菊苣酸通过FOXO3-FOXM1信号轴抑制肺癌细胞增殖和化疗敏感性并促进凋亡

目的:研究菊苣酸调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头蛋白M1(FOXM1)信号轴对肺癌细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法:构建人肺癌细胞顺铂(DDP)耐药细胞A549/DDP,用不同浓度菊苣酸处理后通过MTT法测定细胞活力,以不显著降低细胞活力的最大浓度作为菊苣酸的最佳作用浓度。将A549细胞随机分为对照组、空载组、菊苣酸组、菊苣酸+FOXO3敲低组,分组处理后分别采用MTT法、集落生成实验及流式细胞实验测定各组A549细胞增殖及凋亡;采用免疫印迹法检测各组A549细胞FOXO3-FOXM1通路、增殖(PCNA)与凋亡(Bcl-2、Bax)相关蛋白表达。将A549/DDP细胞随机分为对照组、DDP组、DDP+空载组、DDP+菊苣酸组、DDP+菊苣酸+FOXO3敲低组,分组处理后分别采用MTT法、集落生成实验及流式细胞实验测定各组A549/DDP细胞增殖及凋亡;采用免疫印迹法检测各组A549/DDP细胞FOXO3-FOXM1通路、增殖、耐药[P-糖蛋白(P-gp)]与凋亡相关蛋白表达。结果:与对照组相比,空载组A549细胞各指标无明显变化(P>0.05);菊苣酸组A549细胞凋亡率、Bax与FOXO3蛋白表达升高(P<0.05),集落生成率、细胞活力、Bcl-2与PCNA、FOXM1蛋白表达降低(P<0.05);FOXO3敲低可减弱菊苣酸对A549细胞上述各指标的作用。与对照组、DDP组相比,DDP+空载组A549/DDP细胞各指标均无明显变化(P>0.05);DDP+菊苣酸组A549/DDP细胞凋亡率、Bax与FOXO3蛋白表达均升高(P<0.05),集落生成率、细胞活力、Bcl-2与PCNA、P-gp、FOXM1蛋白表达均降低(P<0.05);FOXO3敲低可减弱菊苣酸对DDP处理下A549/DDP细胞上述各指标的作用。结论:菊苣酸可通过激活FOXO3-FOXM1信号而抑制肺癌细胞增殖和化疗敏感性并促进其凋亡,进而增强化疗药物DDP对其DDP耐药细胞的杀伤作用。

自拟参麦加味汤抑制FOXM1的表达发挥抑制气阴两虚非小细胞肺癌的临床作用分析

目的:探究自拟参麦加味汤对FOXM1的表达情况,进而抑制气阴两虚非小细胞肺癌的临床作用和效果。方法:52例非小细胞肺癌患者为2021年8月至2022年8月住院的52例非小细胞肺癌患者作为本次试验研究对象,采用随机平均分组法分为观察组和对照组,观察组即为给予试验干预的患者,共有26例,对患者在常规治疗的基础上再给予自拟参麦加味汤治疗干预;对照组则为采用常规治疗的患者。统计两组患者治疗效果、对两组患者治疗前后FOXM1的表达进行对比,对比两组患者CD3、CD8、CD45、CD4、NK的情况以及红细胞免疫功能。结果:观察组患者治疗效果高于对照组(P<0.05);治疗前两组患者的FOXM1的表达水平均较高,而在给予治疗和试验干预后,两组患者FOXM1的表达水平均有所下降,而观察组给予自拟参麦加味汤干预后的下降水平更低(P<0.05);观察组患者CD3、CD45、CD4、NK水平均低于对照组,观察组CD8水平高于对照组(P<0.05)。且观察组患者RBC-C3bRR、RBC-ICR低于对照组,RBC-CaR高于对照组(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌患者存在FOXM1的表达水平较低的情况,而在给予自拟参麦加味汤治疗干预后,患者FOXM1的表达水平明显下降,可见自拟参麦加味汤可通过抑制FOXM1的表达发挥抑制非小细胞肺癌细胞发展的作用,可为非小细胞肺癌的靶向治疗提供参考。

西格列汀调节FOXO3-FOXM1信号通路对肺癌细胞化疗敏感性的影响及机制研究

目的:研究西格列汀(SIT)调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头蛋白M1(FOXM1)信号通路对肺癌细胞化疗敏感性的影响及机制。方法:体外培养人肺癌细胞A549及其顺铂(DDP)耐药细胞A549/DDP,均以0、0.5、1、2、3、4mmoL/L的SIT处理,以CCK-8法测定各组A549及A549/DDP细胞活力并筛选出SIT最佳作用浓度。将A549/DDP细胞随机分为对照组、SIT(2mmoL/L)组、si-NC组(转染空载质粒)、SIT(2mmoL/L)+si-FOXO3(转染FOXO3 siRNA质粒)组,以SIT和质粒分组处理的同时以0、2、4、8、16、32mg/L DDP处理,然后以CCK-8法测定各组细胞化疗耐药指数。将A549/DDP细胞随机分为对照组、SIT(2mmoL/L)组、DDP(4mg/L)组、DDP(4mg/L)+si-NC组、DDP(4mg/L)+SIT(2mmoL/L)组、DDP(4mg/L)+SIT(2mmoL/L)+si-FOXO3组,分组处理后分别以CCK-8法、克隆形成实验及流式细胞实验测定各组A549/DDP细胞增殖、凋亡;以免疫印迹法检测各组A549/DDP细胞增殖(C-myc、PCNA)、凋亡{Bax、cleaved多聚ADP核糖聚合酶(PARP)}、耐药{P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP1)、MRP2、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)}与用FOXO3-FOXM1通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,SIT组细胞化疗耐药指数降低(P<0.05),si-NC组细胞化疗耐药指数无明显变化(P>0.05);与SIT组相比,SIT+si-FOXO3组细胞化疗耐药指数升高(P<0.05)。与对照组相比,DDP组、DDP+si-NC组A549/DDP细胞活力、克隆形成率、C-myc及PCNA蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Bax及cleaved PARP蛋白表达升高(P<0.05);DDP+SIT组A549/DDP细胞活力、克隆形成率、C-myc及PCNA、P-gp、MRP1、MRP2、BCRP、FOXM1蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Bax及cleaved PARP、FOXO3蛋白表达升高(P<0.05);SIT组A549/DDP细胞P-gp、MRP1、MRP2、BCRP、FOXM1蛋白表达降低(P<0.05),FOXO3蛋白表达升高(P<0.05)。与DDP组相比,DDP+SIT组A549/DDP细胞活力、克隆形成率、C-myc及PCNA、P-gp、MRP1、MRP2、BCRP、FOXM1蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Bax及cleaved PARP、FOXO3蛋白表达升高(P<0.05);DDP+si-NC组A549/DDP细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与DDP+SIT组相比,DDP+SIT+si-FOXO3组A549/DDP细胞活力、克隆形成率、C-myc及PCNA、P-gp、MRP1、MRP2、BCRP、FOXM1蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、Bax及cleaved PARP、FOXO3蛋白表达降低(P<0.05)。结论:SIT可通过促进FOXO3-FOXM1信号传导而下调耐药蛋白表达,增强肺癌细胞化疗敏感性,进而提高DDP对肺癌DDP耐药细胞的杀伤作用。

在脓毒症相关急性肾损伤中FOXM1靶向调控NLRP3表达

目的探究脂多糖(LPS)诱导的脓毒症相关急性肾损伤潜在的新干预靶点。方法将10只C57小鼠随机分为对照组和LPS组,采用全自动生化分析仪检测小鼠血清中尿酸(UA)、尿素(UREA)和肌酐(CREA)的浓度变化,通过免疫组化检测IL-1β、IL-6和NLRP3的表达情况。免疫印迹检测各组肾组织中IL-6和NLRP3的表达差异。生物信息学HumanTEDB网络分析转录因子FOXM1在NLRP3基因启动子的结合位点,通过双荧光素酶报告基因和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)验证FOXM1与NLRP3的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组小鼠血清中UA、UREA和CREA的浓度升高,肾组织中IL-1β、IL-6、NLRP3和FOXM1表达上调。生物信息学分析结果显示NLRP3是FOXM1的靶基因。双荧光素酶报告基因实验验证了转录因子FOXM1调控NLRP3基因表达,qRT-PCR实验证实了FOXM1对NLRP3表达的正向调控作用。结论脓毒症相关急性肾损伤组织中FOXM1表达升高,且FOXM1能够靶向调控NLRP3表达。

食管胃交界部腺癌肿瘤浸润淋巴细胞中FoxM1、GST-π表达情况与分化程度、转移及预后的关系

目的 分析食管胃交界部腺癌(AEGJ)肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)中叉头框蛋白M1(FoxM1)、谷胱甘肽-S-转移酶-Pi(GST-π)表达情况,探讨其与肿瘤分化程度、转移及患者预后之间的关系。方法 将60例行手术治疗的AEGJ患者纳为研究对象,术中留取癌灶组织与癌旁组织,机械法分离出癌灶组织及癌旁组织内TILs,流式技术检测TILs中FoxM1、GST-π表达量(以含有FoxM1、GST-π抗原细胞的百分率表示)。分析AEGJ癌灶组织及癌旁组织TILs中FoxM1、GST-π表达量与肿瘤临床特征之间的关系。随访3年,比较癌灶组织内TILs中FoxM1、GST-π不同表达量患者生存情况。结果 癌灶组织TILs内FoxM1、GST-π表达水平均高于癌旁组织TILs,差异具有统计学意义(P<0.05)。癌灶组织TILs内FoxM1表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度及淋巴转移相关(P<0.05),TILs内GST-π表达水平与肿瘤分化程度及浸润深度有关(P<0.05)。随访发现,FoxM1高表达组患者3年生存率及中位生存时间均低于低表达组(Rank=4.039,P=0.044),GST-π高表达组患者3年生存率及中位生存时间均低于低表达组(Rank=10.041,P=0.002)。结论 AEGJ组织TILs内FoxM1及GST-π表达水平明显高于癌旁TILs,且与AEGJ病理特点存在一定的关系。FoxM1及GST-π表达水平与AEGJ患者术后生存情况相关,是预测患者预后的潜在指标。

慢性鼻-鼻窦炎患者HIF-1α、FoxM1的表达及其与黏蛋白MUC5AC、MUC5B的相关性

目的 探讨慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、叉头框转录因子M1(FoxM1)的表达及其与黏蛋白5AC(MUC5AC)、黏蛋白5B(MUC5B)的关系。方法 选取2016年3月—2018年5月南充市中心医院行鼻内镜手术伴鼻息肉的CRS患者(CRS wNP组)和不伴鼻息肉的CRS患者(CRS sNP组)鼻窦黏膜各40例,另选取30例正常鼻腔黏膜作为对照组,采用免疫组织化学和逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测各组HIF-1α、FoxM1、MUC5AC、MUC5B的表达,并分析它们之间的关系。结果 免疫组织化学结果显示,MUC5AC、MUC5B、HIF-1α、FoxM1在各组黏膜上皮中阳性面积均差异明显(P<0.001)。CRS wNP组和CRS sNP组各指标阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,各组MUC5AC、MUC5B、HIF-1α、FoxM1 mRNA的相对表达量均有明显差异(P<0.001),CRS wNP组和CRS sNP组各指标相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。Person分析结果显示,在伴或不伴鼻息肉的CRS组织中,HIF-1α、FoxM1与MUC5AC及MUC5B mRNA的表达均存在正相关(P<0.001)。结论 发现在伴或不伴鼻息肉的CRS中,HIF-1α、FoxM1、MUC5AC、MUC5B的表达均上调,且HIF-1α、FoxM1均与黏蛋白MUC5AC、MUC5B正相关,HIF-1α和FoxM1可能在CRS中黏液生成增多中起着重要的作用。

探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制

目的 探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制。方法 在骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、筛选稳定顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)、慢病毒转染稳定FoxM1过表达细胞株(HOS/FoxM1、U2OS/FoxM1)及空载体对照(HOS/NC、U2OS/NC)中,采用Western blot法检测FoxM1和c-myc蛋白的表达。应用CCK-8细胞增殖实验检测FoxM1抑制剂RCM-1对骨肉瘤细胞顺铂敏感性的影响;采用生物信息学方法分析FoxM1和c-myc表达与患者预后的关系。结果 FoxM1和c-myc在骨肉瘤顺铂耐药细胞中的蛋白表达比亲本细胞明显升高。与空载体对照组中FoxM1(0.26±0.03 vs 0.37±0.02)、c-myc(0.35±0.07 vs 0.59±0.03)相比,FoxM1过表达细胞中FoxM1(0.81±0.13 vs 0.61±0.01)和c-myc(1.19±0.08 vs 1.61±0.13)蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。采用10μmol/L FoxM1抑制剂RCM-1处理后,顺铂耐药细胞(FoxM1:0.23±0.01 vs 0.19±0.02,c-myc:0.39±0.01 vs 0.31±0.04)和FoxM1过表达细胞中(FoxM1:0.11±0.03 vs 0.10±0.02,c-myc:0.35±0.01 vs 0.36±0.02)FoxM1和c-myc蛋白表达均明显下降。与单独顺铂给药组相比,采用顺铂联合FoxM1抑制剂RCM-1处理,骨肉瘤耐药细胞和FoxM1过表达细胞的增殖能力均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析发现:FoxM1和c-myc高表达组患者的总生存期低于低表达组(P<0.05)。结论 FoxM1可能通过上调c-myc表达促进骨肉瘤细胞对顺铂耐药,联合运用FoxM1抑制剂能够增强骨肉瘤耐药细胞对化疗的敏感性,了解其分子机制有望为临床逆转骨肉瘤化疗耐药提供新的治疗靶点。

Smo、Gli2及FoxM1对神经胶质瘤诊断和预后的评估价值

目的 探讨Smo、胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)及叉头框转录因子M1(FoxM1)对神经胶质瘤诊断和预后的评估价值。方法 取80例神经胶质瘤标本为神经胶质瘤组,60例正常脑组织标本为正常组。免疫组化法检测两组Smo、Gli2、FoxM1表达水平,分析其与神经胶质瘤患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析不同Smo、Gli2、FoxM1表达水平神经胶质瘤患者预后的差异,分析影响神经胶质瘤预后的相关因素。结果 神经胶质瘤组织Smo、Gli2、FoxM1高表达率均高于正常脑组织,且随神经胶质瘤患者组织学分级升高而表达率增高(P<0.05)。不同组织学分级、不同Smo、Gli2、FoxM1表达水平的神经胶质瘤患者5年生存率存在显著差异(P<0.05)。组织学Ⅲ~Ⅳ级、Smo高表达、Gli2高表达、FoxM1高表达是神经胶质瘤预后的危险因素(P<0.05)。结论Smo、Gli2、FoxM1高表达是神经胶质瘤预后的危险因素,三者有望作为神经胶质瘤诊断和预后的判断指标。

FoxM1靶向肽9R-P49对L929成纤维细胞的抑制作用及机制

为探究9R-P49多肽对FoxM1的作用及其对成纤维细胞的调控机制,采用CCK-8检测细胞抑制率、AO/EB双染和流式细胞术检测细胞凋亡、Transwell检测细胞迁移、细胞平板克隆检测细胞增殖;使用PyMOL分子对接软件预测P49多肽与FoxM1-DBD的潜在结合位点;采用0、30.0和60.0μg/mL的9R-P49多肽处理小鼠成纤维L929细胞,Western Blot检测FoxM1蛋白的表达,最后通过RNA转录组分析差异基因及相关通路。结果表明:在L929细胞中9R-P49下调FoxM1蛋白的表达,同时,9R-P49能够抑制细胞增殖和迁移、促进细胞凋亡;P49多肽与FoxM1-DBD上的Arg 297、Ser 290和Asp 293位点存在潜在结合;给药处理后转录组差异基因GO分类主要富集于细胞过程、单一组织过程、生物调节过程和新陈代谢过程等,KEGG分类主要富集于免疫系统、内分泌系统、信号转导和新陈代谢等通路。在成纤维L929细胞中9R-P49能够通过调控FoxM1表达抑制L929细胞增殖和迁移并促进凋亡。

FOXM1与CENP-A在骨肉瘤化疗耐药中的关系及其作用机制

目的探讨CENP-A是否参与骨肉瘤细胞化疗耐药及与叉头框蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)的调控关系。方法采用Western blot法检测骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)和稳定FOXM1过表达细胞(HOS/FOXM1、U2OS/FOXM1)中CENP-A蛋白表达。转染siRNA后检测CENP-A蛋白表达;运用CCK-8细胞增殖实验观察siRNA敲低CENP-A后耐药骨肉瘤细胞对顺铂敏感性的影响;FOXM1抑制剂RCM1处理后检测CENP-A蛋白表达。Kaplan-Meier法分析GEPIA数据库中CENP-A表达与患者预后的关系,Spearman相关性分析CENP-A和FOXM1两者之间的关系。结果骨肉瘤顺铂耐药细胞中CENP-A蛋白表达比亲本细胞明显升高(0.52±0.03 vs 0.92±0.01,0.33±0.02 vs 1.12±0.01),FOXM1过表达细胞中CENP-A表达较空载体对照亦明显增高;在骨肉瘤顺铂耐药和FOXM1过表达细胞中转染siRNA-CENP-A后,CENP-A蛋白表达均明显降低(0.84±0.01 vs 0.60±0.02,0.98±0.01 vs 0.41±0.01)。转染siRNA敲低CENP-A后,骨肉瘤耐药细胞和FOXM1过表达细胞对顺铂的耐药性明显降低。10μmol/L RCM1 FOXM1抑制剂处理耐药细胞和FOXM1过表达细胞后,CENP-A蛋白表达均明显下降。生物信息学分析发现CENP-A高表达组患者总生存期显著低于低表达组(P<0.01)。Spearman相关性分析发现CENP-A和FOXM1表达呈正相关(r=0.79)。结论FOXM1可能通过调控CENP-A参与骨肉瘤化疗耐药,为骨肉瘤化疗耐药治疗策略提供新的理论基础。

基于生物信息学数据库分析FOXM1在肝癌中的表达及其临床预后意义

目的 通过挖掘癌症数据库中的数据,分析了FOXM1在肝癌患者中的临床表达作用情况及其临床意义。方法 检索Oncomine、GEPIA和HPA数据库中有关肝癌中FOXM1的数据,结合文献二次综合分析,WB进行相互验证。结果 Oncomine数据库分析FOXM1在所有肿瘤类型中的表达,差异有统计学意义的研究结果共78个,其中肝癌中高表达的研究有4个。Oncomine与GEPIA两个数据库分析结果一致发现FOXM1 m RNA在肝癌组织中地表达显著高于正常组织(P<0.001)。HPA网站分析显示,FOXM1蛋白在正常组织中表达水平较低或不表达,但在肝癌组织中呈显著高表达。该蛋白表达结果与mRNA表达一致。生存分析发现,FOXM1表达水平与总生存期和无瘤生存期显著相关,FOXM1高表达患者临床预后差(均P<0,001)。GEPIA在线分析显示在肿瘤的不同临床阶段,各组之间的FOXM1 mRNA表达差异显著(P<0.001)。进一步相关性分析,发现肝癌中FOXM1与MSH4相关性低,而与MLH1、MSH2、MSH3、MSH5和MSH6基因的表达呈现正相关性(均P<0.001);与PIK3CA、mTOR、AKT1、HIF1A及VEGFA的表达均呈现正相关(均P<0.001)。WB结果显示实验组MLH1、MSH2、MSH3、MSH5、MSH6、PIK3CA、mTOR、AKT1、HIF1A和VEGFA的表达水平在一定程度上有所提高。结论 利用生物信息学的相关性方法分析发现,在肝癌组织中,FOXM1高表达,并且和癌症的临床分期以及预后密切相关。其机制可能与调节PI3K/AKT信号通路及错配修复基因MLH1、MSH2、MSH3、MSH5和MSH6有关,值得进一步深入探究。

FOXM1通过调控HJURP表达促进肺腺癌细胞增殖

目的探讨Holliday交叉识别蛋白(Holliday junction recognition protein,HJURP)在肺癌组织中的表达与肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者预后的关系及其对肺腺癌细胞(H1299及SPC-A1)增殖的影响机制。方法收集本中心胸外科2019年2月至2020年5月17例非小细胞肺癌患者经手术切除的肿瘤组织样本和正常组织样本,采用RT-qPCR和Western blot分析HJURP在肿瘤组织和正常组织中的表达情况。通过分析癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和Kaplan-Meier Plotter(KM-plot)数据库,验证HJURP在肿瘤组织和正常组织的表达情况及其与肺腺癌患者预后的关系。采用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2-deoxyuridine,EdU)摄取实验检测HJURP敲低对肺腺癌细胞系增殖的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验,检测HJURP敲低对肺腺癌细胞系体内生长的影响。采用Pearson相关性分析收集样本与公共数据库HJURP与叉头盒基因M1(forkhead box protein M1,FOXM1)表达的相关性。通过染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验分析FOXM1对HJURP的转录调控作用。采用双荧光素酶报告基因实验分析FOXM1与HJURP启动子的结合情况。采用SiRNA敲低FOXM1细胞系,检测其对HJURP表达的影响。结果RT-qPCR与Western blot实验均证实,肺腺癌肿瘤组织中HJURP的表达较正常组织显著升高(P<0.05)。基于TCGA及KM-Plot公共数据库肺腺癌患者队列的生存分析显示,肿瘤组织中HJURP高表达与患者不良预后密切相关(P<0.05)。HJURP敲低后显著抑制H1299(P<0.05)及SPC-A1(P<0.05)的体外增殖能力。HJURP与FOXM1的表达呈正相关(本中心样本:r=0.5813,P<0.05;TCGA数据库:r=0.8776,P<0.05;CCLE数据库:r=0.4551,P<0.05)。ChIP实验与双荧光素酶报告基因实验均显示,FOXM1能够与HJURP启动子区域结合。敲低FOXM1后,HJURP表达水平显著下降(P<0.05)。结论HJURP可调控肺腺癌肿瘤细胞增殖,HJURP高表达与肺腺癌患者较差的预后密切相关。FOXM1是调控HJURP的上游主要转录因子。

FoxM1在肝胆胰恶性肿瘤中的作用及机制研究进展

叉头盒蛋白M1(FoxM1)作为Forkhead基因超家族的一员,是调节细胞增殖和凋亡的重要转录因子。近年研究发现,FoxM1在人类肝胆胰恶性肿瘤中异常表达,并且与其侵袭转移及预后密切相关。随着其作用机制的不断明确,FoxM1可望作为肝胆胰恶性肿瘤新的预后生物标志物和治疗靶点。本文就近年来FoxM1在肝胆胰常见恶性肿瘤的作用及相关机制研究进展进行综述。

环状RNA circ-FOXM1降低克唑替尼对肺癌细胞抑制效果的作用机制研究

目的探讨环状RNA circ-FOXM1降低克唑替尼对肺癌细胞抑制效果的作用机制。方法构建克唑替尼耐药肺癌细胞株H2228/CR。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测circ-FOXM1在BEAS-2B、H2228、H2228/CR细胞中的表达。将H2228细胞分为circ-FOXM1过表达组和过表达对照组。将H2228/CR细胞分为circ-FOXM1沉默组和沉默对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的半抑制浓度(IC_(50))。经克唑替尼干预处理后,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,采用Transwell实验检测各组细胞迁移数,采用Western blot实验检测各组细胞磷酸化的磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)的表达水平。结果H2228/CR细胞circ-FOXM1表达水平高于H2228细胞,H2228细胞circ-FOXM1表达水平高于BEAS-2B细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。克唑替尼对过表达组细胞的IC_(50)显著高于过表达对照组细胞(P<0.05)。克唑替尼对沉默组细胞的IC_(50)显著低于沉默对照组细胞(P<0.05)。经克唑替尼干预处理后,过表达组的细胞凋亡率低于过表达对照组,细胞迁移数、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值均高于过表达对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默组的细胞凋亡率高于沉默对照组,细胞迁移数、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值均低于沉默对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论circ-FOXM1可能通过激活PI3K/AKT信号通路降低克唑替尼对肺癌细胞的抑制效果。

转录因子FOXM1剪接异构体在乳腺癌EMT过程中的初步研究

探究转录因子FOXM1不同的剪接异构体对乳腺癌EMT过程中的影响.采用基因工程方法分别构建了表达FOXM1B-EGFP和FOXM1C-EGFP两种FOXM1剪接异构体真核表达质粒,并将其转染进乳腺癌细胞,采用RT-PCR和Western印迹检测细胞样本中FOXM1剪接异构体的表达和EMT相关基因表达,同时采用transwell检测高表达不同FOXM1剪接异构体细胞的侵袭和迁移能力.成功构建了FOXM1B-EGFP和FOXM1CEGFP真核表达质粒.外源FOXM1B在乳腺癌间质型细胞的表达高于上皮型细胞,并主要存在于细胞核内,且高表达FOXM1B能够显著促进乳腺癌细胞的侵袭和EMT过程.外源FOXM1C在乳腺癌上皮型细胞中的表达高于间质型细胞,并且在细胞核和细胞质中均有表达,高表达FOXM1C能够显著抑制细胞的侵袭和EMT过程.实验结果表明,在乳腺癌细胞中,FOXM1B主要存在于细胞核内,FOXM1C在细胞核和细胞质中均有表达.本研究预示FOXM1B和FOXM1C对乳腺癌细胞EMT过程发挥不同的影响.

Foxm1调控房颤心房重构的作用与机制研究

探讨Foxm1调控房颤心房重构的作用与机制研究。方法:建立48例房颤SD大鼠作为研究组,同时建立40例窦律SD大鼠作为对照组,所有患者均进行开胸手术,取其右心耳组织,利用HE染色法对患者的心房肌组织形态学的改变进行观察,通过荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对Foxm1基因的mRNA进行检测,通过蛋白免疫印迹法对Foxm1蛋白表达水平进行检测。结果:对HE染色结果进行观察,相比较对照组患者,研究组患者的心房肌细胞明显增大,并且患者的肌纤维大小不均、排列紊乱、断裂以及增粗,胞核增大,心肌组织间质的纤维化也更加明显。通过qRT-PCR对Foxm1的表达量进行测量,结果研究组的相对表达量为(2.94±0.53)相比较对照组的(1.01±0.25)明显更高(P<0.05),通过蛋白免疫印迹法检测Foxm1的表达水平,结果研究组为(0.245±0.041)明显高于对照组患者的(0.076±0.021)(P<0.05)。结论:从组织学形态学观察房颤患者明显出现心房重构现象,并且房颤患者的Foxm1的mRNA水平以及蛋白表达量明显升高,其与房颤心房重构呈正相关。

FOXM1促进心肌细胞H9C2细胞增殖、迁移和侵袭探究

探讨FOXM1促进心肌细胞H9C2细胞增殖,迁移和侵袭。方法:选取大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分成3组:分别为空白对照组、阴性对照组以及siRNA-FOXM1阳性对照组;利用实时荧光定量PCR方法对细胞中FOXM1、VEGF以及bFGF的mRNA水平进行检测,通过CCK8法对细胞增殖进行检测;通过细胞划痕实验对细胞迁移能力进行检测;通过Transwell对细胞的侵袭能力进行检测;通过Western blot法对各细胞内的VEGF以及bFGF蛋白的表达进行检测。结果:相比较阴性以及空白对照组,对FOXM1的表达进行干扰之后,其mRNA以及蛋白的表达明显的下降(P<0.05);对FOXM1的表达进行抑制之后,H9C2细胞内部的bFGF以及VEGF的mRNA以及蛋白的表达也出现了明显的下降(P<0.05)。结论:FOXM1能够促进心肌细胞H9C2的增殖、迁移以及侵袭,对FOXM1进行抑制能够使得H9C2增殖、迁移以及侵袭受到抑制,具体的机制可能与VEGF以及bFGF表达有着密切的关系。

姜黄素通过ATK/FoxM1信号通路调控胃癌干细胞增殖及凋亡

背景:姜黄素对多种肿瘤细胞及肿瘤干细胞有抑制作用,但其对胃癌干细胞的影响及作用机制尚未见报道。目的:探索姜黄素对胃癌干细胞的影响及作用机制。方法:利用肿瘤球形成实验和胃癌表面标记物(EpCAM及CD44)从胃癌SGC7901细胞系中分离胃癌干细胞;MTT实验检测姜黄素对胃癌干细胞增殖的影响;流式细胞仪检测姜黄素对胃癌干细胞凋亡的影响;Western blot检测胃癌干细胞中FoxM 1、p-AKT及AKT的表达;给予PI3K/AKT信号通路阻断剂LY294002干预胃癌干细胞,研究AKT信号通路与Fox M1信号通路的调控关系。结果与结论:(1)成功从胃癌SGC7901细胞系中分离出了EpCAM+/CD44+双阳性胃癌干细胞;(2)姜黄素可以抑制胃癌干细胞的增殖,促进其凋亡,抑制干细胞中FoxM1及p-AKT的表达;(3)PI3K/AKT信号通路阻断剂LY294002能够抑制胃癌细胞中p-AKT及FoxM1的表达;(4)结果提示,姜黄素可以通过阻断ATK/FoxM1信号通路抑制胃癌干细胞增殖并促进其凋亡。

FOXM1_(688-748)结构域相互作用蛋白的鉴定

为了鉴定转录因子FOXM1转录激活结构域(C-端第688位到748位氨基酸序列)的互作蛋白,以FOXM1的cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法扩增获得其转录激活结构域序列,克隆进入原核表达载体pGEX-4T2;利用大肠杆菌原核表达获得融合谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-Transferase,GST)标签的重组蛋白GST-FOXM1_(688-748);通过GST-pulldown结合质谱方法鉴定FOXM1_(688-748)的互作蛋白,成功构建了原核表达质粒pGEX-4T2-FOXM1_(688-748),获得了原核表达的重组蛋白GST-FOXM1_(688-748).将质谱鉴定获得的互作蛋白进行分析和归类,预示一些互作蛋白可以参与激活FOXM1的转录活性,如RPN2、MISP、MCM7蛋白,一些互作蛋白可以参与调控FOXM1蛋白的稳定性,如USP9Y、CUL4A、HSPB1、BAG2蛋白.FOXM1蛋白的转录激活结构域与许多不同功能的蛋白发生相互作用,暗示该结构域具有重要的分子生物学作用,期望为以FOXM1为靶点的临床药物研发提供实验依据.

梓醇通过FOXO3-FOXM1轴调控乳腺癌MCF-7细胞的增殖与凋亡

目的:探讨中药地黄提取物梓醇(Cat)对乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡,以及裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法:以不同质量浓度(0、5、25、50、100、200μg/mL)Cat处理人乳腺癌MCF-7细胞,用MTT法筛选Cat给药浓度。将MCF-7细胞分为空白对照组、Cat低剂量组、Cat中剂量组、Cat高剂量组、Cat+sh-NC组和Cat+sh-FOXO3组,采用Edu细胞增殖实验、平板克隆实验、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖与克隆形成能力、凋亡率和细胞周期,WB法检测各组细胞中FOXO3、FOXM1、caspase-3和caspase-8蛋白表达。构建乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,观察Cat对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中FOXO3和FOXM1蛋白表达。结果:Cat低(50μg/mL)、中(100μg/mL)、高(200μg/mL)剂量处理的MCF-7细胞的增殖能力均显著下降(均P<0.05)。与空白对照组比较,Cat低、中、高剂量组Edu阳性细胞率、克隆形成数、S期与G2/M期细胞比例及FOXO3蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例及FOXM1、caspase-3、caspase-8蛋白表达均显著升高(均P<0.05);与Cat+sh-NC组比较,Cat+sh-FOXO3组Edu阳性细胞率、克隆形成数、S期与G2/M期细胞比例及FOXO3蛋白表达均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例及FOXM1、caspase-3和caspase-8蛋白表达均显著下降(均P<0.05)。Cat组MCF-7细胞裸鼠移植瘤体积、质量和FOXO3蛋白表达均显著降低(均P<0.05),FOXM1的蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:Cat抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并促进凋亡,在体内抑制裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与上调FOXO3、下调FOXM1的表达有关。