大片吸虫Ras家族蛋白基因的克隆表达及免疫反应性研究

Ras家族相关蛋白是多种信号转导途径的关键组成蛋白，在寄生虫的生长发育过程中发挥着重要作用，但犬片吸虫的Ras家族蛋白基因（FgRap1）尚未见报道。本研究旨在对FgRapl进行克隆、表达、序列分析及免疫反应性评价。根据肝片吸虫的基因组及转录组数据．设计肝片吸虫Ras家族蛋白基因引物．以大片吸虫总RNA为模板，通过RT—PCR获得Fg尺apl基因；对其进行生物信息学分析及鉴定；然后构建pET—SUMO-FgRap1重组表达栽体，在大肠杆菌Transetta（DE3）感受态细胞中进行诱导表达；对纯化的目的蛋白进行SDS—PAGE和Western—blot分析。结果表明．大片吸虫FgRapi基因大小为648bp，编码215个氨基酸残基。生物信息学分析表明，该蛋白含有9个亲水区，但无跨膜区，有6个α螺旋、8个口折叠、2个较长的口转角、1个较长的无规则卷曲和8个主要的线性B细胞抗原表位。FgRapl蛋白为包涵体表达，用大片吸虫排泄分泌抗原免疫家兔的阳性血清进行Western—blot分析，表明其具有良好的免疫反应性。本研究首次克隆并鉴定了大片吸虫Ras家族蛋白基因，表达的重组蛋白具有良好的免疫反应性，该蛋白是潜在的大片吸虫诊断候选抗原。