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Adhesion of <i>Gallibacterium anatis</i>to Chicken Oropharyngeal Epithelial Cells and the Identification of Putative Fimbriae 被引量:8
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作者 Mónica L. Salgado Lucio Sergio Vaca +4 位作者 Candelario Vázquez Edgar Zenteno Ismael Rea Víctor M. Pérez-Márquez Erasmo Negrete-Abascal 《Advances in Microbiology》 2012年第4期505-510,共6页
Microbial infections are typically initiated by the colonization of tissues by a specific mechanism that promotes adherence to host cells or tissues. In this work, we characterized the ability of Gallibacterium anatis... Microbial infections are typically initiated by the colonization of tissues by a specific mechanism that promotes adherence to host cells or tissues. In this work, we characterized the ability of Gallibacterium anatis F149T to express fimbriae that may be involved in mucosal attachment. Using transmission electron microscopy, the fimbriae-like structures could be observed on the surface of negatively stained G. anatis F149T, and these structures were further visualized after being released by physical shaking. When the fimbriae-like structures were separated by SDS-PAGE, the proteins comprising them were isolated and sized at 13 and 25 kDa. G. anatis F149T was able to adhere to chicken oropharyngeal epithelial cells. Adhesion could be completely inhibited by pretreatment of the bacterial cells with trypsin, whereas 25% inhibition was attained after pretreatment with an antiserum against the 13 kDa protein. We demonstrated by immuno-gold electron microscopy that the antibodies from the antiserum were specifically associated with the fimbria-like structures on G. anatis. These results indicated that G. anatis F149T expresses fimbriae that contribute to its adhesion to chicken oropharyngeal epithelial cells and may be important for colonization of the upper respiratory tract. 展开更多
关键词 G. anatis ADHESION fimbria PILI
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Detection of K88 Fimbriae Gene of Escherichia coli from Mink 被引量:2
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作者 ZHANG Yan-ying GAO Gui-sheng +1 位作者 GAO Guang-ping SHI Qiu-mei 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2012年第5期206-208,211,共4页
[Objective] This paper aimed to study the mechanism of diarrhea of mink caused by Escherichia coil [Method] Through the detection of K88 fimbriae gene of E. coli, cloning of gene fragments and identification, then PCR... [Objective] This paper aimed to study the mechanism of diarrhea of mink caused by Escherichia coil [Method] Through the detection of K88 fimbriae gene of E. coli, cloning of gene fragments and identification, then PCR amplification was used to detect adhesion factor K88 gene, which was connected to T-vector and transformed into competent cells, and positive clones were selected. [ Results] E. coli 078, 029 and 038 were isolated from organs and feces of mink died of diarrhea in 3 mink farms, respectively, the 3 serotypes of E. coliwere detected in carrying K88 fimbriae gene and 3 positive clones were screened, respectively. [ Conclusion] The E. coli causing mink diarrhea carry K88 fimbriae gene. 展开更多
关键词 MINK DIARRHEA K88 fimbriae gene CLONE
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CS3 fimbriae of enterotoxigenic Escherichia coli as chimeric expression carriers of heterologous antigenic determinants
3
作者 董自正 张兆山 +2 位作者 李淑琴 张蓓宁 黄翠芬 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1999年第2期128-135,共8页
CS3 fimbriae, which are the strong immunogen, are produced by human enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). The possibility of using CS3 as a carrier of foreign antigenic determinants was investigated. A SacⅡ site s... CS3 fimbriae, which are the strong immunogen, are produced by human enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). The possibility of using CS3 as a carrier of foreign antigenic determinants was investigated. A SacⅡ site sequence was inserted into the structural gene of CS3 subunit by site-specific mutagenesis based on analyzing and predicting the properties of the proteins. A recombinant strain expressing CS3/CTP3 hybrid fimbriae was constructed by inserting the sequence encoding CTP3 into the SacII site created by directed mutagenesis in the structural gene of CS3 subunit and transforming the recombinant plasmid into the host of DH5α. The result of SDS-PAGE showed that the hybrid CS3/CTP3 molecules were the fusion proteins with molecular masses of about 18.5 ku. Inoculating mice orally and intraperitoneally showed that both antibodies against CS3 and CTP3 were elicited. These results indicate that CS3 pili could be an exposure vector for heterologous antigenic determinants and become a powerful tool for the development of oral vaccines directed against mucosal pathogens. 展开更多
关键词 CS3 fimbriaE gene fusion CHIMERIC PROTEINS EXPRESSION carrier.
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EFFECT OF ARGININE VASOPRESSIN ON LEARNING PROCESS FOLLOWING TRANSECTION OF FIMBRIA-FORNIX IN MICE
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作者 梅镇彤 黄毅 +1 位作者 蒋芝华 段书慧 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1991年第16期1388-1392,共5页
Arginine vasopressin (AVP) is an endogenous neuropeptide that has been reported to enhance the acquisition of active avoidance behavior in mice and light-dark discrimination learning in rats. In addition, our previous... Arginine vasopressin (AVP) is an endogenous neuropeptide that has been reported to enhance the acquisition of active avoidance behavior in mice and light-dark discrimination learning in rats. In addition, our previous work reported the modulating effect of AVP on hippocampal neuronal activity. Thus, it was suggested that hippocampus may be one of the CNS sites mediating the enhancing effect of AVP on acquisition. As we know, the fimbria-fornix is the main afferent and efferent pathways of hippocampus. Accordingly, 展开更多
关键词 fimbria-FORNIX ARGININE VASOPRESSIN learning PROCESS mouse.
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黄连素抑制肺炎克雷伯菌生物膜形成作用机制研究
5
作者 刘冬梅 郭梦雨 +4 位作者 费冰 李永伟 刘莹 任彦颖 刘心伟 《中国现代医药杂志》 2024年第1期6-10,共5页
目的探讨黄连素对肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)生物膜形成的作用,为KP相关感染的诊疗提供理论依据。方法结晶紫半定量法观察不同浓度黄连素对KP生物膜形成过程的影响;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)法检测1/8最低... 目的探讨黄连素对肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)生物膜形成的作用,为KP相关感染的诊疗提供理论依据。方法结晶紫半定量法观察不同浓度黄连素对KP生物膜形成过程的影响;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)法检测1/8最低抑菌浓度(MIC)、1/4 MIC、1/2 MIC黄连素对KP的Ⅰ型和Ⅲ型菌毛fimA、fimH、mrkA、mrkD、fimK、mrkH基因表达的调控作用。结果与对照组相比,黄连素组生物膜总量随黄连素浓度的增加而明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,黄连素组fimA、fimH、mrkA、mrkD、fimK、mrkH基因的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论黄连素有效抑制KP生物膜的形成与下调KP的Ⅰ型和Ⅲ型菌毛结构基因fimA、fimH、mrkA、mrkD以及调控基因fimK、mrkH的表达有关。 展开更多
关键词 黄连素 肺炎克雷伯菌 生物膜 菌毛
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肠炎沙门菌菌毛重组蛋白对其细胞黏附的竞争性阻断效应
6
作者 彭娜娜 宁慧敏 +4 位作者 陈玉豪 李欣颖 祝福强 于国滨 董伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5183-5190,共8页
鸡沙门菌通过其菌毛、鞭毛黏附宿主小肠上皮细胞是其致病过程不可或缺的重要环节。本研究旨在分析原核表达的菌毛重组蛋白FimA-sefA对肠炎沙门菌黏附小肠上皮细胞(IPEC-J2)竞争性阻断效应。将FimA、sefA基因片段克隆至pET28a(+),构建重... 鸡沙门菌通过其菌毛、鞭毛黏附宿主小肠上皮细胞是其致病过程不可或缺的重要环节。本研究旨在分析原核表达的菌毛重组蛋白FimA-sefA对肠炎沙门菌黏附小肠上皮细胞(IPEC-J2)竞争性阻断效应。将FimA、sefA基因片段克隆至pET28a(+),构建重组质粒pET28a-FimA-sefA,转化至菌株BL21(DE3)经镍柱亲和层析法(Ni-NTA)纯化获得重组蛋白FimA-sefA;利用间接免疫荧光法(IFA)、平板计数法分析肠炎沙门菌对IPEC-J2细胞的黏附。结果显示:表达的重组蛋白FimA-sefA分子量为36 ku;重组蛋白FimA-sefA、重组菌及肠炎沙门菌均能黏附IPEC-J2细胞;重组蛋白FimA-sefA及重组菌均能竞争性阻断肠炎沙门菌对IPEC-J2细胞的黏附,重组菌的阻断效应强于重组蛋白。因此,我们认为重组蛋白FimA-sefA能够在一定程度上竞争性阻断肠炎沙门菌对IPEC-J2细胞的黏附,为预防及减轻肠炎沙门菌感染策略提供了新的思路。 展开更多
关键词 肠炎沙门菌 菌毛蛋白 FimA-sefA IPEC-J2 细胞黏附
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菌毛在生防细菌定殖植物病原线虫中功能的研究进展
7
作者 何杉 吴迪 +3 位作者 赵宇 王琦 张丽霞 牛犇 《浙江农业科学》 2024年第7期1676-1682,共7页
植物病原线虫对林业生产危害严重,缺乏有效的防控措施,已造成巨大的经济损失。生防细菌已被用于林木病原线虫的绿色防控,并已取得良好的防治效果。然而,生防细菌防控林木线虫病害的作用机制尚不明确,严重阻碍了防线虫微生物制剂的研发... 植物病原线虫对林业生产危害严重,缺乏有效的防控措施,已造成巨大的经济损失。生防细菌已被用于林木病原线虫的绿色防控,并已取得良好的防治效果。然而,生防细菌防控林木线虫病害的作用机制尚不明确,严重阻碍了防线虫微生物制剂的研发与高效应用。目前,已有大量的研究结果证实,生防细菌在线虫上的定殖能力与其杀线防病效果密切相关,且细菌菌毛在生防细菌于线虫宿主的定殖过程中发挥着重要功能。本文综述了革兰氏阴性细菌菌毛的种类以及菌毛在生防细菌定殖线虫中的功能,讨论了生防细菌菌毛对运动性、黏附性、生物膜形成等定殖相关生物学性状的影响,并对菌毛在细菌防控林木线虫病害中功能的研究与应用进行了展望。 展开更多
关键词 菌毛 生防细菌 植物病原线虫 定殖
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穹窿海马伞切割侧海马提取液对神经干细胞分化为神经元的促进作用 被引量:34
8
作者 金国华 张新化 +3 位作者 田美玲 秦建兵 黄镇 徐慧君 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期137-141,共5页
目的 探讨穹窿海马伞切割侧海马提取液对神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元的影响。 方法 切割SD大鼠右侧穹窿海马伞 ,14d后取两侧海马制成提取液 ;将神经干细胞接种于 3块 2 4孔培养板中 ,每板分成切割组、正常组和对照组各 8... 目的 探讨穹窿海马伞切割侧海马提取液对神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元的影响。 方法 切割SD大鼠右侧穹窿海马伞 ,14d后取两侧海马制成提取液 ;将神经干细胞接种于 3块 2 4孔培养板中 ,每板分成切割组、正常组和对照组各 8孔 ,前 2组分别加入切割侧和正常侧海马提取液。第 1、2块分别于第 7d和14d时行MAP 2免疫荧光检测 ;第 3块于 10d时行AChE组织化学染色。计数MAP 2和AChE阳性神经元数 ,观察胞体大小和突起长度。 结果 切割组第 7d时MAP 2阳性神经元较多 ,胞体大、突起长 ,14d时细胞进一步迁移、成熟 ;正常组第 7d时仅见少量突起短的MAP 2阳性神经元 ,14d时细胞稍增多 ,突起稍增长 :对照组第 7d时未见MAP 2阳性神经元 ,14d时仅有少量胞体小、突起短的MAP 2阳性神经元。第 10d切割组AChE阳性神经元较多 ,突起多而长 ,正常组仅见少量无突起的AChE阳性神经元 ,对照组未见AChE阳性神经元。 结论 穹窿海马伞切割侧海马提取液可明显促进神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元。 展开更多
关键词 穹窿海马伞切割 海马提取液 神经干细胞 分化 神经元 促进作用
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穹窿海马伞损伤对大鼠学习记忆和海马GFAP阳性神经胶质细胞的影响 被引量:14
9
作者 龙大宏 杨丹迪 +2 位作者 李佳楣 许孟杰 汪华侨 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期63-66,W015,共5页
为探讨穹隆海马伞损伤鼠学习记忆能力与海马胶质纤维酸性蛋白阳性细胞之间的关系 ,切断 SD成年大鼠左侧穹窿海马伞 ,用 Y迷宫和免疫组织化学结合图像分析系统测试大鼠学习记忆能力和海马胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的变化状况及它们的相... 为探讨穹隆海马伞损伤鼠学习记忆能力与海马胶质纤维酸性蛋白阳性细胞之间的关系 ,切断 SD成年大鼠左侧穹窿海马伞 ,用 Y迷宫和免疫组织化学结合图像分析系统测试大鼠学习记忆能力和海马胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的变化状况及它们的相互关系。结果显示 :损伤 2周后 ,损伤组损伤侧海马 CA1 区辐射层和齿状回分子层胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的数密度较正常组分别增多 3 0 .2 9%和 3 0 .15 % (都为 P<0 .0 1) ,胞体面积分别增加 16.0 4%和 19.42 % (都为 P<0 .0 1) ,齿状回分子层胶质纤维酸性蛋白阳性细胞体密度增大 19.40 % (P<0 .0 5 )。经相关分析 ,大鼠学习记忆能力与海马 CA1 区胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数密度呈负相关 (r=-0 .83 6,P<0 .0 1) ,与齿状回数密度呈负相关 (r=-0 .792 ,P<0 .0 1)。 展开更多
关键词 穹窿海马伞 学习记忆 胶质纤维酸性蛋白 大鼠 AD 神经元损伤
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牛产肠毒素大肠杆菌毒力因子多重PCR检测方法的建立 被引量:21
10
作者 闻晓波 崔玉东 +1 位作者 朱战波 朴范泽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期322-324,共3页
通过多重PCR扩增产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigentic E.coli,ETEC)的毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa肠毒素的编码基因来检测和鉴定ETEC。试验中对影响PCR扩增的dNTP、Mg2+、引物浓度以及退火温度等因素进行优化,在优化条件的基础上,确... 通过多重PCR扩增产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigentic E.coli,ETEC)的毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa肠毒素的编码基因来检测和鉴定ETEC。试验中对影响PCR扩增的dNTP、Mg2+、引物浓度以及退火温度等因素进行优化,在优化条件的基础上,确定多重PCR的特异性和灵敏性,以此建立同时检测ETEC多个毒力因子的多重PCR方法。用该方法对分离于犊牛腹泻和犊牛肠毒血症的7株大肠杆菌进行检测,结果2株为F41、K99和STa阳性,4株为F41、STa阳性,1株为K99、STa阳性。这与玻片凝集试验检测菌毛的结果一致。试验表明,该方法特异性强、敏感性高、简便、快速,适用于临床鉴定和检测牛ETEC菌株。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 多重PCR K99菌毛 F41菌毛 STa
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穹窿海马伞切割侧海马对植入神经干细胞分化为神经元的影响 被引量:28
11
作者 张新化 金国华 +3 位作者 秦建兵 田美玲 黄镇 徐慧君 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期360-364,共5页
为观察成鼠神经干细胞移植入切割穹窿海马伞侧海马和正常侧海马后存活和分化为神经元的状况 ,用无血清培养和单细胞克隆技术获取成年 SD大鼠前脑室下带神经干细胞 ,进行 Brd U标记和扩增。切割 SD大鼠右侧穹窿海马伞 ,术后 2周将标记有 ... 为观察成鼠神经干细胞移植入切割穹窿海马伞侧海马和正常侧海马后存活和分化为神经元的状况 ,用无血清培养和单细胞克隆技术获取成年 SD大鼠前脑室下带神经干细胞 ,进行 Brd U标记和扩增。切割 SD大鼠右侧穹窿海马伞 ,术后 2周将标记有 Brd U的神经干细胞植入双侧海马齿状回。 2月后 ,行 Nissl染色、Brd U免疫荧光、NF -2 0 0 / Brd U免疫荧光、β-tubulin- / Brd U免疫组织化学染色和 ACh E组织化学染色。结果发现 ,移植的神经干细胞在海马齿状回中存活并沿颗粒下层迁移 ,切割侧海马齿状回中有较多的 Nissl深染的大胞体神经元样细胞 ,而正常侧多为小胞体胶质样细胞。切割侧海马齿状回颗粒下层中见有数个NF-2 0 0 / Brd U、β-tubulin- / Brd U双标神经元和 ACh E阳性神经元 ,而正常侧海马中则未能见到。上述结果提示 ,移植到海马中的神经干细胞能存活、迁移 ,穹窿海马伞切割侧海马中某些物质的表达增强 ,可诱导植入其内的神经干细胞向神经元或 ACh E阳性神经元分化。 展开更多
关键词 神经干细胞 移植 分化 穹窿海马伞切割 海马
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神经生长因子促进老年痴呆鼠学习记忆恢复和海马突触重建 被引量:13
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作者 龙大宏 姚志彬 +3 位作者 何蕴韶 顾耀铭 陈以慈 邝国璧 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期131-136,共6页
切断老年鼠(24月龄)左侧穹窿海马伞(FF),造成隔-海马胆碱能系统损伤的痴呆模型。用Morris水迷宫和体视学分析NGF对模型鼠学习记忆和突触的影响。实验1个月后显示:(1)定位航行试验中,损伤组大鼠寻找平台的潜伏... 切断老年鼠(24月龄)左侧穹窿海马伞(FF),造成隔-海马胆碱能系统损伤的痴呆模型。用Morris水迷宫和体视学分析NGF对模型鼠学习记忆和突触的影响。实验1个月后显示:(1)定位航行试验中,损伤组大鼠寻找平台的潜伏期,稳定后的平均值为40sec,而NGF治疗组为22sec,相互间具有显著性差异(P<0.05);(2)空间搜索试验中,损伤组在原平台象限跨越相应平台位置次数为1.9次,NGF治疗组为5.9次,两者间有统计学意义(P<0.01);(3)损伤组损伤侧齿状回分子层突触数密度和面密度分别下降29%和19.03%,平均面积增大11.4%。NGF治疗组,突触数密度和面密度与损伤组相比,有显著升高(P<0.05),而平均面积显著下降(P<0.05),都接近于正常组;(4)损伤组损伤侧齿状回分子层突触前终末内线粒体的体密度和数密度分别下降30.7%和56.5%,体积增大37.09%。NGF治疗组的体密度、数密度和体积与正常组相比,差异无显著性(P>0.05)。提示NGF能够改善老年痴呆模型鼠学习记忆能力和促进海马突触重建。 展开更多
关键词 神经生长因子 记忆 突触 痴呆 老年性痴呆 海马
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基于Red同源重组和高效自杀性载体系统构建肠炎沙门氏菌突变株方法的比较 被引量:23
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作者 朱春红 孙晓庆 +1 位作者 何素芬 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期81-84,98,共5页
Red同源重组系统和高效自杀性载体系统都能对革兰氏阴性菌染色体直接进行修饰,本试验利用上述2种系统敲除不同来源肠炎沙门氏菌菌株SEF14菌毛操纵子亚单位sefD或sefA基因,并对构建肠炎沙门氏菌突变株方法进行比较。本研究成功构建了国... Red同源重组系统和高效自杀性载体系统都能对革兰氏阴性菌染色体直接进行修饰,本试验利用上述2种系统敲除不同来源肠炎沙门氏菌菌株SEF14菌毛操纵子亚单位sefD或sefA基因,并对构建肠炎沙门氏菌突变株方法进行比较。本研究成功构建了国际、国内标准株,鸡源和人源国内分离株sefD和sefA缺失株各4株。Red同源重组系统中能将PCR产物一步法直接转化肠炎沙门氏菌,通过同源重组序列发生同源重组交换,但对PCR产物和感受态细胞的质量要求很高,一次重组效率很低,而二次重组过程则相对简单、高效。自杀性载体系统若将构建好的含同源DNA片段的重组质粒转化宿主菌,其一次重组效率高,二次重组也只需蔗糖筛选传代丢失抗性质粒。Red同源重组系统将在染色体中残留FRT位点;而自杀性载体系统在染色体中可不留任何痕迹。所以2个系统都能对不同源肠炎沙门氏菌染色体进行直接修饰,而且易删除抗性选择标志,与传统的高效自杀性载体系统比较,Red同源重组系统更方便快捷,省时省力。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 同源重组 SEF14菌毛 sefA sefD
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产肠毒素大肠杆菌多重PCR检测方法的建立 被引量:11
14
作者 曲泽慧 陈佩佩 +3 位作者 张爱芹 郭东春 师东方 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期980-982,共3页
为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛(K88和K99)和毒素(STa)基因,本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物,对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法。该方法对K88、K99和STa... 为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛(K88和K99)和毒素(STa)基因,本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物,对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法。该方法对K88、K99和STa基因的扩增产物分别为237 bp,314 bp和166 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的多重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的多重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果 2株为K99/STa阳性,1株为STa阳性。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 多重PCR K88菌毛 K99菌毛 STa毒素
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肠炎沙门氏菌SEFA基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立 被引量:14
15
作者 朱春红 吴娟 +2 位作者 张伟娟 陆光富 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期44-48,共5页
为了给临床检测肠炎沙门氏菌的感染和血清学调查提供一种切实可行的方法,本研究根据肠炎沙门氏菌SEF14菌毛操纵子亚单位sefA基因序列设计一对引物,利用PCR技术从国内标准株CMCC(B)50336中扩增sefA基因,并按预定的阅读框插入表达载体pET2... 为了给临床检测肠炎沙门氏菌的感染和血清学调查提供一种切实可行的方法,本研究根据肠炎沙门氏菌SEF14菌毛操纵子亚单位sefA基因序列设计一对引物,利用PCR技术从国内标准株CMCC(B)50336中扩增sefA基因,并按预定的阅读框插入表达载体pET22b+中,获得重组质粒pET-sefA,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列大小为498bp,与已发表的sefA结构编码序列完全一致。重组质粒pETsefA转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)并能获得高效诱导表达,通过对菌体裂解上清液SDS-PAGE和western blot分析鉴定,该重组菌可以表达大小为15.2ku的可溶性重组蛋白rSEFA。纯化的rSEFA免疫小鼠所得高免血清以及标准株CMCC(B)50336感染小鼠后所获阳性血清,均能识别标准株肠炎沙门氏菌SEF14菌毛蛋白以及纯化的重组蛋白rSEFA,结果表明明体外表达的rSEFA蛋白有较好的免疫原性和反应原性。而基于rSEFA介导的间接ELISA有较好的特异性,对肠炎沙门氏菌特异性抗体检测有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 SEF14菌毛 sefA 间接ELISA
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肠炎沙门氏菌特异性诊断方法的建立 被引量:18
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作者 蒋颖 刘轶 +1 位作者 郦晓琼 朱国强 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期6-8,12,共4页
用传统的分离鉴定方法从临床采集的12例不同蛋鸡样本中分离到1株肠炎沙门氏菌。为避免传统鉴定技术中可能出现的假阳性等问题,依据SEF 14菌毛是肠炎沙门氏菌的特异性粘附素这一特性,设计编码该粘附素基因中相对保守片段的1对引物,对上... 用传统的分离鉴定方法从临床采集的12例不同蛋鸡样本中分离到1株肠炎沙门氏菌。为避免传统鉴定技术中可能出现的假阳性等问题,依据SEF 14菌毛是肠炎沙门氏菌的特异性粘附素这一特性,设计编码该粘附素基因中相对保守片段的1对引物,对上述可疑菌株进行PCR扩增,以含有编码SEF 14菌毛操纵子全基因的质粒DNA、标准株SD-2染色体DNA作为阳性对照,鸡白痢国内分离株SP染色体DNA作为阴性对照。PCR扩增结果显示分离株出现1条与预期大小498 bp一致的特异性扩增条带,阳性对照也出现相同大小的条带,而阴性对照则未出现。结合传统的细菌学分离鉴定和特定的分子生物学鉴定,将此可疑分离株确定为肠炎沙门氏菌。该方法可快速、准确、敏感地检测肠炎沙门氏菌。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 分离鉴定 SEF14菌毛 PCR技术
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禽源大肠杆菌的分离及其毒力因子的检测 被引量:21
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作者 朱善元 陆辉 王健 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期795-799,共5页
从临床疑似大肠杆菌感染的病禽组织中分离到69株细菌(其中鹅源29株,鸡源40株);通过常规形态学、培养特性和生化特征的研究,确定为大肠杆菌。PCR检测表明,其中46株(66.7%)为F1+大肠杆菌,10株(14.5%)为F1+HPI+大肠杆菌,2株(2.9%)为HPI+大... 从临床疑似大肠杆菌感染的病禽组织中分离到69株细菌(其中鹅源29株,鸡源40株);通过常规形态学、培养特性和生化特征的研究,确定为大肠杆菌。PCR检测表明,其中46株(66.7%)为F1+大肠杆菌,10株(14.5%)为F1+HPI+大肠杆菌,2株(2.9%)为HPI+大肠杆菌;通过比较还发现,F1菌毛和HPI在鹅源和鸡源大肠杆菌中以及不同脏器来源的菌株中具有相似的分子流行病学。O抗原鉴定结果表明鹅源大肠杆菌的O抗原型主要有O26、O78、O18、O117,鸡源大肠杆菌的O抗原型主要有O109、O24、O18、O139、O78。药敏试验表明,其中绝大多数菌株对先锋霉素V、呋喃妥因、庆大霉素敏感,对环丙沙星因菌株差异而不同,林可霉素、四环素、多粘菌素多不敏感。 展开更多
关键词 大肠杆菌 分离 毒力因子 F1 HPI
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大肠杆菌F18菌毛FedE蛋白的表达与鉴定 被引量:7
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作者 成大荣 徐建生 +2 位作者 孙怀昌 高崧 刘俊斌 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期5-8,共4页
根据已经发表的F18菌毛E亚单位的基因序列(fedE)设计1对引物,利用PCR技术从重组质粒TF107E中扩增到一段序列,并按预定的阅读框架插入到表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedE,并转化大肠杆菌BL2... 根据已经发表的F18菌毛E亚单位的基因序列(fedE)设计1对引物,利用PCR技术从重组质粒TF107E中扩增到一段序列,并按预定的阅读框架插入到表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedE,并转化大肠杆菌BL21获得重组菌PPFedE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明:该序列大小为459bp,与GENEBANK中的FedE结构编码序列(Z26520)完全一致。通过对菌体裂解物的SDS-PAGE电泳分析以及Westernblotting鉴定,证明重组大肠杆菌PPFedE的可以表达融合蛋白形式的FedE(命名为GST-FedE),即FedE蛋白(16.297ku)与谷胱苷肽转移酶(27.335ku)相连组成分子量为43.632ku的融合蛋白。 展开更多
关键词 大肠杆菌 菌毛 F18 FedE 表达 鉴定
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神经生长因子对痴呆模型鼠海马突触素的影响 被引量:12
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作者 姚志彬 何蕴韶 +2 位作者 顾耀铭 陈以慈 龙大宏 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期114-117,共4页
切断SD老年鼠(24月龄)左侧穹窿海马伞.造成隔海马胆碱能系统损害的痴呆模型. 用免疫组化和图像分析技术分析神经生长因子对痴呆鼠海马突触素的影响.实验证明损伤一个月后.损伤对照组损伤侧海马CAI区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回... 切断SD老年鼠(24月龄)左侧穹窿海马伞.造成隔海马胆碱能系统损害的痴呆模型. 用免疫组化和图像分析技术分析神经生长因子对痴呆鼠海马突触素的影响.实验证明损伤一个月后.损伤对照组损伤侧海马CAI区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量分别是减少了28.17% 、32.15%、17.36%和35.22%:NGF治疗组、损伤侧海马CAI区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量只减少了6.17%、5.52%、13.50%和3.81%.提示神经生长因子能够促使痴呆鼠海马内突触素含量的增多. 展开更多
关键词 神经生长因子 海马 突触素 痴呆
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产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立 被引量:10
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作者 曲泽慧 陈佩佩 +6 位作者 张爱芹 郭东春 林欢 姜骞 刘家森 师东方 曲连东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期65-68,共4页
为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓... 为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓度0.4mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 双重PCR K88菌毛 K99菌毛
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