副血链球菌fap1-orf4基因座位编码的GTF和ORF4的功能与相互作用的研究

目的研究副血链球菌（Streptococcus parasanguis）fap1-orf4基因座位编码的葡糖基转移酶（GTF）和开放阅读框架（ORF）4是否参与菌毛相关蛋白1（Fap1）的糖基化与成熟以及两种蛋白质之间的相互作用。方法采用基因置换技术构建副血链球菌gtf和orf4突变株，并利用互补分析和Western blot检测副血链球菌Fap1的表达水平，用以评价GTF和ORF4在Fap1的糖基化和成熟的作用，另外采用酵母双杂交技术、GST pull down技术检测GTF和ORF4两种蛋白质的相互作用。结果（1）副血链球菌gtf和orf4的突变株呈现相同表型，成熟的相对分子质量（MT）约220×10^3的Fap1被高相对分子质量不成熟的Fap1（MT约360×10^3）所取代。互补分析显示pVPT-GFP-gtf和pVPT-GFP-orf4能使突变株恢复表达成熟的Fap1l；（2）酵母双杂交技术的划线试验显示共转化子AH109／pAD-gtf＋pBD-orf4和AH109／pAD-orf4＋pBD-gtf均能在营养缺陷的选择性培养基SD-LTHA上生长，而共转化子AH109／pAD＋pBD-orf4、AH109／pAD＋pBD-gtf．AH109／pBD＋pAD-orf4、AH109／pBD＋pAD-gtf不能在营养缺陷的培养基上生长；酵母双杂交技术的X-α-gal试验显示共转化子AH109／pAD＋pBD-orf4和AH109／pAD-orf4＋pBD-gtf呈现蓝色。（3）GST pull down技术进一步证实GTF和ORF4两种蛋白质之间存在直接的相互作用。结论副血链球菌fap1—orf4基因座位编码的GTF和ORF4之间存在相互作用．GTF和ORF4组成复合物是Fap1成熟与糖基化所必需的。