金雀异黄酮抑制OPN-FAK信号通路对非小细胞肺癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨金雀异黄酮(GS)抑制骨桥蛋白(OPN)/黏着斑激酶(FAK)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移和侵袭的影响。方法:qRT-PCR检测四种NSCLC细胞系(H596、H520、A549、H1703)及正常人肺上皮细胞(BEAS-2B)中OPN、FAK mRNA表达水平;以A549细胞为研究目标,分别设置对照组、GS低浓度(GS-L)组(10μmoL/L)、GS中浓度(GS-M)组(20μmoL/L)、GS高浓度(GS-H)组(40μmoL/L)、重组骨桥蛋白(rOPN)组(15ng/mL)、GS-H+rOPN组(40μmoL/L GS+15ng/mL rOPN)。分别利用MTT法、流式细胞仪检测上述各组细胞增殖率、凋亡率;划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移、侵袭变化;Western blot及qRT-PCR检测OPN/FAK信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与BEAS-2B细胞相比,A549细胞中OPN、FAK mRNA表达水平变化最为显著(P<0.05)。与对照组相比,GS-L组、GS-M组、GS-H组A549细胞增殖率、迁移率、侵袭及迁移数、OPN/FAK信号通路相关基因和蛋白表达显著降低,凋亡率显著增加(P<0.05);rOPN组A549细胞增殖率、迁移率、侵袭及迁移数、OPN/FAK信号通路相关基因和蛋白表达显著增加,凋亡率显著降低(P<0.05)。与GS-H组相比,GS-H+rOPN组A549细胞增殖率、迁移率、侵袭及迁移数、OPN/FAK信号通路相关基因和蛋白表达显著增加,凋亡率显著降低(P<0.05)。与rOPN组相比,GS-H+rOPN组A549细胞增殖率、迁移率、侵袭及迁移数、OPN/FAK信号通路相关基因和蛋白表达显著降低,凋亡率显著增加(P<0.05)。结论:GS可以抑制NSCLC-A549细胞的迁移、侵袭及增殖,促进其凋亡,可能与抑制OPN/FAK信号通路有关。

吉马酮调节FAK/YAP信号通路对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨吉马酮(GMC)调节局部黏着斑激酶(FAK)/Yes相关蛋白(YAP)通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 将A549/DDP细胞分为CK组、低剂量GMC组(GMC-L组,5μmol/L)、中剂量GMC组(GMC-M组,10μmol/L)、高剂量GMC组(GMC-H组,20μmol/L)、GMC-H+pcDNA组(20μmol/L+转染pcDNA)、GMC-H+pcDNA-FAK组(20μmol/L+转染pcDNA-FAK)。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;检测多药耐药基因1(MDR1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化的FAK(p-FAK)、YAP蛋白表达情况。结果 与CK组比较,GMC-L组、GMCM组、GMC-H组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与GMC-H组、GMC-H+pcDNA组比较,GMC-H+pcDNA-FAK组A549/DDP细胞OD_(450)值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 GMC可能通过抑制FAK/YAP信号通路减弱NSCLC细胞DDP耐药性。

粘着斑相关非激酶对骨桥蛋白促血管平滑肌细胞迁移的抑制作用及分子机制

为阐明整合素 β3 粘着斑激酶 (FAK)信号途径在骨桥蛋白 (OPN)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用 ,用FAK磷酸化特异性抑制剂粘着斑相关非激酶 (FRNK)选择性阻断FAK磷酸化 ,观察对OPN 整合素 β3 相互作用所激活的FAK信号通路的影响及其与OPN诱导VSMC迁移之间的关系 .外源性FRNK在VSMC中的过表达可显著抑制OPN诱导的VSMC迁移 ,使跨膜迁移细胞数下降 5 0 5 8% (P <0 0 5 ) .OPN刺激不但明显诱导FAK表达 ,而且还促进其磷酸化 .外源性FRNK对OPN诱导的FAK磷酸化具有显著抑制作用 ,使磷酸化型FAK水平比相应对照细胞下降5 9 1% ,但其对FAK表达不产生明显的影响 .FRNK还具有下调整合素 β3 表达的作用 ,免疫荧光细胞化学分析结果显示 ,在转染FRNK的VSMC中 ,粘着斑蛋白的磷酸化水平降低 ,粘着斑数量明显减少 .结果提示 ,整合素 β3 FAK是介导VSMC迁移的重要信号途径 ,外源性FRNK通过下调 β3 表达、抑制FAK磷酸化和减少粘着斑蛋白磷酸化及粘着斑形成等机制 ,减弱OPN刺激信号的跨膜转导及沿胞内途径传递 ,发挥抑制OPN促VSMC迁移的效应 .

FRNK质粒转染抑制肝星状细胞胶原合成

目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对纤维连接蛋白(FN)刺激的肝星状细胞(HSCs)胶原合成的影响。方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;采用Western blotting方法测定FRNK蛋白在HSCs的表达,鉴定转染效果;[3H]-Pro掺入法检测HSCs总胶原和Ⅰ型胶原的合成能力。结果:FRNK质粒成功转染HSCs,于转染48 h时FRNK蛋白表达最强(P<0.05);在FRNK转染HSCs 48 h后总胶原合成能力(498.17±73.20)较空质粒组(748.33±61.30)显著下降(P<0.01);在FRNK转染HSCs 48 h后Ⅰ型胶原合成能力(163.17±23.80)较空质粒组(371.58±15.44)亦显著下降(P<0.01)。结论:FRNK可以使HSCs总胶原和Ⅰ型胶原合成能力降低,提示其对肝星状细胞胶原合成功能具有负调控作用。

膜型基质金属蛋白酶-1在黏着斑激酶相关非激酶调控肝星状细胞胶原代谢中的作用

目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对纤维连接蛋白(FN)刺激的肝星状细胞(HSC)膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)表达的影响并探讨MT1-MMP在FRNK调控HSC胶原代谢中的作用。方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;采用Western blotting法测定FRNK蛋白在瞬时转染时相应的表达,鉴定转染效果;分别应用Western blotting和RT-PCR方法测定MT1-MMP在HSC中的相应表达。结果:FRNK质粒成功转染HSC,于转染48h时,FRNK蛋白表达最强,P<0·05;FRNK转染后在基因水平上:MT1-MMP mRNA表达明显增加;翻译蛋白水平上:FRNK质粒转染HSC48h后,MT1-MMP蛋白表达量显著升高。结论:脂质体介导下FRNK质粒转染,可使外源性FRNK在HSC内大量表达,FRNK可能通过上调MT1-MMP值来抑制HSC胶原合成。

FRNK抑制体外肝星状细胞增殖

目的用FRNK表达质粒瞬时转染FN诱导的HSCs,探讨FRNK对HSCs增殖的影响。方法在脂质体介导下用FRNK表达质粒瞬时转染HSCs,用改良的MTT技术测定细胞增殖,用Western blot及RT-PCR技术检测各指标蛋白及mRNA表达。结果与nFRNK组相比,FRNK在FN诱导的HSCs中大量表达后,于12、24和48h的增殖抑制率分别为20.07%、26.16%和29.77%(P<0.01);FRNK抑制FAK磷酸化和ERK1、p-ERK的表达,而FN则促进FAK、ERK1和p-ERK表达。结论在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒,可时间依赖性的抑制HSCs增殖;FAK-ERK信号传导通路可能参与了该过程。

FRNK抑制人乳腺癌细胞体外增殖及机制研究

目的:研究黏着斑相关非激酶(focal adhesion kinase related non-kinase,FRNK)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用及相关机制。方法:通过RT-PCR方法克隆目的基因FRNK,构建pcDNA3.1-FRNK重组质粒;经脂质体分别介导重组质粒(pcDNA3.1-FRNK)、阳性对照质粒(pcDNA3.1-GFP)和空质粒(pcDNA3.1)转染MCF-7细胞,以正常MCF-7细胞作为空白对照;通过检测转染后细胞FRNK蛋白的表达,并结合转染pcDNA3.1-GFP后细胞表达荧光的多寡来评估转染效率;采用MTT法研究转染后12、24、48和72h各时间点细胞的增殖情况;转染质粒48h后,采用流式细胞术分析MCF-7细胞周期,Westernblot法检测细胞核内NF-κBp65的表达。结果:pcDNA3.1-FRNK质粒可经脂质体介导高效转染MCF-7细胞,促进细胞FRNK的表达,FRNK表达量在转染后48h达高峰;转染pcDNA3.1-FRNK后,MCF-7细胞增殖趋缓,且这种抑制增殖呈一定的时间依赖性;转染FRNK基因后,S+G2/M期的细胞比例较正常细胞显著下降(P<0.05);转染pcDNA3.1-FRNK后MCF-7细胞核内NF-κBp65蛋白表达减少。结论:FRNK可抑制MCF-7细胞增殖,其抑制作用与下调NF-κBp65核易位相关。

整合素β1、FAK和pY397FAK在非小细胞肺癌组织中的表达

通过检测整合素β1亚基、FAK和其磷酸化形式pY397FAK在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和正常支气管黏膜上皮中的表达,探讨整合素β1与FAK在NSCLC发生、浸润和转移中的作用。应用免疫组织化学方法检测整合素β1、FAK和pY397FAK在72例NSCLC、29例淋巴结转移癌和19例正常支气管黏膜上皮中的表达,并与临床病理指标结合起来进行分析。

FRNK质粒转染抑制肝星状细胞增殖机制研究

目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)质粒瞬时转染肝星状细胞(HSC),对纤维连接蛋白(FN)刺激的HSC增殖的影响及其机制。方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒转染;Western blot技术检测FRNK、黏着斑激酶(FAK)、p-FAK(Tyr^(397))蛋白的表达情况,鉴定转染效果;改良MTT法测定HSC增殖;流式细胞术(FCM)检测细胞周期时相。结果:FRNK质粒转染HSC 48 h时,FRNK蛋白表达最强(P<0.01);FAK蛋白转染前后无明显差异(P>0.01);FRNK质粒组p-FAK(Tyr^(397))蛋白含量(0.40±0.14)较空质粒组(1.89±0.25)显著下降(P<0.01);FRNK在HSC大量表达后,于转染12 h、24 h、48 h的HSC增殖抑制率分别为20.07%、26.16%和29.77%(P<0.01),呈时间依赖性关系;FRNK质粒组G0/G1期细胞数(71.4±2.81)较空质粒组(48.9±1.66)明显增加(P<0.01)。结论:脂质体介导下FRNK质粒转染,可使外源性FRNK在HSC内大量表达,抑制FAK磷酸化,阻滞HSC周期时相于G0/G1期,抑制HSC增殖。

黏着斑激酶相关非激酶质粒转染对肝星状细胞凋亡的影响

目的:应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染肝星状细胞(HSCs),探讨FRNK选择性抑制黏着斑激酶(FAK)磷酸化对FN刺激的HSCs凋亡的影响。方法:在体外培养HSCs,以FN刺激HSCs增殖,采用脂质体介导的方法进行FRNK表达质粒转染。应用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术、DNA凝胶电泳技术和透射电镜技术检测细胞的凋亡,Western blotting及RT-PCR方法检测FRNK、FAK、p-FAK(Tyr397)、caspase-3蛋白及其mRNA表达。结果:FRNK表达质粒成功转染HSCs,在翻译后水平抑制FAK磷酸化;FRNK表达质粒转染HSCs48h后,细胞凋亡率增加,与空质粒组之间有显著差异[(25.37±1.92)%vs(9.28±1.05)%],P<0.01,伴随caspase-3在翻译和转录水平的增高[(264.17±12.60vs185.82±9.69),P<0.01;(4.19±0.48vs1.07±0.27),P<0.01]。结论:在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒,可使外源性的FRNK在HSCs内大量表达,在翻译后水平抑制FAK磷酸化;可以诱导FN刺激的HSCs发生凋亡。

Cortactin及FAKPY397在非小细胞肺癌中的表达及关系

目的:探讨皮层肌动蛋白(cortactin)及磷酸化黏着斑激酶(focal adhesion kinase PY397,FAKPY397)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达情况及与临床病理因素之间的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测114例NSCLC及相应癌旁正常肺组织中cortactin及FAKPY397的表达情况。结果:Cortactin在正常肺组织中表达阳性率为19.3%(22/114),显著低于其在NSCLC组织中的阳性率为57.9%(66/114,P<0.001)。Ⅲ、Ⅳ期组中cortactin表达阳性率为78.8%(26/33)显著高于Ⅰ、Ⅱ期组的49.4%(40/81,P=0.004),有淋巴结转移组中cortactin阳性率为74.0%(37/50)显著高于无淋巴结转移组的45.3%(29/64,P=0.002)。FAKPY397在正常肺组织中表达阳性率为25.4%(29/114),显著低于其在NSCLC组织中的阳性率为52.6%(60/114)。Ⅲ、Ⅳ期组中FAKPY397的表达阳性率为69.7%(23/33)显著高于Ⅰ、Ⅱ期组中的阳性率为45.7%(37/81,P=0.020),有淋巴结转移组中FAKPY397阳性率为64.0%(32/50)显著高于无淋巴结转移组的43.8%(28/64,P=0.032)。Speaman相关性分析表明在NSCLC中,cortactin的表达与FAKPY397的表达呈正相关(r=0.436,P<0.01)。结论:NSCLC中cortactin的表达与FAKPY397的表达呈正相关,二者协同表达可能是促进NSCLC进展的因素之一。

长链非编码RNA POU3F3在黑色素瘤中的表达及其与转移的关系

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) POU3F3在黑色素瘤中的表达变化, 以及lncRNA POU3F3与黑色素瘤转移的关系。方法选取来郑州大学第一附属医院2022年1月至2023年5月收治并接受手术治疗的47例患者的临床样本作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术分析黑色素瘤和癌旁组织lncRNA POU3F3的表达水平, 并采用免疫组织化学分析肿瘤组织和癌旁组织中黏着斑激酶(FAK)、β-连环蛋白(β-catenin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)和锌指转录因子Snail蛋白的表达水平。相关性分析lncRNA POU3F3和转移相关蛋白水平的关系。采用Transwell分析lncRNA POU3F3敲降对细胞迁移和侵袭的影响。组间计量数据比较采用t检验。相关性分析采用皮尔森分析。结果癌旁组织中lncRNA POU3F3表达水平(1.23±0.18)明显低于黑色素瘤组织表达水平(2.31±0.19), 差异有统计学意义(t=27.890, P<0.05)。癌旁组织中FAK和β-catenin表达水平(58.98±11.11、73.38±12.26)明显低于黑色素瘤组织(96.28±11.74、129.60±14.61), 差异有统计学意义(t=16.660、20.200, P<0.05)。癌旁组织中N-Cadherin和Snail表达水平(45.83±13.49、55.47±7.35)明显低于黑色素瘤组织(82.17±21.99、93.47±11.70), 差异有统计学意义(t=8.846、18.860, P<0.05)。lncRNA POU3F3表达水平与FAK、β-catenin、N-Cadherin和Snail表达水平呈正相关(r=0.587、0.671、0.814、0.344, P<0.05)。lncRNA POU3F3敲降细胞迁移和侵袭数量[(45.75±9.19)、(36.13±8.76)个]明显低于对照组细胞[(92.50±5.04)、(66.13±9.51)个], 差异有统计学意义(t=12.610, 6.564, P<0.05)。结论 lncRNA POU3F3在黑色素瘤组织中表达显著上调, 并与肿瘤组织中转移相关蛋白FAK、β-catenin、N-Cadherin和Snail表达呈正相关。敲降lncRNA POU3F3可显著抑制黑色素瘤细胞的转移特性。

趋化因子受体4、黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-9在非小细胞肺癌组织的表达及其临床意义

目的探讨趋化因子受体4(CXCR4)、黏着斑激酶(FAK)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平与非小细胞肺癌临床病理学特征的关系。方法选取2019年6月至2022年1月新乡医学院第三附属医院收集的79例非小细胞肺癌肺癌和癌旁组织作为研究对象,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肺癌组织和癌旁组织中CXCR4、FAK和MMP-9表达水平,并分析不同年龄段、性别、分化程度、临床分期和淋巴结转移等病理特征患者癌组织中CXCR4、FAK和MMP-9表达水平,分析CXCR4、FAK和MMP-9表达水平与非小细胞肺癌临床病理学特征的相关性。结果非小细胞肺癌组织CXCR4、FAK和MMP-9蛋白表达水平(1.94±0.41、2.23±0.42、2.06±0.44)明显高于癌旁组织表达水平(0.92±0.17、0.80±0.21、0.93±0.21),差异有统计学意义(t=20.590,26.750,20.450,P均<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期患者非小细胞肺癌组织CXCR4、FAK和MMP-9蛋白表达水平(2.09±0.20、2.39±0.22、2.23±0.25)明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者表达水平(1.82±0.50、2.10±0.51、1.92±0.53),差异有统计学意义(t=3.066,3.280,3.292,P均<0.05)。低分化患者非小细胞肺癌组织CXCR4、FAK和MMP-9蛋白表达水平(2.05±0.22、2.35±0.23、2.18±0.27)明显高于中高分化患者表达水平(1.75±0.25、2.09±0.27、1.86±0.30),差异有统计学意义(t=2.693,2.979,2.903,P均<0.05)。淋巴结转移患者非小细胞肺癌组织CXCR4、FAK和MMP-9蛋白表达水平(2.04±0.24、2.34±0.26、2.14±0.26)明显高于无淋巴结转移患者表达水平(1.82±0.27、2.10±0.29、1.97±0.36),差异有统计学意义(t=3.360,3.704,2.183,P均<0.05)。CXCR4、FAK和MMP-9表达水平与非小细胞肺癌患者淋巴结转移、分化程度和临床分期均呈明显正相关(P<0.05),与性别、年龄无相关(P>0.05)。结论非小细胞肺癌组织中CXCR4、FAK和MMP-9表达水平明显高于癌旁组织,且表达水平与分化程度、临床分期和淋巴结转移呈正相关。

黏着斑激酶相关非激酶对肝星状细胞凋亡及细胞外信号调节激酶的影响

目的应用黏着斑激酶相关非激酶（FRNK）表达质粒瞬时转染纤维连接蛋白（FN）预刺激的肝星状细胞（HSC），探讨FRNK对HSC凋亡及细胞外信号调节激酶（ERK）的影响。方法在体外，以FN诱导HSC增殖，采用脂质体介导的方法用FRNK表达质粒瞬时转染HSC，应用膜联蛋白／碘化丙啶双标记流式细胞术、DNA凝胶电泳技术和透射电镜技术检测细胞的凋亡，Western blot及RT-PCR方法检测FRNK、黏着斑激酶（FAK）、p-FAK（Tyr^397）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）、ERK1、PERK蛋白及其mRNA表达。结果FRNK表达质粒成功转染HSC，在翻译后水平抑制FAK磷酸化。与空质粒组比较，FRNK表达质粒转染HSC 48h后，HSC凋亡率由9．28％±1．05％增至25．37％±1．92％（P〈0．01），caspase-3蛋白由185．82±9．69增至264．17±12．60（P〈0．01），caspase-3mRNA由1．07±0．27增至4．19±0．48（P〈0．01）。FRNK抑制FAK磷酸化和在翻译和转录水平抑制ERK1、p-ERK的表达，而FN则促进FAK和ERK1、pERK在翻译和转录水平的表达。结论在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒，可使外源性的FRNK在HSC内大量表达，在翻译后水平抑制FAK磷酸化；并可能通过FAK-ERK信号转导通路诱导FN刺激的HSC发生凋亡。

黏着斑激酶相关非激酶对CFSC细胞基质金属蛋白酶-2及其抑制因子mRNA表达的影响

目的探讨黏着斑激酶相关非激酶（FRNK）对纤维连接蛋白刺激的肝星状细胞CFSC胶原代谢的影响及其分子机制。方法用体外细胞培养技术、脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染；采用Western blot方法测定FRNK蛋白表达，鉴定转染效果；用^3H Pro掺入技术测定CFSCI型胶原的合成；用RTPCR方法测定FRNK转染前后基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其抑制因子（TIMP2）基因在CFSC中表达的变化情况。结果FRNK质粒成功转染CFSC，Ⅰ型胶原合成下降；MMP2基因表达上升，TIMP2基因表达下降，MMP2／TIMP2比值明显上升。结论外源性FRNK在CFSC内大量表达后，CFSC胶原表达减少；FRNK可能通过调节MMP2／TIMP2比值来促进CFSC的胶原降解。

肾癌索拉非尼耐药相关长链非编码RNA诱导骨肉瘤U2OS细胞侵袭和转移的机制

目的:探讨肾癌索拉非尼耐药相关长链非编码RNA(lncRNA-SRLR)对骨肉瘤U2OS细胞侵袭和转移的机制。方法:应用慢病毒空载对照(LV-NC)和慢病毒lncRNA-SRLR过表达载体(LV-over/SRLR)转染U2OS细胞,并建立细胞稳转株U2OS/NC和U2OS/SRLR。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA-SRLR和赖氨酸羟化酶(PLOD2)mRNA的相对表达量。采用transwell和划痕实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测白细胞介素6(IL-6)的表达情况。采用荧光原位杂交技术(FISH)检测lncRNA-SRLR细胞定位。采用免疫荧光法检测PLOD2蛋白的表达情况。采用Western blot法检测PLOD2和FAK/STAT3通路相关蛋白的表达情况。结果:qRT-PCR检测结果显示,U2OS/NC和U2OS/SRLR细胞中lncRNA-SRLR mRNA的相对表达量分别为1.00±0.01和3 964.97±0.05,差异有统计学意义( P<0.001)。PLOD2 mRNA在U2OS/SRLR细胞中的表达量为2.77±0.11,明显高于对照U2OS/NC细胞(1.00±0.04, P<0.01)。划痕实验和侵袭实验均显示,U2OS/SRLR细胞的迁移和侵袭能力明显高于U20S/NC细胞( P<0.05)。ELISA法检测结果显示,U2OS/NC和U2OS/SRLR细胞上清液中IL-6的表达水平分别为(125.38±11.22)pg/ml和(119.97±13.43)pg/ml,差异无统计学意义( P>0.05)。免疫荧光检测结果显示,U2OS/SRLR细胞中PLOD2蛋白的表达明显高于U2OS/NC细胞。Western blot法检测结果显示,U2OS/SRLR细胞中PLOD2、p-FAK和p-STAT3等蛋白的相对表达量明显高于U2OS/NC细胞,差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:lncRNA-SRLR可能通过作用于PLOD2,激活FAK/STAT3通路诱导了骨肉瘤U2OS细胞的侵袭和转移。

抑制FAK对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的探索在非小细胞肺癌细胞中黏着斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）对细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法利用基因沉默技术（siFAK）和FAK抑制剂（PF573228）处理A549细胞，Western印迹检测FAK的表达和磷酸化；MTS和集落形成实验检测抑制FAK对细胞生长及集落形成的影响：利用TransweU和划痕实验评估抑制FAK对A549细胞迁移和侵袭的影响：Western印迹检测细胞信号通路分子的表达情况。结果转染siFAK的细胞FAK和p-FAK表达显著降低，FAK抑制剂（PF573228）能显著抑制FAK的激活。干扰FAK的表达后，可明显抑制非小细胞肺癌细胞A549的迁移和侵袭（P〈0．001）：而用FAK抑制剂PF573228抑制FAK的磷酸化后也明显地抑制了细胞的迁移和侵袭（P〈0．001）。干扰和抑制FAK表达后，细胞中p-src、p-ERK1／2、p-Akt、MMP9和Calpain2的表达都显著下调。结论通过转染siFAK和FAK抑制剂抑制FAK的激活，都能明显抑制A549细胞生长和集落形成，并显著降低细胞的迁移和侵袭能力。FAK主要通过Src、ERK1／2和Akt信号通路发挥作用，且MMP9和Calpain2可能与FAK介导的肿瘤细胞迁移和侵袭相关。