fliY基因在空肠弯曲菌致病性相关趋化和定植中的作用

目的:构建空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)鞭毛马达开关蛋白FliY编码基因(fliY)敲除突变株,了解FliY蛋白控制细菌鞭毛运动的作用及其与细菌趋化和定植的关系。方法:采用pBluescript-Ⅱ-SK质粒构建用于敲除空肠弯曲菌NCTC11168株fliY基因的自杀质粒。根据同源交换原理,利用自杀质粒构建空肠弯曲菌fliY基因敲除突变株(fliY-)。采用PCR、PCR产物测序与Western Blot,对fliY-突变株进行鉴定。采用体外菌落迁徙试验、细菌趋化试验以及小鼠空肠定植试验,检测fliY-突变株趋化和定植能力。结果:fliY-突变株生长曲线与野生株相似,但PCR与测序及Western Blot结果显示,fliY-突变株中fliY基因已被敲除。与野生株比较,fliY-突变株半固体平板上菌落明显较小(P<0.05),对脱氧胆酸钠和牛胆汁趋化能力显著下降(P<0.05),在感染小鼠空肠组织标本中的细菌数(CFU)也明显减少(P<0.05)。结论:空肠弯曲菌fliY基因功能与调控鞭毛运动作用有关,从而对细菌趋化和定植过程产生重大影响。