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奶牛乳腺炎无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因主要抗原区域的融合表达及抗原性鉴定
被引量:
9
1
作者
吴金花
布日额
+6 位作者
王金良
陈金龙
锡林高娃
孙立杰
王华
杜长智
白文丽
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第7期1292-1299,共8页
为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk及纤连蛋白FbsA三重活性的多亚单位融合蛋白,研究其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性,根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因的核苷酸序列,利用DNAStar...
为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk及纤连蛋白FbsA三重活性的多亚单位融合蛋白,研究其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性,根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因的核苷酸序列,利用DNAStar软件对蛋白的抗原表位序列进行分析并设计合成包括重叠PCR引物共4对引物,通过重叠PCR技术将前2个基因主要抗原区域进行拼接后插入pET30a(+)载体,再将第3个基因插入。为减少三重基因串联表达过程中3个蛋白之间空间构象的干扰,在3个基因连接处各引入1段45bp的柔性linker,结果重组基因在BL21感受态中实现了可溶性表达,表达的蛋白约62 000;Western blot试验表明多亚单位融合蛋白可被无乳链球菌多抗识别,且由此融合蛋白制备小鼠多抗能够识别sip、pgk及FbsA等3个蛋白;这表明构建的多亚单位融合蛋白可能具备sip、pgk及FbsA蛋白的三重活性,而且在小鼠的攻毒保护性试验中,重组多亚单位融合抗原对攻毒小鼠的保护优于单个蛋白。本试验为牛无乳链球菌性乳腺炎新型疫苗的研究提供了一定的参考数据。
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关键词
无乳链球菌
sip基因
pgk基因
fbsa
基因
主要抗原区域
融合表达
原文传递
奶牛乳腺炎无乳链球菌临床分离株fbsA基因的克隆与序列分析
被引量:
1
2
作者
乌日汗
王惠
+4 位作者
吴金花
锡林高娃
孙立杰
刘燕
布日额
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2014年第4期309-311,315,共4页
目的克隆并分析牛乳腺炎无乳链球菌内蒙古地区临床分离株表面蛋白fbsA基因核苷酸及编码氨基酸序列,预测其潜在的抗原表位。方法以无乳链球菌内蒙古地区临床分离株为材料,根据GenBank中公布的无乳链球菌fbsA基因序列设计特异性克隆引物,...
目的克隆并分析牛乳腺炎无乳链球菌内蒙古地区临床分离株表面蛋白fbsA基因核苷酸及编码氨基酸序列,预测其潜在的抗原表位。方法以无乳链球菌内蒙古地区临床分离株为材料,根据GenBank中公布的无乳链球菌fbsA基因序列设计特异性克隆引物,采用同源克隆法,PCR扩增fbsA基因序列,采用DNA Star生物信息学软件预测分析其编码氨基酸的潜在抗原性。结果克隆的fbsA基因序列大小为321bp,编码107个氨基酸残基,与GenBank中公布的B群无乳链球菌fbsA基因核苷酸序列同源性为98.13%,氨基酸序列同源性为99%。预测克隆基因编码氨基酸抗原性指数良好。结论成功克隆出内蒙古地区奶牛乳腺炎无乳链球菌表面蛋白fbsA基因序列,并预测其编码氨基酸具有潜在抗原性为进一步研究其原核表达产物的抗原性及致病机制奠定了基础。
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关键词
奶牛乳腺炎
无乳链球菌
fbsa
基因
克隆
原文传递
题名
奶牛乳腺炎无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因主要抗原区域的融合表达及抗原性鉴定
被引量:
9
1
作者
吴金花
布日额
王金良
陈金龙
锡林高娃
孙立杰
王华
杜长智
白文丽
机构
内蒙古民族大学生命科学学院
内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所
山东省滨州市畜牧兽医研究所
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第7期1292-1299,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(31060352
31260600)
内蒙古民族大学与通辽市政府合作资助项目(SXYB2012086)
文摘
为获得具有无乳链球菌膜表面相关蛋白sip和磷酸甘油激酶pgk及纤连蛋白FbsA三重活性的多亚单位融合蛋白,研究其作为无乳链球菌亚单位疫苗候选抗原的可行性,根据GenBank中已发表的无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因的核苷酸序列,利用DNAStar软件对蛋白的抗原表位序列进行分析并设计合成包括重叠PCR引物共4对引物,通过重叠PCR技术将前2个基因主要抗原区域进行拼接后插入pET30a(+)载体,再将第3个基因插入。为减少三重基因串联表达过程中3个蛋白之间空间构象的干扰,在3个基因连接处各引入1段45bp的柔性linker,结果重组基因在BL21感受态中实现了可溶性表达,表达的蛋白约62 000;Western blot试验表明多亚单位融合蛋白可被无乳链球菌多抗识别,且由此融合蛋白制备小鼠多抗能够识别sip、pgk及FbsA等3个蛋白;这表明构建的多亚单位融合蛋白可能具备sip、pgk及FbsA蛋白的三重活性,而且在小鼠的攻毒保护性试验中,重组多亚单位融合抗原对攻毒小鼠的保护优于单个蛋白。本试验为牛无乳链球菌性乳腺炎新型疫苗的研究提供了一定的参考数据。
关键词
无乳链球菌
sip基因
pgk基因
fbsa
基因
主要抗原区域
融合表达
Keywords
Streptococcus agalactiae
sip
gene
pgk
gene
fbsa gene
main antigen area
fusion expression
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
奶牛乳腺炎无乳链球菌临床分离株fbsA基因的克隆与序列分析
被引量:
1
2
作者
乌日汗
王惠
吴金花
锡林高娃
孙立杰
刘燕
布日额
机构
内蒙古民族大学生命科学学院
内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2014年第4期309-311,315,共4页
基金
国家自然科学基金项目(No.31260600
31060325)
+1 种基金
内蒙古民族大学市校合作项目(No.SXYB2012086)
内蒙古民族大学科学研究项目(No.NMD1212)
文摘
目的克隆并分析牛乳腺炎无乳链球菌内蒙古地区临床分离株表面蛋白fbsA基因核苷酸及编码氨基酸序列,预测其潜在的抗原表位。方法以无乳链球菌内蒙古地区临床分离株为材料,根据GenBank中公布的无乳链球菌fbsA基因序列设计特异性克隆引物,采用同源克隆法,PCR扩增fbsA基因序列,采用DNA Star生物信息学软件预测分析其编码氨基酸的潜在抗原性。结果克隆的fbsA基因序列大小为321bp,编码107个氨基酸残基,与GenBank中公布的B群无乳链球菌fbsA基因核苷酸序列同源性为98.13%,氨基酸序列同源性为99%。预测克隆基因编码氨基酸抗原性指数良好。结论成功克隆出内蒙古地区奶牛乳腺炎无乳链球菌表面蛋白fbsA基因序列,并预测其编码氨基酸具有潜在抗原性为进一步研究其原核表达产物的抗原性及致病机制奠定了基础。
关键词
奶牛乳腺炎
无乳链球菌
fbsa
基因
克隆
Keywords
Dairy cow mastitis
Streptococcus agalactiae
fbsa gene
gene
cloning
分类号
R378.12 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
奶牛乳腺炎无乳链球菌sip、pgk及FbsA基因主要抗原区域的融合表达及抗原性鉴定
吴金花
布日额
王金良
陈金龙
锡林高娃
孙立杰
王华
杜长智
白文丽
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
9
原文传递
2
奶牛乳腺炎无乳链球菌临床分离株fbsA基因的克隆与序列分析
乌日汗
王惠
吴金花
锡林高娃
孙立杰
刘燕
布日额
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2014
1
原文传递
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