菊苣酸通过FOXO3-FOXM1信号轴抑制肺癌细胞增殖和化疗敏感性并促进凋亡

目的:研究菊苣酸调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头蛋白M1(FOXM1)信号轴对肺癌细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法:构建人肺癌细胞顺铂(DDP)耐药细胞A549/DDP,用不同浓度菊苣酸处理后通过MTT法测定细胞活力,以不显著降低细胞活力的最大浓度作为菊苣酸的最佳作用浓度。将A549细胞随机分为对照组、空载组、菊苣酸组、菊苣酸+FOXO3敲低组,分组处理后分别采用MTT法、集落生成实验及流式细胞实验测定各组A549细胞增殖及凋亡;采用免疫印迹法检测各组A549细胞FOXO3-FOXM1通路、增殖(PCNA)与凋亡(Bcl-2、Bax)相关蛋白表达。将A549/DDP细胞随机分为对照组、DDP组、DDP+空载组、DDP+菊苣酸组、DDP+菊苣酸+FOXO3敲低组,分组处理后分别采用MTT法、集落生成实验及流式细胞实验测定各组A549/DDP细胞增殖及凋亡;采用免疫印迹法检测各组A549/DDP细胞FOXO3-FOXM1通路、增殖、耐药[P-糖蛋白(P-gp)]与凋亡相关蛋白表达。结果:与对照组相比,空载组A549细胞各指标无明显变化(P>0.05);菊苣酸组A549细胞凋亡率、Bax与FOXO3蛋白表达升高(P<0.05),集落生成率、细胞活力、Bcl-2与PCNA、FOXM1蛋白表达降低(P<0.05);FOXO3敲低可减弱菊苣酸对A549细胞上述各指标的作用。与对照组、DDP组相比,DDP+空载组A549/DDP细胞各指标均无明显变化(P>0.05);DDP+菊苣酸组A549/DDP细胞凋亡率、Bax与FOXO3蛋白表达均升高(P<0.05),集落生成率、细胞活力、Bcl-2与PCNA、P-gp、FOXM1蛋白表达均降低(P<0.05);FOXO3敲低可减弱菊苣酸对DDP处理下A549/DDP细胞上述各指标的作用。结论:菊苣酸可通过激活FOXO3-FOXM1信号而抑制肺癌细胞增殖和化疗敏感性并促进其凋亡,进而增强化疗药物DDP对其DDP耐药细胞的杀伤作用。

自拟参麦加味汤抑制FOXM1的表达发挥抑制气阴两虚非小细胞肺癌的临床作用分析

目的:探究自拟参麦加味汤对FOXM1的表达情况,进而抑制气阴两虚非小细胞肺癌的临床作用和效果。方法:52例非小细胞肺癌患者为2021年8月至2022年8月住院的52例非小细胞肺癌患者作为本次试验研究对象,采用随机平均分组法分为观察组和对照组,观察组即为给予试验干预的患者,共有26例,对患者在常规治疗的基础上再给予自拟参麦加味汤治疗干预;对照组则为采用常规治疗的患者。统计两组患者治疗效果、对两组患者治疗前后FOXM1的表达进行对比,对比两组患者CD3、CD8、CD45、CD4、NK的情况以及红细胞免疫功能。结果:观察组患者治疗效果高于对照组(P<0.05);治疗前两组患者的FOXM1的表达水平均较高,而在给予治疗和试验干预后,两组患者FOXM1的表达水平均有所下降,而观察组给予自拟参麦加味汤干预后的下降水平更低(P<0.05);观察组患者CD3、CD45、CD4、NK水平均低于对照组,观察组CD8水平高于对照组(P<0.05)。且观察组患者RBC-C3bRR、RBC-ICR低于对照组,RBC-CaR高于对照组(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌患者存在FOXM1的表达水平较低的情况,而在给予自拟参麦加味汤治疗干预后,患者FOXM1的表达水平明显下降,可见自拟参麦加味汤可通过抑制FOXM1的表达发挥抑制非小细胞肺癌细胞发展的作用,可为非小细胞肺癌的靶向治疗提供参考。

FOXM1上调ELK1介导铁死亡促进宫颈癌细胞顺铂耐药性

目的探讨FOXM1通过ELK1对宫颈癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及其潜在机制。方法生物信息学分析FOXM1和ELK1在宫颈癌组织中的表达;qPCR检测FOXM1和ELK1在宫颈癌细胞中的表达;双荧光素酶报告基因实验、ChIP实验验证二者结合情况。GSEA分析ELK1富集通路;Pearson相关性分析ELK1和抑制铁死亡关键基因的相关性。CCK-8检测细胞活力;PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。透射电镜观察线粒体形态变化;Lipid Peroxidation(MDA)Assay试剂盒检测丙二醛(MDA)含量;Werstern blot检测GPX4、SLC7A11、ACSL4蛋白表达。结果ELK1与FOXM1在宫颈癌组织和细胞中显著高表达,且二者存在结合位点。与oe-NC组相比,oe-ELK1组细胞存活率和IC50值显著提高;而与si-NC组相比,si-ELK1组细胞存活率和IC50值显著降低。与oe-NC+DMSO组相比,oe-ELK1+DMSO组线粒体没有出现萎缩、线粒体脊减少情况;而与oe-ELK1+DMSO组相比,oe-ELK1+erastin组线粒体出现了明显的萎缩、线粒体脊减少甚至消失现象。与oe-NC+DMSO组相比,oe-ELK1+DMSO组细胞内MDA含量显著降低,GPX4、SLC7A11蛋白表达增加,ACSL4蛋白表达降低,进一步用erastin处理则逆转了这一现象。与oe-NC+DMSO组相比,oe-ELK1+DMSO组CaSki/DDP细胞的IC50值显著提高,而erastin处理能够减弱这一促进作用。此外,与si-NC+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-NC组线粒体出现了明显的萎缩、线粒体脊减少甚至消失现象;而与si-FOXM1+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-ELK1组线粒体形态得到恢复。与si-NC+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-NC组细胞内MDA含量显著提高,GPX4、SLC7A11蛋白表达显著降低,ACSL4蛋白表达显著提高;而与si-FOXM1+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-ELK1组细胞内MDA含量显著降低,GPX4、SLC7A11蛋白表达显著提高,ACSL4蛋白表达显著降低。与si-NC+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-NC转染抑制了不同浓度DDP处理CaSki/DDP细胞的IC50值,而同时oe-ELK1转染能够逆转这一抑制作用。结论FOXM1通过上调ELK1的表达介导铁死亡,进而促进宫颈癌细胞DDP耐药。

西格列汀调节FOXO3-FOXM1信号通路对肺癌细胞化疗敏感性的影响及机制研究

目的:研究西格列汀(SIT)调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头蛋白M1(FOXM1)信号通路对肺癌细胞化疗敏感性的影响及机制。方法:体外培养人肺癌细胞A549及其顺铂(DDP)耐药细胞A549/DDP,均以0、0.5、1、2、3、4mmoL/L的SIT处理,以CCK-8法测定各组A549及A549/DDP细胞活力并筛选出SIT最佳作用浓度。将A549/DDP细胞随机分为对照组、SIT(2mmoL/L)组、si-NC组(转染空载质粒)、SIT(2mmoL/L)+si-FOXO3(转染FOXO3 siRNA质粒)组,以SIT和质粒分组处理的同时以0、2、4、8、16、32mg/L DDP处理,然后以CCK-8法测定各组细胞化疗耐药指数。将A549/DDP细胞随机分为对照组、SIT(2mmoL/L)组、DDP(4mg/L)组、DDP(4mg/L)+si-NC组、DDP(4mg/L)+SIT(2mmoL/L)组、DDP(4mg/L)+SIT(2mmoL/L)+si-FOXO3组,分组处理后分别以CCK-8法、克隆形成实验及流式细胞实验测定各组A549/DDP细胞增殖、凋亡;以免疫印迹法检测各组A549/DDP细胞增殖(C-myc、PCNA)、凋亡{Bax、cleaved多聚ADP核糖聚合酶(PARP)}、耐药{P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP1)、MRP2、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)}与用FOXO3-FOXM1通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,SIT组细胞化疗耐药指数降低(P<0.05),si-NC组细胞化疗耐药指数无明显变化(P>0.05);与SIT组相比,SIT+si-FOXO3组细胞化疗耐药指数升高(P<0.05)。与对照组相比,DDP组、DDP+si-NC组A549/DDP细胞活力、克隆形成率、C-myc及PCNA蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Bax及cleaved PARP蛋白表达升高(P<0.05);DDP+SIT组A549/DDP细胞活力、克隆形成率、C-myc及PCNA、P-gp、MRP1、MRP2、BCRP、FOXM1蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Bax及cleaved PARP、FOXO3蛋白表达升高(P<0.05);SIT组A549/DDP细胞P-gp、MRP1、MRP2、BCRP、FOXM1蛋白表达降低(P<0.05),FOXO3蛋白表达升高(P<0.05)。与DDP组相比,DDP+SIT组A549/DDP细胞活力、克隆形成率、C-myc及PCNA、P-gp、MRP1、MRP2、BCRP、FOXM1蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Bax及cleaved PARP、FOXO3蛋白表达升高(P<0.05);DDP+si-NC组A549/DDP细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与DDP+SIT组相比,DDP+SIT+si-FOXO3组A549/DDP细胞活力、克隆形成率、C-myc及PCNA、P-gp、MRP1、MRP2、BCRP、FOXM1蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、Bax及cleaved PARP、FOXO3蛋白表达降低(P<0.05)。结论:SIT可通过促进FOXO3-FOXM1信号传导而下调耐药蛋白表达,增强肺癌细胞化疗敏感性,进而提高DDP对肺癌DDP耐药细胞的杀伤作用。

在脓毒症相关急性肾损伤中FOXM1靶向调控NLRP3表达

目的探究脂多糖(LPS)诱导的脓毒症相关急性肾损伤潜在的新干预靶点。方法将10只C57小鼠随机分为对照组和LPS组,采用全自动生化分析仪检测小鼠血清中尿酸(UA)、尿素(UREA)和肌酐(CREA)的浓度变化,通过免疫组化检测IL-1β、IL-6和NLRP3的表达情况。免疫印迹检测各组肾组织中IL-6和NLRP3的表达差异。生物信息学HumanTEDB网络分析转录因子FOXM1在NLRP3基因启动子的结合位点,通过双荧光素酶报告基因和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)验证FOXM1与NLRP3的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组小鼠血清中UA、UREA和CREA的浓度升高,肾组织中IL-1β、IL-6、NLRP3和FOXM1表达上调。生物信息学分析结果显示NLRP3是FOXM1的靶基因。双荧光素酶报告基因实验验证了转录因子FOXM1调控NLRP3基因表达,qRT-PCR实验证实了FOXM1对NLRP3表达的正向调控作用。结论脓毒症相关急性肾损伤组织中FOXM1表达升高,且FOXM1能够靶向调控NLRP3表达。

吉马酮通过FOXO3-FOXM1轴调控甲状腺癌BCPAP细胞的增殖、迁移和化疗耐药

目的:探究吉马酮通过叉头盒蛋白O3(FOXO3)-FOX亚类M1转录因子(FOXM1)信号通路调控人甲状腺癌细胞BCPAP和多柔比星(DOX)耐药BCPAP细胞(BCPAP/DOX)的增殖、迁移和化疗耐药。方法:常规培养BCPAP细胞,用BCPAP细胞构建BCPAP/DOX细胞,用MTT法检测不同浓度吉马酮对BCPAP和BCPAP/DOX细胞增殖的影响。将BCPAP和BCPAP/DOX细胞分为Ctrl组(空白对照)、sh-NC组(转染sh-NC质粒)、低浓度吉马酮组(0.10 mmol/L)、高浓度吉马酮组(0.15 mmol/L)、高浓度吉马酮(0.15 mmol/L)+sh-FOXO3组(转染sh-FOXO3质粒),用转染试剂将sh-NC质粒和sh-FOXO3质粒转至相应的BCPAP和BCPAP/DOX细胞中。用CCK-8法、划痕愈合实验和WB法分别检测各组细胞的增殖、迁移能力,以及FOXO3、FOXM1、BAX、MMP-9和多药耐药-1(MDR-1)蛋白的表达。结果:在BCPAP和BCPAP/DOX细胞中成功地敲减了FOXO3的表达,低浓度和高浓度吉马酮均可显著抑制BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖、迁移能力,降低细胞中FOMX1、MMP-9或MDR-1(BCPAP/DOX细胞)蛋白的表达,提升FOXO3和BAX蛋白的表达(均P<0.05),与低浓度比较,高浓度吉马酮的作用更为显著(均P<0.05),敲减FOXO3后可部分逆转吉马酮对这两种细胞的作用(均P<0.05)。结论:吉马酮可能通过FOXO3/FOXM1信号通路调控BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖和迁移能力,降低BCPAP/DOX细胞化疗耐药性。

FOXM1转录激活HJURP介导有氧糖酵解促进乳腺癌细胞的阿霉素耐药性

目的本研究旨在阐明乳腺癌中有氧糖酵解调控阿霉素耐药的作用机制。方法生信分析乳腺癌组织中霍利迪连接识别蛋白(HJURP)和叉头核蛋白1(FOXM1)的表达及其相关性,并分析HJURP的富集通路;qPCR检测HJURP和FOXM1在乳腺癌细胞中的表达;及在阿霉素耐药细胞中的表达。双荧光素酶实验和ChIP实验验证FOXM1与HJURP的结合关系;CCK-8检测细胞活力和IC 50值;Western blot检测糖酵解代谢途径相关的特定基因的表达;Seahorse XP96分析不同处理组的胞外酸化率(ECAR)和耗氧率(OCR),试剂盒检测各处理组细胞中丙酮酸、乳酸和ATP水平。结果HJURP在乳腺癌中高表达,富集在糖酵解通路上。细胞功能实验发现HJURP能够通过调节有氧糖酵解促进细胞阿霉素耐药性。此外FOXM1靶向结合HJURP,并在乳腺癌中高表达,与HJURP呈正相关。回复实验发现HJURP过表达能够逆转FOXM1敲低对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的抑制作用。结论本研究结果证明转录因子FOXM1能够激活HJURP的转录调节有氧糖酵解促进乳腺癌细胞阿霉素耐药性。

食管胃交界部腺癌肿瘤浸润淋巴细胞中FoxM1、GST-π表达情况与分化程度、转移及预后的关系

目的 分析食管胃交界部腺癌(AEGJ)肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)中叉头框蛋白M1(FoxM1)、谷胱甘肽-S-转移酶-Pi(GST-π)表达情况,探讨其与肿瘤分化程度、转移及患者预后之间的关系。方法 将60例行手术治疗的AEGJ患者纳为研究对象,术中留取癌灶组织与癌旁组织,机械法分离出癌灶组织及癌旁组织内TILs,流式技术检测TILs中FoxM1、GST-π表达量(以含有FoxM1、GST-π抗原细胞的百分率表示)。分析AEGJ癌灶组织及癌旁组织TILs中FoxM1、GST-π表达量与肿瘤临床特征之间的关系。随访3年,比较癌灶组织内TILs中FoxM1、GST-π不同表达量患者生存情况。结果 癌灶组织TILs内FoxM1、GST-π表达水平均高于癌旁组织TILs,差异具有统计学意义(P<0.05)。癌灶组织TILs内FoxM1表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度及淋巴转移相关(P<0.05),TILs内GST-π表达水平与肿瘤分化程度及浸润深度有关(P<0.05)。随访发现,FoxM1高表达组患者3年生存率及中位生存时间均低于低表达组(Rank=4.039,P=0.044),GST-π高表达组患者3年生存率及中位生存时间均低于低表达组(Rank=10.041,P=0.002)。结论 AEGJ组织TILs内FoxM1及GST-π表达水平明显高于癌旁TILs,且与AEGJ病理特点存在一定的关系。FoxM1及GST-π表达水平与AEGJ患者术后生存情况相关,是预测患者预后的潜在指标。

慢性鼻-鼻窦炎患者HIF-1α、FoxM1的表达及其与黏蛋白MUC5AC、MUC5B的相关性

目的 探讨慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、叉头框转录因子M1(FoxM1)的表达及其与黏蛋白5AC(MUC5AC)、黏蛋白5B(MUC5B)的关系。方法 选取2016年3月—2018年5月南充市中心医院行鼻内镜手术伴鼻息肉的CRS患者(CRS wNP组)和不伴鼻息肉的CRS患者(CRS sNP组)鼻窦黏膜各40例,另选取30例正常鼻腔黏膜作为对照组,采用免疫组织化学和逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测各组HIF-1α、FoxM1、MUC5AC、MUC5B的表达,并分析它们之间的关系。结果 免疫组织化学结果显示,MUC5AC、MUC5B、HIF-1α、FoxM1在各组黏膜上皮中阳性面积均差异明显(P<0.001)。CRS wNP组和CRS sNP组各指标阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,各组MUC5AC、MUC5B、HIF-1α、FoxM1 mRNA的相对表达量均有明显差异(P<0.001),CRS wNP组和CRS sNP组各指标相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。Person分析结果显示,在伴或不伴鼻息肉的CRS组织中,HIF-1α、FoxM1与MUC5AC及MUC5B mRNA的表达均存在正相关(P<0.001)。结论 发现在伴或不伴鼻息肉的CRS中,HIF-1α、FoxM1、MUC5AC、MUC5B的表达均上调,且HIF-1α、FoxM1均与黏蛋白MUC5AC、MUC5B正相关,HIF-1α和FoxM1可能在CRS中黏液生成增多中起着重要的作用。

探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制

目的 探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制。方法 在骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、筛选稳定顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)、慢病毒转染稳定FoxM1过表达细胞株(HOS/FoxM1、U2OS/FoxM1)及空载体对照(HOS/NC、U2OS/NC)中,采用Western blot法检测FoxM1和c-myc蛋白的表达。应用CCK-8细胞增殖实验检测FoxM1抑制剂RCM-1对骨肉瘤细胞顺铂敏感性的影响;采用生物信息学方法分析FoxM1和c-myc表达与患者预后的关系。结果 FoxM1和c-myc在骨肉瘤顺铂耐药细胞中的蛋白表达比亲本细胞明显升高。与空载体对照组中FoxM1(0.26±0.03 vs 0.37±0.02)、c-myc(0.35±0.07 vs 0.59±0.03)相比,FoxM1过表达细胞中FoxM1(0.81±0.13 vs 0.61±0.01)和c-myc(1.19±0.08 vs 1.61±0.13)蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。采用10μmol/L FoxM1抑制剂RCM-1处理后,顺铂耐药细胞(FoxM1:0.23±0.01 vs 0.19±0.02,c-myc:0.39±0.01 vs 0.31±0.04)和FoxM1过表达细胞中(FoxM1:0.11±0.03 vs 0.10±0.02,c-myc:0.35±0.01 vs 0.36±0.02)FoxM1和c-myc蛋白表达均明显下降。与单独顺铂给药组相比,采用顺铂联合FoxM1抑制剂RCM-1处理,骨肉瘤耐药细胞和FoxM1过表达细胞的增殖能力均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析发现:FoxM1和c-myc高表达组患者的总生存期低于低表达组(P<0.05)。结论 FoxM1可能通过上调c-myc表达促进骨肉瘤细胞对顺铂耐药,联合运用FoxM1抑制剂能够增强骨肉瘤耐药细胞对化疗的敏感性,了解其分子机制有望为临床逆转骨肉瘤化疗耐药提供新的治疗靶点。

Smo、Gli2及FoxM1对神经胶质瘤诊断和预后的评估价值

目的 探讨Smo、胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)及叉头框转录因子M1(FoxM1)对神经胶质瘤诊断和预后的评估价值。方法 取80例神经胶质瘤标本为神经胶质瘤组,60例正常脑组织标本为正常组。免疫组化法检测两组Smo、Gli2、FoxM1表达水平,分析其与神经胶质瘤患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析不同Smo、Gli2、FoxM1表达水平神经胶质瘤患者预后的差异,分析影响神经胶质瘤预后的相关因素。结果 神经胶质瘤组织Smo、Gli2、FoxM1高表达率均高于正常脑组织,且随神经胶质瘤患者组织学分级升高而表达率增高(P<0.05)。不同组织学分级、不同Smo、Gli2、FoxM1表达水平的神经胶质瘤患者5年生存率存在显著差异(P<0.05)。组织学Ⅲ~Ⅳ级、Smo高表达、Gli2高表达、FoxM1高表达是神经胶质瘤预后的危险因素(P<0.05)。结论Smo、Gli2、FoxM1高表达是神经胶质瘤预后的危险因素,三者有望作为神经胶质瘤诊断和预后的判断指标。

FoxM1靶向肽9R-P49对L929成纤维细胞的抑制作用及机制

为探究9R-P49多肽对FoxM1的作用及其对成纤维细胞的调控机制,采用CCK-8检测细胞抑制率、AO/EB双染和流式细胞术检测细胞凋亡、Transwell检测细胞迁移、细胞平板克隆检测细胞增殖;使用PyMOL分子对接软件预测P49多肽与FoxM1-DBD的潜在结合位点;采用0、30.0和60.0μg/mL的9R-P49多肽处理小鼠成纤维L929细胞,Western Blot检测FoxM1蛋白的表达,最后通过RNA转录组分析差异基因及相关通路。结果表明:在L929细胞中9R-P49下调FoxM1蛋白的表达,同时,9R-P49能够抑制细胞增殖和迁移、促进细胞凋亡;P49多肽与FoxM1-DBD上的Arg 297、Ser 290和Asp 293位点存在潜在结合;给药处理后转录组差异基因GO分类主要富集于细胞过程、单一组织过程、生物调节过程和新陈代谢过程等,KEGG分类主要富集于免疫系统、内分泌系统、信号转导和新陈代谢等通路。在成纤维L929细胞中9R-P49能够通过调控FoxM1表达抑制L929细胞增殖和迁移并促进凋亡。

FOXM1与CENP-A在骨肉瘤化疗耐药中的关系及其作用机制

目的探讨CENP-A是否参与骨肉瘤细胞化疗耐药及与叉头框蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)的调控关系。方法采用Western blot法检测骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)和稳定FOXM1过表达细胞(HOS/FOXM1、U2OS/FOXM1)中CENP-A蛋白表达。转染siRNA后检测CENP-A蛋白表达;运用CCK-8细胞增殖实验观察siRNA敲低CENP-A后耐药骨肉瘤细胞对顺铂敏感性的影响;FOXM1抑制剂RCM1处理后检测CENP-A蛋白表达。Kaplan-Meier法分析GEPIA数据库中CENP-A表达与患者预后的关系,Spearman相关性分析CENP-A和FOXM1两者之间的关系。结果骨肉瘤顺铂耐药细胞中CENP-A蛋白表达比亲本细胞明显升高(0.52±0.03 vs 0.92±0.01,0.33±0.02 vs 1.12±0.01),FOXM1过表达细胞中CENP-A表达较空载体对照亦明显增高;在骨肉瘤顺铂耐药和FOXM1过表达细胞中转染siRNA-CENP-A后,CENP-A蛋白表达均明显降低(0.84±0.01 vs 0.60±0.02,0.98±0.01 vs 0.41±0.01)。转染siRNA敲低CENP-A后,骨肉瘤耐药细胞和FOXM1过表达细胞对顺铂的耐药性明显降低。10μmol/L RCM1 FOXM1抑制剂处理耐药细胞和FOXM1过表达细胞后,CENP-A蛋白表达均明显下降。生物信息学分析发现CENP-A高表达组患者总生存期显著低于低表达组(P<0.01)。Spearman相关性分析发现CENP-A和FOXM1表达呈正相关(r=0.79)。结论FOXM1可能通过调控CENP-A参与骨肉瘤化疗耐药,为骨肉瘤化疗耐药治疗策略提供新的理论基础。

基于生物信息学数据库分析FOXM1在肝癌中的表达及其临床预后意义

目的 通过挖掘癌症数据库中的数据,分析了FOXM1在肝癌患者中的临床表达作用情况及其临床意义。方法 检索Oncomine、GEPIA和HPA数据库中有关肝癌中FOXM1的数据,结合文献二次综合分析,WB进行相互验证。结果 Oncomine数据库分析FOXM1在所有肿瘤类型中的表达,差异有统计学意义的研究结果共78个,其中肝癌中高表达的研究有4个。Oncomine与GEPIA两个数据库分析结果一致发现FOXM1 m RNA在肝癌组织中地表达显著高于正常组织(P<0.001)。HPA网站分析显示,FOXM1蛋白在正常组织中表达水平较低或不表达,但在肝癌组织中呈显著高表达。该蛋白表达结果与mRNA表达一致。生存分析发现,FOXM1表达水平与总生存期和无瘤生存期显著相关,FOXM1高表达患者临床预后差(均P<0,001)。GEPIA在线分析显示在肿瘤的不同临床阶段,各组之间的FOXM1 mRNA表达差异显著(P<0.001)。进一步相关性分析,发现肝癌中FOXM1与MSH4相关性低,而与MLH1、MSH2、MSH3、MSH5和MSH6基因的表达呈现正相关性(均P<0.001);与PIK3CA、mTOR、AKT1、HIF1A及VEGFA的表达均呈现正相关(均P<0.001)。WB结果显示实验组MLH1、MSH2、MSH3、MSH5、MSH6、PIK3CA、mTOR、AKT1、HIF1A和VEGFA的表达水平在一定程度上有所提高。结论 利用生物信息学的相关性方法分析发现,在肝癌组织中,FOXM1高表达,并且和癌症的临床分期以及预后密切相关。其机制可能与调节PI3K/AKT信号通路及错配修复基因MLH1、MSH2、MSH3、MSH5和MSH6有关,值得进一步深入探究。

FOXM1通过调控HJURP表达促进肺腺癌细胞增殖

目的探讨Holliday交叉识别蛋白(Holliday junction recognition protein,HJURP)在肺癌组织中的表达与肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者预后的关系及其对肺腺癌细胞(H1299及SPC-A1)增殖的影响机制。方法收集本中心胸外科2019年2月至2020年5月17例非小细胞肺癌患者经手术切除的肿瘤组织样本和正常组织样本,采用RT-qPCR和Western blot分析HJURP在肿瘤组织和正常组织中的表达情况。通过分析癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和Kaplan-Meier Plotter(KM-plot)数据库,验证HJURP在肿瘤组织和正常组织的表达情况及其与肺腺癌患者预后的关系。采用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2-deoxyuridine,EdU)摄取实验检测HJURP敲低对肺腺癌细胞系增殖的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验,检测HJURP敲低对肺腺癌细胞系体内生长的影响。采用Pearson相关性分析收集样本与公共数据库HJURP与叉头盒基因M1(forkhead box protein M1,FOXM1)表达的相关性。通过染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验分析FOXM1对HJURP的转录调控作用。采用双荧光素酶报告基因实验分析FOXM1与HJURP启动子的结合情况。采用SiRNA敲低FOXM1细胞系,检测其对HJURP表达的影响。结果RT-qPCR与Western blot实验均证实,肺腺癌肿瘤组织中HJURP的表达较正常组织显著升高(P<0.05)。基于TCGA及KM-Plot公共数据库肺腺癌患者队列的生存分析显示,肿瘤组织中HJURP高表达与患者不良预后密切相关(P<0.05)。HJURP敲低后显著抑制H1299(P<0.05)及SPC-A1(P<0.05)的体外增殖能力。HJURP与FOXM1的表达呈正相关(本中心样本:r=0.5813,P<0.05;TCGA数据库:r=0.8776,P<0.05;CCLE数据库:r=0.4551,P<0.05)。ChIP实验与双荧光素酶报告基因实验均显示,FOXM1能够与HJURP启动子区域结合。敲低FOXM1后,HJURP表达水平显著下降(P<0.05)。结论HJURP可调控肺腺癌肿瘤细胞增殖,HJURP高表达与肺腺癌患者较差的预后密切相关。FOXM1是调控HJURP的上游主要转录因子。

FoxM1在肝胆胰恶性肿瘤中的作用及机制研究进展

叉头盒蛋白M1(FoxM1)作为Forkhead基因超家族的一员,是调节细胞增殖和凋亡的重要转录因子。近年研究发现,FoxM1在人类肝胆胰恶性肿瘤中异常表达,并且与其侵袭转移及预后密切相关。随着其作用机制的不断明确,FoxM1可望作为肝胆胰恶性肿瘤新的预后生物标志物和治疗靶点。本文就近年来FoxM1在肝胆胰常见恶性肿瘤的作用及相关机制研究进展进行综述。

环状RNA circ-FOXM1降低克唑替尼对肺癌细胞抑制效果的作用机制研究

目的探讨环状RNA circ-FOXM1降低克唑替尼对肺癌细胞抑制效果的作用机制。方法构建克唑替尼耐药肺癌细胞株H2228/CR。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测circ-FOXM1在BEAS-2B、H2228、H2228/CR细胞中的表达。将H2228细胞分为circ-FOXM1过表达组和过表达对照组。将H2228/CR细胞分为circ-FOXM1沉默组和沉默对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的半抑制浓度(IC_(50))。经克唑替尼干预处理后,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,采用Transwell实验检测各组细胞迁移数,采用Western blot实验检测各组细胞磷酸化的磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)的表达水平。结果H2228/CR细胞circ-FOXM1表达水平高于H2228细胞,H2228细胞circ-FOXM1表达水平高于BEAS-2B细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。克唑替尼对过表达组细胞的IC_(50)显著高于过表达对照组细胞(P<0.05)。克唑替尼对沉默组细胞的IC_(50)显著低于沉默对照组细胞(P<0.05)。经克唑替尼干预处理后,过表达组的细胞凋亡率低于过表达对照组,细胞迁移数、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值均高于过表达对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默组的细胞凋亡率高于沉默对照组,细胞迁移数、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值均低于沉默对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论circ-FOXM1可能通过激活PI3K/AKT信号通路降低克唑替尼对肺癌细胞的抑制效果。

转录因子FOXM1剪接异构体在乳腺癌EMT过程中的初步研究

探究转录因子FOXM1不同的剪接异构体对乳腺癌EMT过程中的影响.采用基因工程方法分别构建了表达FOXM1B-EGFP和FOXM1C-EGFP两种FOXM1剪接异构体真核表达质粒,并将其转染进乳腺癌细胞,采用RT-PCR和Western印迹检测细胞样本中FOXM1剪接异构体的表达和EMT相关基因表达,同时采用transwell检测高表达不同FOXM1剪接异构体细胞的侵袭和迁移能力.成功构建了FOXM1B-EGFP和FOXM1CEGFP真核表达质粒.外源FOXM1B在乳腺癌间质型细胞的表达高于上皮型细胞,并主要存在于细胞核内,且高表达FOXM1B能够显著促进乳腺癌细胞的侵袭和EMT过程.外源FOXM1C在乳腺癌上皮型细胞中的表达高于间质型细胞,并且在细胞核和细胞质中均有表达,高表达FOXM1C能够显著抑制细胞的侵袭和EMT过程.实验结果表明,在乳腺癌细胞中,FOXM1B主要存在于细胞核内,FOXM1C在细胞核和细胞质中均有表达.本研究预示FOXM1B和FOXM1C对乳腺癌细胞EMT过程发挥不同的影响.

Foxm1调控房颤心房重构的作用与机制研究

探讨Foxm1调控房颤心房重构的作用与机制研究。方法:建立48例房颤SD大鼠作为研究组,同时建立40例窦律SD大鼠作为对照组,所有患者均进行开胸手术,取其右心耳组织,利用HE染色法对患者的心房肌组织形态学的改变进行观察,通过荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对Foxm1基因的mRNA进行检测,通过蛋白免疫印迹法对Foxm1蛋白表达水平进行检测。结果:对HE染色结果进行观察,相比较对照组患者,研究组患者的心房肌细胞明显增大,并且患者的肌纤维大小不均、排列紊乱、断裂以及增粗,胞核增大,心肌组织间质的纤维化也更加明显。通过qRT-PCR对Foxm1的表达量进行测量,结果研究组的相对表达量为(2.94±0.53)相比较对照组的(1.01±0.25)明显更高(P<0.05),通过蛋白免疫印迹法检测Foxm1的表达水平,结果研究组为(0.245±0.041)明显高于对照组患者的(0.076±0.021)(P<0.05)。结论:从组织学形态学观察房颤患者明显出现心房重构现象,并且房颤患者的Foxm1的mRNA水平以及蛋白表达量明显升高,其与房颤心房重构呈正相关。

FOXM1促进心肌细胞H9C2细胞增殖、迁移和侵袭探究

探讨FOXM1促进心肌细胞H9C2细胞增殖,迁移和侵袭。方法:选取大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分成3组:分别为空白对照组、阴性对照组以及siRNA-FOXM1阳性对照组;利用实时荧光定量PCR方法对细胞中FOXM1、VEGF以及bFGF的mRNA水平进行检测,通过CCK8法对细胞增殖进行检测;通过细胞划痕实验对细胞迁移能力进行检测;通过Transwell对细胞的侵袭能力进行检测;通过Western blot法对各细胞内的VEGF以及bFGF蛋白的表达进行检测。结果:相比较阴性以及空白对照组,对FOXM1的表达进行干扰之后,其mRNA以及蛋白的表达明显的下降(P<0.05);对FOXM1的表达进行抑制之后,H9C2细胞内部的bFGF以及VEGF的mRNA以及蛋白的表达也出现了明显的下降(P<0.05)。结论:FOXM1能够促进心肌细胞H9C2的增殖、迁移以及侵袭,对FOXM1进行抑制能够使得H9C2增殖、迁移以及侵袭受到抑制,具体的机制可能与VEGF以及bFGF表达有着密切的关系。