基于生信分析探索FOSL1对肝癌索拉非尼治疗抵抗的影响

目的:探究FOS样抗原1(FOS-like antigen 1,FOSL1)在肝癌组织中的表达及其对索拉非尼治疗抵抗的影响。方法:从公共数据库中获取数据进行WGCNA分析,对获取的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。选取血管生成通路差异表达基因,采用STRING数据库建立PPI网络,使用MCODE插件提取排名前7位的关键基因。在人类蛋白质图谱网站对这7个关键基因在肝癌血管内皮细胞表达情况进行筛选。采用Western blot法检测人微血管内皮细胞-1(human microvascular endothelial cells-1,HMEC-1)及肝癌血管内皮细胞(tumor-derived endothelial cells,TEC)中FOSL1的表达,CCK-8法检测HMEC-1及TEC细胞对索拉非尼敏感性,免疫组化检测肿瘤组织及正常肝组织中FOSL1表达。结果:GO功能富集分析图和KEGG通路富集分析图显示“索拉非尼抵抗”和“索拉非尼不抵抗”患者DEGs主要富集在管腔形成和血管生成等通路,KEGG通路主要富集在Wnt信号通路和VEGF信号通路。WGCNA分析得到关键模块,通过对关键模块基因筛选,最终得到JUND、JUNB、IL17RC、IL17RA、IL17F、IL1B、FOSL17个关键基因,其中FOSL1在血管生成中发挥重要作用。通过人类蛋白质图谱网站,发现FOSL1在肝脏各类细胞中表达,但在内皮细胞中表达较高。Western blot检测显示,FOSL1在TEC细胞中的表达水平明显高于HMEC-1细胞。免疫组化染色发现,肿瘤组织中FOSL1高表达,正常肝组织中FOSL1表达水平较低。CCK-8法检测显示,HMEC-1细胞对索拉非尼较敏感,而TEC细胞对索拉非尼不敏感。结论:FOSL1在肝癌血管内皮细胞中高表达,可能与促进血管内皮细胞增殖及索拉非尼治疗抵抗相关。

哮喘豚鼠气道上皮细胞原癌基因c-fos活化与ET-1释放相关性的研究

目的 探讨哮喘豚鼠发作时气道上皮细胞原癌基因c fos的活化与上皮细胞释放内皮素 1(ET 1)的相关性。方法将豚鼠随机分为哮喘组、地塞米松组和正常对照组。以卵蛋白致敏建立哮喘动物组模型 ;再给予肌注地塞米松 (0 .5mg kg)治疗则为地塞米松组。利用Dotblot与Northernblot及免疫组化染色法 ,研究c fos在气道上皮细胞中的表达 ;利用放射免疫法测定各组支气管 肺泡灌洗液 (BALF)中ET 1的含量。结果正常对照组有低水平的c fos基因表达和ET 1合成。哮喘组豚鼠在激发 30min后 ,气道上皮细胞c fosmRNA表达及Fos蛋白染色阳性颗粒都达到高峰 ,持续 2h左右。同时 ,BALF中ET 1的含量在 30min后也达到高峰 ,持续 2～ 3h。地塞米松组的c fosmRNA及蛋白表达水平均明显低于哮喘组 (P <0 .0 1) ,但高于正常对照组 ;并且该组BALF中ET 1的含量也低于哮喘组 (P <0 .0 1)。结论c fos基因活化与ET 1释放在哮喘豚鼠发病中都具有重要作用 ,两者密切相关。ET 1的释放可能受控于c

内皮素-1对培养新生大鼠心肌细胞原癌基因c-fos表达的诱导

本实验用无血清的培养新生大鼠心肌细胞，探讨内皮素１（ＥＴ１）对原癌基因ｃｆｏｓ表达的作用。结果显示：ＥＴ１可显著诱导ｃｆｏｓ的表达，其表达的高峰在３０ｍｉｎ，２ｈ恢复到正常水平，并呈剂量依赖性反应和被ＥＴＡ的特异性受体拮抗剂ＢＱ１２３所阻断；蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）激动剂ＰＭＡ可诱导ｃｆｏｓ表达，而ＰＫＣ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ则可阻断ＥＴ１诱导的ｃｆｏｓ表达；钙通道阻断剂硝苯吡啶预处理心肌细胞对ＥＴ１诱导的心肌细胞的ｃｆｏｓ表达无明显的作用。这些结果提示，ＥＴ１诱导ｃｆｏｓ表达是通过ＥＴＡ受体介导的，ＰＫＣ在此过程中起重要作用。

肥厚性瘢痕组织中VEGF、ICAM-1、c-fos表达的变化

目的 检测与血管内皮细胞激活及增生相关的血管内皮生长因子 (VEGF)、细胞间粘附分子 1(ICAM 1)、以及c fos原癌基因在肥厚性瘢痕组织中的表达。方法 采用免疫组化SP方法 ,比较VEGF、ICAM 1、c fos在肥厚性瘢痕、正常瘢痕、正常皮肤组织中的表达。结果 VEGF、ICAM 1、c fos在肥厚性瘢痕中表达皆增强。VEGF、c fos主要表达在表皮、真皮血管、皮肤附属器 ;ICAM 1主要表达在真皮浅层血管、浸润的炎细胞、成纤维细胞。结论 肥厚性瘢痕组织中血管内皮细胞处于一种激活状态 。

miR-200c-3p靶向FOSL1增加乳腺癌细胞化疗敏感性

化疗耐受是乳腺癌复发转移率居高不下、综合治疗效果难以提高的主要瓶颈。前期研究证实,miR-200c-3p在乳腺癌敏感细胞MCF-7中的表达量显著高于耐药细胞MCF-7/5Fu,提示miR-200c-3p可能参与乳腺癌化疗增敏,但是具体机制不详。生物信息学预测联合双荧光素酶报告基因实验证实,miR-200c-3p靶向调控FOSL1,且在多种肿瘤中miR-200c-3p与FOSL1表达负相关。实时荧光定量PCR技术和Western印迹技术证实,FOSL1在耐药细胞MCF-7/5Fu中的表达量显著高于亲本细胞MCF-7。在MCF-7细胞中,过表达FOSL1能够显著提高该细胞对5-Fu的化疗耐受;在MCF-7/5Fu中,使用siRNA技术沉默FOSL1,将提高该细胞对5-Fu的化疗敏感性。此外,MTT实验还发现,miR-200c-3p抑制剂能够显著上调MCF-7细胞对5-Fu的耐受,但是在此细胞中干扰FOSL1的表达,又可以增加其对5-Fu的化疗敏感性;miR-200c-3p mimics显著增加MCF-7/5Fu细胞的化疗敏感性,上调FOSL1表达后又可逆转miR-200c-3p mimics的化疗增敏作用。总之,miR-200c-3p能够通过靶向FOSL1增加乳腺癌细胞对5-fluorouridine化疗敏感性。

瘢痕疙瘩组织中ICAM-1、VEGF、c-fos表达的免疫组化检测

采取免疫组化SP方法检测了细胞间粘附分子 1(ICAM 1)、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、以及原癌基因 (c fos)在瘢痕疙瘩、普通瘢痕、正常皮肤组织中的表达。结果表明ICAM 1、VEGF、c fos在瘢痕疙瘩中表达皆增强。ICAM 1主要表达在真皮浅层血管、浸润的炎细胞、成纤维细胞 ;VEGF、c fos主要表达在表皮、真皮血管、皮肤附属器 ;部分瘢痕疙瘩标本成纤维细胞c fos染色阳性 ,提示瘢痕疙瘩组织中血管内皮细胞处于一种激活状态 ,瘢痕疙瘩组织血管内皮细胞和成纤维细胞增殖异常。

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织IL-1β与c-Fos的影响

目的:观察和探讨灵芝孢子粉对癫痫(EP)大鼠脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)和c-Fos含量变化的影响。方法:用放射免疫学方法检测IL-1β水平,用免疫组织化学方法检测c-Fos的表达。结果:灵芝孢子粉组脑皮质和海马区c-Fos阳性细胞数明显少于癫痫模型组动物,脑组织中IL-1β明显低于癫痫模型组动物。结论:灵芝孢子粉能够有效降低癫痫大鼠脑组织IL-1β水平,纠正免疫失调而起到抗癫痫作用;灵芝孢子粉能够抑制癫痫大鼠脑组织c-Fos的表达,阻断迟反应基因(LRG)以达到抗癫痫作用。

金雀异黄素对MCP-1诱导人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及c-fos mRNA转录的影响

目的研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白1(MCP1)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)增殖及cfosmRNA转录的影响。方法用不同浓度(10,30,90μmol·L-1)金雀异黄素预作用hUVSMC2h后加入终浓度为10μg·L-1的MCP1作用30min;采用逆转录聚合酶链反应检测细胞中cfos基因的表达;作用48h,用细胞计数检测细胞增殖的情况。结果金雀异黄素在低剂量(10μmol·L-1)即能抑制平滑肌细胞的增殖(P<0.05),在高剂量(30,90μmol·L-1)才能抑制细胞内cfosmRNA的表达(P<0.01,P<0.01)。结论金雀异黄素能抑制MCP1诱导的hUVSMC增殖,其机制可能与降低cfos的表达有关。

食管癌及癌旁组织中EGR-1、c-fos、cyclin D1的表达

目的 :研究EGR 1、c fos、cyclinD13种基因mRNA及其相应蛋白在人食管癌癌变过程中的表达水平及其相关性 ,并探讨其与食管癌的发生、发展及生物学行为的关系。方法 :应用原位杂交法检测 47例食管鳞状细胞癌及其癌旁、上切缘中 3种基因的mRNA、免疫组化SABC法检测蛋白表达水平。结果 :3种基因原位杂交、免疫组化阳性表达产物均分别定位于胞浆及胞核中。EGR 1mRNA、c fosmRNA、cyclinD1mRNA及蛋白分别在食管粘膜上皮非典型增生和鳞癌中呈高表达。表现为非典型增生粘膜中EGR 1、c fos表达高 ,cyclinD1表达低 ,进展为癌后 ,EGR 1表达下降 ,c fos表达持续 ,cyclinD1表达则变高 ;3种基因mRNA与其相应蛋白在各自高表达病变类型中表达具有一致性。结论 :食管癌癌变过程各病变类型EGR 1,c fos,cyclinD1表达不同 ,癌基因和抑癌基因的相互作用、相互制约将决定食管癌癌变过程的发生、发展及转归。

一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素-1诱导的心肌细胞原癌基因c-fos表达(英文)

在原代培养的新生大鼠心肌细胞上 ,探讨一氧化氮 (NO)对血管紧张素Ⅱ (AⅡ )和内皮素 1(ET 1)诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c fos表达的影响。用Bradford法测定心肌细胞总蛋白含量 (作为心肌细胞肥大的指标 ) ;用基因特异性引物和SuperScript一步法进行逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR) ,检测大鼠心肌细胞原癌基因c fos的表达 (以GAPDH为内标 )。结果显示 ,AⅡ和ET 1分别作用 5d和 3d后 ,心肌细胞总蛋白含量显著增加 ;硝普钠 (NO供体 )可抑制AⅡ或ET 1诱导的心肌细胞总蛋白增加。AⅡ ,ET 1和PMA (蛋白激酶C激动剂 )均可诱导心肌细胞原癌基因c fos的表达 ;L 精氨酸可抑制AⅡ ,ET 1和PMA诱导心肌细胞原癌基因c fos的表达 ,L NAME(NOS抑制剂 )可抑制L 精氨酸的这一作用 ;硝普钠对可抑制AⅡ ,ET 1和PMA诱导心肌细胞原癌基因c fos的表达。结果表明 ,NO可抑制AⅡ或ET 1诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c fos表达 ,其作用机制可能与蛋白激酶C这一环节有关。

侧脑室注射IL-1β、IL-1ra对癫痫大鼠脑皮层、海马Fos蛋白表达的影响

目的 了解外源性和内源性白细胞介素 - 1(IL- 1)对戊四氮 (PTZ)致痫大鼠脑皮层、海马神经元兴奋性的影响。方法 应用流式细胞免疫荧光技术对大鼠大脑皮层、海马 Fos表达进行定量分析。结果 IL- 1β和IL - 1ra侧脑室注射后再致痫大鼠分别较单纯 PTZ致痫大鼠皮层海马 Fos表达显著增高和下降 (P<0 .0 1,P<0 .0 5)。结论 内源性和外源性 IL- 1β均有增高癫痫大鼠脑皮层及海马神经元兴奋性的作用。

c-Jun、c-Fos对人牙本质基质蛋白1基因转录调控作用的研究

目的观察c-Jun和c-Fos对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因转录活性的影响。方法将pRSV-c-Jun和pRSV-c-Fos瞬时转染至HDPSCs中,检测转染后不同时间c-Jun、c-Fos蛋白的表达变化。将重组报告基因载体pGL3-P-505～+86与pRSV-c-Jun、pRSV-c-Fos分别共转染至细胞中,报告基因检测系统检测荧光素酶活性变化。结果瞬时转染c-Jun、c-Fos后,蛋白主要表达于HDPSCs细胞胞浆中,并且在转染48h后表达量均达到最高值;c-Jun和c-Fos能够降低pGL3-P-505～+86的荧光素酶活性,c-Jun降低DMP1启动子区-505～+86bp片段的荧光素酶活性更为显著(P<0.05)。结论 c-Jun和c-Fos可降低人DMP1基因转录活性,是HDPSCs向成牙本质细胞方向分化重要的调节因子,DMP1基因启动子序列-110～-100bp区可能是c-Jun、c-Fos有效作用位点。

IKKα通过不同机制介导生长促进和生长抑制信号诱导的c-Fos表达和AP-1活化

目的:探讨IKK激酶催化亚基IKKα在分别介导生长促进信号(血清)和生长抑制信号(紫外线UVB)诱导的反应中,调控转录因子AP-1关键组成亚基c-Fos实现诱导表达的信号传递机制。方法:分别采用Western印迹、RT-PCR和萤光素酶报道分析系统检测血清和紫外线刺激反应状态下IKKα对c-Fos诱导表达和AP-1诱导活化的调控作用;通过转染I-κBα功能抑制型突变体I-κBα-AA,观察NF-κB诱导活化受抑时,c-Fos诱导表达和AP-1诱导活化水平的改变情况。结果:IKKα在生长促进和生长抑制信号诱导的反应中,都能够实现对转录因子AP-1及其关键组成亚基c-Fos诱导表达的调控作用。其中,在血清反应中IKKα可通过NF-κB依赖方式在转录水平调控c-Fos的诱导表达,而在UVB反应中IKKα通过转录非依赖方式调控c-Fos的诱导表达。结论:IKKα能分别以NF-κB依赖和非依赖方式参与调控生长促进和生长抑制信号诱导的反应。

川芎嗪对肾缺血再灌注时c-fos bcl-2 ICAM-1蛋白表达的影响

目的 探讨大鼠肾缺血再灌注损伤不同时间c -fos、细胞淋巴瘤 /白血病 - 2、细胞间粘附分子- 1蛋白的表达及川芎嗪对其影响。方法 用免疫组化法检测大鼠急性肾缺血再灌注不同时间内及川芎嗪干预后c -fos、细胞淋巴瘤 /白血病 - 2、细胞间粘附分子 - 1蛋白表达的分布及强度变化。结果 c -fos蛋白分布于近曲小管、远曲小管、集合管上皮细胞的细胞核、细胞浆内 ,再灌注后 1h表达明显增强 ,3h达高峰 ,6h锐减。细胞淋巴瘤 /白血病 - 2蛋白主要分布于近曲小管上皮细胞的细胞浆 ,再灌注后 1h表达明显增强 ,6h达高峰 ,2 4h仍有较强表达。细胞间粘附分子 - 1蛋白分布在肾血管、肾小管等部位 ,其中以肾血管为著 ,其表达增强于再灌注后 1h ,直到 2 4h仍有增高趋势。川芎嗪干预后c -fos、细胞间粘附分子 - 1蛋白表达明显下降 (P <0 0 1 )。细胞淋巴瘤 /白血病 - 2表达明显增高 (P <0 .0 1 )。

新生大鼠窒息后肾组织c-fos和cyclinD_1的表达及意义

目的 :研究c -fos和cyclinD1在新生大鼠窒息后肾组织的表达及意义。方法 :4 5只新生大白鼠随机分成 4组 ,即对照组 (13只 ) ,窒息 30min后复氧 2h组 (10只 ) ,窒息 30min后复氧 2 4h组 (11只 ) ,窒息 30min后复氧 4 8h组 (10只 )。制成常压窒息模型。用免疫组化ABC法检测窒息后复氧不同时间点肾组织中c -fos,cyclinD1的表达。结果 :窒息后复氧 2h肾组织c -fos和cyclinD1的阳性细胞数开始增加 ,在 2 4～ 4 8h达高峰。同时c -fos和cyclinD1的表达主要集中在肾小球 ,远曲小管 ,集合管等处的细胞核中 ,而近曲小管的表达弱。结论 :c

大鼠心室肌α_1-肾上腺素能受体介导的c-fos、c-myc表达

目的 探讨去甲肾上腺素 (NE)诱导心肌细胞原癌基因的超常表达与适应性心肌肥大的关系及其受体介导和跨膜信号转导的作用。方法 以 10 - 6 mol LNE灌流大鼠离体心脏 1h ,采用逆转录—多聚酶链反应 (RT PCR)方法 ,测定不同实验条件下左心室c fos和c myc表达水平。结果 10 - 6 mol LNE灌流心脏后c fos和c myc表达均显著增强 ;用 5×10 - 6 mol L的哌唑嗪预先灌流可完全阻断NE诱导的c fos和c myc表达增强的效应 ;分别用 5 0mmol L的新霉素和 10 μmol L的钌红预先灌流心脏 ,可显著抑制NE诱导的c fos和c myc表达。结论 NE经α1 受体介导 ,可诱导心肌c fos和c myc表达增强 ;磷酸肌醇—钙信号系统和二酰基甘油—蛋白激酶C信号系统可能与NE诱导心肌c fos和c myc表达增强有关。

白细胞介素—1对大鼠下丘脑室旁核Fos癌蛋白和CRF的诱导作用

将白细胞介素-1(IL)注入大鼠侧脑室,用Fos癌蛋白抗体免疫组化法检测了下丘脑室旁核的激活神经元:大量位于含促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)相应区域的室旁核小细胞部神经元呈Fos免疫强阳性。Fos和CRF的免疫双染色显示了许多Fos免疫阳性神经元也呈CRF免疫阳性。此外,在IL-1注射动物中,CRF的免疫阳性显著加强,提示CRF合成增加。

STAT5与CyclinB1、CyclinD1、C-fos、C-myc在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨信号转导和转录激活因子-5(signal transducer and activator of transcripton5,STAT5)、细胞周期素B1(cy-clinB1)、细胞周期素D1(cyclinD1)蛋白、原癌基因c-fos和c-myc蛋白在非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法:用免疫组化SP、SABC法检测38例手术切除的非小细胞肺癌组织和20例正常肺组织中STAT5、cyclinB1、cyclinD1、c-fos和c-myc的蛋白表达。结果:STAT5、cyclinB1、cyclinD1、c-fos和c-myc在非小细胞肺癌中的表达明显高于正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.01);STAT5在非小细胞肺癌中的表达,与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期等病理因素无关(P>0.05),同样,在非小细胞肺癌中cyclinB1、cyclinD1、c-fos和c-myc的表达与上述临床病理因素也无关;STAT5和cyclinB1、cyclinD1在NSCLC组织中的表达均呈显著正相关(P<0.05);STAT5与c-fos、c-myc的表达均呈无相关(P>0.05)。结论:研究结果显示在非小细胞肺癌中存在STAT5、cyclinB1、cyclinD1、c-fos和c-myc的过度表达,但是与临床病理因素无关,提示它们参与了非小细胞肺癌的发生,但与肿瘤的进展可能无关。CyclinB1和cyclinD1的表达可能由STAT5调控;在NSCLC的发生中,STAT5可能通过上调cyclinB1和cyclinD1的表达,促进细胞周期进展和细胞的恶性转化,促进肿瘤的形成,而c-fos和c-myc可能不是通过STAT5信号途径来诱导肿瘤的发生。

无水酒精阻滞大鼠腹腔神经丛后脊髓、孤束核C-FOS和NOS-1的表达

目的:通过免疫组化的方法研究无水酒精阻滞大鼠腹腔神经丛后脊髓和延髓孤束核内CFOS和NOS1的表达。材料和方法:对70只Wistar大鼠实施手术,建立实验动物模型。分5组于术后不同时间取得脊髓和延髓样本,并用标准方法对其进行CFOS和NOS1免疫组化染色,观察脊髓和延髓孤束核CFOS和NOS1的表达。结果:无水酒精阻滞后脊髓后角、延髓孤束核神经元细胞内均有CFOS和NOS1表达。结论:无水酒精阻滞腹腔神经丛后,短时间内脊髓后角和延髓孤束核内CFOS和NOS1表达阳性,表明FOS和NOS1与内脏信息在脊髓水平的传导有关。CFOS和NOS1参与了内脏信息在孤束核内的传导。

SDF-1/CXCR4信号通路对骨癌痛大鼠脊髓背角FOS蛋白表达的影响

目的观察SDF-1/CXCR4信号通路对骨癌痛(cancer induced bone pain,CIBP)大鼠脊髓背角FOS蛋白表达的影响。方法 40只健康雌性SD大鼠随机分成5组:Normal组,Sham-Veh组,Sham-AMD3465组,CIBP-Veh组及CIBPAMD3465组。第4、5组大鼠胫骨内注射Walker肿瘤细胞(乳腺癌细胞)构建骨癌痛模型;第2、3、4和5组术后第1 d至术后第14 d连续给予AMD3465(CXCR4一种选择性拮抗剂)/Veh;术前第1 d至术后第14 d采用Von-Frey机械细丝连续观察大鼠的术侧后足痛阈改变;免疫荧光双重标记法观察SDF-1/CXCR4在脊髓背角的细胞分布;Western blot定量检测脊髓背角SDF-1与CXCR4蛋白的表达水平;免疫组织化学染色法观察脊髓背角FOS阳性细胞表达数。结果术后第1 d至7 d,大鼠术侧后足的机械痛阈缓慢降低,在术后第7 d降至最低,第7 d至第14 d痛阈维持在较低水平,给予CXCR4选择性拮抗剂AMD3465后大鼠术侧痛阈明显上升。SDF-1和CXCR4表达在神经元上,Western blot检测结果进一步说明CIBP模型大鼠脊髓背角内SDF-1和CXCR4的表达明显增加(P<0.05),给予CXCR4选择性拮抗剂AMD3465后,SDF-1和CXCR4蛋白的显著降低(P<0.05);CXCR4选择性拮抗剂AMD3465能够有效降低FOS阳性细胞的数量。结论 SDF-1/CXCR4信号通路参与骨癌痛的发生发展,并可调控脊髓背角内FOS蛋白的表达。