宫颈癌淋巴结转移患者PD-L1与TILs表达水平及其与预后的关系

目的探讨宫颈癌淋巴结转移患者程序性死亡配体-1(PD-L1)、肿瘤浸润淋巴细胞亚群(TILs)表达水平及其与患者预后的关系。方法选取2007年1月至2013年9月在梅州市人民医院诊治并接受宫颈癌根治性切除术后发生淋巴结转移的101例患者作为研究对象。采用免疫组织化学法检测PD-L1、CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、叉头翼螺旋转录因子3(Foxp3)^(+)TILs表达水平。比较不同PD-L1表达水平患者临床病理特征差异;采用Spearman相关对PD-L1表达水平与TILs密度的相关性进行分析;采用Kaplan-Meier生存分析法分析PD-L1表达水平、TILs密度及密度比值与累计生存率的关系;采用Cox比例风险模型分析患者预后的独立影响因素。结果PD-L1表达于肿瘤细胞的细胞质和(或)细胞膜,阳性表达率为34.65%(35/101);CD4^(+)TILs计数为94(45,190);CD8^(+)TILs计数为63(31,117);FoxP3^(+)TILs计数为6.0(2.5,13.5);FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs比值为0.109(0.036,0.193)。PD-L1阳性表达组与PD-L1阴性表达组CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs密度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。PD-L1表达情况与CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs密度均呈正相关(r=0.305、0.222、0.222,P=0.002、0.026、0.026)。生存组与死亡组CD4^(+)TILs密度、CD8^(+)TILs密度和PD-L1表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。手术年龄<50岁、PD-L1阳性表达、CD4^(+)TILs高密度、CD8^(+)TILs高密度、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs低比值患者累计生存率均高于手术年龄≥50岁、PD-L1阴性表达、CD4^(+)TILs低密度、CD8^(+)TILs低密度、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs高比值患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,PD-L1阳性表达、CD8^(+)TILs高密度是患者预后的独立保护因素(P<0.05)。结论PD-L1、CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs比值与宫颈癌淋巴结转移患者预后均有关,其中PD-L1阳性表达、CD8^(+)TILs高密度是宫颈癌淋巴结转移患者预后的独立保护因素。

西黄胶囊联合TP方案对晚期非小细胞肺癌患者血清Foxp3、Ang-2水平的影响

目的探讨西黄胶囊联合TP方案治疗晚期非小细胞肺癌患者的临床疗效。方法选取2017年6月—2019年6月期间新乡医学院第一附属医院收治的晚期非小细胞肺癌患者86例,采用随机摸球法分为对照组和治疗组,每组各43例。对照组采用TP方案化疗,治疗组在此基础上加用西黄胶囊治疗。两组患者均连续治疗42 d后,观察两组患者近期疗效及不良反应发生情况,同时观察两组患者治疗前后中医证候症状积分、血清叉头翼状螺旋转录因子3(Forkhead or winged helix transcription,Foxp3)、血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)、美国东部肿瘤协作组体能状况(Eastern cooperative oncology group performance status,ECOGPS)评分变化。结果治疗后治疗组有效率为46.51%、疾病控制率为83.72%,与对照组有效率25.38%、疾病控制率65.12%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者咳嗽、气短、胸闷、出汗、乏力、畏寒肢冷、腰膝酸软积分及总分较治疗前均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血清Foxp3、Ang-2水平较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组ECOGPS评分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗组发热(30.23%)、恶心呕吐(30.23%)、血小板减少(34.88%)、白细胞减少(41.86%)及肝肾功能损伤(30.23%)发生率与对照组(53.49%、60.47%、55.81%、48.84%、44.19%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论西黄胶囊联合TP方案治疗NSCLC的效果显著,能明显改善患者临床症状及体能状况,减轻化疗毒副反应,并降低血清Foxp3、Ang-2表达水平发挥抗癌作用。

白斑颗粒Ⅰ号方对白癜风患者Foxp3 mRNA表达的影响

目的观察白斑颗粒Ⅰ号方对白癜风患者Foxp3 m RNA表达的影响,阐明白斑Ⅰ号方治疗白癜风的作用机制。方法白癜风患者60例,随机分为试验组和对照组各30例,健康对照组30例,采用RT-PCR方法检测各组PBMC中Foxp3 m RNA表达变化情况。结果白癜风患者组Foxp3 m RNA水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组治疗3个月后Foxp3 m RNA水平高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);对照组治疗3个月后Foxp3 m RNA水平高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,实验组治疗前后外周血Foxp3 m RNA升高值高于对照组治疗前后外周血Foxp3 m RNA升高值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论白斑颗粒Ⅰ号可能通过上调调节T细胞功能,使PBMC Foxp3 m RNA恢复或接近正常水平达到治疗白癜风的目的。

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞Foxp3表达的影响

目的观察高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)对调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)叉头翼状螺旋转录因子(forkhead/winged helix transcription factorp3,Foxp3)基因及蛋白表达的影响,并对其机制进行初步探讨。方法免疫磁珠法分离正常BALB/c小鼠脾脏Treg。采用固相包被抗-CD3及可溶性CD28辅助活化,给予HMGB1刺激,观察HMGB1刺激与Foxp3基因及蛋白表达的时间-效应关系及剂量-效应关系。结果经HMGB1刺激后的TregFoxp3蛋白表达于24～72h明显下调(P<0.05,P<0.01),其中以作用48、72h后表达下调尤为显著(P<0.01);给予不同剂量HMGB1刺激72h后,10、100、1000ng/ml的HMGB1均可诱导Foxp3表达减弱(P<0.05,P<0.01),其中HMGB1的浓度在1000ng/ml时Foxp3表达下调最明显。Foxp3mRNA表达呈现出与蛋白表达相同的时间、剂量依赖关系。结论HMGB1通过诱导TregFoxp3mRNA表达下调,进一步影响其蛋白产物合成,从而影响Treg免疫调节活性。

IL-17和Foxp3在小鼠克罗恩病模型中的表达及其意义

目的观察小鼠克罗恩病模型外周血单核细胞及结肠组织中白细胞介素（IL）17、叉头状/翅状螺旋蛋白3（Foxp3）的表达,探讨其在2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的克罗恩病小鼠急性炎症中的作用。方法共40只6~8周龄雌性Bal/c小鼠,采用随机数字表法随机分为两组,20只以TNBS/乙醇溶液灌肠诱导克罗恩病模型（实验组）,另外20只小鼠以同等浓度的乙醇氯化钠灌肠（正常对照组）。干预1周后行疾病活动指数（DAI）,结肠病理组织学评分（TDI）和结肠大体形态损伤指数（CMDI）评价,以实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测小鼠外周血单核细胞IL-17mRNA、Foxp3 mRNA的表达,采用免疫印迹法检测小鼠结肠组织IL-17蛋白、Foxp3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,实验组的DAI、TDI、CMDI显著升高[DAI（5.41±0.48）比（0.85±0.07）,TDI（5.63±0.74）比（0.74±0.08）,CMDI（6.88±0.84）比（0.91±0.06）,P〈0.01],外周血单核细胞的IL-17 mRNA显著升高[（1.118±0.145）比（1.000±0.000）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈正相关（r=0.875,0.935,0.825,P〈0.01）,Foxp3 mRNA显著降低[（0.797±0.271）比（1.000±0.000）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈负相关（r=-0.885,-0.734,r-0.812,P〈0.01）,结肠组织IL-17蛋白显著上升[（0.631±0.331）比（0.272±0.112）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈正相关（r=0.765,0.778,0.734,P〈0.01）,Foxp3蛋白显著降低[（0.274±0.112）比（0.592±0212）,P〈0.01],与DAI、TDI及CMDI呈负相关（r=-0.889,-0.809,-0.851,P〈0.01）。结论在TNBS诱导的结肠炎中,Th17/Treg轴的免疫偏倚是导致克罗恩病发生和发展的重要因素。

Pgp1和FoxP3在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨P-糖蛋白1(Pgp1)和核转录因子蛋白3(FoxP3)在结直肠癌中的表达及其与预后的关系。方法选取2012年2月至2015年2月我院保存的结直肠癌标本106例,同时选取癌旁组织标本64例作为对照,采用免疫组化染色法检测Pgp1和FoxP3表达,同时根据Pgp1和FoxP3表达情况将患者分为Pgp1和FoxP3双阴性表达(A组),Pgp1单阳性表达(B组)、FoxP3单阳性表达(C组),Pgp1和FoxP3双阳性表达(D组)。结果结直肠癌组织Pgp1和FoxP3蛋白阳性表达率分别为63.21%和43.40%,明显高于癌旁组织(P<0.05);结肠癌Pgp1蛋白阳性表达率为78.95%,明显高于直肠癌(P<0.05);FoxP3表达与患者临床病理特征以及治疗方案无明显关系(P>0.05);B组中位总体生存时间为52个月(95%CI:40.01～63.99),明显高于A组、D组和C组(P<0.05);A组和D组中位总体生存时间为40个月(95%CI:31.20～48.80)和34个月(95%CI:30.74～37.26),明显高于C组的24个月(95%CI:18.56～29.44),比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Pgp1和FoxP3表达与结直肠癌临床病理特征关系较弱,其中仅Pgp1表达与肿瘤位置有一定相关性;Pgp1和FoxP3表达与结直肠癌患者预后有一定关系,其中Pgp1阳性表达,FoxP3阴性表达者预后较好。

CC类趋化因子22和叉头状翅膀样转录因子3在胆管癌组织中的表达及意义

目的探讨CC类趋化因22(C-C class chemokines 22,CCL22)和叉头状翅膀样转录因子3(forkhead/winged helix transcription factor 3,FOXP3)在胆管癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测70例胆管癌组织和15例非肿瘤胆道上皮组织中CCL22、FOXP3的表达情况,分析其与胆管癌临床和预后的关系。结果 70例胆管癌、15例非肿瘤胆道上皮组织中CCL22和FOXP3阳性表达率分别为62.4%(44/70)、20.0%(3/15)及71.4%(50/70)、13.3%(2/15)。CCL22和FOXP3蛋白在胆管癌组织中的表达水平均明显高于非肿瘤胆道上皮组织(P<0.01)。有淋巴结转移者和TNM分期Ⅲ+Ⅳ期者较无淋巴结转移者和TNM分期Ⅰ+Ⅱ期者CCL22和FOXP3的表达阳性率高,差异有统计学意义(P<0.05)。CCL22与FOXP3蛋白表达呈明显正相关(P<0.01)。CCL22和FOXP3蛋白阴性表达者生存时间明显长于阳性表达者(P<0.01)。结论 CCL22和FOXP3可能对胆管癌发展及预后产生重要影响。

Foxp3基因多态性与妊娠期高血压的相关性

目的通过对叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)多态性基因位点的序列分析,探讨Foxp3基因多态性分布及基因型变异对妊娠期高血压(HDCP)发病的易感性,以阐明其在DHCP发生中的分子机制。方法选取186例妊娠期高血压患者,设为病例组;另选取同期251例本院住院的正常孕妇,设为对照组。分析两组Foxp3-6054、924位点的基因多态性与HDCP的相关性。结果两组研究对象年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组高血压家族史、孕周、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Foxp3-924基因多态性检测中两组基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。病例组患者中T/T基因型及T等位基因频率明显少于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);病例组A/A基因型频率明显多于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析提示AT+TT型可减少HDCP的发生风险(OR=0.367,95%CI为0.218,0.617,P<0.05),而联合基因型AA+AT可增加罹患HDCP的风险(OR=2.518,95%CI为1.654,3.832,P<0.05)。结论 Foxp3-6054位点基因型及等位基因频率在HDCP组与正常妊娠组间存在显著性差异,Foxp3-6054位点多态性可能参与HDCP的发生,而Foxp3-924基因多态性可能与HDCP无关。

Foxp3在AOM/DSS诱导小鼠结肠癌模型中的表达及其意义

目的观察头状/翅状螺旋蛋白3(FOXP3)在氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)/葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导小鼠结肠癌中的表达水平及其意义。方法将雌性SPF级C57BL/6小鼠随机分为两组:对照组10只;AOM/DSS组(模型组)10只。模型组小鼠腹腔注射AOM(10 mg/kg),饮用1%DSS 1周,之后正常饮水2周,以上为1个周期,连续3个周期;对照组以等体积生理盐水腹腔注射,并正常饮水。于实验11周末处死所有小鼠。结肠病理组织HE染色观察病理组织学改变。收集血浆,血细胞分析仪检测单核细胞计数;留取结肠癌组织,免疫组织化学染色方法检测Foxp3蛋白表达水平。结果结肠组织行HE染色后发现模型组小鼠均出现不同程度的结肠癌表现。模型组血浆单核细胞计数明显低于正常组[(5.14±0.25)×10~9/L vs(5.78±0.17)×10~9/L,P<0.01],免疫组化染色半定量分析结肠癌组织中Foxp3蛋白表达水平较正常对照组显著升高(3.55±0.88 vs 1.00±0.71,P<0.05)。结论在AOM/DSS诱导的小鼠结肠癌中,Foxp3蛋白表达增加促进了其发生发展。

Foxp3/Treg与RORγt/Th17失衡在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染期间可见到广泛的免疫介导的肝损伤. HBV免疫清除的失败从而导致慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB),并大大增加肝硬化和肝细胞癌的风险. T淋巴细胞在HBV感染中的免疫反应起重要作用,尤其是调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)和辅助性T细胞17(helper T cell 17, Th17)失衡的问题,二者的平衡失调是HBV持续感染与肝脏炎性损伤的重要机制.为了更好地揭示潜在的机制,在本综述中,我们系统地回顾了Treg和Th17,讨论了在HBV感染后Treg与Th17两者之间的关系,并对特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt, RORγt)和叉头/翅膀状螺旋转录因子3(forkhead/winged helix family transcription factor 3, Foxp3)两者之间的变化,随着近几年对HBV免疫靶向治疗研究的不断深入,Foxp3/Treg与RORγt/Th17的平衡似乎对HBV的感染至关重要,以此为契机可以为CHB的治疗提供新的思路.

豚鼠肺气肿模型肺组织Foxp_3、RORγt及IL-17的表达及意义

目的采用弹性蛋白主动免疫方法制造豚鼠肺气肿模型,与传统熏烟制造模型方法比较,探究弹性蛋白抗体对肺气肿的影响;探讨豚鼠肺气肿模型肺组织中叉头状/翅状螺旋蛋白3(Foxp3)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素17(IL-17)的表达和意义。方法分别采用熏烟、弹性蛋白主动免疫的方法制造豚鼠肺气肿模型;测量各组模型中肺泡平均半径;免疫组化技术检测肺组织Foxp3、RORγt和IL-17。结果熏烟组及主动免疫组平均肺泡半径明显长于对照组(P<0.05)。熏烟组及主动免疫组较对照组肺组织中Foxp3阳性细胞数减少,RORγt阳性细胞增多,Foxp3/RORγt比值表达失衡,IL-17表达水平增强(P<0.05),熏烟组与主动免疫组比较差异无统计学意义。相关性分析提示豚鼠肺组织Foxp3/RORγt阳性细胞比值与IL-17及平均肺泡半径呈负相关(P<0.05)。结论弹性蛋白主动免疫可以导致豚鼠肺气肿发生;熏烟组及主动免疫组豚鼠肺气肿模型肺组织中存在Foxp3/RORγt表达失衡,这种失衡可能是免疫调节细胞CD4+T细胞及效应细胞Th17细胞表达失调的重要机制,从而可能参与慢性阻塞性肺疾病(COPD)自身免疫调节,对COPD的发生发展有一定的促进作用。

PD-L1和FOXP3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的探讨程序性死亡配体1(PD-L1)和叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法收集2018年1月至2020年2月接受甲状腺切除术患者的组织标本160例,其中PTC 140例,结节性甲状腺肿20例。采用免疫组化染色法检测PTC和结节性甲状腺肿组织中PD-L1和FOXP3的表达情况,分析两者表达与PTC临床病理特征的关系以及两者表达的相关性。结果纳入的140例PTC病例中,86例PD-L1阳性表达,其中低表达37例、中表达26例、高表达16例、极高表达7例,PD-L1表达阳性率为61.4%;84例FOXP3阳性表达,其中低表达37例、中表达19例、高表达8例、极高表达20例,FOXP3的阳性表达率为60.0%。在结节性甲状腺肿组织中,PD-L1和FOXP3表达均为阴性,与两者在PTC组织中的表达水平比较,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.001)。PD-L1表达与TNM分期、包膜侵犯、腺外侵犯、远处转移和合并桥本氏甲状腺炎(HT)有关(P<0.05),与年龄、性别、T分期、中央区淋巴结转移、侧方淋巴结转移和肿瘤病灶无关(P>0.05)。FOXP3表达与年龄、包膜侵犯、腺外侵犯和TNM分期有关(P<0.05),而与性别、T分期、中央区淋巴结转移、侧方淋巴结转移、肿瘤病灶、远处转移和合并HT均无关(P>0.05)。在PTC组织中,PD-L1与FOXP3表达呈正相关(r=0.732,P=0.000)。结论PD-L1和FOXP3在PTC组织中表达上调,两者表达与TNM分期和肿瘤局部浸润有关,且两者表达呈正相关。

理冲汤对异种移植子宫肌瘤小鼠免疫逃逸相关因子的影响

目的从免疫逃逸角度探讨“扶正祛瘀”中药理冲汤对异种移植子宫肌瘤小鼠吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO和叉头状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响。方法采用完全随机分组法将32只CB-17 Scid雌性小鼠分为正常组、模型组、理冲汤组和阳性药组,每组8只。采用异种移植法制备子宫肌瘤动物模型;造模成功后,理冲汤组给予理冲汤,阳性药组给予米非司酮,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续干预4周后进行组织样本采集。通过HE染色观察各组小鼠子宫平滑肌组织病理学改变;采用免疫印迹法检测各组小鼠子宫平滑肌组织中IDO表达含量;采用实时荧光定量PCR检测Foxp3 m RNA的表达含量。结果与模型组比较,理冲汤组小鼠子宫内膜及肌层增厚现象减轻,纤维组织含量较少;理冲汤组小鼠子宫平滑肌组织中IDO、Foxp3 mRNA表达含量较模型组明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论理冲汤具有抑制子宫肌瘤发生发展的作用,其药理机制可能与阻断肿瘤免疫逃逸途径相关。

乙肝病毒携带孕妇外周血单个核细胞Foxp3及Th17和Toll样受体的表达

目的研究叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、辅助性T细胞17(Th17)、Toll样受体(TLR)在乙肝病毒携带孕妇外周血单个核细胞中的表达。方法选取2018年2月-2021年2月于南京医科大学附属妇产医院建册、产检且乙肝表面抗原(HBsAg)阳性孕妇60例为研究组,选取同时期进行建册、产检且HBsAg阴性孕妇60名为对照组,检测两组孕妇外周血T淋巴细胞、Foxp3、Th17和Toll样受体的表达情况。结果研究组CD_(4)^(+)水平较对照组降低,CD_(8)^(+)水平升高(P<0.05);研究组Foxp3、TLR4、TLR7表达水平高于对照组,Th17表达水平低于对照组(P<0.05);不同乙肝病毒载量Foxp3、Th17、TLR4、TLR7水平比较差异有统计学意义(P<0.05);高载量组孕妇Foxp3、TLR4、TLR7水平高于中、低载量组,Th17水平低于中、低载量组(P<0.05);Spearman秩相关分析结果显示,乙肝病毒载量与Foxp3、TLR4、TLR7水平均呈正相关,与Th17水平呈负相关(P<0.05)。结论乙肝病毒携带孕妇Foxp3、Th17、TLR4、TLR7表达异常,临床应重视高病毒载量孕妇上述指标的检测,有效控制病毒的复制及免疫的平衡。

邻苯二甲酸二丁酯和苯并(a)芘染毒对大鼠T淋巴细胞亚群比例及Foxp3表达水平的影响

目的探讨分析邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和苯并(a)芘(BaP)的免疫损伤机制,通过DBP和BaP亚慢性染毒大鼠,分析T淋巴细胞亚群比例以及叉头螺旋翼状转录因子3(Foxp3)表达水平的变化情况,为DBP、BaP所致的免疫损伤机制研究及预防提供研究线索。方法将80只健康的SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组(给予玉米油)、DBP 50 mg/kg组(标为DBP_(50)组)、DBP 250 mg/kg组(标为DBP_(250)组)、BaP 1 mg/kg组(标为BaP_(1)组)、BaP 5 mg/kg组(标为BaP_(5)组)、DBP 50 mg/kg+BaP 1 mg/kg组(标为DBP_(50)+BaP_(1)组)、DBP 250 mg/kg+BaP 5 mg/kg组(标为DBP_(250)+BaP_(5)组),每组10只大鼠,采取灌胃方式进行染毒,连续染毒90 d,其中每周连续染毒6 d。染毒结束后提取及纯化大鼠淋巴细胞,采用流式细胞术检测淋巴细胞内各亚群比例;反转录实时荧光聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测Foxp3 mRNA的表达水平;蛋白质免疫印迹(WB)检测淋巴细胞内Foxp3蛋白的表达水平;实验结果用x±s表示,组间比较用方差分析,进行两两比较,若方差齐性采用Tukey’s检验,若方差不齐性采用Games-Howell检验,并采用Pearson相关分析Treg淋巴细胞比例与Foxp3蛋白表达水平、CD4^(+)T、CD8^(+)T淋巴细胞比例的相关性。结果DBP、BaP染毒后,CD4^(+)T淋巴细胞比例溶剂对照组(18.433±1.718)%与DBP_(50)组(6.873±0.645)%、DBP_(250)组(3.747±0.153)%、BaP_(1)组(6.303±0.746)%、BaP_(5)组(6.257±0.471)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(6.933±0.628)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(3.637±0.137)%比较,差异有统计学意义,P值分别为0.018、0.019、0.013、0.020、0.019和0.019;BaP_(5)组(6.257±0.471)%与DBP_(250)+BaP_(5)组(3.637±0.137)%比较,差异有统计学意义,F=194.80,P=0.034。CD8^(+)T淋巴细胞比例溶剂对照组(32.870±1.035)%与DBP_(50)组(29.703±0.319)%、DBP_(250)组(18.160±1.185)%、BaP_(1)组(30.707±1.320)%、BaP_(5)组(19.393±0.833)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(30.247±1.665)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(11.397±1.108)%比较,差异有统计学意义,P值分别为0.004、<0.001、0.035、<0.001、0.013、<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(11.397±1.108)%与DBP_(250)组(18.160±1.185)%、BaP_(5)组(19.393±0.833)%比较,差异有统计学意义,F=151.50,均P值<0.001。Treg细胞比例溶剂对照组(4.150±0.101)%与DBP_(50)组(7.057±0.656)%、DBP_(250)组(8.257±0.633)%、BaP_(1)组(6.810±0.514)%、BaP_(5)组(7.963±0.337)%、DBP_(50)+BaP_(1)组(7.300±0.501)%、DBP_(250)+BaP_(5)组(11.921±0.652)%比较,差异有统计学意义,均P<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(11.921±0.652)%与DBP_(250)组(8.257±0.633)%、BaP_(5)组(7.963±0.337)%比较,差异有统计学意义,F=74.98,均P<0.001。Foxp3 mRNA表达水平的溶剂对照组(1.000±0.094)与DBP_(250)组(1.654±0.007)、DBP_(250)+BaP_(5)组(2.224±0.111)比较,差异有统计学意义,P值分别为0.029和0.001;DBP_(50)+BaP_(1)组(1.412±0.007)与DBP_(50)组(1.257±0.010)、BaP_(1)组(1.233±0.015),差异有统计学意义,P值分别为<0.001、0.003;DBP_(250)+BaP_(5)组(2.224±0.111)与DBP_(250)组(1.654±0.007)、BaP_(5)组(1.480±0.009)比较,差异有统计学意义,F=177.50,P值分别为<0.001、0.031。Foxp3蛋白的溶剂对照组(0.162±0.013)与DBP_(50)组(0.286±0.031)、DBP_(250)组(0.376±0.016)、BaP_(1)组(0.243±0.021)、BaP_(5)组(0.275±0.029)、DBP_(50)+BaP_(1)组(0.397±0.031)、DBP_(250)+BaP_(5)组(0.472±0.024)比较,差异有统计学意义,P值分别为<0.001、<0.001、0.001、<0.001、<0.001、<0.001;DBP_(50)+BaP_(1)组(0.397±0.031)与DBP_(50)组(0.286±0.031)、BaP_(1)组(0.243±0.021)%比较,差异有统计学意义,均P<0.001;DBP_(250)+BaP_(5)组(0.472±0.024)与DBP_(250)组(0.376±0.016)、BaP_(5)组(0.275±0.029)比较,差异有统计学意义,F=62.40,均P<0.001。进一步做Pearson相关性分析显示,DBP、BaP联合染毒时,Treg淋巴细胞比例与Foxp3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.969,P=0.001),与CD4^(+)T、CD8^(+)T淋巴细胞比例呈负相关关系,r值分别为-0.863和-0.879,P值分别为0.027和0.021。结论DBP、BaP暴露可能通过上调Foxp3的表达水平,促进Treg细胞分化和发育,使其比例增大,从而抑制CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的比例,此可能是DBP、BaP对淋巴细胞产生免疫抑制作用的机制之一,DBP、BaP可能通过此过程造成免疫系统的损伤,也为DBP、BaP的防治提供依据。

叉头翼状螺旋转录因子3及白细胞介素17在结肠癌中的表达及临床意义

目的 通过观察结肠癌患者肿瘤组织及癌旁组织中叉头翼状螺旋转录因子3（Foxp3）表达情况,以及检测结肠癌患者和健康人血清白细胞介素17 （IL-17）的水平,探讨调节性T细胞（Treg细胞）和Th17细胞在结肠癌发生和发展过程中的变化.方法 采用免疫组织化学SP法检测56例结肠癌组织及癌旁组织和15例正常结肠组织中Foxp3表达情况,采用酶联免疫吸附法检测其血清IL-17水平.结果 结肠癌患者血清IL-17明显高于健康对照者[（9.1 ±2.3） ng/L比（6.2±1.5）ng/L],差异有统计学意义（P=0.007）.结肠癌组织Foxp3阳性细胞数均显著多于正常对照组织和癌旁组织[（24.1±6.4）个比（2.7±1.1）个和（8.7±2.3）个],癌旁组织显著多于正常对照组织,差异均有统计学意义（P＜0.01）.TNM分期Ⅲ期结肠癌患者血清IL-17显著高于Ⅰ～Ⅱ期[（8.5±2.1） ng/L比（5.4±0.9） ng/L],结肠癌组织Foxp3显著多于Ⅰ～Ⅱ期[（25.8±6.2）个比（18.2±4.4）个],差异有统计学意义（P＜0.01）.病理分级中高分化腺癌血清IL-17与低分化腺癌[（9.4±1.1）ng/L比（8.9±1.8）ng/L]比较差异无统计学意义（P＞0.05）;中高分化结肠癌组织Foxp3显著多于低分化结肠癌组织[（26.8±5.5）个比（17.2±3.2）个],差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 结肠癌患者血清IL-17水平和结肠癌组织Foxp3阳性表达显著高于正常组织,且随TNM分期及病理分级增高而增高,提示IL-17以及Foxp3在结肠癌的生长和转移过程中发挥重要作用.IL-17水平和Foxp3表达与局部肿瘤组织的免疫状态密切相关,联合检测有助于进一步了解肿瘤患者的免疫状态,为肿瘤的免疫治疗提供基础资料.

叉头样／翼状螺旋转录因子3基因多态性与克罗恩病易感性和疾病表型的关系

目的 探讨浙江籍汉族人群叉头样/翼状螺旋转录因子（Foxp）3基因多态性与CD易感性和疾病表型的关系。 方法 纳入2007年1月至2015年12月确诊的268例CD患者和490名健康对照者，采用多重SNaPshot技术检测其Foxp3的rs3761547、rs2232365、rs2294021、rs3761548 4种单核苷酸多态性（SNP），评价其与英夫利西单克隆抗体疗效的关系，并进行连锁不平衡和单倍型分析。统计学方法采用非条件Logistic回归分析。 结果 31例接受英夫利西单克隆抗体治疗有效与19例无效患者比较，4个SNP的突变等位基因和基因型频率差异均无统计学意义（P均〉0.05）。连锁不平衡分析发现上述4个SNP彼此紧密连锁。男性CD组GCGC单倍型频率为29.20%（40/137），高于男性健康对照组的19.37%（43/222），差异有统计学意义（OR＝1.717，95%CI 1.045～2.820，P＝0.032）；女性CD组ACGA单倍型频率为13.36%（35/262），低于女性健康对照组的19.03%（102/536），差异有统计学意义（OR＝0.656，95%CI 0.433～0.995，P＝0.046）。男性结肠型（L2）ATAC单倍型频率为25.93%（7/27），低于回结肠型（L3）的75.38%（49/65），差异有统计学意义（OR＝0.114，95%CI 0.041～0.320，P〈0.01）；男性结肠型（L2）GCGC单倍型频率为51.85%（14/27），高于回结肠型（L3）的9.23%（6/65），差异有统计学意义（OR＝10.590，95%CI 3.423～32.758，P〈0.01）；男性狭窄型（B2）患者ATAC单倍型频率为73.21%（41/56），高于非狭窄、非穿透型（B1）的47.30%（35/74），差异有统计学意义（OR＝0.328，95%CI 0.156～0.693，P＝0.003）；男性狭窄型（B2）患者GCGC单倍型频率为17.86%（10/56），低于非狭窄、非穿透型（B1）的39.19%（29/74），差异有统计学意义（OR＝2.946，95%CI 1.295～6.784，P＝0.009）；男性穿透型（B3）患者ACGA单倍型频率为71.43%（5/7），高于非狭窄、非穿透型（B1）的12.16%（9/74），差异有统计学意义（OR＝0.055，95%CI 0.009～0.329，P〈0.01）。 结论 Foxp3（rs3761547、rs2232365、rs2294021、rs3761548）基因多态性与中国汉族CD易感性和疾病表型相关，但与英夫利西单克隆抗体的疗效无关。

基于外周血A20 mRNA和NF-κB mRNA及Foxp3 mRNA水平的创伤合并感染患者预后评估

目的 探究外周血锌指蛋白(A20)mRNA、核因子κB(NF-κB)mRNA及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA水平与创伤患者合并感染预后的评估价值。方法 选取山东省立第三医院2018年6月-2020年6月创伤患者182例,根据是否合并感染分为感染组74例与未感染组108例,根据创伤严重度评分(ISS)将患者分为轻伤组、重伤组和危重伤组,根据感染严重程度将患者分为轻度组、中度组和重度组,根据患者28 d预后结果将患者分为存活组和病死组,比较各组患者外周血A20 mRNA、NF-κB mRNA及Foxp3 mRNA水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价A20 mRNA、NF-κB mRNA及Foxp3 mRNA水平对患者预后的评估作用。结果 感染组患者外周血A20 mRNA低于未感染组,NF-κB mRNA及Foxp3 mRNA水平高于未感染组(P<0.05);对于创伤合并感染患者,不同创伤严重程度、感染严重程度患者A20 mRNA、NF-κB mRNA及Foxp3 mRNA,差异有统计学意义(P<0.05);存活组患者A20 mRNA高于病死组,NF-κB mRNA及Foxp3 mRNA低于病死组(P<0.05)。A20 mRNA、NF-κB mRNA及Foxp3 mRNA评估创伤合并感染患者预后,联合检测曲线下面积(AUC)为0.898,大于单项指标(A20:Z=2.148,P=0.032;NF-κB:Z=3.251,P<0.001;Foxp3:Z=2.188,P=0.029)。结论 外周血A20、NF-κB及Foxp3 mRNA与创伤合并感染患者病情严重程度及预后相关,可作为评估患者预后的良好指标。

叉状头/翅膀状螺旋转录因子3对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的 观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子3（Foxp3）在结直肠癌中的表达及其短发夹RNA（shRNA）对结直肠癌细胞凋亡的影响.方法 Western blot检测结直肠癌组织和对应的癌旁组织中Foxp3的表达水平.同时Western blot检测人结直肠癌细胞HCT116、SW480、RKO及人肠黏膜细胞CCC-HIE-2中Foxp3的表达水平.转染靶向Foxp3基因的shRNA的表达载体Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2和对照序列载体shRNA control至人结直肠癌细胞中,分别命名为Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2、shRNA control组.同时设置未转染组,未转染组中只加入转染试剂.Western blot和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Foxp3水平,筛选出干扰效率较高的shRNA.流式细胞术检测48h细胞凋亡.结果 Foxp3在癌旁组织及结肠癌组织中表达水平依次为：0.24±0.05、0.78±0.08,差异有统计学意义（t=63.254,P=0.000）.Foxp3在人结直肠癌细胞HCT116、SW480、RKO中的表达水平均高于人肠黏膜细胞CCC-HIE-2,且Foxp3的表达水平由低到高依次为：RKO、HCT116、SW480,后期选用SW480继续研究.未转染组、shRNA control、Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2 组细胞中Foxp3蛋白表达水平依次为：0.92±0.05、0.93±0.07、0.21±0.04、0.34±0.06,mRNA 表达水平依次为：1.00±0.07、1.01±0.08、0.53±0.06、0.79±0.08,后续选用Foxp3 shRNA2干扰Foxp3表达.未转染组、shRNA control、Foxp3 shRNA2组细胞凋亡率依次为（13.21±3.12）%、（12.98±3.54）%、（32.01±6.72）%.Foxp3 shRNA2组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）表达水平依次为：0.86±0.05、0.85±0.06、0.26±0.05,活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）表达水平依次为：0.38±0.09、0.39±0.08、0.88±0.06,磷酸化信号转导和转录激活因子3（p-STAT3）表达水平依次为：0.40±0.06、0.39±0.04、0.22±0.05.结论 Foxp3在结直肠癌组织及细胞中均表达上调,干扰Foxp3表达能促进人结直肠癌细胞凋亡,作用机制可能与STAT3信号通路有关.

年轻女性宫颈鳞状上皮内病变、宫颈癌组织中调节性T细胞的表达及其预测作用

目的探讨调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)在年轻女性宫颈鳞状上皮内病变(cervical squamous intraepithelial lesions,CSIL)、宫颈癌组织中的表达及其与不同病变级别的相关性,并研究其预测CSIL转归的作用。方法选取2014年6月-2016年6月在广东省妇幼保健院或深圳市妇幼保健院就诊的年龄<35岁CSIL、宫颈癌患者110例,分为宫颈低级别鳞状上皮内病变(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)组(30例)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组(30例)及宫颈癌组(50例),另选取同期因其他疾病(如子宫肌瘤、子宫内膜异位症)行全子宫切除的正常宫颈组织30例为正常对照组。进行免疫组织化学染色,检测宫颈组织中叉头状旋转录因子3(forkhead helix transcription,FOXP3)的表达情况。结果 FOXP3在正常对照组、LSIL组、HSIL组及宫颈癌组中的阳性表达率分别为3.3%、36.6%、53.3%和100.0%,FOXP3在不同级别CSIL、宫颈癌中的总阳性率有显著差别,疾病级别越重,总阳性率越高。正常对照组、LSIL组、HSIL组及宫颈癌组病变组织中,FOXP3的阳性表达强度与病变级别相关(P<0.001)。结论 FOXP3在年轻女性CSIL、宫颈癌组织中阳性表达强度与病变级别相关,可辅助临床评价肿瘤的生物学行为。