Forkhead box protein 3 mRNA expression in the peripheral blood of kidney-transplant recipients with acute rejection

Background Regulatory T cells （Tregs） are immunologically and clinically interesting not least because of the important role they play in allograft rejection. Likewise, expression of the transcription factor forkhead box protein 3 （FOXP3）, detected in transplant biopsies, is also of intere.（;t because of its role in the development of regulatory T cells. In this study, we investigated the relationship between FoxP3 mRNA expression and acute organ rejection in kidney-transplant recipients. Methods In this prospective study, FoxP3 mRNA expression levels in peripheral blood samples from 10 recipients of living relative-donor kidney transplants were measured before transplantation as well as at the 14th and 90th days post-transplantation. In addition, 46 first-time kidney-transplant recipients participated in a cross-sectional study, with 28 patients classified as having acute organ rejection; whilst the remaining 18 patients had functionally stable allografts. FoxP3 mRNA expression levels in peripheral blood samples were compared between these two different groups. Results Before transplantation mean FoxP3 mRNA levels vs. GADPH mRNA levels （Ig（FoxP3 mRNA/GADPH mRNA）） in the 10 recipients were 1.11±0.67. The mean FoxP3 mRNA expression levels measured at 14th and 90th days post-transplantation were significantly higher than before transplantation （1.69±0.38, P=0.03; 1.44±0.21, P=0.04, respectively）. Additionally, the mean FoxP3 mRNA levels vs. GADPH mRNA expression levels （Ig（FoxP3 mRNA/GADPH mRNA）） were significantly higher in recipients suffering acute rejection compared with those with stable allografts （1.77±0.61 and 1.43±0.27, respectively, P=0.03）. Conclusions After kidney transplantntion, FoxP3 mRNA levels were found to increase in the peripheral blood of all recipients. Considerably higher FoxP3 rnRNA levels were observed in recipients suffering acute rejection. These results suggest that FoxP3 mRNA levels in peripheral blood samples can be used as a diagnostic tool for identifying acute rejection.

Foxp3在小鼠肺发育中的动态表达及意义

目的:通过分析叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)在小鼠肺发育过程中的表达及其与肺发育相关标志物之间的关系,探讨Foxp3在肺发育中的可能作用。方法:根据小鼠肺发育的进程,选取胎鼠及新生鼠分为6组,分别于孕17.5 d及出生后1、4、7、14、21 d留取肺组织,HE染色观察肺组织形态,免疫组织化学染色检测CD31含量并观察肺微血管密度。qRT-PCR检测Foxp3及肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)、血管生成素-1(angiopoietin 1,Ang-1)mRNA表达,蛋白质印迹法检测Foxp3及SP-C、VEGF-A、Ang-1蛋白表达。结果:肺组织内Foxp3 mRNA在孕17.5 d小管期表达最高,后呈现不断减少趋势。SP-C mRNA在小鼠出生后1 d表达最高,随后逐渐减弱,直至肺泡化晚期。VEGF-A、Ang-1 mRNA在孕17.5 d表达最高,之后呈现不断减少趋势,最终趋于稳定。Foxp3蛋白在小管期已有表达,且在小管期及囊泡期表达最高,其后逐渐趋于平稳,VEGF-A及Ang-1在小管期及囊泡期表达亦最高,后逐渐减少;SP-C表达于出生后1 d达到最高,随后逐渐减少,并于肺泡化中晚期趋于平稳。相关性分析显示,Foxp3与SP-C、VEGF-A及Ang-1存在相关性(r分别为0.661、0.630和0.738)。结论:Foxp3在胎肺期及出生后早期呈现动态表达,Foxp3在小管期及囊泡早中期的高表达与SP-C、VEGF-A及Ang-1呈正相关,提示Foxp3可能促进肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞的增殖,参与肺发育过程。

EBV miR-BART17-3p对原发免疫性血小板减少症患儿Treg/Th17平衡的影响

目的探讨EBV mi R-BART17-3p影响原发免疫性血小板减少症(ITP)患儿Treg/Th17平衡的机制。方法收集ITP患儿(ITP组,20例)和健康儿童(对照组,20例)外周血并分离CD_(4)^(+)T细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法、Western blot法、酶联免疫吸附法检测EBV mi R-BART17-3p、T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)、叉头框蛋白P3(Fox P3)、白细胞介素17A(IL-17A)和转化生长因子-β(TGF-β)的m RNA、蛋白表达水平及含量。采用双荧光素酶报告基因实验考察EBV mi R-BART17-3p对Tim-3表达水平的影响。将15只BALB/C小鼠随机分为空白对照组、模型组、观察组,各5只。腹腔注射抗血小板抗体MWReg30以复制ITP小鼠模型,建模4 d后观察组小鼠予尾静脉注射携带EBV mi R-BART17-3p inhibitor的腺病毒载体。细胞染色并观察形态,检测外周血中TGF-β、IL-17A含量及血小板计数,采用流式细胞仪分别检测CD_(4)^(+)T细胞中Th17和Treg水平,并计算二者百分比。结果与对照组比较,ITP组患儿外周血EBV mi R-BART17-3p表达水平显著升高,Tim-3和TGF-βm RNA表达水平显著降低(P<0.05);Tim-3 m RNA表达水平与EBV mi R-BART17-3p表达水平呈显著负相关(r=-0.732,P<0.001)。Tim-3慢病毒载体p LKO.1-sh-Tim-3(sh-Tim-3)可显著降低Tim-3、Fox P3、TGF-β水平(P<0.05)。mi R-BART17-3p mimic显著升高了CD_(4)^(+)T细胞中mi R-BART17-3p的表达水平,并显著降低了Tim-3、Fox P3、TGF-βm RNA和蛋白表达水平(P<0.05);mi R-BART17-3p mimic可显著降低TGF-β含量,Tim-3+mi R-BART17-3p过表达逆转了mi R-BART17-3p mimic对TGF-β的抑制作用。动物实验结果显示,沉默EBV mi R-BART17-3p可促进Treg分化,减少脾脏和骨髓组织中的巨核细胞计数,并显著增加外周血中血小板计数。结论EBV mi R-BART17-3p可通过Fox P3/Tim-3途径调节ITP患儿Treg/Th17的免疫失衡。

甲状腺乳头状癌组织中肿瘤转移相关基因1、叉头翼螺旋转录因子3水平变化与临床病理特征及淋巴转移的关系

目的:探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)、叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)淋巴转移患者中的作用及临床意义。方法:选取手术治疗的111例PTC患者为研究对象,收集患者的癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法观察组织中MTA1、FOXP3表达情况;采用多因素Logistic回归风险模型分析影响PTC淋巴转移的因素。结果:111例PTC组织标本中,MTA1的阳性表达率(MTA1阳性例数/癌组织总例数)为78.38%(87/111)高于癌旁组织17.12%(19/111),FOXP3在PTC组织中的阳性表达率(FOXP3阳性例数/癌组织总例数)为70.27%(78/111)高于癌旁组织13.51%(15/111),两组比较差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman等级相关分析结果显示MTA1与FOXP3表达呈正相关(r=0.532,P=0.000);PTC患者癌组织中MTA1与FOXP3表达与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);单因素分析结果显示淋巴转移患者与未转移患者在性别、病灶数、包膜侵犯、TNM分期、脉管侵犯、MTA1及FOXP3等病理特征方面比较有统计学差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示性别、病灶、TNM分期、包膜侵犯及MTA1、FOXP3表达均是影响PTC淋巴转移的危险因素(均P<0.05)。结论:MTA1、FOXP3在PTC患者癌组织中表达均升高,其表达水平与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关,可作为评估PTC淋巴转移的有效指标。

FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

目的:探讨叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法:采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA)。采用Westernblotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值。各组A549细胞中分别加入0、10和20μmol·L^(-1)DAPT,作为0、10和20μmol·L^(-1)DAPT组;另取A549细胞,分别加入0μmol·L^(-1)DAPT、1.0mg·L^(-1)Dox和1.0mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT,作为0μmol·L^(-1)DAPT组、1.0 mg·L^(-1)Dox组和1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组。Western blotting法检测各组细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平,CCK-8和Western blotting法检测0、10和20μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞的IC50值和细胞中Notch1、Hes1及FOXP3蛋白表达水平,Western blotting法检测0μmol·L^(-1)DAPT组、1.0 mg·L^(-1)Dox组和1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中FOXP3、P-糖蛋白(P-gp)、Notch1和Hes1蛋白表达水平。结果:与空白对照和si-NC组比较,si-FOXP3组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),增殖活性和IC50值降低(P<0.05或P<0.01),细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与0μmol·L^(-1)DAPT组比较,10和20μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与0μmol·L^(-1)DAPT组比较,1.0 mg·L^(-1)Dox组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与1.0 mg·L^(-1)Dox组比较,1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:沉默FOXP3可提高NSCLC细胞对Dox的敏感性,其作用机制与抑制Notch1/Hes1信号通路有关。

黄芪莪术药对调控Akt/FoxO3a信号通路对胃癌前病变的影响研究

目的 基于蛋白激酶B(Akt)/叉头状转录因子O亚族3(FoxO3a)通路探究黄芪-莪术药对逆转胃癌前病变的机制。方法 取48只雄性Wistar大鼠,随机选择12只作为正常组,其余大鼠采用甲基硝基亚硝胍(MNNG)复合造模法建立胃癌前病变模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄芪-莪术组、叶酸组,每组10只。正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,黄芪-莪术组给予黄芪-莪术水煎浓缩液3.6 g/kg灌胃,叶酸组给予叶酸1.8 mg/kg灌胃,均1次/d,连续灌胃10周。观察大鼠日常生活情况、体重、精神状态,HE染色观察胃黏膜组织病理形态,RT-PCR法检测胃组织中Akt1、FoxO3a、Beclin1、LC3-Ⅱ、p62 mRNA表达情况,Western blot法检测胃组织中Akt1、FoxO3a、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠体重、食量、活力下降,精神变差;胃黏膜见腺体增大,腺体间细胞增生,少量炎症细胞浸润;胃组织中Akt1、p62 mRNA相对表达量和Akt1、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Beclin1、FoxO3a、LC3-ⅡmRNA相对表达量和FoxO3a蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,黄芪-莪术组和叶酸组大鼠精神、食量及活力均有好转;胃黏膜腺体细胞排列较为整齐紧密,未见出血、炎症细胞浸润;胃组织中Akt1、p62 mRNA相对表达量和Akt1、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),Beclin1、FoxO3a、LC3-ⅡmRNA相对表达量和FoxO3a蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论 黄芪-莪术药对可一定程度逆转大鼠胃癌前病变,其可能是通过影响Akt/FoxO3a信号通路,激活增强体内自噬系统从而清除胃癌前病变细胞实现的。

胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3表达及与患者临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中类泛素样含环指域蛋白1(UHRF1)、Yes相关蛋白1(YAP1)和叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)表达及与患者临床病理特征的关系。方法收集2021年1至12月湖州市第一人民医院经手术切除的85例胃癌患者的癌组织与配对癌旁组织,采用免疫组化法测定UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。比较胃癌组织与癌旁组织及不同临床病理特征患者间UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。结果胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率均显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径胃癌患者UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率比较,差异均无统计意义(均P>0.05);低分化胃癌患者高于高、中分化胃癌患者,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者,淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移胃癌患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌组织UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率高,并与患者肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征有关。

参附注射液对失血性休克大鼠肺损伤的影响

目的观察参附注射液对大鼠失血性休克(HS)致肺损伤的影响并探讨潜在机制。方法选择SPF级健康雄性SD大鼠36只,16~17周龄,体重400~600 g。采用随机数字表法将大鼠分为三组:假手术组(SH组)、失血性休克组(HS组)和参附注射液组(SF组),每组12只。SH组麻醉后仅分离出右股静脉和股动脉,不行动静脉置管,HS组和SF组制备HS大鼠模型。HS组经静脉导管进行液体复苏,复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与生理盐水10 ml/kg,SF组复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与参附注射液10 ml/kg,灌注时间约60 min。于术后24、48 h随机处死6只大鼠,取肺组织检测湿重与干重比(W/D),采用ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)浓度,采用PCR法检测肺组织视黄酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA表达量,采用Western blot法检测RORγt、Foxp3、HIF-1α、水通道蛋白1(AQP1)和AQP5蛋白含量,肺组织行HE染色后在光镜下观察病理学改变并行肺损伤评分。结果与术后24 h比较,术后48 h SF组肺组织W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1蛋白含量均明显升高(P<0.05)。与SH组比较,术后24、48 h HS组和SF组W/D、IL-6、IL-17、IL-10和TGF-β浓度、RORγt、Foxp3和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显升高(P<0.05),AQP1、AQP5蛋白含量明显降低(P<0.05),光镜下可见肺泡结构破坏,肺泡间质充满大量水肿液,其间浸润着大量炎性细胞。与HS组比较,术后24、48 h SF组W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1和AQP5蛋白含量均明显升高(P<0.05),光镜下可见肺泡结构紊乱改善,水肿程度减轻,炎性细胞数量减少。结论参附注射液可调节促炎因子IL-6、IL-17与抗炎因子IL-10、TGF-β平衡,升高肺组织AQP1、AQP5蛋白含量,降低肺组织W/D和肺损伤评分,减轻HS大鼠肺损伤,机制可能与调节HIF-1α-RORγt/Foxp3平衡有关。

Foxp3在Graves病患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的:研究Graves病患者外周血叉头/翼状螺旋转录因子(Foxp3)的表达,探讨其在Graves病免疫发病机制中的作用。方法:取32例Graves病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMC),经细胞表面及胞内双重染色后通过流式细胞术(FCM)测定Foxp3的表达,同时采用电化学发光免疫分析法(ECLIA)测定血清甲状腺激素、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)的水平。结果:GD组治疗前外周血Foxp3阳性率显著低于正常对照组(P<0.01),且与同时测定的FT3、FT4呈显著负相关(P<0.01);治疗后,随着甲状腺功能的逐渐改善Foxp3水平虽仍低于正常对照(P<0.05)但较治疗前明显升高(P<0.05)。结论:GD患者体内存在Foxp3的表达异常,Foxp3可能参与了GD的发病,而高甲状腺素血症与Foxp3调节性T细胞两者之间有一定关联。

镁对哮喘患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞凋亡及Foxp3表达的影响

目的:观察镁对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞凋亡及叉头框蛋白3(Foxp3)表达的影响。方法:经磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+T细胞,分镁剂干预组(10 mmol/L)及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞的凋亡率及Foxp3表达情况。结果:(1)健康人外周血CD4+CD25+T细胞的纯度为77.4%～92.3%,哮喘患者CD4+CD25+T细胞的纯度为75.2%～93.8%。(2)CD4+CD25+T细胞占外周血CD4+T细胞的比例在健康组为4.12%～7.98%,在哮喘组为4.51%～8.68%,两者没有显著差异(P>0.05)。(3)镁(10 mmol/L)可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4+CD25+T细胞凋亡率增加(P<0.05),但对Foxp3的表达无影响(P>0.05)。结论:镁促进CD4+CD25+T调节细胞凋亡增加可能为其治疗支气管哮喘的作用机制之一。

抑制miR-133b通过靶向FOXP3对PD大鼠调节性T淋巴细胞、炎性反应和神经元凋亡的影响

目的探究抑制微小RNA(microRNA,miR)-133b通过靶向叉头盒蛋白3(forkhead box protein 3,FOXP3)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的影响。方法32只PD模型大鼠随机分为PD组和PD+miR-133b antagomir组(n=16),健康大鼠16只作为对照组。尾静脉注射miR-133b antagomir(300µg)来抑制miR-133b的水平。检测和比较各组大鼠神经功能、黑质损伤、细胞凋亡、炎性反应、Treg细胞水平、miR-133b、FOXP3 mRNA和蛋白表达水平;通过双荧光素酶报告验证miR-133b和FOXP3的靶向关系。结果PD组的逃避潜伏期、旋转速率、细胞凋亡情况、IL-6、miR133b水平显著高于对照组,穿越次数、IL-10、FOXP3 mRNA和蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05)。PD+miR-133b antagomir组的逃避潜伏期、旋转速率、细胞凋亡情况、IL-6、miR-133b水平显著低于PD组,穿越次数、IL-10、FOXP3 mRNA和蛋白表达量显著高于PD组(P<0.05)。miR-133b可与FOXP3靶向结合,提高miR-133b的水平显著抑制FOXP3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论抑制miR-133b的水平会促进FOXP3蛋白的表达量,恢复PD大鼠模型中Treg水平,抑制黑质组织的炎性反应,缓解细胞凋亡,保护神经功能。

骨髓中CD4^+CD25^(high)Foxp3^+调节性T细胞与儿童急性B淋巴细胞白血病的相关性研究

目的通过检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿骨髓中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达及CD4+细胞中调节性T细胞(Treg)比例,探讨Treg与儿童B-ALL发生及预后的关系。方法用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测10名正常儿童、35例初发B-ALL患儿及68例临床缓解患儿骨髓中Foxp3mRNA水平;用流式细胞术检测上述骨髓标本中CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测骨髓中细胞因子白细胞介素10(IL-10)的表达情况。结果骨髓中Foxp3 mRNA表达水平在B-ALL初发患儿组是对照组的4.44倍,微小残留病(MRD)阳性组是阴性组的2.39倍;B-ALL初发患儿骨髓中Treg占CD4+T淋巴细胞的比例[中位数(M)=12.77%]较对照组(M=8.09%)增高,差异具有统计学意义(P<0.01);MRD阳性组Treg比例(M=14.74%)与MRD持续阴性组(M=11.30%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后MRD阳性组骨髓中IL-10水平[(24.69±11.73)pg/mL]显著高于MRD持续阴性组[(9.19±5.82)pg/mL,P<0.05]。结论 B-ALL初发和MRD阳性患儿骨髓中Foxp3 mRNA水平和Treg比例显著增高,且骨髓中IL-10水平与Treg的比例变化趋势相一致。Treg可作为评价B-ALL患儿预后和复发的指标,Treg可能是通过分泌抑制性细胞因子IL-10而发挥其抑制作用。

叉头样转录因子3与胃癌的研究进展

叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)过去被认为是调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的关键转录因子,近来发现其在胃癌细胞中也有表达,这可能是一种新的肿瘤免疫逃逸机制。胃癌患者外周血及微环境中Foxp3蛋白及mRNA的高表达可能涉及到多种信号通路,具有重要的基因调控作用并最终使肿瘤逃逸机体的免疫杀伤,干预其表达可能成为一种有效的免疫治疗手段。

转录因子FOXP3在肿瘤免疫中的作用

叉头样转录因子(FOXP3)是脊椎动物叉头样转录因子家族中的一员,通过调控Treg细胞的发育、分化和成熟,发挥其免疫抑制作用。在肿瘤学的研究领域中,FOXP3+Treg细胞在肿瘤免疫逃逸机制中发挥了相当重要的作用。本文就FOXP3在各类肿瘤中的表达、肿瘤免疫中的作用机制以及免疫治疗中的作用作一综述。

食管癌患者根治手术前后外周血中GATA3、Foxp3 mRNA的表达及其意义

目的研究食管癌患者根治手术前后外周血中GATA结合蛋白3(GATA3)、叉头蛋白P3(Foxp3)mRNA的表达及其意义。方法选取196例食管癌患者为病例组,另选同期的60例体检健康者作为正常组,采用定量PCR检测手术前后患者外周血单核细胞中GATA3、Foxp3 mRNA表达,用流式细胞仪检测外周血样本中CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞的表达水平,分析GATA3、Foxp3 mRNA表达与食管癌临床病理特征及患者预后的关系。结果病例组手术前的GATA3、Foxp3 mRNA表达水平高于手术后1周和正常组,CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞水平低于手术后1周和正常组(P<0.05);病例组手术后1周与正常组的GATA3、Foxp3 mRNA、CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同TNM分期、病理分级、肿瘤大小和淋巴结转移的食管癌患者术前GATA3 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、淋巴结转移的食管癌患者术前Foxp3 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、病理分级、肿瘤大小、淋巴结转移、GATA3、Foxp3 mRNA表达的食管癌患者1年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05);TNM分期晚(RR=1.610)、Foxp3高表达(RR=1.473)是影响食管癌患者预后的危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论食管癌患者术前的GATA3、Foxp3 mRNA呈现高表达,行根治术后水平有所下降。临床应重视Foxp3的高表达,其对患者的预后有重要意义。

PI3K/AKT/FoxO信号通路在胰岛素类似生长因子1调节神经细胞PRNP基因表达中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头状转录因子O亚家族蛋白(Fox O)信号通路在胰岛素类似生长因子1(IGF-1)调节神经细胞PC12细胞株PRNP基因表达中发挥的作用。方法将对数生长期的PC12细胞分为IGF-1组、实验1组和实验2组和对照组。IGF-1组加入终浓度80 ng/m L的IGF-1;实验1、2组先加入25、50μmol/L的PI3K/AKT/Fox O信号通路抑制剂LY294002,37℃培养30 min后再滴入80 ng/m L的IGF-1。对照组不加药物。继续培养24 h。采用实时荧光定量PCR法测算各组PC12细胞PRNP mRNA相对表达量,采用Western blotting法测算各组PC12细胞AKT、磷酸化AKT(p AKT)、Fox O3a和磷酸化Fox O3a(p Fox O3a)蛋白相对表达量。结果 IGF-1组PC12细胞PRNP mRNA及p AKT、p Fox O3a蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.05)。实验1、2组PC12细胞PRNP mRNA及p AKT、p Fox O3a蛋白相对表达量低于IGF-1组(P均<0.05),且实验2组低于实验1组(P均<0.05)。结论 IGF-1通过磷酸化PI3K/AKT/Fox O信号通路蛋白AKT、Fox O3a调节PC12细胞PRNP基因表达。

胃癌细胞FoxP3的表达及其与外周血单个核细胞(PBMCs)的相互作用

目的检测叉头样蛋白3(forkhead box protein 3,FoxP3)在胃癌细胞中的表达分布,并探讨其在外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和胃癌细胞共培养过程中的作用。方法应用免疫荧光技术检测FoxP3蛋白的表达定位;建立胃癌细胞和PBMCs的体外共培养体系,然后用CCK-8法检测共培养后胃癌细胞的生长抑制情况;通过Real-time PCR技术检测共培养后胃癌细胞和PBMCs中FoxP3mRNA表达情况;并采用流式细胞技术和Western blot技术检测共培养后两种细胞中FoxP3蛋白表达情况。结果 FoxP3表达于胃癌细胞的胞质和胞核。胃癌细胞与PBMCs共培养时能明显抑制胃癌细胞的增殖。直接和间接共培养后MKN28胃癌细胞的FoxP3蛋白的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)均增加(P=0.031;P=0.015);与单培养相比,来源于胃癌患者和健康对照组的淋巴细胞与胃癌细胞共培养后其FoxP3 MFI均明显增加(P=0.016;P=0.034),且IL-2能促进间接培养条件下PBMCs的FoxP3表达(P=0.024),而对直接共培养影响不大。共培养后胃癌细胞的FoxP3mRNA和蛋白表达均增加,直接共培养较间接共培养增加更明显(P=0.035)。结论胃癌细胞与PBMCs的相互作用主要依赖细胞间的直接接触方式,FoxP3的表达变化在这一过程中发挥了重要作用,这可能跟肿瘤免疫逃逸有关。

肺结核患者NO和FOXP3表达水平变化及意义

目的探讨肺结核患者一氧化氮(NO)和叉头蛋白3(FOXP3)表达水平的变化及临床意义。方法选择肺结核患者与健康者各40例,采用Griess比色法检测血清NO水平,采用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+T淋巴细胞百分比;采用实时定量聚合酶链反应检测FOXP3mRNA水平。结果肺结核患者血清NO浓度为(15.71±1.26)μmol/L,高于健康者的(5.45±0.98)μmol/L(P<0.05);肺结核患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞约占CD4+T淋巴细胞的(4.57±0.85)%,高于健康者的(1.83±0.49)%(P<0.05);肺结核患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞高表达FOXP3。结论肺结核患者NO、FOXP3表达水平均升高,在肺结核免疫调节机制中起着重要作用;动态监测二者表达水平的变化有利于肺结核患者的诊治。

PD-1、FOXP3和CSF-1R蛋白表达对霍奇金淋巴瘤患者预后的影响

目的:研究集落刺激因子1受体(CSF-1R)、叉头转录因子3(FOXP3)和程序性死亡1(PD-1)蛋白表达对霍奇金淋巴瘤患者预后的影响。方法:记录本院收治的54例霍奇金淋巴瘤患者的临床特征资料和治疗方案。采集患者标本,采用免疫组织化学染色法检测微环境相关的预后因子CSF-1R、FOXP3及PD-1蛋白表达,同时通过原位杂交技术检测EB病毒及其小编码的mRNA(EBER);探讨CSF-1R、FOXP3及PD-1 3种蛋白表达与霍奇金淋巴瘤患者预后的关系,并采用单因素分析和多因素分析(Cox比例风险模型)研究影响霍奇金淋巴瘤患者预后的相关因素。结果:54例霍奇金淋巴瘤患者中,CSF-1R^+22例(40. 74%),FOXP3高表达28例(51. 85%),PD-1^+9例(16. 67%)。单因素分析结果发现,国际预后指数(IPI)评分、EBER和FOXP3蛋白表达是霍奇金淋巴瘤患者无进展生存(PFS)的影响因素(均P <0. 05);临床分期(Ann Arbor分期)、IPI评分、EBER、CSF-1R和FOXP3蛋白表达是患者总生存(OS)的影响因素(均P <0. 05)。多因素分析(Cox比例风险模型)结果发现,EBER状态是霍奇金淋巴瘤患者PFS、OS的影响因素(P <0. 05); FOXP3蛋白表达是患者PFS的影响因素(P <0. 05); Ann Arbor分期、CSF-1R蛋白表达均是患者OS的影响因素(均P <0. 05)。结论:CSF-1R、FOXP3与霍奇金淋巴瘤患者的预后有密切联系,可为该病的靶向治疗提供一定的依据。

叉头样转录因子3在肺恶性肿瘤中的作用

叉头样转录因子(Foxp3)是一个具有多种功能的转录因子,通常调控细胞生长发育,不但在肿瘤发生、发展中发挥作用,而且在肿瘤的治疗、预后评估中均起着相当重要的作用。Foxp3是通过调控调节性T细胞(Treg细胞)水平,抑制肿瘤微环境免疫功能,使肿瘤细胞逃避免疫监视,导致肿瘤的发生。抑制Foxp3表达,使机体发挥正常免疫功能,可达到抗肿瘤目的。本文就Foxp3在肺恶性肿瘤中的表达和肿瘤免疫中的作用机制以及免疫治疗中的作用作一综述。