FoxA1及RNF6在宫颈鳞状细胞癌的表达及意义

目的探讨FoxA1及RNF6在宫颈鳞状细胞癌的表达及意义。方法回顾性分析164例宫颈鳞状细胞癌患者(PE组)及164例慢性宫颈炎患者(对照组)的临床资料及保存良好的病理组织标本。采用实时定量PCR技术及免疫组织化学方法检测2组患者病理组织FoxA1及RNF6蛋白、mRNA的表达情况。结果PE组FoxA1及RNF6蛋白、mRNA表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论FoxA1及RNF6可能通过调节基因表达及蛋白酶作用增强肿瘤细胞增殖、分化,在宫颈鳞状细胞癌生长中发挥重要作用。

MAOA/FOXA1在前列腺癌神经内分泌化进展中的动态变化特征

目的探索前列腺癌神经内分泌分化(neuroendocrine differentiation,NED)进展中单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAOA)和叉头框蛋白A1(forkhead box A1,FOXA1)的动态变化特征,为临床神经内分泌型前列腺癌(neuroendocrine prostate cancer,NEPC)的治疗提供新的策略。方法通过恩杂鲁胺(enzalutamide,ENZ)长期持续诱导的方式建立NED的细胞模型和小鼠移植模型;采用Western Blot和Real-time PCR方法检测MAOA、FOXA1在NED中的动态表达;选用GEO数据库分析在多种NED模型中MAOA与FOXA1的动态变化趋势;构建前列腺癌细胞系小鼠移植模型,通过免疫组化分析体内模型中MAOA、FOXA1在NED中的动态表达;通过慢病毒转染干预MAOA,检测MAOA对FOXA1的调控作用。结果MAOA与FOXA1在NED过程中均呈现先升高后降低的动态变化特征;敲低前列腺癌细胞中MAOA可以导致FOXA1的表达降低,这可能是MAOA通过FOXA1在NED的不同阶段发挥不同作用。结论MAOA和FOXA1在NED过程中呈先升高后降低的趋势,MAOA的表达能影响FOXA1的水平,MAOA/FOXA1可能在NED过程中发挥动态调控的作用。

FOXA1通过调控XBP1的转录促进乳腺癌增殖的功能及机制研究

目的 探究先锋转录因子FOXA1在乳腺癌中的功能及其发挥功能的分子机制。方法利用cBioPortal数据库分析FOXA1在肿瘤中的突变情况,利用TCGA数据库分析FOXA1在乳腺癌组织中的mRNA表达水平及其与患者预后的关系;采用CCK-8和克隆集落形成实验探究FOXA1和X盒结合蛋白1(XBP1)对ERα阳性乳腺癌细胞增殖能力的影响;采用流式细胞技术分析FOXA1对ERα阳性乳腺癌细胞周期的影响;联合转录组学和GEO数据库分析乳腺癌中受FOXA1调控的基因及信号通路;采用蛋白质印迹技术和RT-qPCR技术验证受FOXA1调控的基因的表达情况。结果 在肿瘤中,FOXA1在多个位点发生突变;FOXA1在乳腺癌组织中的表达水平显著高于正常组织,并且FOXA1的高表达与患者的不良预后呈正相关;相比于其他乳腺癌分型,FOXA1在Luminal型乳腺癌中呈显著高表达;转录组和染色质免疫共沉淀分析一共鉴定到177个受FOXA1直接转录调控的基因,其中包括XBP1;通路富集分析表明,受FOXA1调控的基因显著富集在细胞周期和DNA复制通路上;在ERα阳性乳腺癌细胞系中,沉默FOXA1或者XBP1的表达显著抑制细胞增殖,沉默FOXA1的表达导致G1期细胞增多。结论 先锋转录因子FOXA1在ERα阳性乳腺癌中高表达,并且与患者不良预后相关。FOXA1通过调控包括XBP1在内的一系列癌基因的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖。

FOXA1和YAP在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中FOXA1蛋白和YAP蛋白的表达及其与胃癌患者临床病理特征的关系。方法收集西安交通大学医学部第二附属医院2009年1月至2013年12月间临床资料保存完整的胃癌组织80例和相应癌旁正常组织80例。应用免疫组化染色测定FOXA1和YAP1在胃癌及癌旁组织中的表达,分析两者表达与胃癌临床病理特征的关系;并进一步检测两者在胃癌中表达水平的相关性。结果 FOXA1蛋白和YAP蛋白在胃癌组织中的免疫组化评分显著高于其在癌旁组织中的免疫组化评分(FOXA1:3.50±0.20 vs.1.13±0.11,P<0.01;YAP:3.40±0.20vs.1.55±0.14,P<0.01);FOXA1蛋白的阳性表达与肿瘤大小、浸润深度、有无淋巴结转移及TNM分期有显著相关性(P<0.01);YAP蛋白的阳性表达与胃癌的分化程度以及淋巴结转移有显著相关性(P<0.01);FOXA1和YAP蛋白在胃癌组织中的表达具有显著相关性(P<0.01)。结论FOXA1和YAP在胃癌组织中存在显著高表达;FOXA1和YAP的阳性表达与胃癌患者的临床病理特征密切相关,两者在胃癌的发生发展可能有协同促进作用,联合检测这两种蛋白的表达对胃癌的临床诊断及预后判断有一定的指导意义。

转录因子FOXA1与前列腺癌恶性程度及进展相关性研究

目的:探讨FOXA1与前列腺癌(PCa)临床分期、组织学分级及去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的关系。方法:收集前列腺癌患者(35例)、良性前列腺增生(BPH)患者(21例)前列腺组织病理切片,应用免疫组化方法检测FOXA1和Ki-67的表达情况,进一步分析该分子阳性表达率与肿瘤临床分期、Gleason评分和CRPC的相关性。结果:PCa患者前列腺组织中FOXA1表达率明显高于BPH患者(100%vs 71.4%,P<0.01),FOXA1的表达阳性率与Ki-67表达阳性率正相关(P<0.001),与CRPC无明显相关性(P=0.391),但与Gleason评分(P=0.027)和肿瘤临床分期(P=0.002)相关。结论:FOXA1在前列腺癌组织中表达阳性率增高,晚期前列腺癌最高。

Hsa-miR-132通过靶向FOXA1基因影响食管癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨hsa-miR-132(miR-132)对人食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的机制。方法:构建pCDNA3.1(+)-miR-132表达载体并转染高转移潜能的人食管癌细胞KYSE150,G418筛选稳定过表达miR-132的KYSE150细胞。软琼脂克隆形成实验和Transwell小室实验检测KYSE150细胞的增殖和侵袭,Real-time PCR和Western blotting检测miR-132和叉头框蛋白A1基因(forkhead box protens A1,FOXA1)在KYSE150细胞中的表达,双荧光素酶报告基因分析和Western blotting检测过表达miR-132对FOXA1的调控作用。结果:成功构建pCDNA3.1(+)-miR-132质粒,获得稳定过表达miR-132的KYSE150细胞。亲本KYSE150细胞中miR-132低表达,而FOXA1蛋白高表达。与转染空载体和未转染KYSE150细胞相比,转染pCDNA3.1(+)-miR-132不影响KYSE150细胞的增殖(13.9±0.33 vs 15.4±0.11、17.1±0.20,P>0.05),但细胞体积较小且表面比较光滑;其可显著降低KYSE150细胞的侵袭能力[(55±1.6)vs(129.0±3.1)、(124.0±2.8)个细胞,P<0.01]。miR-132能够作用于FOXA1 3'-UTR,从而抑制内源性FOXA1的表达。结论:食管癌KYSE150细胞低表达miR-132,外源性过表达miR-132可负向调控FOXA1的表达,从而抑制KYSE150细胞的侵袭能力。

表达大鼠FoxA1的慢病毒制备和鉴定

通过PCR扩增获得大鼠FoxA1的cDNA,构建慢病毒重组载体plv-rFoxA1-IRES-EGFP,并瞬时转染293T细胞观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及Western blot检测FoxA1的表达.通过钙转将该重组载体与辅助质粒△8.91,pVSV-G共转染293T细胞制备慢病毒.研究结果表明,大鼠FoxA1慢病毒质粒成功构建,并且证实所制备的慢病毒能感染细胞,使细胞有效表达FoxA1蛋白,为FoxA1的功能研究奠定了材料基础.

甲状腺癌细针穿刺组织中S100A13、FOXA1表达量与细胞周期、细胞侵袭的相关性

目的:研究甲状腺癌细针穿刺组织中S100A13、FOXA1表达量与细胞周期、细胞侵袭的相关性。方法:选择在海阳市人民医院接受超声引导下甲状腺结节细针穿刺的患者,根据穿刺后病理检查结果分为甲状腺恶性组织和甲状腺良性结节。测定S100A13、FOXA1、细胞周期分子、细胞侵袭分子的表达量。结果:甲状腺癌组织中S100A13、FOXA1、CDK2、CyclinD1、MCM2、MCM7、SKP2、CLOCK、STAT3、STAT5、N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的mRNA表达量显著高于甲状腺良性结节(P<0.05);FOXA1高表达的甲状腺癌组织中CDK2、CyclinD1、MCM2、MCM7、SKP2、CLOCK的mRNA表达量显著高于FOXA1低表达的甲状腺癌组织(P<0.05);S100A13高表达的甲状腺癌组织中STAT3、STAT5、N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的mRNA表达量显著高于S100A13低表达的甲状腺癌组织(P<0.05)。结论:甲状腺癌中高表达的S100A13、FOXA1分别能够促进细胞侵袭以及细胞周期进程。

FoxA1蛋白的生物信息学分析

转录因子FoxA1通过与染色体结合释放出DNA结合位点对信号转导和细胞增殖进行调控。研究发现多种肿瘤组织中FoxA1表达上调,参与肿瘤生长调控,揭示FoxA1有可能成为新的肿瘤治疗靶点。该研究采用生物信息学方法,在获得FoxA1基因和蛋白序列的基础上,对其结构、性质以及与其有相互作用的蛋白进行初步的生物信息学分析,以期为进一步研究FoxA1的生物学特性奠定基础。

乳腺癌患者组织中FOXA1、BRCA-1表达与临床病理参数的相关性

目的研究乳腺癌患者组织中叉头框蛋白A1(FOXA1)、乳腺癌易感基因1(BRCA-1)表达与临床病理参数的相关性。方法回顾性分析2018年3月至2019年5月于本院收治的97例乳腺癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学法检测FOXA1、BRCA-1的表达,采用Pearson法分析FOXA1、BRCA-1的表达与乳腺癌患者临床病理参数之间的相关性。结果 BRCA-1阳性率35.05%,FOXA1阳性率61.86%。不同组织学分级、TNM分期、ER、PR、Ki67表达的乳腺癌患者组织中FOXA1的阳性例数比较差异有统计学意义(P<0.05)。不同组织学分级、TNM分期、肿瘤直径、ER、PR、Ki67表达的乳腺癌患者组织中BRCA-1的阳性例数比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FOXA1、BRCA-1表达与乳腺癌患者组织的临床病理参数具有较好的相关性,对于乳腺癌分级、分期以及预后有重要的临床价值。

人FoxA1 shRNA载体构建与检测

目的构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果。方法设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人FoxA1基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901),Realtime RT-PCR和Western-blotting检测干扰载体的干扰效率。结果①酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各干扰载体分别转染人正常胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901)发现,和空白对照组相比,3组干扰载体能够从mRNA和蛋白表达水平明显抑制FoxA1的表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以3号质粒对Foxa1的干扰效率最强。结论成功构建了三个有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,三组质粒都能有效地抑制FoxA1在GES-1细胞和SGC-7901细胞中的表达。

幽门螺杆菌感染与胃黏膜中FOXA1表达的相关性

背景:幽门螺杆菌(Hp)为Ⅰ类致癌因子。转录因子FOX家族在肿瘤发生、发展中的重要作用正逐渐凸显,FOXA1是一些microRNAs(miRNAs)作用的关键靶向转录因子。目的:探讨Hp感染与胃黏膜组织中转录因子FOXA1表达的相关性。方法:选择2014年1月—2014年9月接受胃镜检查的患者80例,采用14C-尿素呼气试验(14C-UBT)、胃黏膜组织学检查(改良Giemsa染色)、细菌培养检测Hp感染情况,采用免疫组化SP法检测患者胃黏膜组织中FOXA1表达。结果:Hp阳性组FOXA1阳性表达率为73.8%(31/42),Hp阴性组为47.4%(18/38),组间差异有统计学意义(χ2=4.81,P<0.05)。结论:FOXA1在胃黏膜组织中的高表达提示miRNAs途径可能是Hp感染致胃上皮内瘤变乃至癌变的分子机制之一。

miR-132在食管癌细胞系KYSE150中对靶基因FOXA1的调控作用

目的构建miR-132真核表达载体和融合靶基因FOXA1表达载体,在食管癌细胞KYSE150中验证miR-132对靶基因FOXA1的调控作用。方法根据miR-132序列在基因组中的位置及其上下游序列,以EC9706细胞基因组DNA为模板,扩增包含miR-132前体序列,克隆到pMD18-T Simple中,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后亚克隆到质粒pcDNA3.1(+)上;通过Real-time PCR检测转染重组表达载体pcDNA3.1-miR-132的KYSE150成熟miR-132的表达水平。用生物信息学软件对miR-132的靶基因进行预测,将候选靶基因FOXA1的3′UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-132对靶基因FOXA1的调控作用。将pCDNA3.1-miR-132表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过Western blot检测miR-132对FOXA1蛋白表达的影响。结果成功构建了miR-132真核表达载体,Real-time PCR验证表明pCDNA3.1-miR-132在KYSE150细胞中能够显著地过表达成熟miR-132。生物信息学预测FOXA1可能是miR-132的靶基因。双荧光素酶报告基因分析表明miR-132能够作用于FOXA1的3′UTR。Western blot进一步证实miR-132能够抑制内源性FOXA1蛋白的表达。结论FOXA1是miR-132直接调控的靶基因。

人FOXA1蛋白的原核表达、纯化及蛋白互作分析

构建FOXA1的原核表达载体,诱导表达并纯化后获得人FOXA1的C端和N端蛋白片段,为寻找FOXA1的互作蛋白提供材料基础.提取人乳腺癌细胞MCF7的总RNA,逆转录成cDNA,设计引物PCR克隆FOXA1的cDNA,再以此为模板扩增FOXA1的C端、N端cDNA片段,分别并克隆进带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒.双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21Rosetta DE3,经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定FOXA1蛋白的表达.与MCF7细胞裂解液孵育,进行GST-Pull down试验,检测纯化蛋白与FOXA1已知互作蛋白TLE3的相互作用.成功构建pGEX-4T-1-FOXA1-C和pGEX-4T-1-FOXA1-N的原核表达载体;在大肠杆菌中诱导目的蛋白表达;经Glutathione Sepharose 4B纯化后,获得了人FOXA1的C端蛋白片段GST-FOXA1-C与N端蛋白片段GSTFOXA1-N;证实GST-FOXA1-C能与FOXA1已知互作蛋白TLE3的相互作用.

人FoxA1基因重组慢病毒载体的构建和鉴定

目的构建叉头盒蛋白A1（Forkhead-box A1,Fox A1）的重组慢病毒表达载体,为探究其功能和作用机制奠定基础。方法设计基因引物,采用聚合酶链反应（PCR）扩增出Fox A1的c DNA序列,然后将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经PCR、双酶切反应及DNA测序鉴定,将阳性重组Fox A1表达载体、p CMV-VSV-G和p CMV-d R8.91包装质粒共转染到HEK-293T细胞进行病毒包装收集病毒浓缩液,然后再感染293T细胞,通过观察绿色荧光蛋白来计算病毒滴度,最后用病毒转染原代培养人皮肤成纤维细胞（HFFs）,通过实时荧光定量PCR检测Fox A1 m RNA的表达水平。结果重组慢病毒表达载体Fox A1经PCR扩增、酶切及测序鉴定正确,并得到滴度为1×10~8 TU/m L的病毒液,病毒感染人皮肤成纤维细胞后表达显著增强。结论成功构建了人Fox A1重组慢病毒载体,并可在HFFs内高效表达,为后续Fox A1的功能和机理研究奠定了实验基础。

转录因子FOXA1在乳腺癌分子分型中的功能研究

乳腺癌作为高度异源性的疾病,其准确的分子分型对于乳腺癌预后判断和制定合理的治疗方案都具有十分重要的临床意义。通过前期生物信息学分析认为foxa1在乳腺癌中具有重要的分子分型作用,利用免疫印迹法及实时定量PCR方法在涵盖4个乳腺癌亚型的10个乳腺癌细胞株中检测FOXA1的mRNA及蛋白表达水平情况,探索其与乳腺癌分子亚型之间关联,以及在肿瘤发生、发展及预后中的意义。结果显示,FOXA1的mRNA和蛋白表达量在乳腺癌Luminal A型和Luminal B型中显著高于其在Her2过表达型和三阴性型乳腺癌细胞株中的表达量。通过对其他促进细胞生长的重要基因表达量的关联分析以及基因沉默实验,发现FOXA1是介于GATA3和ER的关键调控元素,其高表达能够抑制细胞增殖。研究提出foxa1可以作为辅助分子对乳腺癌进行精准分型,验证了前期的生物信息学结论,推动了乳腺癌精准医学的发展。

FOXA1的作用机制及作为乳腺癌预后生物标志的研究进展

乳腺癌的发病具有明显的家族遗传倾向，而且与自身的雌激素水平密切相关。雌激素作用于雌激素受体（ER）从而调控的基因表达，是乳腺癌研究的重点。老年人由于雌激素分泌水平的改变以及其他机体功能的减退，是乳腺癌的高发人群。

叉头盒蛋白A1(FOXA1)在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的研究叉头盒蛋白A1(FOXA1)在良性乳腺肿瘤、乳腺癌及癌旁组织中的表达,以及与临床资料的相关性。方法采用免疫组织化学方法,检测54例乳腺癌、54例癌旁组织及20例良性乳腺肿瘤(10例纤维腺瘤和10例导管内乳头状瘤)中FOXA1的表达。分析FOXA1的表达与患者年龄、癌组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、细胞增殖核抗原KI67、人类表皮生长因子受体2(HER2)、肿瘤分期、瘤体大小以及阳性淋巴结数等临床资料的关系。结果 FOXA1在乳腺癌组织中的阳性率为68.5%(37/54),癌旁组织中的阳性率为88.9%(48/54),良性乳腺肿瘤中的阳性率为100%(20/20),FOXA1在乳腺癌与癌旁组织间、乳腺癌与良性乳腺肿瘤间的表达差异有统计学意义(P<0.05),而在癌旁组织与良性乳腺肿瘤间的表达差异无统计学意义(P>0.05);FOXA1的表达与组织学分级、Ki67呈负相关,与ER、PR呈正相关;FOXA1表达在各近似分子亚型间、Luminal A亚型与非Luminal A亚型间、Luminal亚型与非Luminal亚型之间有差异性。结论乳腺癌组织中普遍表达FOXA1,Luminal A型中最高,提示FOXA1可能成为乳腺癌患者预后良好的标志物之一。

FOXA1及FOXD3蛋白联合检测对胃癌临床诊断及患者生存率的意义

目的探讨FOXA1及FOXD3蛋白联合检测对胃癌临床诊断及患者生存率的意义。方法选取2015年1月至2017年1月间沈阳医学院附属中心医院收治的100例胃癌患者作为观察组,100例非胃癌者作为对照组。采用免疫组织化学染色法检测受试者通过胃镜检查采集的组织样本FOXA1及FOXD3蛋白表达水平,分析FOXA1及FOXD3蛋白检测对胃癌的临床诊断价值;对患者随访两年,分析FOXA1及FOXD3蛋白表达水平与患者生存率的关系。结果FOXA1、FOXD3在胃癌患者中的阴性表达率显著高于非胃癌患者(P<0.05),FOXA1、FOXD3蛋白联合检测有助于胃癌患者的临床诊断。FOXA1或FOXD3阳性表达胃癌患者生存率显著优于FOXA1或FOXD3阴性表达胃癌患者(P<0.05);FOXA1和FOXD3任一表达阳性胃癌患者生存率显著优于FOXA1及FOXD3指标双阴性胃癌患者(P<0.05)。结论采用FOXA1及FOXD3蛋白联合检测可提高胃癌临床诊断的敏感度,且FOXA1和FOXD3阳性表达常提示患者预估生存期较长。

FOXA1、p16在子宫内膜癌中的表达情况及其临床意义

目的:探讨FOXA1、p16在子宫内膜癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组化方法检测FOXA1、p16在68例子宫内膜癌组织、11例不典型增生组织及27例正常子宫内膜组织中的表达情况,分析2者与子宫内膜癌各临床病理指标的相关性以及2者表达的相关性。结果:子宫内膜癌组织中FOXA1、p16阳性表达率均低于正常子宫内膜组织及不典型增生内膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);FOXA1、p16的表达与子宫内膜癌病理分期、组织分级、肌层浸润、病理类型及淋巴结转移情况有关(P<0.05);2者在子宫内膜癌中的表达呈正相关。结论:FOXA1和p16与子宫内膜癌的发生发展相关,2者在子宫内膜癌的发展中具有协同作用。