Study on Colloidal Gold Immunochromatography Assay for Rapid Detection of Spectinomycin

[Objectives] This study was conducted to establish a rapid detection method for spectinomycin in pork,chicken,fish,shrimp flesh and water.[Methods]A test strip for rapid detection of spectinomycin in milk was developed by colloidal gold immunochromatography assay. [Results]The test strip had a detection limit of 50 μg/kg to milk with a detection time of 15 min,and the false positive rate and false negative rate were both 0. [Conclusions]The method is accurate,simple,reliable and convenient,and is suitable for rapid on-site spectinomycin detection.

弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD快速检测方法的建立及应用

为建立一种针对弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)敏感性高、特异性强的临床快速检测方法,根据该菌定居因子基因cfa的保守序列,设计特异性引物,采用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),并结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)方法进行反应条件的优化及特异性与灵敏度的检测。结果表明:本研究中所建立的弗氏柠檬酸杆菌重组酶聚合酶扩增结合侧向流动试纸条(RPA-LFD)快速检测方法,在38℃条件下扩增20 min后,能特异性地检测到弗氏柠檬酸杆菌,对弗氏柠檬酸杆菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限分别为1.5×102 CFU/mL和200 fg/μL,是常规PCR(cfa引物)检测灵敏度(20 pg/μL)的100倍;利用所建立的RPA-LFD法与常规PCR同时检测杂交鲟攻毒试验样本,两种方法的检测结果一致。研究表明,本研究中建立的弗氏柠檬酸杆菌RPA-LFD方法,操作简便、反应迅速、特异性好、灵敏度高,并且不需要昂贵的仪器,该方法可为未来弗氏柠檬酸杆菌细菌性疾病的早期诊断提供更有效的技术支持。

猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用

【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。

环介导等温扩增技术结合乳胶微球试纸条检测副溶血性弧菌

目的建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术结合乳胶微球试纸条(latex microsphere test strips,LMTS)快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的方法。方法以副溶血性弧菌的不耐热溶血素(TLH)基因作靶标设计引物,6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,6-FAM)和生物素(Biotin)标记引物,对体系各项反应参数进行优化;将新鲜菌液作10倍梯度稀释后进行LAMP、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光定量LAMP(quantitative LAMP,qLAMP)反应,比较三者的敏感度;对副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌、福氏志贺氏菌、粪链(肠)球菌、单核细胞增生李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌进行LAMP扩增,验证其特异性;虾样品用菌液进行模拟污染,分析LAMP-LMTS的可靠性。结果LAMP-LMTS方法的灵敏度可达4.16×10^(2)copies/μL,与qLAMP、LAMP-琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis,AGE)方法结果一致,检出限要比利用外引物建立的PCR方法低10倍的拷贝数,灵敏度更高。结论该方法检测副溶血性弧菌具有检测时间短、灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,可应用于基层实验室、应急检测或现场监测,具有较高的推广价值。

黄曲霉毒素B_(1)胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究

以黄曲霉毒素B_(1)为研究对象,制作出一种可实现对黄曲霉毒素B_(1)含量快速检测的胶体金试纸条。实验采用竞争抑制法,基于试纸条的层析作用,以胶体金为标记物与黄曲霉毒素B_(1)单抗偶联,将黄曲霉毒素B_(1)抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤维膜上作为检测线和质控线,制备出可以快速检测黄曲霉毒素B_(1)的免疫层析试纸条。通过优化,试纸条在37℃条件下,分别在5,10,15,20 d后测试,效果没有明显降低,检测灵敏度为20 ng/mL;与磺胺类药物、“瘦肉精”类药物均无交叉反应。该试纸条具有良好的稳定性和特异性,可实现生物样本中黄曲霉毒素B_(1)的快速大量检测。

基于咖啡酸的水合肼荧光探针的合成及应用

以天然产物咖啡酸为原料,设计、合成了一种可快速识别水合肼(N_(2)H_(4))的咖啡酸乙酯荧光探针(ED)。通过^(1)HNMR、^(13)CNMR和HRMS对其结构进行了表征。探针ED对N_(2)H_(4)具有高选择和高灵敏性识别,检测极限为0.31μmol/L,最适pH范围为3~8,响应时间为48 s。采用HRMS和^(1)HNMR确定探针与N_(2)H_(4)的作用机理,结果表明,探针ED与N_(2)H_(4)作用后不饱和酮结构与N_(2)H_(4)反应后生成吡唑环。此外,探针ED与N_(2)H_(4)作用后,溶液颜色从无色变为黄色,可实现N_(2)H_(4)的“裸眼检测”,并成功用于水样中N_(2)H_(4)的检测。

荧光纳米微球免疫层析技术检测新型冠状病毒研究

采用碳二亚胺(EDC)法将抗新冠病毒核衣壳蛋白(N蛋白)单克隆抗体与稀土铕荧光纳米微球共价偶联,合成荧光标记免疫探针,并用透射电子显微镜进行表征。开发了一种检测新型冠状病毒的荧光免疫检测试纸条,通过荧光检测仪测定检测线上的荧光强度,建立了定量检测新冠病毒的荧光免疫检测技术。本研究研制的新冠病毒荧光免疫层析试纸条,与荧光检测仪配套使用,对新冠病毒N蛋白的最低检出限达到0.01 ng/mL;对新冠病毒检测特异性强,与肺炎支原体、禽流感病毒等其它呼吸道肺炎病原物无交叉反应;对新冠灭活病毒的检测,用本研究开发的荧光免疫试纸条技术与荧光定量PCR进行比对验证,灵敏度为荧光定量PCR的1/100;与胶体金抗原检测试纸条相比较,比胶体金试纸条灵敏10倍以上。本研究开发的新冠病毒荧光检测试纸条,操作简便、快速、灵敏、成本低、体积小,适于现场快速检测。

基于双核酸适配体的夹心试纸条法在多菌灵检测中的应用研究

建立了一种胶体金标记核酸适配体的试纸条用于多菌灵的快速检测。将核酸适配体CZ13与AuNPs结合作为信号探针,生物素标记的核酸适配体CZ12固定在链霉亲和素包被膜上作为捕获探针。优化了影响灵敏度的实验条件,如信号探针制备中使用的NaCl和适配体的浓度,检测线上链霉亲和素与生物素标记的核酸适配体的摩尔比等。在最佳实验条件下,多菌灵检测范围为0.5~40μg/mL,检测限为0.45μg/mL。该方法可用于实际样品检测,检测时间为15 min,与果蔬中常见农残不存在交叉反应,方法准确、可靠、使用简便,适合样品的现场快速检测。

牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条的制备及应用

奶牛妊娠的早期诊断至关重要,妊娠相关糖蛋白6(PAG6)是母体胎盘组织分泌至外周循环中的特异蛋白质,因此,本研究致力于制备牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条。制备牛妊娠相关糖蛋白6多克隆抗体,将其稀释后加样至NC膜上,通过固定和封闭制备出一种可检测boPAG6的快速检测试纸条,在试纸条上加入待检血清进行孵育后洗涤,再加入二抗孵育后洗涤,最后加入显色液显色后进行快速检测。标准化快速检测试纸条是将抗体用PBS稀释成10μg/mL点样至NC膜上,在37℃温箱中固定抗体30 min,经5%的脱脂奶粉封闭后制成。待检血清滴加至试纸条后,在37℃温箱中孵育1 h后,进行洗涤和二抗孵育,最后在DAB显色试剂盒作用下显色3 min即可判定。临床检测的初步应用表明,在未孕与怀孕奶牛的混合血清中仍然可以判定是否怀孕,快速检测试纸条特异性强;血清在稀释3200倍的最低检测限时,快速检测试纸条的敏感性良好;而且该结果与ELISA的符合率在80%之上。试验重复性良好,并能在4℃和-20℃条件下保存2周。建立了一种奶牛早期妊娠诊断的快速检测试纸条并应用于初步的妊娠诊断。

国产食品安全检测试纸条的应用现状

根据动植物源性食品安全常见问题,总结市场上国产食品安全检测试纸条的产品种类,分析我国食品安全检测试纸条的不足,展望其在未来应用中的发展方向,以期为相关企业、第三方检测机构及相关主管部门提供参考,进一步推动食品安全检测试纸条在我国的应用和发展。

基于定向标记抗体的虾原肌球蛋白量子点免疫层析方法的建立及应用

目的利用量子点定向标记的单克隆抗体,建立竞争荧光免疫层析方法快速检测食品中虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)。方法使用杂交瘤细胞株免疫Balb/c小鼠,从小鼠腹水中制备得到单克隆抗体,将氨基化量子点通过具有抗体Fc端生物亲和性的重组蛋白共价固定于抗体Fc端。以量子点定向标记抗体作为检测抗体,以南美白对虾中的TM作为检测靶标,基于竞争法原理组装免疫层析试纸条。在对条件参数进行优化后,应用于市售食物样品中TM的检测。结果所建立方法的灵敏度为0.96μg/mL(%P=50%),检出限为0.15μg/mL(%P=20%),检测结果与文献中报道的相当。试纸条批内差和批间差的变异系数分别为6.81%~8.86%和8.27%~14.67%,均小于15%,在可接受范围之内。同时试纸条显示出了良好的特异性与准确性,实际样品的检测结果与过敏原标签一致。结论本研究所建立的荧光免疫层析试纸条检测方法适用于TM的快速、高效检测。

单波长激发-能量色散X射线荧光光谱法测定土壤全量硅、铝、铁、钾、钠、钙、镁、锰、磷、钛、硫

土壤质量受农作物种植、气候变化和工业发展等因素的持续影响而不断变化。及时准确评估土壤质量对于合理利用土地资源以及确保农业粮食生产的安全至关重要。土壤质量的评估涉及多种无机元素含量的分析和检测。传统的分析方法包括全量硅、磷、硫、铝等多种元素,但这些方法通常需要较长的实验周期、复杂的样品前处理以及较高的成本。为了实现土壤中多种元素的高效检测,通过对样品粒度、取样量、压片压力和保压时间对测定结果的影响,建立了单波长激发-能量色散X射线荧光光谱法测定土壤全量硅、铝、铁、钾、钠、钙、镁、锰、磷、钛、硫元素的方法。结果显示,当样品粒度为0.150 mm(100目)、取样量为4.0 g、压力20 MPa,保压时间为60 s时,可实现最优检测。在最优检测条件下,各元素的方法检出限为3 mg/kg~0.10%,定量限为12 mg/kg~0.40%,且方法的正确度和精密度可靠。方法具有各类土壤类型的适应性,同时具备检测速度快、分析成本低、前处理简单、对土壤样品无损等特点,适用于实验室及现场快速检测。方法能够提高分析效率,降低人员间误差,提高样品分析通量,为土壤分析工作者提供一种可靠快速的分析方法。

柑橘衰退病毒RT-RPA-LFD可视化检测方法的建立及应用

【目的】柑橘衰退病由柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)引起,是一种世界性的重要柑橘病害。为实现CTV的田间快速检测,建立一种准确、快速且可视化的检测方法。【方法】以CTV外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,设计3对特异性引物和探针,通过引物筛选,以及优化引物浓度、反应时间和反应温度等条件,建立CTV的反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RT-RPA-LFD)快速检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品的检测。【结果】建立了CTV的RT-RPA-LFD检测方法:最佳检测引物为RPA-1F/R,对应探针为RPA-P,最佳反应条件为40℃,25 min,且与其他5种柑橘病毒无交叉反应。该方法的灵敏度是RT-PCR的100倍,最低可检测到2.12×10^(1)拷贝·μL^(-1)的CTV核酸,与RT-qPCR相当。采用RT-RPA-LFD法在67份田间样品中检测出CTV阳性样品41份,与RT-PCR法检测结果一致。【结论】建立的CTV RT-RPA-LFD法具有操作简单、快速、结果可视等优点,适合基层植保工作者对田间样品开展快速检测。

基于胶体金侧向层析原理的大米中痕量镉现场快速检测方法

目的:建立一种可实现对大米中镉元素现场快速检测的胶体金试纸条检测方法。方法:基于侧向免疫层析技术,对胶体金试纸条一系列影响检测性能的参数进行系统优化。结果:所制备的胶体金试纸条对大米中镉元素的检测达到了可视化检测限为10 ng/g的水平。在实际应用中,此方法样品前处理过程操作简单,低浓度酸直接提取并稀释后即可用于试纸条检测。结论:胶体金试纸条快速检测方法适用于大米镉的现场快速筛检。

两种基于重组酶介导扩增技术的沙门氏菌检测方法比较

该研究旨在利用重组酶介导扩增技术建立并比较两种食品中沙门氏菌快速检测方法。根据沙门氏菌菌毛蛋白fimY基因设计引物和探针,分别采用荧光法和侧向流试纸条法对扩增产物进行检测,构建重组酶介导等温核酸扩增方法,验证两种方法的特异性、灵敏度及对人工污染样品的检测效果。该研究构建的两种方法均在39℃下恒温运行,检测时间30~40 min,方法特异性良好,与大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等常见的其他食源性致病菌无交叉反应,侧向流试纸条法灵敏度可达到1 pg/μL,荧光法灵敏度为10 pg/μL,对人工污染样品的检测结果与传统分离培养法检测结果一致。因此该研究建立了两种快速、特异、灵敏的方法用于检测沙门氏菌,为食品中沙门氏菌污染的快速筛查提供一定的参考价值和数据支撑。

大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

本文采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液标记大肠杆菌O157:H7抗体(6C1E5),然后将其包被于金标垫上,再将大肠杆菌O157:H7抗体(10G1A2)和兔抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素膜作为检测线和质控线,研制出的大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸检测灵敏度达104 CFU/mL,并与鼠寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌等8种菌株无交叉反应,显示出较强的特异性。

莱克多巴胺胶体金免疫层析试纸条的研制及性能测试

本实验用胶体金标记RAC单克隆抗体构建一种能够快速检测RAC的免疫层析试纸条,通过正交试验优化试纸条中标记pH、抗体的量、NC膜上RAC抗原及羊抗鼠抗体划线的浓度等因素得到最佳组合,并测定试纸条的特异性、稳定性、检测时间和检测限。结果表明:经过优化后得到的最佳组合为pH=6,标记抗体的量4μg,RAC抗原及羊抗鼠抗体的浓度分别为0.8 mg/mL和1.0 mg/mL;该试纸条可在5 min内特异性地检测RAC,检测限为2 ng/mL,在室温条件下能保存12个月。

基于金@铂纳米酶的食品中过氧化氢残留快速检测试纸的研制

为实现对食品中残留过氧化氢便捷、灵敏的检测,研制一种基于金@铂纳米酶的过氧化氢快速检测试纸。该试纸以Whatman No.1滤纸为载体,以金@铂纳米酶为催化剂,以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺为显色剂,以pH 4.6的醋酸-醋酸钠溶液为缓冲体系制备而成。通过优化试纸制作工艺,确定试纸浸泡时间为10 s,最快显色稳定时间为3 min。该试纸检出限为0.34 mg/kg,具有较好的线性关系(R^(2)=0.9931)。该试纸制作方便、准确度高、稳定性好、操作简单,可以应用于食品各流通环节的即时现场检测。

肉制品中卡那霉素胶体金快速检测试纸条的研制

为实现对肉制品中卡那霉素残留的快速检测,研制了一种卡那霉素胶体金检测试纸条.根据实验结果确定了胶体金试纸条的最佳制备条件,然后对研制的试纸条的灵敏度、特异性和稳定性进行测试.结果表明,该试纸条的最低检测限为100μg/L,试纸条对卡那霉素具有明显的特异性,稳定性好.该试纸条能够用于肉制品中卡那霉素残留的快速检测,而且经济、简便,具有实用价值.

量子点标记免疫层析试纸条检测谷物中T-2毒素

利用量子点(QDs)标记T-2抗体(QDs-Ab)作为信号探针,建立了一种量子点免疫层析检测方法(QDICA),用于快速检测谷物中的T-2毒素。结果表明,QDICA的检测限为5μg·L^(-1)。整体检测时间不超过10 min,方法特异性良好且具有一定的有效性。T-2-QDICA操作简便快速,成本低,满足谷物中T-2残留量的快速检测要求。