞增殖,并且与Ishikawa细胞比较,Ishikawa/DPP细胞对DDP的敏感性更低(均P<0.05);Andro以剂量依赖性的方式抑制Ishikawa/DPP细胞的增殖(均P<0.05)。Ishikawa/DPP细胞中Fas、FasL的表达水平均高于Ishikawa细胞(均P<0.05)。选取20μg/mL DDP和25μmol/L Andro为干预剂量,干预时间24h。与对照组比较,DDP组Ishikawa/DPP细胞中PD-L1、MDR-1、Fas、FasL mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而克隆形成率、迁移与侵袭细胞数、凋亡率差异均无统计学意义(均P>0.05);与DDP组比较,Andro组Ishikawa/DPP细胞中Fas、FasL mRNA表达水平、细胞克隆形成率、迁移与侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、MMP-2、PD-L1、MDR-1、Fas、FasL蛋白表达水平显著降低,BAX蛋白表达水平及凋亡率显著升高(P<0.05或P<0.01),pcDNA3.1-NC组与Andro组类似;与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-Fas/FasL组Ishikawa/DPP细胞上述指标变化均被逆转(P<0.05)。结论:Andro可能通过抑制Fas/FasL信号轴来抑制Ishikawa/DPP细胞增殖、迁移与侵袭,促进凋亡,从而降低细胞对DDP的耐药性。

益母草碱调节Fas/FasL信号通路对乳腺癌细胞恶性生物行为的影响

目的探讨益母草碱(Leonurine,Leo)对乳腺癌细胞的增殖、迁移、凋亡、细胞周期进展以及上皮间质转化的影响及作用机制。方法体外培养4T1乳腺癌细胞,将细胞分为对照组(Control组)、益母草碱低、中、高浓度组(Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组)、益母草碱高浓度+转染短发夹RNA慢病毒阴性对照组(Leo-H+sh-NC组),益母草碱高浓度+转染Fas短发夹RNA慢病毒组(Leo-H+sh-Fas组)。使用不同浓度的益母草碱(10~160 mmol/L)处理细胞,CCK-8法检测细胞的存活率,筛选最佳实验浓度;通过Transwell小室法评价细胞的迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期进展;Western blot检测N-cadherin、Vimentin、Fas、FasL表达,建立荷瘤小鼠模型评价益母草碱对乳腺癌移植瘤生长的影响。结果使用浓度为10~160 mmol/L的益母草碱处理细胞12 h,4T1细胞存活率显著降低(P<0.05),半数抑制浓度(IC50值)为(53.61±1.729)mmol/L,选择10、20、30 mmol/L为后续实验浓度;与Control组相比,Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组4T1细胞的增殖活力、迁移率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、N-cadherin、Vimentin表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Fas、FasL表达显著升高(P<0.05);与Leo-H+sh-NC组相比,Leo-H+sh-Fas组4T1细胞的增殖活力、迁移率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、N-cadherin、Vimentin表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Fas、FasL表达显著降低(P<0.05);益母草碱可以抑制乳腺癌移植瘤的生长(P<0.05)。结论益母草碱可以抑制乳腺癌细胞恶性生物行为,其作用机制可能与激活Fas/FasL信号通路有关。

解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响。方法:SPF级Wistar大鼠84只,随机分为空白组、模型组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,以硫代乙酰胺(TAA)皮下注射复制急性肝衰竭大鼠模型,造模前3d开始灌胃给药,2次/d,间隔12h,共给药5.5d;采用ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α含量,Western blot法测定肝细胞TNFR1的表达量,免疫组化法检测Fas/FasL在各组肝细胞中分布的趋势及表达强度。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α含量升高,肝细胞TNFR1、Fas、FasL的表达均显著增强,差异有统计学意义(P<0.01),解毒化瘀Ⅱ方能降低血清TNF-α的含量,抑制肝细胞TNFR1、Fas/FasL的表达,呈现量效关系,并以解毒化瘀Ⅱ方高剂量组作用效果最佳。结论:解毒化瘀Ⅱ方抗肝衰竭的作用机制可能是通过干预TNF-α/TNFR1及Fas/FasL的表达,阻止死亡信号的转导,抑制肝细胞凋亡。

氧化应激通过Fas/FasL信号通路调控奶牛子宫内膜细胞凋亡

胚胎早期死亡及流产严重影响母牛的繁殖性能,造成极大的经济损失。本研究利用不同浓度双氧水(H_(2)O_(2))处理子宫内膜细胞6 h,通过流式细胞仪、酶标仪分别进行细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)比值检测,建立子宫内膜细胞氧化应激模型。在此基础上,利用流式细胞仪检测细胞凋亡和生长周期,利用荧光定量RT-PCR和Western blot检测Fas/FasL信号通路关键基因的mRNA和蛋白表达水平,并利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)抑制子宫内膜细胞中Fas基因表达,进一步验证Fas/FasL凋亡通路是否参与氧化应激诱导的子宫内膜细胞凋亡。所有试验都重复3次以上。结果发现,利用200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理子宫内膜细胞6 h,细胞内ROS阳性水平急剧增加(P<0.05),SOD和CAT活性以及GSH与GSSG比值都显著降低(P<0.05),说明H_(2)O_(2)处理对子宫内膜细胞造成氧化应激损伤。在此处理条件下,生长周期中S期比例显著降低(P<0.05),凋亡比例显著提高(P<0.05);Fas/FasL凋亡通路中关键基因Fas、Caspase 8和Caspase 3的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);培养液中FasL浓度以及Fas、Caspase 8和Caspase 3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。进一步研究发现,抑制Fas基因表达在一定程度上降低了氧化应激诱导的细胞凋亡比例以及Fas/FasL凋亡通路中关键基因的表达水平。总之,本研究结果表明,氧化应激通过激活Fas/FasL信号通路促进奶牛子宫内膜细胞凋亡,这为解释氧化应激对子宫内膜细胞的不利影响提供了新的见解。

芍药苷抑制FasL诱导的Fas/FasL信号转导通路的实验研究

目的探讨芍药苷对Fas配体(FasL)诱导大鼠颈椎间盘纤维细胞的Fas/FasL信号转导通路的影响。方法采用1月龄SD大鼠(雌雄不拘)的颈椎间盘纤维环,采用酶消化法,建立椎间盘纤维环细胞体外培养。传至3代纤维环细胞,建立FasL诱导体外培养纤维环细胞凋亡模型。实验中,将细胞随机分为空白组、模型组和药物组,模型组应用适宜浓度的Fas配体(FasL)诱导其凋亡,药物组在FasL诱导的同时给予适宜浓度芍药苷培养液干预。Annexin V/FITC法检测细胞凋亡率,分别鉴定模型复制情况及观察芍药苷保护作用;荧光定量PCR技术检测Fas、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平。结果药物组纤维环细胞的凋亡率明显低于模型组(P<0.01),药物组的Fas、Caspase-3、Caspase-8凋亡因子基因的表达明显低于模型组(P<0.01)。结论芍药苷可通过下调纤维环细胞的Fas、Caspase-3、Caspase-8的基因表达,抑制Fas/FasL信号转导通路,从而降低纤维环细胞的凋亡率。

姜黄素通过Fas/FasL信号通路调控胶质瘤细胞增殖和凋亡

目的探讨姜黄素通过Fas/Fas L信号通路对胶质瘤细胞的增殖及凋亡产生影响。方法以人胶质细胞瘤U87细胞为研究对象,采用细胞毒性试验检测姜黄素对U87胶质瘤细胞的细胞毒性作用。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆实验(colony formation assay)观察姜黄素对胶质瘤增殖能力的影响;流式细胞术(FCM)及Caspase-3活性检测细胞凋亡;流式细胞术检测胶质瘤细胞周期;实时定量PCR、Western blot法检测细胞内Fas、Fas L m RNA和蛋白的表达水平。结果随着姜黄素浓度增加,胶质瘤细胞系的细胞毒性作用也增强(P<0.05),24 h的IC50为14.28μmol/L。流式细胞术检测姜黄素阻滞胶质瘤细胞周期于G2/M期。姜黄素作用胶质瘤后Fas和Fas L在m RNA和蛋白表达水平上升(P<0.05)。姜黄素对胶质瘤细胞的增殖及细胞集落形成有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论姜黄素可能通过上调Fas/Fas L通路抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡。

Fas/FasL信号传导途径在启动尘肺中的作用机制

目的探讨Fas/FasL信号传导途径在尘肺发生发展中的作用机制。方法以中国煤炭工人北戴河疗养院无其他肺部疾病的0+接尘工人及Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者为研究对象,将支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺泡巨噬细胞(AMs)分5组培养(分别在信号传导途径的不同环节进行抑制),即对照组(未抑制任何途径介导的细胞凋亡过程)、SOD组(在AMs凋亡过程上游保护AMs,抑制AMs细胞膜脂质过氧化过程从而抑制凋亡过程,观察SOD对凋亡细胞的保护作用)、Fas/FasL组(抑制三条传导途径中的另两条即TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL途径,观察Fas/FasL信号传导途径介导的细胞凋亡情况)、FasL抑制组(同时抑制TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL和Fas/FasL三条途径,观察Fas/FasL信号传导途径上游抑制后的细胞凋亡情况),caspase-8抑制组(同时抑制TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL途径和Fas/FasL途径的下游蛋白caspase-8的活性,观察Fas/FasL信号传导途径下游抑制后的细胞凋亡情况)。分别采用Western blot(WB)、琼脂糖凝胶电泳(AGE)和TDT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)方法检测肺泡巨噬细胞(AMs)的凋亡情况、DNA片段的改变、信号蛋白Fas、FasL、caspase-8、caspase-3的表达水平。结果SOD组、FasL抑制组、caspase-8抑制剂组的凋亡指数均低于对照组,差异均有统计学意义。对照组的AMs出现凋亡细胞特征性"梯状带",SOD组未出现,FasL抑制组、caspase-8抑制剂组的DNA条带明显弱于对照组。SOD组的Fas、FasL、caspase-8、caspase-3蛋白的表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0·05);FasL抑制组的caspase-8、caspase-3的表达低于Fas/FasL组与对照组,差异均有统计学意义(P<0·05);caspase-8抑制组的caspase-3表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0·05)。结论尘肺的发生发展可能与Fas/FasL信号传导途径介导的AMs凋亡有关。

β-榄香烯通过Fas/FasL信号通路调控胶质瘤细胞增殖和凋亡

目的探讨β-榄香烯通过Fas/Fas L信号通路对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法以人胶质母细胞瘤U87细胞系为研究对象,分为空白对照组和β-榄香烯实验组。采用细胞毒性试验分析β-榄香烯对U87胶质瘤细胞的细胞毒性作用;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测β-榄香烯对胶质瘤的增殖能力的影响;流式细胞仪(FCM)及Caspase活性试剂盒检测细胞凋亡;流式细胞术检测胶质瘤细胞周期;实时定量PCR、Western blot法检测细胞内Fas、Fas L的表达水平。结果胶质瘤细胞系的细胞毒性作用随着β-榄香烯浓度增加而增强,IC50为45.73μg/m L;流式细胞仪分析β-榄香烯作用于U87细胞,阻滞周期于G1/S期;β-榄香烯作用于U87胶质瘤后Fas和Fas L的mRNA和蛋白表达水平上升;β-榄香烯作用于胶质瘤细胞有抑制增殖作用,并呈浓度和时间依赖性。结论β-榄香烯可能通过上调Fas/Fas L通路的表达水平,抑制胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡。

IL-17调控PI3K/AKT/FAS/FASL信号通路抑制Hep-2细胞凋亡

目的研究白介素-17(IL-17)对Hep-2细胞凋亡的影响,阐明IL-17通过PI3K/AKT信号通路在抑制Fas/Fas L信号通路从而抑制Hep-2细胞凋亡的部分机制。方法以正常Hep-2细胞为对照组,50 ng/ml 200-17(IL-17刺激剂)为实验组,流式细胞仪检测200-17对Hep-2细胞凋亡率的影响。以Hep-2细胞为对照组,不同浓度200-17(1、50、100ng/ml)为实验组,Western blot法检测200-17作用6 h后各组Hep-2细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、Fas、Fas L蛋白的表达。结果 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测结果显示,对照组和实验组凋亡率逐渐增高,与对照组比较,加50 ng/ml 200-17作用6、12、24 h后,Hep-2凋亡率均降低,200-17作用6 h后与对照组比,实验组Hep-2细胞凋亡率降低最明显。Western blot结果显示不同浓度(0、1、50、100 ng/ml)的200-17刺激Hep-2细胞后,随着200-17浓度的升高,Hep-2细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白的表达逐渐增加,差异有统计学意义(P <0. 01); PI3K、AKT蛋白表达差异无统计学意义。与对照组比较,1、50、100 ng/ml组200-17刺激6 h后Hep-2细胞内Fas、Fas L蛋白表达降低,差异有统计学意义(P <0. 01)。结论 IL-17可能通过PI3K/AKT/Fas/Fas L信号通路抑制Hep-2细胞凋亡。

白桦脂酸通过阻断Fas-Fasl信号通路抑制异氟醚诱导的大鼠脑神经元损伤

目的研究白桦脂酸对异氟醚诱导的发育期大鼠脑神经元细胞的效应,探讨其通过阻断Fas-Fasl信号通路抑制神经元损伤的干预机制。方法分离4周龄SD大鼠海马组织,并培养海马神经元细胞,将海马神经元细胞随机分为对照组、异氟醚诱导组、白桦脂酸低剂量组、白桦脂酸中剂量组、白桦脂酸高剂量组。异氟醚诱导组细胞于2.4%异氟醚环境中暴露2 h,白桦脂酸各剂量组分别给相应剂量药物培养后置于2.4%异氟醚环境中暴露2 h,对照组于正常环境中培养。流式细胞仪检测海马神经元细胞的凋亡及线粒体膜电位水平;RT-PCR和Western blot检测脑神经细胞元Fas、Fasl、caspase-8、cyt c、BID、caspase-9、Bcl-2、Bax、caspase-3、PARP表达水平;氧电极法检测大鼠线粒体呼吸水平;紫外分光光度法检测细胞内ATP含量。结果流式细胞分析表明,与异氟醚诱导组比较,白桦脂酸组脑神经元细胞的凋亡均受到抑制,线粒体膜电位水平升高(均P<0.05);与对照组和异氟醚诱导组比较,白桦脂酸能够使Fas、Fasl、caspase-8、cyt c、BID、caspase-9、Bax、caspase-3、PARP表达水平下调(均P<0.05),Bcl-2表达水平上调(P<0.05);氧电极和紫外分光光度检测表明,与对照组和异氟醚诱导组比较,白桦脂酸组大鼠线粒体呼吸水平和细胞内ATP含量提高(P<0.05)。结论一定浓度的白桦脂酸可通过阻断Fas-Fasl信号通路,显著抑制异氟醚诱导发育期大鼠脑神经元的损伤。

炎调方通过Fas/FasL通路抑制ATⅡ细胞凋亡的研究

目的体外观察炎调方通过Fas/FasL通路延缓LPS诱导II型肺泡上皮细胞(ATII)凋亡的作用。方法原代分离与培养ATII细胞,运用脂多糖(LPS)干预ATII进行体外ALI细胞造模,结合药物血清技术,观察炎调方对ATII细胞凋亡的影响。Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态,流式细胞仪检测ATII细胞凋亡率,Western blot方法检测Fas、FasL、caspase-8、caspase-3表达。结果 LPS降低了ATII细胞存活率,炎调方对LPS诱导的细胞凋亡有显著的抑制作用;LPS能明显激活caspase-8和caspase-3活性,提高Fas和FasL的水平;炎调方能减弱caspase-8和caspase-3活性,降低Fas和FasL表达。结论炎调方能延缓ATII凋亡,其机制可能与抑制Fas/FasL通路活性有关。

Fas-FasL信号途径在ITP患者血小板凋亡中的作用研究

目的探讨Fas-FasL信号途径在原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者血小板异常凋亡中的变化及可能的作用机制。方法选取ITP患者32例为ITP组,另择行健康体检者32例为正常对照组。采用流式细胞术检测ITP组患者(用药治疗前)与正常对照组受检者外周血PLT表面Fas的表达,调节性T细胞(Treg细胞)比率、表面Fas配体(FasL)的表达,并进行比较,分析ITP组患者以上指标的相关性。结果ITP组患者CD4^+FasL^+细胞比率、CD41^+Fas^+血小板比率均高于正常对照组受检者(均P<0.05),PTL与Treg细胞比率均低于正常对照组受检者(均P<0.05)。ITP组患者PLT与CD4^+FasL^+细胞比率、CD41^+Fas^+血小板比率均呈负相关(均P<0.05),与Treg细胞比率呈正相关(P<0.05),Treg细胞比率与CD41^+Fas^+血小板比率呈负相关(P<0.05)。结论血小板高表达Fas可与激活的T细胞表面FasL结合,T细胞可通过Fas-FasL途径直接介导血小板凋亡。

Fas／FasL参与热诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的调控

目的：探讨睾丸局部加热致大鼠睾丸生精细胞凋亡及Fas/FasL信号通路在生精细胞凋亡调控中的作用。方法16只成年SD雄性大鼠随机均分为加热组和对照组。加热组进行大鼠睾丸43℃水浴15 min；对照组行大鼠睾丸22℃水浴15 min。24 h后进行灌流和内固定，取睾丸。制作5μm的组织切片，采用睾丸原位末端标记法（TUNEL）和免疫组化分析，检测生精细胞凋亡及 Fas 和 FasL 表达。化学发光法检测大鼠血清睾酮水平。结果加热组睾丸生精细胞凋亡率（15.8％±1.6％）较对照组（2.2％±0.5％）显著增加；加热后Fas和FasL在生精细胞和支持细胞表达水平也明显升高；对照组和加热组血清睾酮（T）水平无差异。结论睾丸局部加热诱导生精细胞凋亡，Fas和FasL系统为该凋亡过程的信号通路之一。

Fas/FasL系统与胆管癌的免疫逃逸

自1999年国外学者Que FG等发现Fas/FasL系统在胆管癌等恶性肿瘤的免疫赦免与逃逸过程中起重要作用以来,有关胆管癌Fas/FasL系统逃避免疫系统监视的机理及胆管癌治疗研究得到了蓬勃发展.本文就Fas/FasL系统介导细胞凋亡的信号转导机制、信号转导途径的调节和在诱导胆管癌免疫逃逸等方面进行了综述.

pEGFP-N1-IL-17通过调控Fas/FasL信号通路影响喉癌Hep-2细胞的凋亡

目的:研究重组质粒白介素17(pEGFP-N1-IL-17)对喉癌细胞(Hep-2细胞)凋亡的影响,阐述pEGFP-N1-IL-17通过Fas/FasL信号通路抑制Hep-2细胞凋亡的机制。方法:设置未转染的Hep-2细胞为空白对照组,pEGFP-N1-NC转染的喉癌Hep-2细胞为阴性对照组,pEGFP-N1-IL-17转染的喉癌Hep-2细胞为实验组。qRT-PCR、Western blot实验用来检测IL-17在Hep-2细胞的表达水平,成功构建了IL-17过表达载体。用Western blot检测空白对照组、阴性对照组、实验组中Fas、FasL、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase8蛋白的表达情况。用流式细胞仪检测空白对照组、阴性对照组、实验组细胞的凋亡率。结果:IL-17过表达载体转染喉癌Hep-2细胞后,qRT-PCR检测IL-17表达水平上调数倍。与阴性对照组相比,空白对照组Fas、FasL、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase8蛋白表达无明显差异。与阴性对照组相比,实验组喉癌Hep-2细胞内Fas、FasL、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase8蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。空白对照组、阴性对照组的细胞凋亡率没有明显变化。与空白对照组相比,实验组的喉癌Hep-2细胞的凋亡率有明显降低。结论:IL-17可能通过Fas/FasL信号通路来抑制喉癌Hep-2细胞凋亡。

苦参碱对小鼠S180肉瘤细胞凋亡及对FAS/FASL信号途径的影响

本研究探讨苦参碱对肉瘤小鼠肿瘤生长和凋亡的影响,及其对FAS/FASL信号途径的影响。建立S180肉瘤小鼠模型,30只小鼠分为5组,每组6只,分为对照组,10 mg/kg苦参碱、25 mg/kg苦参碱、50 mg/kg苦参碱和5 mg/kg顺铂,对照组采用生理盐水灌胃,苦参碱组采用不同浓度苦参碱灌胃,顺铂组顺铂腹腔注射3天,饲养12天后取出瘤体,测定瘤体重量。TUNEL法检测肿瘤组织凋亡,测定Caspase-8活性,免疫组化检测FAS/FASL,Western blot检测FAS/FASL和Caspase-8蛋白表达。与对照组相比,10、25、50 mg/kg苦参碱组瘤体重量显著减小,瘤体细胞凋亡率显著增加,均具有显著统计学差异(P<0.01),且具有浓度依赖性。与对照组相比,10、25、50 mg/kg苦参碱组瘤体组织Caspase-8活性显著增加,FAS/FASL及Caspase-8蛋白表达增加,均具有显著统计学差异(P<0.01),且这些作用与苦参碱浓度呈现正相关趋势。与顺铂组相比,25和50 mg/kg苦参碱组瘤体重量显著减小,瘤体细胞凋亡率显著增加,FAS/FASL及Caspase-8蛋白表达和Caspase-8活性显著增加,均具有显著统计学差异(P<0.01)。苦参碱能够促进肉瘤小鼠肿瘤组织的凋亡,并且该作用与上调FAS/FASL表达及活化Caspase-8有关。

二烯丙基二硫化物诱导MDCC-MSB-1细胞的凋亡及Fas/FasL信号通路调控作用

为探究二烯丙基二硫化物(DADS)对马立克氏病肿瘤细胞系(MDCC-MSB-1细胞)的增殖抑制作用及其信号通路的调控机制,以MDCC-MSB-1细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度DADS分别作用MDCC-MSB-1细胞24,48,72 h后对细胞增殖抑制的影响。用0、80、160、240μmol/LDADS预处理MDCC-MSB-1细胞24 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33342核酸染色法检测细胞形态变化;caspase-8活性试剂盒检测细胞中caspase-8蛋白酶活性;并用荧光定量PCR法检测Fas/FasL信号通路关键因子mRNA的转录水平。结果显示,40μmol/L〜240μmol/L的DADS抑制MDCC-MSB-1细胞的增殖呈时间剂量依赖性;随着浓度的升高,细胞形态逐渐出现细胞核核膜消失,染色体降解为多个片段并且边缘化,形成凋亡小体;240μmol/L的DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞caspase-8蛋白酶活性及Fas、FADD、caspase-8、Bid和caspase-3mRNA的转录水平极显著升高(P<0.01)。结果表明,DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞的凋亡,并活化其Fas/FasL死亡受体凋亡信号通路,可为鸡马立克氏病的治疗提供参考。

烙灸疗法介导Fas/FasL信号通路对髓核细胞外基质环境的影响

目的探讨烙灸疗法介导Fas/FasL信号通路对腰椎间盘突出症髓核细胞外基质环境的调控机制。方法将120只雄性SD大鼠随机分为烙灸组、拮抗剂组、模型对照组、空白对照组。除空白对照组30只大鼠外均采用针刺手术方法制作大鼠腰椎间盘突出后髓核重吸收模型,烙灸组和拮抗剂组的大鼠在造模后1个月进行干预,分为3批,每批10只,分别在干预1、3、6个月后进行取材;其余2组不予干预,在造模后分3批进行取材。结果模型对照组、拮抗剂组与烙灸组的髓核细胞凋亡指数明显高于空白对照组(P<0.05),而烙灸组的髓核细胞凋亡指数高于模型对照组及拮抗剂组(P<0.05);烙灸组髓核细胞外基质中的MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-13和ADAMTS-4mRNA表达水平高于模型对照组、拮抗剂组(P<0.05)。烙灸组髓核细胞外基质MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-13蛋白表达量高于模型对照组、拮抗剂组及空白对照组(P<0.05);烙灸组髓核细胞外基质中的ADAMTS-4蛋白表达较模型对照组、拮抗剂组明显增高(P<0.01)。结论烙灸疗法通过Fas/FasL信号通路的介导,可提高MMPs和ADAMTS-4表达,从而加速细胞外基质的降解,促进腰椎间盘突出后髓核重吸收。

烙灸疗法通过Fas/FasL信号通路对髓核细胞凋亡的调节机制

目的:探讨烙灸疗法通过Fas/FasL信号通路对髓核细胞凋亡的调节机制。方法:将SD大鼠120只随机分为烙灸组、拮抗剂组、模型组和空白组,每组30只。采用公认尾椎椎间盘腰椎硬膜外埋置法造模1月后进行干预。烙灸组在腰椎局部行烙灸疗法,1次/d,每次10min。拮抗剂组大鼠在腹腔内注射抗Fas抗体,10μg/kg/week,干预方法同烙灸组。模型组大鼠固定器上固定10min,每天1次,不予其他干预。空白组大鼠不予造模和干预。四组大鼠每组均干预1月、3月、6月后进行取材。采用TUNEL法对髓核细胞的凋亡进行检测。结果:烙灸组的髓核细胞凋亡指数均高于空白组、模型组及拮抗剂组(P<0.05)。结论:烙灸疗法可以促进大鼠椎间盘髓核细胞的凋亡,进一步证明烙灸可以促进新生血管的形成、加快髓核细胞的凋亡。