酸性成纤维细胞生长因子对大鼠缺血/再灌注损伤肠上皮细胞丝裂素活化蛋白激酶的影响

目的观察外源性酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对大鼠缺血/再灌注(I/R)损伤后肠上皮细胞丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响,并探讨其与肠上皮细胞增殖能力变化的关系。方法采用大鼠肠系膜上动脉夹闭法制备缺血45min后再灌注动物模型。132只Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R组、aFGF处理组(再灌注即刻颈静脉注射aFGF4μg)及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)阻断剂PD98059预处理组(缺血前尾静脉注射PD980597.5μg,再灌注即刻静脉注射aFGF4μg)。检测缺血前,I/R15、30min及1、2、6、12和24h时肠上皮细胞增殖能力和MAPK活性。结果aFGF处理后肠上皮细胞增殖明显增加,同时MAPK活性显著增高。用p44/p42MAPK(ERK1/2)阻断剂PD98059可抑制ERK1/2的活性,使肠上皮细胞增殖减少。结论aFGF可促进I/R损伤后肠上皮细胞增殖,并可能与其激活肠上皮MAPK有关。

气道上皮损伤对成纤维细胞增殖的影响

目的探讨气道上皮细胞对成纤维细胞生长的调节机制。方法应用一种间接的气道重构的细胞模型,以酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)TyrphostinAG1478及金转停为干预因素,用3HTdR掺入法观察大鼠气管上皮细胞不同损伤状态下培养上清液对成纤维细胞生长的影响,用ELISA方法检测上清液中表皮生长因子(EGF)及转化生长因子β1(TGFβ1)的变化。结果损伤组上皮的50%培养上清液刺激成纤维细胞的增殖,上皮损伤后50μmol/L的TKIs预处理30min可减弱其刺激作用;损伤组上皮细胞的上清液中TGFβ1明显降低,50μmol/L的TKIs预处理后可使上清液中TGFβ1明显增高;各组中均未检测出EGF。结论上皮损伤可间接导致成纤维细胞增殖,上皮损伤后一定浓度的TKIs预处理30min则可一定程度地抑制此种增殖效应,TKIs对气道重构的发生可能有一定预防作用。

成体半月板细胞体外分区培养研究

目的分区培养成体半月板细胞,观察不同区域的半月板细胞生长特性以及生长因子对其的影响。方法无菌切取1月龄雄性山羊双后肢半月板,剪碎后D-Hanks液漂洗,Ⅱ型胶原酶振荡消化,滤网过滤后离心收集细胞。接种6孔细胞培养板,每孔1×105个,37℃、体积分数为0.05的CO2、饱和湿度培养。绘制生长曲线,台盼蓝染色测细胞活力。细胞爬片行苏木精-伊红及Ⅱ型胶原免疫组化染色。RT-PCR检测aggrecan的表达。用流式细胞仪检测细胞周期的分布。结果山羊成体半月板细胞自36 h后开始贴壁,外侧区细胞以长梭形为主,内侧区以多角形为主,混合区细胞形态为混合型。台盼蓝拒染试验测细胞活力约为92%。群体倍增时间约为47.4 h。加入人胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子后细胞增殖加快,多角形细胞增多;细胞爬片行Ⅱ型胶原免疫组化染色证实在转染细胞胞浆中有棕黄色颗粒。RT-PCR检测结果显示目的条带与aggrecan的预期大小相符。流式细胞仪检测加入生长因子后的半月板细胞S期比例增加,而G1期细胞减少。结论不同区域的半月板细胞有形态差异。加入生长因子后可促进其生长、增殖。

bFGF与EGF诱导BMSCs向神经干细胞分化的观察

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）在体外条件下对骨髓基质干细胞（BMSCs）向神经千细胞（NSCs）和神经样细胞分化的诱导作用。方法 采用出生4周左右大鼠的全骨髓细胞进行培养，传至第3代时，分为两组：实验组细胞加入bFGF和EGF，进行诱导分化；对照组不加因子继续培养。在倒置显微镜下每日观察，记录BMSCs的诱导分化情况，并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗巢蛋白（Nestin）单抗、兔抗神经元特异性烯醇化酶（NSE）单抗、兔抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP）单抗鉴定。结果 实验组诱导7d后有部分细胞具备神经元样细胞形态，胞体锥形或圆形，有较长单极或多极的突起，均有Nestin、NSE、GFAP阳性细胞表达，且3种细胞数量差别有显著性（t=3．266～6．099，P〈0．05）。而对照组细胞仍为典型的成纤维细胞形态，无Nestin、NSE、GFAP阳性细胞。结论 bFGF、EGF可以诱导BMSCs向NSCs分化，并可调控神经元分化，促进神经元细胞成熟。

紫外线对人皮肤成纤维细胞的影响

紫外线辐射可造成皮肤损伤,引起皮肤出现红斑、光老化等。紫外线作用于成纤维细胞,引起细胞因子分泌及基因表达的改变,不仅能造成真皮层的损伤,还可被用来治疗某些疾病,如局限性硬皮病。从紫外线对皮肤成纤维细胞的损伤、成纤维细胞对紫外线的防御反应及紫外线的应用等方面阐述了紫外线对成纤维细胞的影响。

凝血酶敏感蛋白-1对人肝癌细胞株裸鼠种植瘤生长和血管生成作用的研究

目的:研究凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)对人肝癌细胞株HCCLM3裸鼠种植瘤生长和微血管密度(MVD)的作用,并探讨TSP-1作用后碱性成纤维细胞生长因子(bF-GF)表达的变化。方法:建立人肝癌细胞株HCCLM3的裸鼠模型,治疗组和对照组分别瘤内注射TSP-1和生理盐水。治疗3周后处死动物,测量比较治疗组和对照组肿瘤质量和体积,免疫组织化学方法研究两组肿瘤组织中bFGF表达和MVD的变化。结果:治疗组人肝癌细胞株HCCLM3裸鼠种植瘤的体积[(0.216±0.058)mm3vs(0.335±0.075)mm3,P<0.05]和质量[(0.298±0.081)gvs(0.464±0.092)g,P<0.01]均小于对照组。两组bFGF的阳性表达率差异无统计学意义,P<0.05。表达强度治疗组有低于对照组的趋势,但差异无统计学意义,t=26,P=0.05。治疗组的MVD(16.67±4.76)低于对照组(28.17±4.96),P<0.01。结论:TSP-1可抑制人肝癌细胞株HCCLM3的裸鼠种植瘤的生长和血管生成,这一过程中bFGF可能有一定作用,但尚需要更直接的证据。

碱性成纤维细胞生长因子对胰腺星状细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对胰腺星状细胞(PSCs)增殖作用的影响。方法采用组织块分离法培养PSCs,通过免疫荧光检测结蛋白、神经胶质原纤维酸性蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴别。取培养的第2-3代PSCs,用不同浓度bFGF(5、10、20、25ng/ml)处理72h,CCK8法检测PSCs增殖情况,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白基因mRNA表达,Western blot方法检测α-SMA表达;其结果与对照组比较。结果 (1)不同浓度bFGF组的细胞增殖率明显高于对照组[(145.17±6.67)%、(152.96±7.50)%、(148.64±8.74)%和(144.83±10.06)%vs.100%](P<0.05)。(2)与对照组比较,bFGF促进Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达显著增加(P<0.05)。(3)与对照组比较,bFGF刺激PSCs后引起α-SMA表达显著增加(P<0.05)。结论 bFGF可促进PSCs增殖活化,在一定程度上可促进胰腺纤维化。