超声造影联合血清Ficolin-3,FOXM1对2型糖尿病下肢动脉病变的诊断价值分析

目的超声造影联合血清纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)、叉头框蛋白M1(FOXM1)对2型糖尿病(T2DM)下肢动脉病变的诊断价值分析。方法选取2022年2月至2023年2月我院收治的T2DM患者114例,以下肢动脉血管造影检查为金标准,将患者分为下肢动脉病变组23例(病变组)和无下肢动脉病变组91例(T2DM组),另选取同期于本院进行体检的健康志愿者91例为对照组。对患者及健康志愿者进行血清Ficolin-3、FOXM1及超声造影检查;ROC曲线分析血清Ficolin-3、FOXM1对T2DM下肢动脉病变的诊断价值;采用四格表法分析血清Ficolin-3、FOXM1、超声造影及3项联合对T2DM下肢动脉病变的诊断价值。结果病变组、T2DM组血清Ficolin-3水平显著高于对照组,且病变组血清Ficolin-3水平显著高于T2DM组(均P<0.05);病变组、T2DM组血清FOXM1水平显著低于对照组,且病变组血清FOXM1水平显著低于T2DM组(均P<0.05);血清Ficolin-3诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.868,敏感度为86.96%,特异度为75.82%,最佳截断值为35.12μg/ml;血清FOXM1诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.854,敏感度为82.61%,特异度为78.02%,最佳截断值为0.57;血清Ficolin-3、FOXM1检查结果与金标准均具有中度一致性(Kappa=0.480、0.481,均P<0.001);超声造影检查结果显示,T2DM下肢动脉病变的阳性检出率为73.91%,与金标准具有较高一致性(Kappa=0.631,P<0.001);3项联合检测的敏感度、漏诊率均显著优于超声造影单独诊断,准确度显著优于Ficolin-3、FOXM1单独诊断,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论血清Ficolin-3、FOXM1联合超声造影检查在T2DM下肢动脉病变诊断中的应用价值较高,进一步提升了诊断的敏感度、准确度,减少了误诊率。

哮喘小鼠CD4^+T细胞中microRNA-31和FOXP3 mRNA的表达及相互关系的研究

目的初步探讨哮喘CD4+T细胞中microRNA-31和FOXP3的表达水平、两者的相关性及激素对它们的影响。方法以卵蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘小鼠模型。将15只BALB/c小鼠分为正常对照组、OVA组和地塞米松组,ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IFN-γ水平;实时荧光定量PCR检测小鼠脾脏CD4+T细胞的microRNA-31和FOXP3 mRNA的水平,并分析二者之间的相关性。结果 OVA组BALF中IL-4水平高于正常对照组[(228.29±66.18)pg/ml vs(66.63±17.33)pg/ml,P<0.05],地塞米松组BALF中IL-4水平与正常对照组或OVA组相比,无统计学差异。各组间IFN-γ无统计学差异。OVA组CD4+T细胞中FOXP3 mRNA为正常对照组的0.10倍(P<0.05);地塞米松组CD4+T细胞中FOXP3 mRNA为OVA组的3.75倍(P<0.05);正常对照组与地塞米松组之间FOXP3mRNA无统计学差异。OVA组的microRNA-31为正常对照组4.79倍(P<0.05);地塞米松组的microRNA-31为正常对照组4.85倍(P<0.05);OVA组microRNA-31水平和地塞米松组相比无统计学差异。microRNA-31和FOXP3 mRNA的Pearson相关系数为-0.609(P<0.05)。结论哮喘中microRNA-31和FOXP3 mRNA具有相关性。microRNA-31与地塞米松可能通过不同的途径调节CD4+T细胞中FOXP3 mRNA的表达。

慢性阻塞性肺疾病的炎症反应与Foxp3、T-bet、GATA3表达失衡有关

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠调节性T细胞(Treg)、叉头状转录因子3(Foxp3)、T-bet、GATA连接蛋白3(GATA3)的变化。方法将30只大鼠随机分为对照组、模型组,每组15只。模型组大鼠采用烟熏加脂多糖(LPS)气管滴入方法建立COPD模型。模型复制成功第28天,采用ELISA检测大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)白介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平,流式细胞术检测外周血Treg表达,分别采用逆转录PCR及Western blot法检测肺组织Foxp3、T-bet、GATA3mRNA和蛋白表达。结果模型组大鼠肺泡腔及肺间质内大量炎性细胞浸润,肺组织结构破坏。与对照组比较,模型组大鼠血清IFN-γ表达升高(P<0.01),IL-4、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg降低(P<0.05);模型组Foxp3、GATA-3mRNA、蛋白表达降低,T-bet mRNA和蛋白升高(P<0.01)。相关性分析显示,T-bet、GATA-3、Foxp3基因和蛋白表达与IL-4、IFN-γ分泌相关(P<0.05)。结论 COPD炎症反应与T-bet、GATA-3、Foxp3表达失衡有一定关系。

乳腺癌CD4^+ CD25^(high) Foxp^(3+)调节性T细胞数量和分布及Foxp3mRNA表达与肿瘤分期的相关性研究

目的研究乳腺癌患者CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)的存在数量、分布情况,及其功能基因Foxp3mRNA的表达变化与国际抗癌联盟(UICC)乳腺癌的TNM分期的关系。方法用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合分析40名健康对照者及40例乳腺癌患者(临床TNM分期T1期9例、T2期10例、T3期12例、T4期9例)外周血、肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)及癌旁淋巴结中CD4+CD25high Foxp3+Treg的数量及分布情况。实时荧光定量PCR技术检测TregFoxp3mRNA表达水平。结果乳腺癌患者外周血CD4+CD25high Foxp3+Treg占CD4T细胞的百分比为(8.91±3.06)%,高于正常健康对照组(5.84±2.63)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者TIL、癌旁淋巴结中Treg占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血,差异有统计学意义(P均<0.01)。乳腺癌组织TIL和癌旁淋巴结中Treg的Foxp3平均荧光强度(MFI)显著高于外周血(P<0.05)。T1、T2、T3、T4期乳腺癌患者Treg比例分别为(5.81±1.89)%、(6.52±2.15)%、(9.65±3.14)%、(11.86±2.43)%。乳腺癌患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA表达水平明显高于健康对照组(P<0.01)。相关分析显示,Treg数量与肿瘤TNM分期显著相关(r=0.7 576,P<0.01);Foxp3基因mRNA表达水平与乳腺癌TNM各分期呈显著相关性(r=0.6 129,P<0.05)。结论乳腺癌患者CD4+CD25high Foxp3+Treg的数量升高,其增高程度与肿瘤临床分期呈显著正相关。乳腺癌患者外周血和癌组织局部Treg的数量、分布情况及特异性转录因子Foxp3mRNA的表达强度均有所不同,提示这可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25high Foxp3+Treg将来可作为乳腺癌患者病情进展的重要判断指标之一。

IL-17和Foxp3在小鼠克罗恩病模型中的表达及其意义

目的观察小鼠克罗恩病模型外周血单核细胞及结肠组织中白细胞介素（IL）17、叉头状/翅状螺旋蛋白3（Foxp3）的表达,探讨其在2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的克罗恩病小鼠急性炎症中的作用。方法共40只6~8周龄雌性Bal/c小鼠,采用随机数字表法随机分为两组,20只以TNBS/乙醇溶液灌肠诱导克罗恩病模型（实验组）,另外20只小鼠以同等浓度的乙醇氯化钠灌肠（正常对照组）。干预1周后行疾病活动指数（DAI）,结肠病理组织学评分（TDI）和结肠大体形态损伤指数（CMDI）评价,以实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测小鼠外周血单核细胞IL-17mRNA、Foxp3 mRNA的表达,采用免疫印迹法检测小鼠结肠组织IL-17蛋白、Foxp3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,实验组的DAI、TDI、CMDI显著升高[DAI（5.41±0.48）比（0.85±0.07）,TDI（5.63±0.74）比（0.74±0.08）,CMDI（6.88±0.84）比（0.91±0.06）,P〈0.01],外周血单核细胞的IL-17 mRNA显著升高[（1.118±0.145）比（1.000±0.000）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈正相关（r=0.875,0.935,0.825,P〈0.01）,Foxp3 mRNA显著降低[（0.797±0.271）比（1.000±0.000）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈负相关（r=-0.885,-0.734,r-0.812,P〈0.01）,结肠组织IL-17蛋白显著上升[（0.631±0.331）比（0.272±0.112）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈正相关（r=0.765,0.778,0.734,P〈0.01）,Foxp3蛋白显著降低[（0.274±0.112）比（0.592±0212）,P〈0.01],与DAI、TDI及CMDI呈负相关（r=-0.889,-0.809,-0.851,P〈0.01）。结论在TNBS诱导的结肠炎中,Th17/Treg轴的免疫偏倚是导致克罗恩病发生和发展的重要因素。

子痫前期患者蜕膜中CD_4^+CD_(25)^+调节性T细胞的Foxp3表达

目的初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞在子痫前期患者胎盘附着处蜕膜中表达及其临床意义。方法选择子痫前期30例和正常晚期妊娠30例,采用免疫组化法检测蜕膜CD4+CD25+调节性T细胞的特异性转录因子Foxp3的阳性表达率,分析比较两组检测结果。结果蜕膜中Foxp3在子痫病例组及正常对照组的阳性表达率分别为16.67%和66.67%,子痫病例组Foxp3阳性表达率明显低于正常对照组(P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞的特异性转录因子Foxp3在子痫前期患者蜕膜组织中阳性表达率减低,其免疫抑制功能减弱,从而使母胎免疫耐受失衡、受损,免疫排斥作用增强,导致子痫前期的发生。

Pgp1和FoxP3在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨P-糖蛋白1(Pgp1)和核转录因子蛋白3(FoxP3)在结直肠癌中的表达及其与预后的关系。方法选取2012年2月至2015年2月我院保存的结直肠癌标本106例,同时选取癌旁组织标本64例作为对照,采用免疫组化染色法检测Pgp1和FoxP3表达,同时根据Pgp1和FoxP3表达情况将患者分为Pgp1和FoxP3双阴性表达(A组),Pgp1单阳性表达(B组)、FoxP3单阳性表达(C组),Pgp1和FoxP3双阳性表达(D组)。结果结直肠癌组织Pgp1和FoxP3蛋白阳性表达率分别为63.21%和43.40%,明显高于癌旁组织(P<0.05);结肠癌Pgp1蛋白阳性表达率为78.95%,明显高于直肠癌(P<0.05);FoxP3表达与患者临床病理特征以及治疗方案无明显关系(P>0.05);B组中位总体生存时间为52个月(95%CI:40.01～63.99),明显高于A组、D组和C组(P<0.05);A组和D组中位总体生存时间为40个月(95%CI:31.20～48.80)和34个月(95%CI:30.74～37.26),明显高于C组的24个月(95%CI:18.56～29.44),比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Pgp1和FoxP3表达与结直肠癌临床病理特征关系较弱,其中仅Pgp1表达与肿瘤位置有一定相关性;Pgp1和FoxP3表达与结直肠癌患者预后有一定关系,其中Pgp1阳性表达,FoxP3阴性表达者预后较好。

豚鼠肺气肿模型肺组织Foxp_3、RORγt及IL-17的表达及意义

目的采用弹性蛋白主动免疫方法制造豚鼠肺气肿模型,与传统熏烟制造模型方法比较,探究弹性蛋白抗体对肺气肿的影响;探讨豚鼠肺气肿模型肺组织中叉头状/翅状螺旋蛋白3(Foxp3)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素17(IL-17)的表达和意义。方法分别采用熏烟、弹性蛋白主动免疫的方法制造豚鼠肺气肿模型;测量各组模型中肺泡平均半径;免疫组化技术检测肺组织Foxp3、RORγt和IL-17。结果熏烟组及主动免疫组平均肺泡半径明显长于对照组(P<0.05)。熏烟组及主动免疫组较对照组肺组织中Foxp3阳性细胞数减少,RORγt阳性细胞增多,Foxp3/RORγt比值表达失衡,IL-17表达水平增强(P<0.05),熏烟组与主动免疫组比较差异无统计学意义。相关性分析提示豚鼠肺组织Foxp3/RORγt阳性细胞比值与IL-17及平均肺泡半径呈负相关(P<0.05)。结论弹性蛋白主动免疫可以导致豚鼠肺气肿发生;熏烟组及主动免疫组豚鼠肺气肿模型肺组织中存在Foxp3/RORγt表达失衡,这种失衡可能是免疫调节细胞CD4+T细胞及效应细胞Th17细胞表达失调的重要机制,从而可能参与慢性阻塞性肺疾病(COPD)自身免疫调节,对COPD的发生发展有一定的促进作用。

CDKN3和FOXA1 mRNA在直肠癌中的表达关系及意义

目的:探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(CDKN3)和叉头框蛋白A1(FOXA1)mRNA在直肠癌中的表达水平及其临床意义。方法:选取2017年11月至2020年3月在唐山市协和医院和解放军陆军第82集团军医院就诊的94例直肠癌患者作为观察组,另选取同时期在医院进行常规体检的健康人群95例,作为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测直肠癌患者血清中的CDKN3和FOXA1 mRNA表达情况;分析高、低级别直肠癌患者血清CDKN3和FOXA1 mRNA的表达水平;分析CDKN3、FOXA1 mRNA水平与直肠癌患者临床病理特征的关系;预测CDKN3和FOXA1 mRNA水平对高、低直肠癌患者的诊断价值。结果:观察组血清中CDKN3与FOXA1 mRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05);高级别直肠癌患者血清中CDKN3、FOXA1 mRNA的表达量明显高于低级别直肠癌患者(P<0.05);直肠癌患者血清中CDKN3、FOXA1 mRNA表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结是否转移有关(P<0.05);CDKN3 mRNA诊断高、低级别直肠癌的ROC曲线下面积为0.839,截断值为5.317,灵敏度为63.8%,特异性为94.4%;FOXA1 mRNA诊断高、低级别直肠癌的ROC曲线下面积为0.853,截断值为0.740,灵敏度为70.7%,特异性为97.2%。结论:直肠癌患者血清中CDKN3、FOXA1 mRNA表达量上升,且高级别直肠癌患者二者表达量显著高于低级别直肠癌患者,CDKN3、FOXA1 mRNA参与直肠癌病情进程与发展,对高、低级别直肠癌诊断具有一定价值。

孕晚期胎膜早破孕妇阴道内菌群变化、外周血单个核细胞FoxP3、STAT5表达及妊娠结局

目的:孕晚期胎膜早破(PROM)孕妇阴道内菌群变化、外周血单个核细胞叉头翼状螺旋转录因子3(FoxP3)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)表达及其妊娠结局分析。方法:收集2020年6月-2021年12月本院收治的PROM孕妇(PROM组)123例和正常妊娠晚期孕妇(对照组)120例临床资料,检测分娩前阴道分泌物微生物分布,外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平及血清IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10水平,分析两组阴道菌群分布与FoxP3、STAT5 mRNA表达水平的差异。结果:PROM组乳酸杆菌患者占比(51.2%)低于对照组(75.0%),革兰阳性杆菌(15.5%)、革兰阳性球菌(13.0%)、溶血性葡萄球菌(21.1%)、粪肠球菌(25.2%)、阴沟肠杆菌(17.9%)占比高于对照组(6.7%、5.0%、8.3%、10.0%、7.5%),外周血单个核细胞FoxP3(0.78±0.12)、STAT5 mRNA(1.04±0.22)表达水平均低于对照组(1.26±0.34、1.75±0.42)(均P<0.05);与对照组比较,PROM组血清IFN-γ、IL-12水平升高,IL-4、IL-10水平降低,且PROM组阴道微生态失调孕妇外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平低于阴道微生态正常孕妇,妊娠结局不良者外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平低于妊娠结局良好者(均P<0.05)。结论:PROM患者外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平降低,与患者阴道内菌群变化和妊娠结局有关,可能是PROM发生的相关机制。

非小细胞肺癌患者癌组织中HMGB1、MMP-9和FOXP3表达水平及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FOXP3)表达水平及临床意义。方法选取100例NSCLC患者作为研究对象,采用回顾性分析法分析所有患者的临床资料及随访资料,根据其资料结果收集100例NSCLC患者的100份癌组织(研究组)及100份癌旁正常组织标本(对照组),所有标本组织均行HMGB1、MMP-9和FOXP3水平的检测,根据其资料及检测结果记录所有患者的性别、年龄等一般临床资料及肿瘤情况、HMGB1、MMP-9和FOXP3水平及预后等情况。结果(1)NSCLC患者癌变组织中HMGB1、MMP-9和FOXP3的阳性表达率均显著高于癌旁正常组织,比较差异间均具有统计学意义(P<0.05);(2)HMGB、MMP-9和FOXP3阴性和阳性患者其5年总生存率差异均具有统计学意义(分别为χ^2=6.863,P=0.009;χ^2=5.804,P=0.016;χ^2=8.854,P=0.003);(3)吸烟、肿瘤低分化、出现淋巴结转移以及HMGB1、MMP-9、FOXP3阳性表达和临床分期为Ⅲ+Ⅳ期的NSCLC患者其5年生存率均显著降低(P<0.05);(4)经多因素Cox比例风险回归模型分析:肿瘤低分化、临床分期为Ⅲ+Ⅳ期、出现淋巴结转移及HMGB1、MMP-9、FOXP3阳性均为影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论HMGB1、MMP-9和FOXP3在NSCLC患者的癌组织中均表现为较高水平,且其阳性表达联合肿瘤低分化、临床分期为Ⅲ+Ⅳ期和出现淋巴结转移均为影响NSCLC患者预后的独立危险因素。

免疫浸润相关基因mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中的表达及其与预后的关系

目的探讨免疫浸润相关基因mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中的表达水平及其与预后的关系。方法选取延安大学附属医院2017年1月至2019年1月宫颈癌患者74例作为宫颈癌变组,宫颈癌前病变患者74例作为宫颈癌前病变组,另选取同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者74例作为宫颈正常组,比较3组免疫浸润相关基因[人类白细胞抗原G(HLA-G)、叉状头螺旋转录因子3(FOXP3)、T细胞免疫球蛋白粘连蛋白-3(TIM-3)]、恶性生物学行为相关基因[侵袭基因p21-活化的激酶6(PAK-6)、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子(EZH2)、增殖基因血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、同源盒基因B7(HOXB7)]的mRNA相对表达量,分析免疫浸润相关基因与宫颈癌发生及宫颈癌恶性生物学行为的关系,并统计对比不同免疫浸润相关基因表达水平患者3年生存率。结果HLA-G、FOXP3、TIM-3 mRNA相对表达量为宫颈癌变组>宫颈癌前病变组>宫颈正常组(P<0.05);不同临床分期、分化程度,以及有无淋巴结转移、有无脉管浸润患者的HLA-G、FOXP3、TIM-3、PAK-6、EZH2、ANGPTL4、HOXB7 mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA高表达患者宫颈癌前病变进展至宫颈癌的风险分别是低表达患者的3.005倍、4.654倍、3.343倍;宫颈癌患者HLA-G、FOXP3、TIM-3 mRNA与侵袭相关基因PAK-6、EZH2 mRNA、增殖相关基因ANGPTL4、HOXB7的mRNA表达呈正相关(P<0.05);随访3年,失访2例,72例宫颈癌患者3年生存率为68.06%(49/72),HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA高表达患者3年生存率均低于低表达患者(P<0.05)。结论免疫浸润相关基因HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中呈上调表达,会显著增加宫颈癌发病风险,且与宫颈癌恶性生物学行为密切相关,还可能对生存预后产生重要影响。

TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用

目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及EB病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,EBI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及EBI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P<0.0001)且细胞增殖能力下降(P<0.0001),所以选择100μg/mL Pg⁃LPS用于模拟炎症状态。10、100 ng/mL TGF⁃β1能提高炎症状态下hPDLFs的增殖能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1能促进炎症状态下hPDLFs的迁移能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可加快炎症状态下hPDLFs的细胞周期(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可抑制炎症状态下hPDLFs的IL⁃6基因和蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的EBI3基因及蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的Foxp3基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(P<0.05)。结论TGF⁃β1可促进炎症状态下hPDLFs的增殖及迁移能力、上调EBI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。

氟暴露对大鼠肾脏损伤及SIRT3-FOXO3a-PINK1/PARKIN通路的影响

目的探讨氟暴露对大鼠肾脏损伤及沉默信息调节因子3(SIRT3)-叉头蛋白O3a(FOXO3a)-张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(PARKIN)通路的影响。方法选取4周龄SD大鼠(清洁级,体质量100~150 g)24只,按随机数字表法分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组8只(雌雄各半)。对照组自由饮用自来水(氟离子浓度<0.5 mg/L),低、高氟组分别自由饮用自来水和氟化钠配制的溶液(氟离子浓度分别为5.0、50.0 mg/L),周期为180 d。实验结束后,观察并记录大鼠氟斑牙形成情况,采集大鼠股骨、尿液、血液,检测骨氟、尿氟、血氟含量,并检测肾脏功能相关指标(血清尿酸、肌酐、尿素氮含量);光镜下观察苏木素-伊红(HE)染色肾组织形态学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和蛋白质印迹法分别检测肾脏SIRT3、FOXO3a、PINK1、PARKIN、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬受体蛋白(P62)mRNA和蛋白表达水平。结果低、高氟组大鼠分别有7、1只检出Ⅰ度氟斑牙,0、7只检出Ⅱ度氟斑牙。与对照组比较,低、高氟组大鼠骨氟(μg/g:1.18±0.06、2.16±0.07比0.52±0.05)、尿氟(mg/L:4.43±0.11、7.46±0.09比2.58±0.14)、血氟含量(μg/ml:0.77±0.06、1.68±0.10比0.52±0.08),血清尿酸(μg/ml:61.01±4.17、103.92±5.43比28.68±2.91)、肌酐(μg/ml:74.82±9.61、132.05±5.35比22.38±4.11)、尿素氮含量(μg/ml:13.36±1.27、14.55±0.34比0.29±0.07)均较高(均P<0.05)。光镜下,对照组肾组织表现为肾小管和肾小球细胞排列紧密且整齐,细胞形态规则,轮廓完整清晰;低氟组与对照组相似,未见明显异常;高氟组可见肾小球结构异常,出现萎缩现象,部分区域肾小管表现为上皮细胞水肿和细胞间界限不清。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,低、高氟组SIRT3(0.82±0.03、0.58±0.02比1.00±0.08)和P62 mRNA表达水平(0.75±0.07、0.28±0.09比1.00±0.07)均较低(均P<0.05);FOXO3a(1.35±0.04、3.01±0.23比1.00±0.08),PINK1(1.58±0.09、3.28±0.09比1.00±0.07),PARKIN(1.51±0.04、1.67±0.10比1.00±0.05)和LC3 mRNA表达水平(1.74±0.07、2.38±0.18比1.00±0.08)均较高(均P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组比较,低、高氟组SIRT3(0.91±0.01、0.55±0.03比1.00±0.01)和P62蛋白表达水平(0.94±0.27、0.66±0.38比1.00±0.19)均较低(均P<0.05);FOXO3a(1.14±0.03、1.22±0.05比1.00±0.02),PINK1(1.46±0.03、1.56±0.03比1.00±0.05),PARKIN(1.98±0.02、2.33±0.11比1.00±0.06)和LC3蛋白表达水平(4.10±0.58、4.93±0.33比1.00±0.13)均较高(均P<0.05)。结论氟暴露可致大鼠肾组织损伤,SIRT3、P62表达水平下调,FOXO3a、PINK1、PARKIN及LC3表达水平上调。

血清FOXQ1、CEACAM19、CA72-4、CA15-3检测对宫颈癌患者的早期诊断效果分析

目的研究宫颈癌早期诊断中应用糖类抗原72-4(CA72-4)、糖类抗原15-3(CA15-3)、叉头框蛋白Q1(FOXQ1)、癌胚抗原相关细胞黏附分子19(CEACAM19)的效果。方法以南华大学附属长沙中心医院2021年1月-2023年1月收治的90例宫颈癌患者为A组,以该院同期收治的90例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者为B组,另以同期在该院进行体检的90例健康女性为对照组,三组均采集血样检测相关血清学指标水平。结果A组CA72-4、CA15-3、FOXQ1、CEACAM19水平均高于B组与对照组,且B组高于对照组(P<0.05);低中分化宫颈癌患者CA72-4、CA15-3、FOXQ1、CEACAM19水平高于高分化患者(P<0.05);CA72-4、CA15-3、FOXQ1、CEACAM19均为宫颈癌发生的危险因素(P<0.05);CA72-4、CA15-3、FOXQ1、CEACAM19联合检测受试者工作特征曲线下面积高于单独检测(P<0.05)。结论FOXQ1、CEACAM19、CA72-4、CA15-3水平在宫颈癌患者中明显升高,其联合检测能够提高宫颈癌早期诊断效能。

应用iDC从G-CSF动员的外周血中诱导产生CD4^＋CD25^＋调节性T细胞

目的探讨在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的外周血单个核细胞(PBMC)中诱导产生CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的可行性及其表型和功能。方法收集G-CSF动员和未动员的BALB/c♀鼠的PBMC,采用磁活性标记的细胞分选法(MACS)分选BALB/c♀鼠的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞及C57BL/6♂鼠的CD11c+未成熟树突细胞(iDC),建立细胞培养体系,经iDC体外诱导G-CSF动员和未动员的CD4+CD25-T细胞转换为CD4+CD25+Treg细胞(iTreg)。分别应用流式细胞术、混合淋巴细胞反应技术检测诱导后细胞的CD25、Foxp3的表达水平以及抑制功能,比较G-CSF动员与非动员组间iTreg的表型和抑制功能的差异。结果 iDC诱导G-CSF未动员和动员的组间CD25+分子表达率分别为(76.8±4.1)%和(90.4±5.3)%,差异有统计学意义(P<0.01);两组诱导产生的CD25+T细胞的Foxp3表达水平分别为(64.1±2.7)%和(59.5±3.2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。iDC诱导G-CSF未动员和动员的外周血产生的iCD4+CD25+Treg均表现出免疫抑制功能,其中动员后诱导生成的iTreg的免疫抑制效应明显增强。结论应用iDC从G-CSF动员的外周血中诱导产生的iCD4+CD25+Treg具有更强的体外抑制效应,为自身免疫性疾病的治疗提供新的思路和手段。

骨髓间充质干细胞注射抑制败血症大鼠的炎症反应

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)对败血症大鼠的治疗作用。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、治疗组。利用盲肠结扎造瘘术(CLP)制备大鼠败血症模型,提取BMSC培养至第三代,治疗组大鼠尾静脉注射BMSC,模型组大鼠注射等剂量的PBS。观察各组大鼠术后72 h后存活率,取大鼠肺脏组织HE染色观察病变情况,心脏采血应用实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、叉头盒蛋白3(Foxp3)、CC趋化因子配体2(CCL2)的mRNA水平,ELISA检测IL-6、IL-17、TNF-α的蛋白水平。结果空白组大鼠与假手术组大鼠的存活率以及肺组织形态均未见明显异常、大鼠血培养未见细菌生长;IL-6、IL-17、TNF-α、CCL2、Foxp3 mRNA和蛋白水平无明显差别。模型组中大鼠存活率明显低于假手术组,组织病变明显,大鼠血培养可见大量肠杆菌生长。外周血单个核细胞IL-6、IL-17、TNF-α、CCL2 mRNA和IL-6、IL-17、TNF-α蛋白的表达水平较假手术组明显增高,而Foxp3的mRNA表达水平较假手术组明显降低。治疗组中大鼠存活率明显高于模型组,肺组织病变明显减轻,IL-6、IL-17、TNF-α和CCL2 mRNA和蛋白的表达水平较模型组明显降低,而Foxp3的mRNA表达水平较模型组组明显增高。结论 BMSC治疗可增加败血症大鼠存活率,降低炎性细胞因子水平。

输血相关急性肺损伤患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T淋巴细胞变化的临床意义

目的检测输血相关急性肺损伤（TRALI）患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T淋巴细胞（Treg）的计数及其功能基因又头框蛋白3（Foxp3）mRNA的表达水平，以及探讨其与疾病预后的关系。方法收集2008年6月至2011年11月期间健康体检者（对照组，n=30）和重症监护病房收治的TRALI患者[TRALI组，n=26，TRALI组按预后又分为死亡组（n=5）和存活组（n=21）]外周抗凝血，采用流式细胞术分析各组T细胞亚群。采用四色流式细胞术以Foxp3-FITC／CD25-PE／CD4-PerCP／CD3-PC7抗体组合检测各组受试者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的计数，比较死亡组和存活组患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的水平。实时荧光定量PCR技术检测特异性转录因子Foxp3mRNA的表达水平，并分析患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg的比例与Foxp3mRNA的表达水平的关系。结果TRALI患者与对照组健康人间CD3＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞计数的差异无统计学意义，而CD3＋CD8＋T细胞则较对照组增加（P〈0．05），CD4＋／CD8＋比值降低（P〈0．05）。死亡组CD3＋CD8＋T细胞比例高于存活组（P〈0．05），C133＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞比例和CD4＋／CD8＋比值则低于存活组（均P〈0．05）。TRALI患者外周血CD4＋CD2.5high Foxp3＋Treg计数为（8．86±3．14）％，明显高于健康对照组（5．67±2．43）％（P〈0．05）。TRALI死亡组患者外周血CD4＋CD2shighFoxp3＋Treg计数为（11．23±3．79）％，显著高于存活组患者（7．69±3．21）％（P〈0．05）。TRALI患者外周血Foxp3mRNA的表达水平为（3．77±2．73）×10^5拷贝/ug，显著高于对照组（0．43±0．21）×10^5拷贝／μg（P〈0．05）。TRALI患者外周血CD4＋CD25highFoxp3＋Treg计数与Foxp3mRNA的表达水平呈正相关（r=0．5131，P〈0．05）。结论TRAM患者外周血CD4＋CD.5highFoxp3＋Treg和Foxp3mRNA的变化可能是导致TRALI疾病发展的关键因素之一，与疾病预后有密切关系。

叉头／翼状螺旋转录因子3基因多态性与溃疡性结肠炎的关系

目的在浙江籍汉族人群中探讨叉头/翼状螺旋转录因子3 （Foxp3）基因多态性与溃疡性结肠炎（UC）易感性的关系。方法收集381例UC患者和490名年龄、性别相匹配的健康对照者，采用多重SNaPshot技术检测Foxp3基因4种单核苷酸多态性（SNP） （rs3761547、rs2232365、rs2294021、rs3761548），并进行连锁不平衡和单倍型分析。结果男、女性UC组分别与男、女性对照组比较，Foxp3的4种SNP（rs3761547、rs2232365、rs2294021、rs3761548）的等位基因和基因型频率的差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。依据疾病严重程度和累及部位分层分析。男性重度UC患者中，rs2232365、rs2294021、rs3761548的等位基因C、G、A频率均显著高于男性对照组（69.6%比34.3%，P＝0.001；69.6%比34.3%，P＝0.001；39.1%比14.4%，P＝0.002）。与女性对照组相比，女性重度UC患者中不仅rs2232365、rs2294021、rs3761548的等位基因C、G、A频率更高（51.9%比38.0%，P＝0.049；63.5%比39.2%，P＝0.001；53.8%比21.4%，P〈0.001），而且基因型（TC＋CC）、（AG＋GG）、（CA＋AA）的频率亦更高（80.8%比57.7%，P＝0.022；84.6%比58.4%，P＝0.009；76.9%比34.7%，P〈0.001）。虽然上述4种SNP彼此紧密连锁，但男、女性UC组分别与男、女性对照组比较，各单倍型频率的差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。结论浙江籍汉族人群中Foxp3（rs2232365、rs2294021、rs3761548）基因变异可能增加重度UC发病风险。

穴位注射对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg相关转录因子及细胞因子表达的影响

目的:观察穴位注射对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜叉头状转录因子p3(Foxp3)和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、血清白细胞介素-17(IL-17)表达的影响,从Th17/Treg平衡角度探讨穴位注射治疗AR的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、穴位注射组、非经非穴组,每组8只。采用卵清蛋白致敏法复制AR模型。穴位注射组每隔3d于"印堂"和双侧"迎香"注射地塞米松、转移因子和利多卡因混合液各0.1mL,共4次。非经非穴组同样方法于大鼠左右臀部"后海"与"环跳"连线中点和左(或右)前肢腋窝直下5cm处注射。采用叠加量化记分法进行行为学评分,采用免疫组织化学法检测鼻黏膜中Foxp3和RORγt的表达,酶联免疫吸附法检测血清中IL-17的表达。结果:模型组症状评分高于正常组(P<0.05),穴位注射组症状评分低于模型组和非经非穴组(P<0.05),非经非穴组症状评分略低于模型组,但差异无具统计学意义(P>0.05)。模型组较正常组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率降低(P<0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率增高、血清IL-17表达升高(P<0.05),Foxp3/RORγt比值下降(P<0.05)。与模型组和非经非穴组比较,穴位注射组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率增高(P<0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率、血清IL-17表达降低(P<0.05),Foxp3/RORγt比值升高(P<0.05)。大鼠鼻黏膜Foxp3表达与症状评分呈负相关(P<0.05),鼻黏膜RORγt表达和血清IL-17表达与症状评分呈正相关(P<0.05),鼻黏膜Foxp3/RORγt与症状评分呈负相关(P<0.05)。结论:穴位注射可通过上调鼻黏膜Foxp3表达水平,下调鼻黏膜RORγt表达水平,纠正其失衡,并抑制IL-17产生,从而缓解鼻部炎性反应。