三种Feulgen染色方法的比较

目的探索一种快速的Feulgen染色方法,并尝试其在细胞核DNA含量分析中的应用。方法选取十只健康小白鼠的肝细胞涂片,每只小白鼠的肝细胞涂片分成三组,采用快速Feulgen染色法、改良Feulgen染色法、传统Feulgen染色法对这三组分别染色,用TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞涂片内单个完整肝细胞核的DNA含量,比较各组染色效果和肝细胞核DNA含量的测量结果。结果应用快速Feulgen染色法,获得了满意的效果,细胞核染色深,结构清晰,背景着色淡,而所需染色时间仅为15分钟;同一种方法染色的不同小鼠肝细胞涂片,相同DNA含量倍体肝细胞核的DNA含量均值的变异系数(CV)<10%,CV(快速)<CV(改良)<CV(传统);不同方法染色的同一小鼠肝细胞涂片,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异,IOD(快速)>IOD(改良)>IOD(传统);各组2、4、8倍体肝细胞核DNA含量间的比值均接近2或4;结论此种快速Feulgen染色方法优于其他两种方法,可应用于图像分析系统对细胞核DNA含量与倍体的测量和分析。

Lyon’s Feulgen标准化染色方法与传统Feulgen法的比较研究

目的:Lyon’s Feulgen标准法与传统Feulgen法的比较。方法:用相同组织切片经Lyon’s Feulgen标准法与传统Feul- gen方法同时染色,观察阳性强度,比较两法的重复性。结果:相同组织切片经Lyon’s Feulgen标准法染色阳性产物明显强于传统Feulgen法,重复性更好。结论:Lyon’s Feulgen标准法优于传统法。

植物DNA的Feulgen染色法研究

通过染色法显示DNA是高校生物类专业常做实验之一,Feulgen染色是显示DNA的传统染色方法。在教学实践中由于取材不同,DNA的染色效果表现出较大差异。本研究以洋葱、玉米、蚕豆、豌豆为材料,对其不同组织进行Feulgen染色,通过比较染色效果及操作方法的难易,选择出最适合用Feulgen染色法显示DNA的实验材料。结果表明:(1)从观察结果来看,洋葱内表皮和洋葱根尖的染色效果最好;(2)从实验的操作过程来看,洋葱内表皮的取材及操作方法是最简单的一种。所以洋葱内表皮最适合用于实验教学中Feulgen染色法显示DNA。

改良Feulgen染色法检测标本细胞DNA的效果评估

目的探讨改良Feulgen染色法临床检测细胞DNA中的效果。方法收集宫颈癌普查检测样本300例(份),每例标本进行液基制片各3份,随机分成3组:标准组,实验组1,实验组2。另取标准片30片,随机分成3组:标准组,实验组1,实验组2,采用经典Feulgen染色法及改良Feulgen染色法分别对宫颈癌普查检测标本和标准片进行染色,分别测量二倍体细胞核变异系数(CV)、积分光密度(IOD)及DNA指数(DI),测量结果进行统计学分析。结果实验组宫颈检测样本二倍体细胞核IOD、DI、CV值与标准组比较,差异无统计学意义(P>0.1);改良Feulgen染色法显示细胞核染色深,结构清晰,背景着色淡;经典Feulgen染色法流程需要4 h,改良Feulgen染色法只需要30 min。结论改良Feulgen染色法与经典Feulgen染色法对检测细胞DNA结果高度一致,且改良Feulgen染色法效果良好,用时短,可以用于临床标本细胞DNA检测。

Feulgen-EA双重染色固定液应用评价

目的对Feulgen-EA染色再固定环节进行应用评价。方法运用细胞图像分析系统对经过冰醋酸(乙酸)、AF、改良AF、Clarke、Bohm-Sprenger 5种固定液再固定后的细胞切片进行扫描,比较细胞核积分光密度(IOD)、变异系数(CV)、Area的差异,获得适合核DNA再固定的固定液,同时探讨温度对固定的影响,通过EA对细胞浆染色,比较胞浆着色效果。结果 DNA再固定宜选用AF或Bohm-Sprenger固定液反应30 min,当温度过低时,影响DNA的固定,相应地延长固定时间,EA对胞浆染色效果良好。结论 AF、Bohm-Sprenger固定液能满足Feulgen-EA双重染色的要求。

大鼠睾丸支持细胞的原代培养与鉴定

目的采用改良方法对大鼠睾丸支持细胞进行分离、纯化和原代培养,为得到更高纯度和稳定的支持细胞原代培养体系,并建立一种简单、易行的支持细胞鉴定方法。方法采用酶消化法分离大鼠睾丸支持细胞,用Tris-HCl处理后除去生精细胞,实现进一步纯化。并用Feulgen染色法鉴定支持细胞,对支持细胞进行形态学观察。结果培养的支持细胞纯度达到95%,每个睾丸可获取支持细胞约107个,Feulgen染色后明显可见支持细胞核内的双极小体。结论酶消化法分离和Feulgen染色法鉴定大鼠支持细胞简单易行,且细胞纯度较高。

食管黏膜脱落细胞DNA倍体检测在食管癌诊断中的价值

目的探讨胃镜直视下食管病灶脱落黏膜细胞的DNA倍体分析对食管良恶性疾病的诊断价值。方法采用Feulgen染色及图像分析技术,对胃镜直视下刷取的食管病灶黏膜细胞进行DNA含量及倍体分析,以黏膜病理组织镜下诊断结果为"金标准",分析食管病灶黏膜细胞DNA倍体分析对食管良恶性疾病的诊断价值。结果对病理诊断为食管癌43例,良性病变61例分析发现,食管癌中有34例DNA倍体异常,良性病变中有4例DNA倍体异常,其诊断食管癌灵敏度为79.07%,特异度为93.44%,阳性预测值为89.47%,阴性预测值为86.36%,阳性似然比为12.05,Youden指数为72.51%。食管癌患者的黏膜脱落细胞DNA的倍体阳性率明显高于食管良性疾病患者;在食管癌患者中,分化程度越低DNA倍体的含量越高,DNA倍体的含量与食管癌的分化程度有一定关系。结论食管黏膜脱落细胞DNA倍体对食管癌的诊断有一定价值,为大规模开展食管脱落细胞进行分子普查奠定了基础。

大鼠脑挫伤后神经细胞DNA片段化和含量变化与损伤时间的关系

目的观察大鼠脑挫伤后神经细胞DNA片段化和DNA含量的时序变化规律。方法建立自由落体打击大鼠脑挫伤动物模型,采用TUNEL和Feulgen′sDNA染色方法,结合图像分析技术进行研究。结果大鼠脑挫伤后随着损伤时间延长DNA片段化程度逐渐增强,而DNA含量逐渐降低。结论采用TUNEL和Feulgen′sDNA染色法观察伤后DNA片段化和DNA含量变化,可以应用于脑损伤时间推断的研究,探索推断损伤时间的新方法。

雷公藤对大鼠肾上腺细胞核DNA含量的影响

目的：观察雷公藤醋酸乙酯提取物（ Ｔ Ｗ Ｅ Ｅ）对大鼠肾上腺皮质及皮质束状带细胞核 Ｄ Ｎ Ａ 含量的影响，以探讨雷公藤的抗感染和免疫抑制作用机制。方法：将 Ｔ Ｗ Ｅ Ｅ 和泼尼松分别给正常 Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗ ｌｅｙ 大鼠灌服１ 个月，同时设置对照组，利用组织学 Ｈ Ｅ 染色及 Ｆｅｕｌｇｅｎ 组织化学染色观察大鼠肾上腺变化。结果： Ｔ Ｗ Ｅ Ｅ 组肾上腺皮质明显增厚，束状带细胞浆充满类脂质空泡；皮质全层细胞核分布较稀疏，细胞核较大，但染色较浅淡。结论： Ｔ Ｗ Ｅ Ｅ 能促进肾上腺束状带细胞核 Ｄ Ｎ Ａ 功能活性，具有刺激肾上腺束状带细胞增生和类脂质分泌的功能。

两种染色方法在细胞核DNA含量检测中的应用及比较

目的 探讨改良、快速两种Feulgen染色方法达到最佳染色效果的水解时间段，为科研和临床的应用提供方法学指导。方法 选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织，制成肝细胞涂片，分别在室温和60℃温度下水解不同时间，应用改良和快速两种方法染色，TIGER图像分析仪检测和分析单个肝细胞核的DNA含量。结果 （1）不同大鼠肝细胞涂片在同一水解温度、时间作用下，相同DNA倍体含量肝细胞的DNA含量大致相同，CV值均小于10％；（2）二、四、八倍体肝细胞核的DNA含量比值均接近2或4；（3）同一大鼠相同水解温度不同水解时间，同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下，IOD（5-7min）〉IOD（9-15min）〉IOD（1min,20min），室温水解温度下，IOD（50min）〉IOD（20-30min,70-90min）〉IOD（5-1min,100min）。结论 HCL水解肝细胞涂片时间过长或过短均不能理想的染色，快速法和改良法Feulgen染色达较佳染色效果的时间段分别为：快速法5—7min，改良法20-90min。

胃癌p53蛋白表达及与细胞形态计量、DNA含量、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的关系

探讨胃癌p53蛋白表达与胃癌生物学行为、细胞核形态、DNA含量及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的关系。采用免疫组化S-P法、改良Feulgen染色法及图象分析技术对58例原发进展期胃癌进行p53、PCNA、DNA含量及细胞核形态检测。结果发现,p53蛋白表达与胃癌Lauren分型无关(p>0.05),而与胃癌浸润深度、淋巴结转移有关(p<0.05);p53蛋白表达阳性胃癌,癌细胞核面积大,核长径长,核周长长,PCNA 表达高,DNA指数高,DNA 2C细胞检出率低,DNA>5C检出率明显增高(p<0.05)。上述结果表明p53蛋白检测对判断胃癌浸润深度、淋巴结转移及预后有重要意义;p53蛋白表达与胃癌癌细胞核形态关系密切;p53蛋白表达阳性胃癌具有更强的增殖活性,是它发生浸润、转移的基础。

显微吸收光度法测定细胞核DNA含量

用显微吸收光度计扫描法测定500个Feulgen染色的睾丸生精上皮细胞核DNA相对含量,数据经计算机处理后表明所测各倍体细胞的DNA含量比和它们实际含量比相符合。如采用内插生物标准来进行显微吸收光度法测试细胞核DNA相对含量,可成为一种方便有效的细胞分析技术。文中讨论了扫描法测量时影响测量值的一些因素。

二色补血草核型分析

采用孚尔根试剂染色压片技术对二色补血草(Limoniumbicolor(Bunge)Kuntze)体细胞染色体进行了核型分析。结果表明:二色补血草体细胞染色体数2n=16,为二倍体植物。二色补血草的8对染色体中有7对为中部着丝点染色体(m型),1对为近中部着丝点染色体(sm型)。核型公式为:二色补血草2n=2x=16=14m+2sm。染色体绝对长度变化范围为3.002～4.684μm,相对长度变化范围为9.82%～15.33%,最长染色体与最短染色体之比为1.56。

不同水解温度、时间对细胞核产物与DNA含量检测的影响

目的探讨水解产物变化趋势与染色效果的相关性以及两种不同染色方法达到最佳染色效果的水解时间,为科研和临床的应用提供有价值的参考。方法选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织,一部分制成恒定细胞数的肝细胞滴片,5N HCL水解后,紫外分光光度计扫描产物的最大吸收峰波长,并检测该产物OD值的变化; 另一部分肝组织制成肝细胞涂片,分别在室温和60℃温度下水解不同时间,应用改良和快速两种Feulgen法染色,图像分析仪检测和分析单个细胞核的DNA含量与倍体。结果（1）肝细胞滴片水解产物扫描在260 nm处有最大吸收波峰; （2）紫外分光光度计在室温和60℃水解温度下测得水解产物的量随着时间的延长逐渐增加; （3）同一大鼠在相同水解温度下,经过不同时间水解,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下,IOD（5-7 min）〉IOD（9-15 min）〉IOD（1 min,20 min）,室温水解温度下,IOD（50 min）〉IOD（20-30 min,70-90 min）〉IOD（5-10min,100 min）。结论HCL对细胞核的水解作用使DNA双链中糖苷键断裂,醛基暴露,碱基脱至HCL中,且量逐渐增加; HCL水解时间与染色的效果不成正比,两种Feulgen染色法存在各自较佳染色效果的时间段,分别为：快速法5-7 min,改良法20-90 min。

Schiff试剂配制方法改良并应用于实验教学

目的探讨两种Schiff试剂配制方法以及应用于实验教学中的染色效果对比。方法分别采用传统配制方法和改良冷配法配制Schiff试剂。热配法:将碱性品红溶于沸水,并趁热过滤,向滤液中加入盐酸以及亚硫酸氢钠,4℃避光静置过夜。次日加入活性炭,振荡脱色,过滤后即得。冷配法:将碱性品红直接加入一定浓度的盐酸中后加入亚硫酸钠,充分振荡溶解即得。采用蟾蜍全血涂片的Feulgen反应,比较两种方法配制的染液的染色效果。结果两种方法配制的Schiff试剂均将蟾蜍红细胞的细胞核染成紫红色,染色效果相当。结论Schiff试剂改良冷配法操作简便快捷,染色结果清晰,更适于实验教学活动中。

睾丸生精细胞涂片:在评估图像分析仪光度测量线性中的应用

目的 评估TIGER细胞图像分析仪测量细胞图像光度的线性.方法 选取十只健康成年小白鼠的睾丸组织,制成细胞悬液,涂片,快速Feulgen染色,TIGER细胞图像分析仪测量涂片内三种单个完整生精细胞核的DNA含量并比较它们的比值关系,分析其平均吸光度（AOD）的最大、最小值范围.结果 三种生精细胞核的DNA含量呈1、2、4的比例,其AOD值范围为0.73～1.64.结论 TIGER细胞图像分析仪在其平均吸光度值为0.73～1.64的范围内测得的组织、细胞图像光度呈线性.

大鼠脑挫伤DNA含量变化与损伤时间的关系

目的观察大鼠脑挫伤后DNA含量的时序变化规律。方法建立自由落体打击大鼠脑挫伤动物模型，采用Feulgen’s DNA染色方法，结合图像分析技术。结果损伤侧大脑皮质浅层和海马区平均积分光密度（IOD）变化呈：24h内迅速下降，24—96h有缓慢上升趋势；伤后24h内上述两区域平均积分光密度均与损伤时间呈线性关系，R^2分别为0．668和0．615。可导出直线回归方程。结论采用Feulgen’s DNA染色法结合图像分析技术观察伤后DNA含量变化，可以应用于脑损伤时间推断的研究，探索推断脑损伤时间的新方法。

明视野显微镜下特异性区分斑马鱼视网膜细胞核的方法

目的结合JB-4塑胶树脂包埋和福尔根染色寻找一个最佳能够敏感且特异染色斑马鱼视网膜细胞核的方法。方法分析JB-4切片厚度、盐酸水解程度及Schiff反应条件对细胞核染色的影响;观察不同切片厚度对细胞核可分辨度的影响;比较福尔根染色与亚甲天蓝II及核固红染色对细胞核观察的影响。结果盐酸浓度越高、浸润时间越长,染色程度越强;盐酸浓度越低、浸润时间越短,染色程度越弱。低浓度的盐酸可以通过延长浸润时间而提高染色强度。染色强度随着Schiff浸润时间的延长而增加,2h达到最强染色。在2μm组织切片中单个细胞核比在3μm组织切片、4μm组织切片及6μm组织切片中显示出更清晰的核边界。与亚甲天蓝II和核固红染色相比,福尔根染色特异性和稳定性更强。结论通过本实验结果分析发现了一个最佳能够敏感且特异染色斑马鱼视网膜细胞核的方法,这个简单可靠的染色方法可以用于细胞计数。

兔眼辐射损伤后角膜和晶体上皮细胞DNA含量的定量分析

利用改良Feulgen染色和图像分析技术对不同剂量6 0 Coγ射线 (0、 10、 2 0和 30Gy)和照后不同时间 (3、 15天和 1、 3、 6个月 )的兔眼角膜和晶体上皮细胞的DNA含量进行了定量分析。结果表明 ,各剂量组DNA含量的MOD和IOD值降低 ,与对照组相比均有明显差异 (p<0 0 1) ,提示辐射能引起角膜及晶体上皮细胞核中DNA含量发生规律性变化 ,因此角膜及晶体上皮细胞DNA含量测定可以作为眼辐射损伤的指标之一 ,为其诊断提供实验依据。

Cytomorphological Analysis of Keratinocytes in Oral Smears from Tobacco Users and Oral Squamous Cell Carcinoma Lesions—A Histochemical Approach

Aim To analyse the cytomorphological features of kerati- nocytes in smears obtained from the oral mucosa of tobacco users and from oral squamous cell carcinoma lesions. Methodology Oral smears were obtained from clinically, normal appearing mucosa of oral squamous cell carcinoma patients （n=20） and from the mucosa of smokers （n=20）, and apparently healthy individuals （n=20） were used as controls. The smears were histochemically stained and cytomorphological assessment of the keratinocytes was carried out. One-way ANOVA （Analysis of Variance） was used for comparing the parameters among multiple groups and Tukey-HSD test was used to compare the mean values between groups. Results The mean nuclear area of keratinocytes from the mucosa of tobacco users was 46 ± 2.57 and that of the oral squamous cell carcinoma lesion was 81.54±4.31. While there was a significant （P=0.001） reduction in the cellular area of keratinocytes from oral squamous cell carcinoma lesion when compared with those from oral smears of tobacco users. Conclusion Cytomorphometric analysis of keratinocytes can serve as a useful adjunct in the early diagnosis of oral squamous cell carcinomas.