聚羟基丙烯酸和Van-clear替代传统试剂在FISH法检测宫颈hTERC基因中的应用比较

目的:观察环保固定液(聚羟基丙烯酸、环保透明脱蜡液Van-clear单独或联合)替代传统固定液[4%(体积分数)中性缓冲甲醛、传统透明脱蜡液二甲苯]应用于荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测宫颈组织中人端粒酶核糖核酸组分(human telomerase RNA component,h TERC)基因扩增的差异。方法:收集2013年3月到2015年4月于中山市博爱医院妇科住院部送检的255例宫颈组织标本,同一病变部位切取4个样本,分为4组,命名为A、B、C、D组:A组采用4%中性缓冲甲醛固定、二甲苯透明脱蜡制作切片;B组采用聚羟基丙烯酸固定、二甲苯透明脱蜡制作切片;C组采用4%中性缓冲甲醛固定、Van-clear透明脱蜡制作切片;D组采用聚羟基丙烯酸固定、Van-clear透明脱蜡制作切片。采用FISH技术检测4组宫颈标本中h TERC基因。结果:在FISH法检测宫颈各级病变组织h TERC基因时,荧光显微镜下,A、B、C、D四组的组织轮廓和背景均清晰,探针定位准确,可见耀眼的红/绿荧光信号。B、C、D组与A组阳性率相比差异均无统计学意义(P>0.05),且FISH结果符合率高。结论:环保试剂聚羟基丙烯酸、Van-clear有潜在的可能单独或联合替代4%中性缓冲甲醛、二甲苯应用于FISH法检测宫颈h TERC基因。

浸润性尿路膀胱上皮癌中人类表皮生长因子受体-2表达与扩增的研究

目的：探讨不同分期（T2～T4）的尿路膀胱上皮癌（urothelial bladder carcinoma，UBC ）中人类表皮生长因子受体-2（HER2）蛋白表达和基因扩增状态。方法：将49例不同分期的膀胱癌患者的肿瘤组织进行HER2 免疫组织化学染色，以及HER2基因的双色荧光原位杂交（FISH）检测。结果：膀胱癌患者男性居多。而且分期越高，HER2 染色阳性率越高。但所有患者均未出现基因扩增，有12例患者出现17号染色体多倍体。分期越高，多倍体发生越多。结论：膀胱癌患者HER2 蛋白增高不是由于基因扩增所致，其它的转录和后转录机制参与并调节了蛋白的表达。

荧光原位杂交法对胃癌组织HER-2基因状态的检测

目的:比较荧光原位杂交(FISH)法与免疫组织化学(IHC)染色法检测胃癌组织HER-2基因状态的一致性.方法:选择本课题组前期IHC染色法检测775例胃腺癌标本中HER-2蛋白表达为(2+)及(3+)的病例,应用FISH法对HER-2基因扩增情况进行验证.结果:FISH结果显示,86例HER(3+)标本中,60例存在HER-2基因扩增,符合率69.77%;26例阴性病例中10例为多倍体,占38.46%.43例HER-2(2+)的病例中,6例(13.95%)存在H E R-2基因扩增;37例阴性病例中20例为多倍体,占54.05%.全组扩增效果不满意率1.97%(3/152).结论:IHC可作为HER-2状态的初步筛查方法,对于IHC检测HER-2(3+)及HER-2(2+)拟行靶向治疗的病例仍有必要进一步行FISH检测,以确定HER-2基因状态,同时在评价HER-2基因状态时,要考虑17号染色体多体的影响因素.

SHP2在吸烟肺癌患者肿瘤组织中的表达及意义

背景与目的蛋白质的磷酸化和去磷酸化是肺癌发生的重要机制,而吸烟是导致肺癌发生发展的重要危险因素,本研究旨在探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)肿瘤组织中的表达及其临床意义,并初步探讨不同的吸烟指数与SHP2表达水平的关系及可能机制。方法采用免疫组织化学技术(Invision法)和荧光原位杂交技术(FISH法)检测53例肺癌组织中SHP2的表达和SHP2mRNA的扩增情况。结果 SHP2在15例正常支气管上皮内弱阳性率为80%(亦为总阳性率);在48例NSCLC中弱阳性率为35.4%,中度阳性率为43.8%,强阳性率为6.2%(总阳性率为85.4%);在5例SCLC中弱阳性率为0%,中度阳性率为80%,强阳性率为20%(总阳性率为100%)。SHP2在27例非吸烟NSCLC患者肿瘤组织中的弱阳性率为40.7%,中度阳性率为37.4%,强阳性率为3.7%(总阳性率为81.5%);SHP2在吸烟指数≥400的21例NSCLC患者肿瘤组织中弱阳性率为23.8%,中度阳性率为71.4%,强阳性率为4.7%(总阳性率为100%)。等级计数资料秩和检验结果表明,肺癌组织中SHP2表达的阳性率显著高于正常支气管上皮(P<0.05),SCLC中SHP2的阳性率高于NSCLC(P<0.05),吸烟指数≥400的NSCLC癌组织中SHP2阳性率高于非吸烟患者(P<0.05)。结论吸烟NSCLC患者肿瘤组织中SHP2的高表达可能与吸烟相关;SHP2可能在肺癌发生发展中起一定的作用;SHP2可能为肺癌治疗的药物研发提供新思路。

胃食管结合部癌Her－2基因扩增及蛋白表达与临床病理关系

目的：通过检测表皮生长因子－2（ Her－2）在胃食管结合部癌中的蛋白表达和基因扩增情况，探讨其与胃食管结合部癌患者的临床病理关系。方法采用免疫组织化学法（ IHC）和荧光原位杂交技术（ FISH）检测80例手术切除的胃食管结合部癌组织中Her－2的蛋白表达和基因扩增情况，并分析与胃食管结合部癌的病理分化程度、浸润深度、临床分期和淋巴结转移的关系。结果应用FISH技术检测显示在胃食管结合部癌组织中Her－2的蛋白阳性表达率为22．5％，应用IHC技术检测其在癌组织表达率为15％，Her－2基因扩增和蛋白阳性表达与胃食管结合部癌的分化程度和临床TNM分期有关（ P＜0．05），而与年龄、性别和浸润深度及淋巴结转移无相关性。结论 Her－2蛋白过表达和基因扩增是胃食管结合部癌患者的一个预后指标，与其发生发展有关，联合检测Her－2蛋白表达水平及基因扩增程度对于胃食管结合部癌的治疗和预后评估有一定指导意义。

用定量多色荧光原位杂交检测t（8；21）急性髓系白血病的异质性及亚克隆间的进化关系

目的用定量多色荧光原位杂交（QM．FISH）的方法检测t（8；21）急性髓系白血病（AML）中是否存在异质性亚克隆，及不同亚克隆之间在遗传学上的承继关系。方法在UCSC Genome Bioinformatics数据库中定位检索含目的基因AMLl、ETO、WTl、c-kit和p27的细菌人工染色体（BAC）克隆，用缺口平移的方法将荧光素染料标记的dUTP或dCTP连接到目的基因上制成五色FISH探针。白血病细胞低渗、同定后湿法滴片。将制备好的FISH探针杂交到患者标本上，经荧光显微镜采集荧光信号从而获得清晰稳定的多色图像。计数AMLl．ETO阳性细胞中AMLl-ETO融合基因及基因AMLl、ETO、WTl、c-kit和p27的拷贝数。将各个基因拷贝数相同的细胞定义为同一亚克隆，统计同一患者标本中亚克隆的种类及比例，进而推测不同亚克隆之间的进化关系；比较配对的初诊、复发患者中优势亚克隆的演变，推测与白血病复发、耐药相关的基因异常。结果共检测36例初诊的t（8；21）AML患者骨髓标本，1例与初诊患者配对的复发标本。在36例初诊患者中，4例（11．1％）具有AML1-ETO融合信号增加，3例（8．3％）有AMLl信号增加，10例（27．8％）有AMLl信号缺失，并且这种信号缺失具有性别差异，主要出现在男性患者中，4例（11．1％）有ETO信号增加，20例（55．6％）有wTl信号增加，15例（41．7％）有p27信号增加，14例（38．9％）有c-kit信号增加；28例（77．8％）可检测到异质性亚克隆，不同亚克隆之间呈线性或树状进化关系；1例复发病例标本与配对的初诊病例标本相比较，表现出明显的克隆演变，包括优势克隆比例改变及亚克隆的消失与新生。结论t（8；21）AML的遗传学异常具有广泛异质性，亚克隆之间不仅具有承继关系，而且处于动态进化演变状态。

宫颈癌石蜡切片组织荧光原位杂交预处理方法的探讨

目的:探讨宫颈癌石蜡切片组织荧光原位杂交过程中不同预处理方法对实验效果的影响。方法:分别采用硫氢化钠法和亚硫酸氢钠法预处理宫颈癌石蜡组织切片,从细胞核消化程度以及荧光信号质量等方面比较不同的消化时间、变性温度以及不同年份的石蜡切片的荧光原位杂交实验效果的差异。结果:①优化后的亚硫酸氢钠法和硫氢化钠法处理石蜡切片都能得到较好的荧光原位杂交信号。②石蜡切片消化处理后以变性温度90℃处理切片,能得到高质量的荧光原位杂交信号。③两种预处理方法处理不同年份的石蜡切片得到的实验结果不同,硫氢化钠法可以处理年代更久远的石蜡切片。结论:与亚硫酸氢钠法相比,硫氢化钠法能得到质量更高的荧光原位杂交信号,在科研方面有更广阔的应用前景。