南五味子提取物对UVB辐射的防护作用观察

目的观察南五味子提取物(schisandra extract)对中波紫外线(ultraviolet radiation b,UVB)辐射造成的人永生化角质细胞(HaCaT细胞)、人真皮成纤维细胞(Fb细胞)损伤的保护作用并探讨其机制。方法 MTT检测各组细胞存活率;Hoechst 33342染色观察HaCaT细胞形态学凋亡;流式细胞仪测定南五味子提取物对UVB辐射后Fb细胞凋亡率的影响;激光共聚焦观察各组细胞产生的活性氧簇(ROS)及检测其荧光强度;试剂盒测定HaCaT细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和Fb细胞内外羟脯氨酸(HYP)含量。结果南五味子提取物对HaCaT,Fb细胞生长未显示出抑制作用,但可以抑制UVB辐射引起的细胞凋亡;南五味子提取物显著降低了由UVB辐射产生的ROS的量,升高细胞外GSH-PX,SOD水平并降低细胞内HYP水平。结论南五味子提取物可能通过其抗氧化活性抑制UVB辐射引起的氧化应激、细胞凋亡和细胞内胶原降低,减轻UVB辐射造成的皮肤损伤及光老化。

人皮肤成纤维细胞原代培养及增殖能力研究

目的探索和建立永生化的人皮肤成纤维细胞,为皮肤成纤维细胞在临床医学上的应用提供可靠的科学依据。方法胰蛋白酶消化法分离培养人皮肤成纤维细胞;细胞生长曲线及MTT法测定细胞增殖能力;流式细胞仪测定成纤维细胞生长周期及细胞增殖指数。结果不同代次原代及冻存复苏后的人皮肤成纤维细胞增殖能力均很强。结论人皮肤成纤维细胞在增殖能力上完全可以作为体细胞基因治疗的靶细胞,而且是未来最有希望的永生化基因治疗细胞之一。

凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞培养体系的优化

试验目的是为研究优化凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞的培养体系。试验基于MTT法,分析不同培养条件(包括培养基类型、p H值、渗透压、FBS添加量等因素)对凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞培养体系的影响。结果表明:在p H值为7.6,Na Cl添加量为1.2%,FBS添加量为5%的2×L-15培养基中,凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞生长状况最好。因此,通过改变培养条件,可以适当优化凡纳滨对虾肝胰脏原代细胞的培养体系,但未能获得良好的传代细胞。

不同子模块MMC在中压直流配电网中的应用研究

模块化多电平换流器(Modular Multilevel Converter,MMC)的子模块是其核心部件。结合MMC在中压直流配电网领域的广阔前景,分析了MMC常见的半桥型、全桥型子模块结构。简化半桥型、全桥型、混合型三种子模块结构的MMC在直流侧双极短路故障时的等效电路,从理论上分析了三种子模块结构的MMC对直流侧双极短路故障的抑制能力。针对三种子模块结构MMC,分别通过基于PSCAD/EMTDC的两端MMC系统的仿真,验证了理论分析的正确性。得出在中压直流配电网中,混合型子模块结构MMC在技术上的可行性和经济上的优越性。为未来中压直流配电网中换流器子模块拓扑的选择提供参考。

正常及炎症牙髓组织中白细胞介素1的活性检测

用细菌内毒素建立豚鼠的牙髓炎模型，借助体外培养的Ｌ９２９细胞，在培养液中加入正常和炎症的牙髓组织上清液，采用成纤维细胞增殖法测定正常和炎症牙髓组织中白细胞介素１（ＩＬ１）的活性。结果发现正常牙髓组织无ＩＬ１的活性，炎症牙髓组织产生明显的ＩＬ１活性，并随内毒素诱导时间的延长而增强。ＩＬ１为牙髓炎的主要介质之一，介导了牙髓炎的发生和发展。

单克隆人胰腺干细胞分离培养体系的建立

本研究探讨了建立单克隆人胰腺干细胞分离培养体系及单克隆人胰腺干细胞系,对一些影响干细胞增殖的因素进行了分析。无菌取人流产胎儿胰腺组织。切碎至1 mm^3,0.1%Ⅳ型胶原酶消化。低糖DMEM、10%FBS、3.7g/L NaHCO_3、0.08 g/L青霉素及0.1 g/L链霉素培养液贴壁培养细胞。2.5 g/L胰蛋白酶+0.4g/L EDTA消化传代。克隆环筛选单克隆干细胞,培养液中添加10 ng/mL EGF,扩增单克隆干细胞。采用核型分析法检测干细胞染色体,MTT法测定干细胞生长曲线。胶原酶消化胰腺组织.获得单个细胞和细胞团。贴壁培养,原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长。胰蛋白酶消化传代,上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化。克隆环筛选,获得单克隆人胰腺干细胞。扩增培养。1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺组织干细胞建系,传50代。染色体核型分析,该干细胞系为正常的二倍体细胞。细胞生长曲线显示培养1-4 d,干细胞生长缓慢,5-6 d,进入倍增期。培养液中添加15%FBS,干细胞增殖较快,再添加15 ng/mL EGF或10 ng/mL IGF-Ⅱ,干细胞增殖更快。研究结果表明应用本实验建立的细胞分离培养体系获得了单克隆人胰腺干细胞系。

血清浓度对鸡胚盲肠上皮细胞原代培养的影响

为探讨细胞培养基中血清浓度对鸡盲肠上皮细胞体外培养的影响，分别用舍0％、2．5％、5％和10％胎牛血清（FBS）的细胞培养液培养鸡胚盲肠上皮细胞，检测细胞活性；选择适宜的FBS浓度，并测定了该浓度条件下鸡盲肠上皮细胞的生长特性。结果表明：用含2．5％和5％FBS的培养基培养鸡胚盲肠上皮细胞，第4天细胞贴壁率达最高，分剐为84％和80．33％，显著地高于无血清和10％FBS组（P〈0．01／0．05），第7天仍均维持在76％以上，两者间除了第2天外，其余差异均不显著；用含2．5％FBS的细胞培养基进行鸡胚盲肠上皮细胞原代培养，第2～3天为适应阶段，第3～5天处于对数生长期，第5～9天细胞进入减速期，第10～11天再次进入对数生长期，第11天以后细胞进入衰退期，整个过程持续14d左右。鸡胚盲肠上皮细胞培养的血清浓度以2．5％FBS为宜。

纤维联接蛋白FN、凝血酶敏感蛋白(TSP)在成纤维细胞及骨髓基质细胞的免疫电镜定位

本文用免疫电镜技术(过氧化酶标记和胶体金标记)在来自兔角膜瘢痕的纤维母细胞和来自小鼠骨髓的长期培养的基质上进行了纤维粘连蛋白(FN),血小板凝血酶敏感蛋白(TSP)定位。结果显示在纤维母细胞和骨髓基质细胞表面以及细胞外细纤维构成的网中。另外,有时在上述二种细胞胞浆中也可以看到FN和TSP的定位。应用免疫电镜技术可以研究各种结缔组织增生性疾病,FN和TSP的分布以及它们和结缔组织增生的关系,为纤维化形成机制以及胶原形成细胞、基质细胞和其它细胞的关系提供了形态学依据。

中华蜜蜂幼虫原代细胞培养及中华蜜蜂囊状幼虫病毒在培养的细胞中的复制

【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最佳培养基,并通过细胞活力比较,确定用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的适宜胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）浓度。在此基础上,用该原代细胞接种中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood bee disease,CSBV）,并通过实时定量RT-PCR方法对病毒复制情况进行检测。【结果】相对于WH2培养基,在Grace培养基中生长的细胞大而圆,透明,边缘整齐,无颗粒物,活力明显高于WH2培养,且含15%FBS的Grace培养基更适合于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养。CSBV接种在该原代细胞,能够复制增殖,同时伴随宿主细胞快速分裂。【结论】中华蜜蜂幼虫原代细胞培养基在含15%FBS的Grace中能够良好生长,并且CSBV可以在该原代细胞中进行复制。

海洋贝类提取物对血管平滑肌细胞增殖的影响

采用 2 0 %胎牛血清 (FBS)、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)所诱导的大鼠 VSMCs增殖模型 ,观察了海洋贝类提取物 (ESs)对血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的影响。将培养的 5～ 8代细胞接种于 96孔板 ,除正常组加入含 0 .4 % FBS的 M199培养液外 ,其他组均加入含 2 0 % FBS培养液 (或含 5 0 ng/ ml b FGF的 0 .4 % FBS培养液 ) ,同时给药组分别加入含有 2 5、5 0、10 0 μl/ ml浓度的 ESs,孵育 4 8h后 ,以细胞计数、结晶紫染色及 MTT比色法测定 VSMCs生长情况。结果表明 ,与模型组比较 ,ESs各剂量组 VSMCs的增殖受到明显抑制 (P<0 .0 5、P<0 .0 1)。ESs对 2 0 % FBS和 b FGF所致的 VSMCs增殖具有明显抑制作用 。

王浆主蛋白(MRJPs)对张氏肝细胞的促增殖作用及其机制

将王浆主蛋白(major royal jelly proteins,MRJPs)添加到细胞培养基中,用MTT法比较纯MRJPs与胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、不同MRJPs/FBS比例对张氏肝细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测MRJPs各处理对细胞周期的影响。结果表明:仅添加MRJPs不能促进细胞增殖;完全培养基(10%FBS)中MRJPs的最佳添加量为0.5mg/mL;MRJPs(5mg/mL)/FBS的添加比例为60/40时混合培养基对细胞的促增殖效果与完全培养基相比差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示,MRJPs与FBS配合使用可促使细胞S期及G0/G1期比例增大;推测MRJPs的作用可能与促进DNA合成、前期RNA和核糖体合成有关。

兔关节软骨细胞体外三维培养条件的优化

实验使用海藻酸钠水凝胶作为细胞支架,模拟软骨细胞体内生长的三维环境,研究了体外三维培养条件下,不同浓度的胎牛血清(FBS)和硒酸复合液(ITS)体系对兔透明软骨细胞(hyaline cartilage)的生长、增殖和细胞外基质分泌活动的影响。结果表明,三维模式培养21天,透明软骨细胞仍然具有较好的增殖活性。在硒酸复合液及低浓度血清时,细胞未去分化,保持分泌Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)和软骨聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的能力,与之比较,高浓度胎牛血清(10%)培养条件下,在21天开始细胞去分化,即硒酸复合液在一定的血清浓度下有助于维持软骨细胞生长、增殖,避免了软骨细胞受高浓度血清影响而去分化。

不同浓度胎牛血清对骨髓基质细胞产生细胞因子水平影响的研究

目的通过比较使用不同浓度胎牛血清(FBS)培养的骨髓基质细胞(BMSCs)产生某些细胞因子的量,揭示FBS对BMSCs产生细胞因子是否有影响。方法采用密度梯度离心法分离骨髓单一核细胞,分别使用10%和20%FBS通过贴壁法培养BMSCs,收集传3代后又培养72h的BMSCs及培养上清,用流式细胞仪鉴定细胞表面标志并用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中白细胞介素(IL)-7、IL-8和干细胞因子(SCF)的水平。结果90%以上细胞表面抗原高表达CD29,而CD34、CD45及HLA-DR表达阴性,即BMSCs纯度在90%以上;两组BMSCs培养上清液中IL-7、IL-8和SCF的水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论胎牛血清对BM-SCs产生细胞因子没有影响。

马尾松树皮提取物体外抑制人大肠癌细胞生长规律初探

为深入研究马尾松树皮提取物(PMBE)的抑癌生长作用,构建PMBE的动物药理模型,本研究通过细胞培养、细胞活力检测(MTT实验)及计算机模拟评估马尾松树皮提取物(PMBE)抑制体外培养人大肠癌LoVo细胞生长规律,建立了马尾松树皮提取物(PMBE)、胎牛血清(FBS)及处理时间(t)三因素对LoVo细胞生长抑制率的反应模型,利用该回归模型对三因素优化组合,同时就各因素单独效应及其互作效应进行了探讨。PMBE、FBS、t三因素适量水平搭配(0、1、0)可提高对LoVo的生长抑制效率,最高可达0.42,即三因子用量分别为140μg/mL、15%、48 h时效果最佳。系列数据分析结果表明,在体外处理细胞过程中可能存在抑制物效应报酬递减规律,且试验体系中多因素综合效应呈现随机非线性特点。该研究是统计学在医学科研设计、衡量和评价(D.M.E)领域的一次尝试,可为构建PMBE的动物药理模型确定药用剂量提供参考。

基于蚕丝蛋白的低温保护剂用于梅山猪耳成纤维细胞的低温保存研究

细胞低温保存为临床治疗和科学研究提供优质的细胞。体积分数为10%二甲基亚砜(DMSO)和体积分数为20%胎牛血清(FBS)是目前冻存细胞常用的保护剂。但DMSO对细胞具有毒性损伤,FBS存在携带病毒、感染疾病的风险。本文以梅山猪耳成纤维细胞作为模型细胞进行冻存实验,将蚕丝蛋白用于低温保护剂中,用不同质量浓度的丝胶蛋白和不同体积分数的丝素蛋白来分别替代FBS和DMSO,验证其在细胞低温保存中的有效性。解冻复苏后用台盼蓝染色法、MTT法、24 h贴壁率等检测细胞的存活率和生长活力,筛选出最佳的基于天然蚕丝蛋白的低温保护剂配方。结果表明:含质量浓度为1%丝胶蛋白和含体积分数为20%FBS的低温保护剂对猪耳细胞的冻存效果无显著差异,说明丝胶蛋白能有效替代FBS。将体积分数为10%DMSO浓度降至5%,添加体积分数为10%丝素蛋白后,细胞的存活率和贴壁率与对照组相比无明显差异,说明丝素蛋白能降低DMSO的浓度。将质量浓度为1%丝胶蛋白与体积分数为10%丝素蛋白联用后,能达到较好的冻存效果。

牛体细胞核移植技术体系的优化

为了提升卵母细胞成熟质量和核移植胚胎的体外发育潜能,在卵母细胞成熟液和胚胎培养液中分别添加不同浓度IGF及胎牛血清FBS,并探讨了二者对牛卵母细胞成熟培养、核移植胚胎发育的影响以及相关性能的变化。结果表明:分别在成熟液中添加40 ng/mL IGF、培养液中添加20%FBS后,成熟率、卵裂率、囊胚率均有显著提高。本研究为今后牛体细胞核移植技术体系的优化和完善打下了坚实的理论基础。

Nonlinear RCMC method for spaceborne/airborne forward-looking bistatic SAR

In the spaceborne/airborne forward-looking bistatic syn- thetic aperture radar （SA-FBSAR）, due to the system platforms＇ remarkable velocity difference and the forward-looking mode, the range cell migration （RCM） not only depends on the target＇s two- dimensional location, but also varies with the range location non- linearly. And the nonlinearity is not just the slight deviation from the linear part, but exhibits evident nonlinear departure in the RCM trajectory. If the RCM is not properly corrected, nonlinear image distortions would occur. Based on the RCM model, a modified two-step RCM compensation （RCMC） method for SA-FBSAR is proposed. In this method, firstly the azimuth-dependent RCM is compensated by the scaling Fourier transform and the phase multi- plication. And then the range-dependent RCM is removed through interpolation. The effectiveness of the proposed RCMC method is verified by the simulation results of both point scatterers and area targets.

胎牛血清不同组分对昆虫杆状病毒复制的影响

为探讨胎牛血清(FBS)中的不同组分对昆虫杆状病毒(BAC)复制的影响,找到血清中能提高病毒复制效果的有效组分,对亲和凝胶层析柱法分离获得血清中的四个混合组分(S1、S2、S3和S4)进行了病毒培养实验。在6孔板上接种SF9细胞,培养24 h,接种0.01MOI的BAC-GFP病毒,按照0、0.3%、0.6%、1.3%、2.5%、5%的浓度梯度加入6孔板中进行病毒培养。分别在24 h、48h、72 h、96 h进行荧光拍照、观察。96 h收集病毒上清,进行空斑形成实验测定病毒滴度。用收集的病毒感染SF9细胞,72 h流式检测病毒的复制情况。结果显示:血清样本S1在浓度1.3%以上时,对于BAC的复制有促进作用; S2没有促进效果,反而随着S2的浓度上升而出现抑制的情况; S3在浓度2.5%以上时,同样有着明显促进作用; S4的促进作用不显著。试验表明,与原胎牛血清相比,添加单一血清组分S1对提高BAC病毒的复制效果更显著。

胎牛血清对大鼠胚胎海马神经干细胞向GFAP阳性细胞分化的影响

目的探讨胎牛血清对大鼠胚胎海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向表达胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)细胞分化的影响。方法体外取材、纯化、传代培养NSCs至第3代并进行细胞特异性表面标记物Nestin染色鉴定,将已鉴定好的第3代NSCs分为NSCs单独培养组(对照组)和NSCs胎牛血清诱导组(血清组)继续培养7 d,观察各组NSCs的生长变化,免疫组织化学(ICH)检测GFAP了解GFAP阳性细胞数和细胞突触长度,RT-PCR、Western blot检测突触素(synaptophysin,SYN)的表达变化。结果与对照组相比,血清组GFAP阳性细胞数增多(P<0.01),细胞突触长度增长(P<0.01),SYN mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。结论胎牛血清能够诱导大鼠胚胎海马NSCs向GFAP阳性细胞分化和促进分化后的GFAP阳性细胞突触的生长,可能与胎牛血清诱导过程中促进细胞表达SYN有关。

3种成软骨诱导培养基对单层培养和微球培养的人脂肪干细胞成软骨效果比较

目的比较3种成软骨诱导培养基对单层培养和微球培养的人脂肪干细胞(human adipose mesenchymal stem cells,hASCs)体外成软骨分化的效果。方法从人脂肪组织中提取hASCs,分别采用单层培养和微球培养,加入3种不同成分的成软骨诱导培养基,A组:胎牛血清(FBS)+10 ng/ml转化生长因子3(TGF-β3);B组:胰岛素-转铁蛋白-亚硒酸钠(ITS)+1 ng/ml TGF-β3;C组:ITS+10 ng/mL TGF-β3。3周后提取单层培养的细胞蛋白进行成软骨相关标志物检测,并对细胞微球进行阿尔新蓝、甲苯胺蓝、天狼星红染色,比较成软骨效果。结果3周后单层培养体系C组的软骨标志物表达最高,微球培养阿尔新蓝、甲苯胺蓝、天狼星红染色C组着色最深。结论作为培养基添加物,ITS在诱导hASCs成软骨分化时的效果优于FBS,而作为刺激hASCs成软骨的重要生长因子TGF-β3,10 ng/ml的浓度比1 ng/ml作用更强。