Modulation of Anti-Microbial Resistant <i>Salmonella heidelberg</i>Using Synbiotics (Probiotics and Prebiotics) in Two <i>In-Vitro</i>Assays (Cross-Streaking and Agar Wells Diffusion)

Salmonellosis is the most prevalent bacterial foodborne disease in many countries worldwide. Utilization of probiotics is one of the most accepted ways to reduce Salmonella, especially lactic acid bacteria, as it has proven to reduce the enteric pathogens in monogastric and ruminant livestock animals through different mechanisms such as antimicrobials production, competitive adhesion to the gastrointestinal tract, and immune stimulation. Prebiotics could be utilized solely for health benefits as an alternative to probiotics or in addition to probiotics for a synergistic effect known as synbiotics. The aim of this study was to compare effects of different probiotic strains (Lactobacillus acidophilus (La-14), Lactobacillus paracasei (Lpc-37), Streptococcus thermophiles (St-21), Bifidobacterium bifidum (Bb-06), and Aspergillus niger (ATCC®16888TM) and without prebiotics (Mannose;Xylose;Galactooligosaccharides GOS;Inulin;and Dandelion extract) on lowering Salmonella heidelberg CFU in vitro. Different inhibition levels probiotic strains were assessed and compared in the presence and absence of 2.5% prebiotic compounds using cross-streaking and agar well diffusion assays. Recommendations for the growth of selected microorganisms such as temperature and oxygen conditions were taken into consideration. All the analysis was conducted in triplicates. The results showed that all the probiotics strains except S. thermophiles were able to significantly (P < 0.05) inhibit the growth of S. heidelberg in at least one of the assays. The difference in inhibition percentage confirms that probiotic strains have multiple inhibition mechanisms, such as production of antimicrobials, lower pH by producing organic acids (acetic acid, lactic acid, etc.), and inhibition of pathogen’s virulence factor expression, and production of lipopolysaccharide solubilizing compounds.

琼脂扩散法用于放线菌源生防菌剂筛选的活性影响因素

以灰霉病菌(Botrytis cinerea)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeobosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、西瓜猝倒病菌(Pythium aphanidematum)为模式靶标,探讨了放线菌源生防杀菌剂筛选的活性特征、影响活性稳定性和敏感度的因素。采用琼脂扩散法,测试了模式靶标、化合物标准样品和放线菌标准菌株的发酵液样品对杀菌活性测试的影响。结果表明,靶标的处理过程、靶标菌的含量、样品的类型以及样品的加入量与活性反应有直接关联。不同模式靶标菌对破碎处理的耐受程度不同,必须针对不同模式靶标进行个性化处理,以保证模式靶标菌在测试中的稳定生长状态。在琼脂扩散法中,不仅可以检测样品的杀菌活性强度,而且活性成分与靶标菌的不同作用方式也可以呈现。保留活菌的放线菌发酵液样品在加入量较宽的范围内都显示活性,而经过滤除菌处理的放线菌发酵液样品和标准化合物都只在样品加入量比较大时才显示出活性。

半枝莲水提液体外抑菌及抑菌稳定性研究

目的 探究半枝莲水提液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、耻垢分枝杆菌的体外抑菌活性及抑菌稳定性,为临床应用及开发植源性抑菌药物提供研究基础。方法 采用纸片扩散法测定半枝莲水提液对供试菌的抑菌活性,琼脂稀释法测定其最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);同时以抑菌圈直径为指标,探究盐浓度、紫外光照射和不同pH对半枝莲水提液抑菌稳定性的影响。结果 半枝莲水提液对4种供试菌有抑菌活性,抑菌圈直径分别为(18.27±0.25)、(18.0±0.50)、(17.7±0.26)、(18.0±0.00)mm,为高度敏感,MICs分别为5.41、6.08、6.08、5.41mg/ml。抑菌稳定性实验结果表明,盐浓度、紫外光照射、pH对半枝莲水提液体外抑菌活性均无显著影响(P>0.05),抑菌活性保留率均>95.0%。结论 半枝莲水提液对4种供试菌有良好的体外抑菌活性和抑菌稳定性。

纸片扩散法检测淋病奈瑟菌的药物敏感性

目的探讨纸片扩散法检测淋病奈瑟菌对7种监测药物敏感性的准确性。方法以琼脂稀释法作为参考方法,采用纸片扩散法(K-B法)配对检测60株临床淋病奈瑟菌对头孢曲松、头孢克肟、大观霉素、阿奇霉素、环丙沙星、四环素和青霉素的敏感性,比较两种方法药敏结果的分类一致性、小误差、重大误差和极重大误差。结果与琼脂稀释法比较,K-B法检测头孢曲松、头孢克肟、大观霉素、阿奇霉素、环丙沙星、四环素和青霉素的分类一致性分别为95.0%、76.7%、100%、80.0%、93.3%、63.3%和90.0%;所检测药物中头孢曲松、头孢克肟、环丙沙星、四环素和青霉素有小误差,分别为5.0%、23.3%、6.7%、30.0%和10.0%;对阿奇霉素和四环素的极重大误差率分别为20.0%和6.7%。结论淋病奈瑟菌监测药物除头孢克肟、阿奇霉素和四环素外,K-B法药敏试验结果的准确性较高。

琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化

对影响琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的四个主要因素:琼脂浓度、Tween20、培养温度、预培养进行了研究。结果表明,0.75%琼脂的效价检测培养基、0.5% Tween20的添加以及30℃培养条件,可提高乳链菌肽效价测定的灵敏度和精确性;4℃预培养有利于乳链菌肽在琼脂中的扩散。

苹果多酚抑菌效果的研究

观测苹果多酚对细菌、酵母菌、霉菌生长的影响以及对各种供试菌株在测试浓度范围内的最低抑菌浓度,以期为新型安全天然食品防腐剂的研究提供一定的依据。采用双层平板打孔法,研究了不同质量浓度(2、6、10g/L)苹果多酚,对6种细菌、3种酵母菌及3种霉菌的抑制作用,对筛选出来的供试菌株,采用0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、1.0、2.0g/L8种不同浓度的苹果多酚进行测试浓度范围内最低抑菌浓度试验。结果表明:苹果多酚对黄杆菌SHL45、大肠杆菌、荧光假单胞菌SHL5、荧光假单胞菌SHL7、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌6种供试菌株,在苹果多酚测试浓度范围内的最低抑制浓度分别为0.6、0.7、0.6、0.6、0.8、0.5g/L,对金黄色葡萄球菌等6种供试菌株有明显的抑制作用。

1990年～1999年临床常见病原菌及耐药现状

了解临床感染性疾病中常见的病原菌种类、分布及体外耐药谱 ,配合临床合理选药和有效治疗。方法 按《全国临床检验操作规程》进行。结果 从临床标本中分离了 6 197株细菌 ,其中铜绿假单胞菌 10 96株、大肠埃希氏菌 96 1株、金葡球菌 787株、表葡球菌 6 76株、克雷伯氏菌 393株 ,依次占分离率的 17.7%、15 .5 %、12 .7%、10 .9%、6 .3%。铜绿假单胞菌居首 ,其中铜绿假单胞菌主要来自痰标本 ,大肠埃希氏菌主要来自尿标本 ,金葡球菌主要来自分泌物标本。耐药性较高的有以下菌株 ,铜绿假单胞菌对庆大霉素、头孢唑林的平均耐药率分别为 5 1.2 %、72 .9% ;金葡球菌对青霉素的平均耐药率为 74.5 % ;表葡球菌对青霉素、苯唑西林及复方磺胺甲口恶唑片的平均耐药率分别为 6 8.2 %、6 6 .3%、73.4%。以上耐药率均超过 5 0 .0 %。结论 2 0世纪 90年代后期细菌检出率及耐药率都在迅猛增加 ,要加强对细菌的监测 ,指导临床合理用药 。

禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原的研制及应用

研制了禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原,检测了该抗原的效价和特异性,并用该抗原对人工感染鸡沉淀抗体的变化以及现地血清样本进行了检测。结果显示,该抗原不与其他主要禽类病原体阳性血清反应,可与1∶8稀释的禽腺病毒Ⅰ型阳性血清反应。对3月龄SPF鸡进行人工感染后,第7 d可检测到沉淀抗体,血清中的沉淀抗体可持续3个月以上。抗原在-20℃条件下可保存2年。经对现地38个鸡场进行检测,其中阳性场14个,阳性率为36.84%,表明我国的禽腺病毒感染率很高。结果证实,研制的禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原敏感、特异,可用于禽腺病毒感染的血清学检测。

花椒叶提取物抑菌效果的初步研究

采用滤纸片法研究了花椒叶提取物在不同条件下对3种常见菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌)的抑菌效果。结果表明:(1)不同浓度下花椒叶提取物对3种细菌都有明显的抑制作用,且提取物浓度越高抑菌效果越明显;(2)不同温度下花椒叶提取物对3种细菌都有明显的抑制作用,但提取物的抑菌效果受温度影响较小;(3)花椒叶提取物在中性(pH=7.0)至偏碱性(pH=7.0～10.0)条件下抑菌效果明显,而在酸性(pH=4.0、6.0)条件下几乎无效果;(4)花椒叶提取物对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌作用效果相对较好。表明花椒叶提取物具有一定的抑菌作用。

连翘、丹参、当归和川芎嗪抑制弹性蛋白酶活力的对比观察

用琼脂扩散法测定弹性蛋白酶活力,发现酶活力与扩散直径成线性关系。连翘、丹参、当归和川芎嗪均有显著的抑制弹性蛋白酶活力作用,其中又以连翘为优。

苦参提取液中黄酮类化合物的抑菌作用

为探讨苦参中黄酮类化合物体外抑菌活性,采用乙醇回流法从苦参中提取含黄酮类化合物并用分光光度法在510 nm处测定黄酮含量.同时,采用琼脂扩散法研究了苦参黄酮类化合物对2种细菌和3种真菌的抗菌性能,测定了其最小抑菌浓度.结果表明:浓度为0.556 g/L的苦参黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌抑菌圈直径分别为11,8 mm,对啤酒酵母菌、黑曲霉和产黄青霉的抑菌圈直径分别为11,9,9 mm;苦参黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、啤酒酵母菌、产黄青霉、黑曲霉的最小抑菌浓度分别为5.6×10-3,0.56,0.28,0.56,0.56 g/L.由此得出结论,苦参中黄酮类化合物对细菌和真菌都有抑制作用,对革兰氏阳性菌的作用强于革兰氏阴性菌,对单细胞真菌作用强于丝状真菌.

琼脂扩散法测定罗布麻韧皮中酮类物质的抑菌活性

罗布麻在生物法脱胶方面存在一定困难,主要原因是因为有抑菌物质的存在。对青海罗布麻韧皮中的酮类物质进行了分离提取,用梯度稀释法测定了酮类物质对金黄葡萄球菌的最小抑菌浓度,用琼脂扩散法对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉的抑菌活性进行了研究。结果表明,罗布麻酮类化合物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.563μg·mL-1,浓度为1g·L-1的罗布麻酮类化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉的抑菌活性分别为32.835,15.734,21.521,21.322IU·mg-1。从抑菌活性看,罗布麻酮类化合物对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用,对革兰氏阴性菌黑曲霉的抑制作用较弱。证实罗布麻酮类化合物对细菌和真菌有抑制作用。

抗槲皮素抗体的研制

目的通过人工抗原的构建 ,制备针对槲皮素的特异性抗体。方法采用混合酸酐法合成的槲皮素卵清蛋白结合物作为包被抗原 ,将槲皮素与载体蛋白牛血清白蛋白 (BSA)结合 ,制成人工抗原。用人工抗原免疫家兔 ,制备了针对槲皮素的特异性抗体 ,并用双向琼脂扩散试验和 EL ISA方法对抗体进行了鉴定。IR、UV、TL C和熔点分析表明 ,中间体结合物为新的化合物。结果理想的包被抗原浓度为 40 0 ng/ ml,相应抗血清工作浓度为 1:16 0 0。结论运用混合酸酐法可以合成槲皮素人工抗原 。

棉花大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)血清学检测——抗原处理的比较

分别以棉花黄萎病菌V20的菌丝研磨物、菌丝蛋白、超氧化物歧化酶酶带Ⅰ、超氧化物歧化酶酶带Ⅱ为抗原免疫家兔,制备了抗血清As1、As2、As3、As4。琼脂双扩散法(ADD)和间接ELISA方法测定其特异性,发现这4种抗血清既可与同种的抗原发生阳性反应,也可与不同种的抗原发生交叉反应。用异种抗原黑白轮枝菌和尖孢镰刀菌吸附这4种抗血清,排除其非特异性成分后,抗血清专化性明显提高,消除了交叉反应。特异性测定表明:经吸附后的4种抗血清可以准确地将大丽轮枝菌鉴定到种的水平,但仍不能区分其生理型和致病类型。另外,当分别使用菌丝研磨物或菌丝蛋白为特异性测定抗原时,ADD检测的结果虽然一致,但前者阳性反应沉淀线粗糙,轮廓不清晰,后者的沉淀线较细,且清晰、明显。因此适宜选择菌丝蛋白为抗原进行抗血清的特异性测定试验。

细菌药物敏感性实验方法研究进展

致病菌的耐药性已成为世界范围内的公共卫生和安全问题,如何对致病菌的耐药性进行准确快速的检测是许多微生物科研人员和医疗工作者共同面临的难题。根据近年国内外有关研究资料与报道,对于细菌耐药性的检测和分析主要通过对细菌进行药物敏感性实验来执行。目前用于细菌药敏性实验的方法主要包括:肉汤稀释法、琼脂稀释法、K-B纸片法和E-test实验等。文中就以上几种细菌药敏性实验方法的原理、步骤及优缺点进行了概述,并对各种实验方法的应用进行了举例分析。

温度对琼脂扩散法测定Nisin效价的影响

4℃预扩散和培养温度是影响琼脂扩散法测定Nisin效价的两个重要因素。4℃预扩散可明显改进Nisin在琼脂中的扩散效果,提高效价测定的精确度。30℃培养时,Nisin效价测定的精确度和灵敏度最高。

丹参酮ⅡA的抑菌活性研究

目的 :研究丹参酮ⅡA的抑菌活性及选用溶剂的相关性。方法 :将疏水性溶剂 (CHCl3 )改换为亲水性溶剂 (DMF)后 ,再利用琼脂扩散法以观察其抑菌的效果。结论 :采用琼脂扩散法的药敏试验 ,不全能适用于从中药内分离出的那些脂溶性而具有抑菌的活性成分。本试验的结果是丹参酮ⅡA和丹参酮ⅡB对大肠杆菌的最低抑菌浓度分别是 5 0 ,2 5 μg/ml。对金黄色葡萄球菌ATCC 2 5 92 3的最低抑菌浓度分别是 10 0 ,5 0 μg/ml。对绿脓杆菌ATCC 2 785 3的最低抑菌浓度分别是 5 0 ,2 5 μg/ml。对溶血性链球菌的最低抑菌浓度分别是 12 5 ,2 5 μg/ml,文中还引述了丹参酮ⅡA与隐丹参酮从结构差别到物化性质特别是亲水性质的区别。

常用抗菌药物对东北地区猪源链球菌的体外抗菌活性研究

采用微量稀释法(27种药物)和琼脂扩散法(7类药物)分别对临床分离的101株猪源链球菌进行了体外耐药性研究。以美国临床检验标准委员会(CLSI/NCCLS)的临界浓度和抑菌圈直径做为判断标准,判定了其对27种药物的耐药性和7类药物的耐药谱。结果表明,临床分离的菌株以耐药菌为主,且100%的菌株呈多重耐药;对头孢菌素类(100%)、磺胺类药物(96%～100%)、大环内酯类(97%～99%)、四环素类(98%)、青霉素类(94%～97%)耐药性最为严重,氟喹诺酮类药物(48%～91%)耐药性次之,共有25种不同的耐药谱型。结果表明,在东北地区分离到的猪源链球菌以多重耐药为主。

参菊洗剂体外抑菌作用

目的研究参菊洗剂的体外抑菌作用。方法采用琼脂扩散纸片法测定抑菌圈直径,采用液体培养液连续稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),采用琼脂培养液平板法测定最低杀菌浓度(MBC),并与市售某妇科洗液比较抑菌作用。结果参菊洗剂对5种病原菌株的抑菌作用明显优于相同浓度的市售某妇科洗液,差异有统计学意义(P<0.05);参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MIC分别为33.75,67.50,67.50,67.50,33.75 mg·m L-1;参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MBC分别为33.75,67.50,67.50,135.00,33.75 mg·m L-1。结论参菊洗剂具有较明显的抑菌和杀菌作用。

六种微藻的抗MRSA活性筛选

本文以琼脂扩散法为体外抗菌活性测定方法,研究了六种微藻(两种绿藻,三种硅藻和一种蓝藻)的不同溶剂提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑制活性。结果表明,每种微藻的提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有不同程度的抑制活性。其中,蓝隐藻、牟氏角毛藻和青岛大扁藻的提取物具有良好的抗菌活性。结论:微藻是一种新的开发抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌物质的潜在资源。