高糖对人肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质的影响

目的观察不同浓度的葡萄糖对人肾小球系膜细胞增殖的影响及对细胞外基质纤维连接蛋白(Fn),Ⅳ型胶原(ColⅣ)的影响。方法体外培养人肾小球系膜细胞株,分别加入葡萄糖终浓度为5.5、10、20、30、40 mmol/L进行处理,于不同时间段(12、24、48、72 h)用MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测培养48 h后条件培养基中Fn及ColⅣ的含量。结果高糖作用12、24、48、72 h均能促进细胞的增殖,且随着葡萄糖浓度升高作用时间的延长促进作用增强。检测细胞上清液的Fn和ColⅣ。与对照组相比,30 mmol/L D-葡萄糖作用48 h后,Fn和ColⅣ表达增高。结论高浓度葡萄糖对系膜细胞增殖作用具有量效及时效关系,我们选择30 mmol/L浓度的葡萄糖作用48 h为最合适的细胞刺激条件。高浓度葡萄糖可促进系膜细胞细胞外基质的产生,而系膜细胞细胞外基质过度表达,可以直接导致细胞外基质的积聚,从而导致肾小球硬化的发生。

铜蓝蛋白及纤维粘连蛋白对石英粉尘促进胶原转录的协同作用

本文使用人胶原α_1(Ⅰ)、α_2(Ⅰ)和α_1(Ⅲ)链cDNA探针,采用斑点杂交技术观察了铜蓝蛋白(ceruloplasmin,Cp)和纤维粘连蛋白(fibronectin,Fn)对体外培养的人胚肺成纤维细胞胶原mRNA合成的影响。发现Cp及Fn对成纤维细胞胶原mRNA的合成有促进作用。向培养的成纤维细胞中同时加入石英粉尘和Cp时,其刺激胶原mRNA增长的程度高于单独加入石英粉尘或Cp时的刺激作用。提示Cp对石英粉尘的促纤维化有协同作用。本实验同时证实Fn也具有类似于Cp的促纤维化的协同作用。

急性胰腺炎预后指标的检测

本实验采用Ｃ－反应蛋白、α＿２巨球蛋白和纤维结合蛋白等三个实验室指标探讨其对急性胰腺炎的诊断和判断作用。实验结果表明，Ｃ－反应蛋白在急性胰腺炎中含量增高，而α＿２巨球蛋白、纤维结合蛋白在急性胰腺炎中含量降低。通过对三种蛋白变化率的百分计算，可对坏死型胰腺炎和重型胰腺炎作早期的判断，其在入院后３天诊断的敏感度、特异性、阳性及阴性预告值在前者可达８６％、９３％、９２％、８８％，在后者可达１００％、９６％、８３％、１００％，因此对临床的辅助诊断、判别有很大的作用。

层黏连蛋白和纤维连接蛋白在小鼠肾小体发育中的表达

目的观察层黏连蛋白(LN)和纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾小体发育过程中的表达规律,探讨其与肾小体发生发育的关系及作用。方法采用免疫组织化学技术结合体视学方法定量检测LN和Fn的表达。结果胚龄12 d的胎鼠LN表达于输尿管芽周围,胚龄14 d始,在各期肾小体的基膜均有表达。体视学测量发现,随着肾小体的发育成熟,其阳性表达的面密度值逐渐增多。Fn在除逗号小体以外的各期肾小体的基底膜处均有表达。体视学测量结果显示其表达量逐渐增加。结论 LN和Fn在小鼠肾小体发育和成熟过程中发挥重要作用。

尿纤维连接蛋白检测在老年人早期糖尿病肾病中的诊断价值

目的:探讨检测老年2型糖尿病(DM)患者尿纤维连接蛋白(FN)对老年人糖尿病肾病(DN)早期诊断的临床价值。方法:检测53例老年2型糖尿病患者及27名正常老年人的尿FN、尿微量白蛋白(M-Alb)、β2-微球蛋白(β2-MG)、空腹血糖及糖化血红蛋白,并进行分析比较。结果:正常白蛋白尿DM组的尿FN(9.80±4.71)μg/mmol.cr及微量白蛋白尿DM组的尿FN(30.93±19.28)μg/mmol.cr明显高于正常老年对照组的尿FN(3.91±3.68)μg/mmol.cr(t′分别为5.89、6.75,P均<0.01),且微量白蛋白尿DM组尿FN水平较正常白蛋白尿DM组明显增高,两组间有统计学差异(t′=5.14,P<0.01)。相关分析显示尿FN与尿M-Alb、β2-MG的排泄量、糖化血红蛋白均呈显著正相关(r分别为0.5059、0.4570、0.6624,P均<0.01)。结论:尿FN检测似可作为老年2型DN早期诊断的一项敏感指标。

重组纤维连接蛋白羧基端细胞结合域对骨髓基质干细胞黏附力的影响

目的:研究增强骨髓基质干细胞黏附力的方法。方法:去细胞猪主动脉瓣叶分别用纤维连接蛋白(Fn)和重组纤维连接蛋白羧基端细胞结合域(FnCTD64)及牛血清白蛋白(BSA)浸泡预涂处理12 h,对照组未预涂蛋白。采用间隔24 h、3次种植的方法种植骨髓基质干细胞(BMSCs),于种植后第8天进行细胞计数及MTT法检测比较去细胞瓣叶上黏附、增殖的细胞数量,同时取瓣叶进行组织学检测观察瓣叶表面BMSCs覆盖情况。结果:采用预涂Fn和FnCTD64后的去细胞猪主动脉瓣叶,预涂Fn组的细胞计数为(9.085±0.622)×104,MTT的吸光值为0.537±0.022;预涂FnCTD64组的细胞计数为(9.111±0.607)×104,MTT的吸光值为0.540±0.025;预涂BSA组的细胞计数为(4.593±0.464)×104,MTT的吸光值为0.360±0.018;对照组的细胞计数为(4.460±0.441)×104,MTT的吸光值为0.353±0.019;前两组明显高于后两组(P<0.01)。预涂Fn组和FnCTD64组无显著性差异。瓣叶经H-E染色,可见预涂Fn和FnCTD64组细胞覆盖情况优于预涂BSA组和对照组。结论:Fn和FnCTD64能明显增加BMSCs在去细胞猪主动脉瓣叶表面的黏附和增殖。

大鼠IgA肾病模型的建立及血清中IL-6、FN、NO的检测

目的建立大鼠IgA肾病(IgAN)模型,测定大鼠血清中的白介素-6(IL-6)、纤维结合蛋白(FN)、一氧化氮(NO),探讨这些指标水平的变化与IgAN免疫损伤的相关性,为临床治疗提供动物实验研究依据。方法24只大鼠被随机分成3组,每组8只。模型组和治疗组用免疫复合物法复制;正常对照组用生理盐水。10周后,治疗组大鼠被给予雷公藤多甙片3周。留取所有大鼠血清测定IL-6、FN、NO;留取所有大鼠尿液测定红细胞(RBC)、总蛋白量(TPR);留取所有大鼠肾组织作病理学检查。结果模型组中大鼠尿液中RBC、TPR含量较治疗组及正常对照组显著增高(P<0.01);血清中的IL-6、FN的水平较治疗组及正常对照组显著增高(P<0.01);血清中的NO水平较治疗组及正常对照组显著降低(P<0.01)。治疗组的大鼠肾组织病理损伤程度较模型组明显减轻(P<0.01)。结论血清中的IL-6、FN及NO的水平与RBC数、TPR及肾组织病理损伤程度相关,它们可作为观察IgAN治疗效果的重要指标,也可作为IgAN严重性的预测指标。下调血中的IL-6、FN及上调NO的水平,可减少IgA与FN免疫复合物的形成,从而改善肾组织的免疫损伤。

纤连蛋白通过激活FAK促进口腔鳞癌细胞迁移的实验研究

目的探讨粘着斑激酶(FAK)信号通路在纤连蛋白(FN)调节口腔鳞癌细胞迁移中的作用。方法采用Transwell方法检测不同浓度FN(0,0.1,1,10和50μg/ml)对口腔鳞癌细胞迁移能力的影响,并检测FAK磷酸化抑制剂(PF-04554878)对FN促进口腔鳞癌细胞迁移能力的影响。采用Western blot法检测FN最佳浓度下的FAK活性变化。结果 FN能够促进口腔鳞癌细胞的迁移,且在浓度10μg/ml时作用最大;FN促进口腔鳞癌细胞迁移过程中FAK被激活,PF-04554878可阻断FN对口腔鳞癌细胞迁移的促进作用。结论 FN通过激活FAK促进口腔鳞癌细胞迁移。

658nm低能量激光照射对人牙周膜细胞生物学效应的影响

目的:探讨658 nm低能量激光照射对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶活性及纤维连接蛋白合成的影响。方法:改良组织块法体外培养人牙周膜细胞。通过658 nm激光照射人牙周膜细胞,观察能量密度为1.86 J/cm2和3.72 J/cm2激光照射后不同时间点细胞增殖效应、碱性磷酸酶活性和纤维连接蛋白的变化。结果:1.86 J/cm2和3.72 J/cm2能量密度的激光照射人牙周膜细胞,可显著促进细胞增殖效应。3.72 J/cm2能量密度的激光照射可提高人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性;能量密度为1.86 J/cm2的激光照射人牙周膜细胞72 h后,细胞中纤维连接蛋白分泌量增加。结论:658 nm低剂量激光照射可促进人牙周膜细胞增殖;适量的低剂量激光照射人牙周膜细胞可促进其碱性磷酸酶活性及纤维连接蛋白的分泌。

培养人眼小梁细胞水通道蛋白1与细胞外基质的相关实验研究

目的探讨人眼小梁细胞上水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP1)与细胞外基质中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)、胶原蛋白Ⅰ(collagen Ⅰ,CAI)及胶原蛋白Ⅳ(collagen Ⅳ,CAIV)的相关关系。方法培养的人眼小梁细胞分别给予地塞米松(dexamethasone,DEX)0.4μg/ml(B组)、DEX0.4μg/ml+AQP1反义寡核苷酸(antisense oligonucle-otides,AS-ODN)0.625μg/ml(C组)、DEX 0.4μg/ml+AQP1AS-ODN 1.25μg/ml(D组)、DEX 0.4μg/ml+AQP1AS-ODN 2.5μg/ml(E组)、DEX 0.4μg/ml+AQP1AS-ODN 5μg/ml(F组)处理,以不加药组为对照组(A组)。5天后,采用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对FN、LN、CAI及CAIV的表达进行检测。结果 0.4μg/ml DEX能刺激培养的人眼小梁细胞FN、LN及CAIV表达明显增强,CAI表达减少,与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在C、D、E、F组,AQP1AS-ODN可以降低由0.4μg/ml DEX引起的FN、LN、CAIV表达增强。同样的,增加由0.4μg/ml DEX引起的CAI表达减少。结论人眼小梁细胞AQP1与细胞外基质中FN、LN、CAI及CAIV关系密切。AQP1的正常表达是细胞外基质适量表达的前提。

脑胶质瘤中纤维连接蛋白及其整合素β_1受体的表达

目的探讨脑胶质瘤中纤维连接蛋白(FN)及其整合素β1受体蛋白(β1integrin)表达的临床病理联系。方法用免疫组化SP法检测56例胶质瘤组织中FN和整合素β1的表达情况,并进行相关临床病理分析。结果(1)胶质瘤组织间质血管壁FN染色随级别增高而增厚(P<0.01),且血管厚度在复发病例组明显高于无复发组(P<0.05)。恶性程度高的Ⅲ级与Ⅳ级胶质瘤组织中还可见基质弥散阳性染色。(2)FN和整合素β1在胶质瘤中阳性表达率分别为30.36%(17/56)和39.29%(22/56),并均随肿瘤级别增加而增高(P<0.05,P<0.01),两者表达存在相关性(rs=0.312,P<0.05)。复发病例FN和整合素β1阳性表达率(68.42%,57.89%)均高于无复发组(10.81%,29.73%)(P<0.01,P<0.05)。结论FN及其整合素β1受体在胶质瘤组织中的高表达促进了胶质瘤的恶性进展,两者可能成为有价值的判断胶质瘤恶性程度及预后的指标。

PrP106-126对星形胶质细胞层黏连蛋白和纤黏连蛋白表达的影响

星形胶质细胞增生是朊病毒病早期的主要病理学特征。PrP106-126(prion protein peptide106-126)具神经毒性,导致星形胶质细胞增生。层黏连蛋白(laminin,LN)和纤黏连蛋白(fibronectin,FN)是星形胶质细胞胞外基质的主要成分。利用PrP106-126和PrP106-126制备的小胶质条件培养基(conditioned medium from microglia,MiCM)分别作用于体外培养的星形胶质细胞,应用RT-PCR和Westernblot技术探讨PrP106-126对星形胶质细胞的增殖及其胞内LN、FN表达的影响。试验分为5个处理(空白对照、Scr对照、PrP106-126、MiCM、MiCMPrP106-126)。结果表明,PrP106-126可促进星形胶质细胞增殖、LN和FN的表达,但促增殖和FN表达作用有赖于活化小胶质细胞细胞因子的共同参与。

纯钛表面经三氟代乙烷磺酰氯固定纤维粘连蛋白的实验研究

目的研究外源性纤堆粘连蛋白(FIbronectin,Fn)固定于经三氟代乙烷磺酰氯(TresyI chloride)激活的纯坎表面后对细胞早期粘附的影响。方法将Fn直接固定于经tresyI chloride处理的纯钛表面,xPS分析表面元素及结合能;再将人牙周韧带细胞接种于其上。并分别在30min、60min、120min三个时间段用MTT比色法检测细胞粘附活力。荧光染色观察细胞形态和伸展。结果随时同延长。每组细胞粘附和伸展相均持续增加。30min、60min经处理并固定有Fn的实验组和对照组细胞粘附差异存在显著性(P<O．05),120min时两组间无量著性盖异(P>O．05)。结论纯钛表面经tresyl chloride处理并固定了Fn后,在早期能促进细胞的粘附。

丹参、赤芍对实验性肝损伤大鼠血浆纤维联接蛋白影响的研究

本文通过用D-半乳糖胺造成大鼠急性肝损伤模型后,投予丹参、赤芍注射液,观察大鼠存活率、血中ALT及胆红素含量,并经时测定血浆纤维联接蛋白水平的变化。结果表明,丹参、赤芍可刺激大鼠产生血浆纤维联接蛋白,使其血中的水平提高,进而促进网状内皮系统的功能,对保护肝细胞具有一定意义。

Smad4反义寡核苷酸对高糖培养的人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白、层黏连蛋白的影响

目的观察Smad4反义寡核苷酸(antioligodeoxynucleotide,antiODN)对体外高糖培养的人肾小球系膜细胞(human glomerular mesangial cells,HGMC)分泌纤连蛋白(fibronectin,FN),层黏连蛋白(laminin,LN)的影响。方法用脂质体法将正义、反义、错义Smad4寡核苷酸瞬时转染体外培养的HGMC,并进行高糖培养,同时设立正常糖组、高糖组、甘露醇组、脂质体组为对照组,用ELISA法检测培养上清液中FN、LN的含量,进行统计学分析。结果转染Smad4反义寡核苷酸的HGMC分泌的FN、LN量与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05),而与高糖组、正义组、错义组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论随着高糖作用的时间延长,体外培养的HGMC分泌的FN、LN量逐渐增加,而转染Smad4 antiODN可以抑制高糖的刺激,减少FN、LN的表达,从而减少系膜细胞细胞外基质的堆积,为延缓肾脏纤维化提供了新的途径。

联合检测宫颈阴道分泌物中胎儿纤维蛋白和白细胞介素-8对预测早产的价值

目的探讨宫颈阴道分泌物中胎儿纤维蛋白(Fetal fibroneetin,FFN)和白细胞介素-8(Interleu-kin-8,IL-8)与早产的相关性。方法选择在本院诊断为先兆早产的孕妇40例为实验组,另选同期同孕龄的正常孕妇40例为对照组,并用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测宫颈阴道分泌物中FFN和IL-8水平。结果实验组孕妇的宫颈阴道分泌物中FFN和IL-8均显著的高于对照组,并且先兆早产的"真"早产和"伪"早产孕妇的宫颈阴道分泌物中的FFN和IL-8之间也有显著的差异。结论孕妇的宫颈阴道分泌物中FFN和IL-8与早产具有相关性,且宫颈阴道分泌物中的FFN和IL-8有一定的关联。

尿纤维连接蛋白检测在膀胱癌患者中的临床应用

目的:探讨尿纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)在膀胱癌患者中的临床应用价值。方法:采用ELISA 方法检测78例膀胱癌患者(组1)、63例其他泌尿生殖系统疾病患者(组2)及88例健康人(对照组,组3)的尿 Fn含量,并同时测定尿肌酐(Creatin,Cr),计算尿Fn/Cr比值。比较各组人群尿Fn和尿Fn/Cr之间的差异, 并分析不同肿瘤分期膀胱患者的尿Fn,尿Fn/Cr比值之间的差异。结果:膀胱癌组尿Fn含量(594.37±990. 72 ug/L)、Fn/Cr比值(192.28±1047.72 mg/mol)与其他泌尿生殖系统疾病组的尿Fn含量(351.63±859.07 ug/L)、尿Fn/Cr比值(65.25±206.35 mg/mol)及对照组的尿Fn含量(173.08±481.02 ug/L)、对照组的尿 Fn/Cr比值21.92±98.73 mg/mol(P<0.05)相比,差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。受试者工作曲线(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC曲线)显示:尿Fn用于膀胱癌患者临床诊断的灵敏度和特异度分别为77.1%和78.2%,尿Fn/Cr分别为79.2%和83.0%。另外,不同分期的肿瘤患者的尿Fn含量,尿Fn/Cr 比值也有明显差异(P均<0.05)。结论:尿Fn和尿Fn/Cr在膀胱癌患者的临床诊断方面有着重要的应用价值,是诊断膀胱癌的一种较理想的指标,并可用于膀胱癌患者的预后评估。

补肾排毒合剂对肾间质纤维化小鼠纤连蛋白及整合素α2、β1表达的影响

目的探讨补肾排毒合剂对肾间质纤维化的作用机制。方法将60只清洁级昆明小鼠随机分为正常组（I组）、UUO组（Ⅱ组）、补肾排毒合剂组（III组）和洛汀新组（IV组）。采用单侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化模型。术后7、14、21、28d处死小鼠，取手术肾组织行HE染色，免疫组织化学方法测定肾组织中纤连蛋白及整合素α2、β1的变化。结果纤连蛋白及整合素α2、β1在正常肾组织中微弱表达，Ⅱ组表达较I组升高，Ⅲ组和Ⅳ组各时间点的表达较Ⅱ组降低，Ⅲ组和Ⅳ组之间无明显差异。结论补肾排毒合剂可通过调节纤连蛋白及整合素α2、β1的表达延缓肾间质纤维化的进展。

胎儿纤维连接蛋白对绒毛膜羊膜炎预测价值的研究

目的:通过研究胎膜早破患者胎儿纤连蛋白(Fetal fibronectin,fFN)与绒毛膜羊膜炎的关系,为产前早期诊断绒毛膜羊膜炎、预测妊娠结局提供新方法。方法:采用固相免疫吸附法对胎膜早破患者30例,健康孕妇30例进行宫颈阴道液fFN定性检测,同时测定血清C反应蛋白。分娩后胎盘胎膜行病理检查。结果:研究组fFN阳性率为33.33%,对照组为3.33%,差异有显著性(P<0.01)。研究组中fFN阳性者绒毛膜羊膜炎发生率明显高于阴性者,且胎膜早破患者易发生不良妊娠结局。结论:fFN对产前诊断绒毛膜羊膜炎有价值,为预防不良妊娠结局提供了有效的监测手段。

运动对老年糖尿病人抗凝血酶Ⅲ及粘附蛋白的影响

本文对20例老年Ⅱ型糖尿病(NIDDM)病人在30分钟中等强度运动前后血清抗凝血酶Ⅲ及血浆粘附蛋白(纤维连结素与von Willebrand因子)的变化进行了研究。发现运动前NIDDM组抗凝血酶Ⅲ活性低于对照组,运动后活性升高;两组运动前后纤维连结素水平平均无明显变化;运动前NIDDM组von Willebrand因子水平高于对照组,有运动习惯的NIDDM组其水平低于无运动习惯的NIDDM组,并且运动后其水平接近正常水平。提示适当运动可能有助于延缓血管并发症的发生、发展。