TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点

目的了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点。方法采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达情况。以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,10例健康成人作为对照;采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达水平。结果 TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1基因的表达水平(中位数8.526%)明显低于健康对照组(中位数33.237%)(P<0.001),而FcεR Iγ基因的表达水平(中位数2.571%)则高于健康对照组(中位数0.958%)(P=0.019),Zap-70基因在两组中的表达水平没有显著性差异,但均与TCRζ基因的表达水平呈正相关。结论 TCRζ缺陷的AML病人T细胞中Elf-1基因的低表达可能是导致AML病人TCRζ基因缺陷性表达的原因之一,而FcεR Iγ基因的高表达则可能是在一定程度上缓解了TCRζ基因缺陷性表达所带来的T细胞免疫异常。

IgE与其高亲和力受体FcεRⅠ的相互作用

IgE在I型变态反应中起着及其重要的作用,其与效应细胞上的IgE高亲和力受体(FcεRI)结合,从而触发细胞内一系列信号转导,使肥大细胞发生脱颗粒并释放大量炎性介质是哮喘等过敏性疾病的重要发病机制。本文主要针对IgE及其受体FcεRI的生物学特点以及它们相互结合这一重要步骤的结构研究进行综述。

人FcεRIα亚基细胞外区的原核表达及其和IgE结合的机制

应用两种不同的表达系统对FceR I α亚基的细胞外区进行克隆和表达,表达产物经纯化后用免疫斑点杂交法检测其与IgE结合的能力,探索IgE与其高亲和力受体FceR I α亚基的细胞外区结合的机制。结果两种体系均成功表达出FceRI α亚基的细胞外区,pBAD/gⅢA表达的FceR I α亚基的细胞外区能与IgE结合,而PQE30表达的FeaR I α亚基的细胞外区不能与IgE结合。提示FccR I α亚基的细胞外区已足够和IgE结合,无需β、γ亚基的存在,其所具有的一定的空间构型和二硫键的形成在与IgE结合时是必需的,而糖基化位点在与IgE的结合时是非必需的。

慢性粒细胞白血病患者FcεRⅠγ链基因表达上调

目的:在慢性粒细胞白血病病人(CML),CD3ζ链表达明显下降,分析与CD3ζ存在互补关系的FcεRⅠγ基因在CML患者中表达水平,以了解T细胞免疫中TCR信号转导的变化情况。方法:利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法测定CML患者和健康人各20例的外周血单个核细胞(PBMCs)的FcεRⅠγ基因表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-ΔCt×100%,计算FcεRⅠγ链的相对mRNA表达量。结果:CML患者PBMCs中FcεRⅠγ基因表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。FcεRⅠγ表达水平变化与病人外周血CD3+T细胞比例无相关性。结论:CML病人中FcεRⅠγ表达上升,提示FcεRⅠγ可能在一定程度调节CD3ζ链缺陷所带来的T细胞免疫异常。

慢性荨麻疹患者血清中抗FcεRⅠα自身抗体及其功能性的检测

目的:了解慢性荨麻疹患者血清抗FcεRⅠα自身抗体的阳性率,探讨慢性荨麻疹患者血清中组胺释放活性与抗FcεRⅠα自身抗体的关系。方法:以FcεRIα融合蛋白(rsFcεRⅠα)为抗原,用ELISA和免疫印迹法检测慢性荨麻疹患者血清中抗FcεRIα自身抗体,并通过抗FcεRⅠα自身抗体对组胺释放活性的影响证实其功能。结果:62例慢性荨麻疹患者中检出抗FcεRⅠα自身抗体阳性者22例(35.5%),其血清引起的组胺释放率平均为26.26%±16.08%;将其血清与rsFcεRⅠα作用后组胺释放率下降为9.14%±5.79%,组胺释放活性明显受到抑制。结论:部分慢性荨麻疹患者血清中的组胺释放活性因子与其血清中的抗FcεRIα自身抗体有关,抗FcεRⅠα自身抗体可能直接活化肥大细胞,释放组胺等血管活性介质,引起荨麻疹的发生。

FcεRⅠ信号传导途径与过敏性疾病的治疗

IgE的高亲合力受体FcεRⅠ在过敏性疾病中充当重要角色。FcεRⅠ所介导的信号传导途径是引起过敏症状的一条主要通路。通过阻断信号通路以治疗过敏性疾病已成为研究的一个焦点 ,本文就FcεRⅠ信号阻断方面的研究进展作一综述。

FcεRⅡ的研究进展

1966年Ishizaka 发现IgE,以后对IgE抗体系统研究取得很大成果。早期的研究局限在IgE 介导的变态反应,近十年来IgE 生物合成与调节、IgE 的Fc 受体(FcεR)已成为许多研究的主题。人和动物肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的FcεR 已被鉴定。

人郎罕细胞上的FcεRⅠ

人郎罕细胞能表达ＩｇＥ的高亲和性受体一ＦｃεＲＩ，这一新发现使人们对此受体的功能有了新的认识，同时也为进一步研究郎罕细胞和其他抗原提呈细胞在特应性疾病的发生中所起的病理生理作用提供了新的方向。

FcεRⅠ受体α亚基的重组表达、单克隆抗体的制备及特异性鉴定

目的通过基因重组的方法表达IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基,并用重组蛋白制备单克隆抗体。方法用RT-PCR的方法从过敏性疾病病人外周血嗜碱性粒细胞调取FcεRⅠα蛋白基因,经T-A克隆、亚克隆至pET28a(+)原核表达载体,将重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),IPTG诱导表达FcεRⅠα亚基蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白;并用其免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗FcεRⅠα亚基单克隆抗体,用细胞免疫荧光法对单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果成功调取了人IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基的基因,且测序正确;构建原核表达质粒FcεRⅠα-pET28a(+);成功建立4株稳定分泌抗FcεRⅠα亚基的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为G101、C22、G113、G42。通过细胞免疫荧光实验证实,4株单克隆抗体均能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠα亚基。结论成功利用基因重组技术制备了FcεRⅠα亚基蛋白,制备了4株效价高、特异性好的抗FcεRⅠα亚基单克隆抗体,为FcεRⅠα亚基及其抗体在过敏性疾病中的生物学功能研究奠定了基础。

抗FcεRⅠα自身抗体在慢性自发性荨麻疹中的表达及临床意义

目的研究抗FcεRⅠα自身抗体在慢性自发性荨麻疹(Chronic spontaneous urticaria,CSU)中的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测CSU患者中抗FcεRⅠα自身抗体的表达,并分析抗FcεRⅠα自身抗体与CSU患者的病程、荨麻疹活动性评分(UAS)评分、风团数目、瘙痒程度、生活质量评分、单一抗组胺药疗效的临床相关性。结果 CSU患者组抗FcεRⅠα抗体水平较正常对照组明显升高(P<0.05),抗FcεRⅠα抗体水平与病程、荨麻疹活动性评分(Urticaria activity score,UAS)、风团数目评分、瘙痒程度评分、生活质量评分无明显相关性(P>0.05),单一抗组胺药使用有效者其血清抗FcεRⅠα抗体滴度低于单一抗组胺药治疗无效者(P<0.05)。结论抗FcεRⅠα抗体在CSU发病中有重要的作用,抗FcεRⅠα抗体滴度较高的CSU患者可能对常规抗组胺药治疗抵抗。

敲除FcεR1加重小鼠非酒精性脂肪肝病

目的探讨Ig E高亲和力受体FcεR1在高脂饮食(HFD)诱导的小鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中的作用。方法选取野生型(WT)雄鼠和Ig E高亲和力受体FcεR1敲除(FcεR1-/-)雄鼠各10只,均给予HFD诱导NAFLD模型,每周固定时间称取小鼠体质量。12周后处死小鼠,称取小鼠体质量,收取血及肝组织并检测肝功能相关指标。结果 FcεR1-/-小鼠与WT小鼠相比,体质量增加的同时(P<0.05),肝脏体重比增高(P<0.05),血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(CHOL)及肝组织TG均升高(P<0.01),肝组织Ⅲ型胶原(collagenⅢ)mRNA表达升高(P<0.01),NAFLD症状严重。结论 Ig E高亲和力受体FcεR1可能具有保护NAFLD诱导肝损伤的作用,其机制可能是通过降低体质量和改善脂质代谢实现的。

CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响

目的观察CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响,探讨其诱导免疫耐受的相关机制。方法将48只清洁级雄性Balb/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(DXM)治疗组(C组)、CpG ODN治疗组(D组),每组12只。以卵白蛋白(OVA)作用建立小鼠哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)计数细胞总数并分类,取肺组织作病理,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中FcεRⅠ、FcγRⅡb mRNA的表达。结果 (1)电镜观察肺组织超微结构:B组显示支气管及血管周围有较多炎性细胞浸润,肺泡隔内嗜酸粒细胞浸润,C组和D组与B组相比明显减轻。(2)BALF中炎症细胞表达变化:与B组相比,C组、D组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)绝对值以及EOS占细胞总数的百分比(EOS%)均显著减少(P<0.01)。(3)RT-PCR结果:C组、D组FcεRⅠmRNA表达均显著低于B组(P<0.01),C组、D组FcγRⅡb mRNA表达均显著高于B组(P<0.01)。(4)相关分析:小鼠肺组织FcεRⅠ和FcγRⅡb表达呈显著负相关(P<0.01,n=40)。结论 CpG ODN能降低哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ的表达,增加FcγRⅡb的表达,具有改善气道炎症和诱导免疫耐受的作用。

变应性鼻炎IgE高亲和力可溶型Fc段受体1α(sFcε1α)蛋白的制备及血清中相应抗体的检测

目的构建人可溶型Fc段受体1α(s FcεR1α)的原核表达载体,诱导表达并纯化重组FcεR1α胞外区段蛋白,检测其与血清中Ig E的结合力及相应抗体的含量。方法应用巢式PCR技术获得人FcεR1α胞外区段基因,构建原核表达载体p ETs Fcε1α,最佳诱导条件表达出s FcεR1α,采用亚胺二乙酸His标签纯化树脂纯化并进行Western blot法鉴定。ELISA检测人s FcεR1α与血清中Ig E的结合力及血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E及抗FcεR1α自身抗体的含量。结果扩增出人FcεR1α胞外区段基因,大小为600 bp左右。p ET-s FcεR1α经PCR、双酶切、测序鉴定正确。诱导表达、纯化出人s FcεR1α,相对分子质量(Mr)大小约为42 000。Western blot法鉴定为人s FcεR1α。人s FcεR1α可以与人血清中Ig E结合。变应性鼻炎(AR)患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。结论获得人s FcεR1α,s FcεR1α与人血清中Ig E有较强的结合力,AR患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。

FcεRI-β基因启动子区多态性与哮喘儿童血清总IgE的关系

目的 探讨IgE高亲和力受体 β链 (FcεRI β)基因启动子区 10 9C/T多态性与儿童哮喘血清总IgE水平的关系。方法 采用聚合酶链式反应 限制性片断长度多态性 (PCR RFLP)法检测了 2 0 0 1年 12月至 2 0 0 3年 2月吉林大学第一临床医院 12 6例哮喘儿童和 87名正常儿童的FcεRI β 10 9C/T基因多态性 ;用酶联免疫法检测血清总IgE水平和空气过敏原。结果 FcεRI β 10 9C/T基因型分布及等位基因频率哮喘组与正常对照组比较 ,差异均无显著性意义 ;哮喘组、对照组过敏原检测阳性率在突变基因型与未突变基因型间比较 ,差异均无显著性意义 ;哮喘组FcεRI β 10 9C/T突变纯合型个体的Log10 IgE水平高于突变杂合型及未突变型个体的水平 (P <0 0 5 )。结论 FcεRI β基因启动子区 10 9C/T不是汉族儿童哮喘的易感基因 ,与过敏原亦无关 ,但突变纯合子TT型与血清总IgE水平升高相关联。

肠道内IgE的生物特性与消化道疾病的研究进展

免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)是肠道重要保护物质,在肠道免疫中有至关重要的作用.IgE由黏膜下固有层淋巴组织中浆细胞合成分泌,在多种细胞因子、免疫细胞参与下调节肠道免疫系统功能,当抗原侵入机体后不同的分子机制以及高亲和力IgE受体(FcεRⅠ)和低亲和力IgE受体(CD23^+)在调节肠道免疫系统功能中发挥作用.本文就肠道中IgE的结构、合成转运、分泌调节、受体分类、功能和肠道相关临床疾病的研究进展作一综述.

慢性自发性荨麻疹患者血清免疫指标检测分析

目的探讨自身抗体、免疫球蛋白、补体等在慢性自发性荨麻疹(chronic spontaneous urticaria,CSU)致病机制中的作用。方法收集临床CSU病例90例,同时设立正常对照组62例进行比较。抽取患者及对照组静脉血5ml,留取血清检测:抗IgE抗体、抗FcεRⅠ抗体、总IgE、IgA、IgM、IgG、C3、C4、抗甲状腺过氧化物酶抗体(antithyroid peroxidase autoantibody,anti-TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(anti-thyroglobulin antibodies,TGAb),分析检测结果。结果 90例CSU中,23例抗IgE抗体为阳性,占25.56%(23/90),9例抗FcεRⅠ抗体为阳性,占10.00%(9/90)。CSU组抗IgE抗体为(45.67±36.31)μg/ml、抗FcεRⅠ为(577.93±360.78)μg/ml,浓度明显高于正常对照组[分别为(27.16±12.59)μg/ml、(388.97±200.19)μg/ml],差异均有统计学意义;CSU组总IgE为(109.57±74.09)IU/ml、C4为(0.31±0.11)g/L,浓度高于正常对照组[分别为(70.29±27.91)IU/ml、(0.27±0.07)g/L],差异均有统计学意义;TPOAb、TGAb、IgA、IgM、IgG、C3与正常对照组比较,差异均无统计学意义。结论 CSU患者抗IgE抗体、抗FcεRⅠ抗体异常增高,并存在IgE介导的变态反应和补体激活机制。

慢性荨麻疹患者外周血中CD8^+CD28^-T细胞检测结果分析

目的:探讨CD8^+CD28^-T细胞在慢性荨麻疹患者致病机制中的作用。方法:收集临床慢性荨麻疹(CU)病例83例,同时设立对照组64例进行比较。应用ELISA法检测研究对象血清中抗Ig E抗体、抗FcεRⅠ抗体浓度,流式细胞仪检测外周血中CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD8^+CD28^-、CD4^+CD25^+T细胞比例,分析检测结果。结果:83名CU中,23例抗Ig E抗体为阳性,占27.7%(27/83);31例抗FcεRⅠ抗体为阳性,占37.3%(31/83)。CU患者外周血CD8^+T细胞比例、CD8^+CD28^-T细胞比例低于正常对照组(P<0.05),CD4^+/CD8^+比值、CD4^+CD25^+T细胞比例均高于对照组(P<0.05)。结论:CU患者机体外周血CD8^+CD28^-T细胞、CD4^+CD25^+T细胞比例与对照组相比存在差异,CD8^+CD28^-T细胞比例降低也可能是CU致病机制之一。

慢性荨麻疹自身抗体的表达情况及意义分析

目的:对慢性荨麻疹自身抗体的表达情况及意义分析。方法:收集近期在本院治疗的慢性自身免疫性荨麻疹患者78例作为观察组,同时随机选择同期健康体检者78例作为对照,检测抗FcεRI抗体、抗甲状腺自身抗体(抗甲状腺过氧化物酶自身抗体与抗甲状腺球蛋白抗体)、抗幽门螺杆菌(HP)自身抗体、抗核抗体(ENA)、抗dsDNA抗体等自身抗体表达情况,并进行比较分析。结果:与对照组相比较,慢性荨麻疹患者FcεRI抗体、抗甲状腺抗体、HP抗体、抗dsDNA等自身抗体表达阳性率均明显升高,与对照组比较差异具有统计学意义,抗核抗体阳性率差异则不具有统计学意义。与对照组相比较,慢性荨麻疹患者FcεRI抗体、抗核抗体、抗dsDNA等自身抗体表达水平明显升高,比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性特发性荨麻疹的发病与其自身免疫背景有关,其血清内存在多种自身抗体异常表达,值得临床进一步研究应用。