底肥、追肥施氮量对新疆贝母生长发育性状的影响

新疆贝母为珍稀濒危植物,具较高的药学利用价值,其天然分布土壤养分中有效氮、有效磷、有效钾含量很高,营养元素可能对新疆贝母生长发育影响很大。为考察不同水平底肥及追肥对其1年生株高、产量等生育性状的影响,在新疆伊梨库尔德宁镇进行施肥试验。结果表明,底肥有机肥与追施氮肥均对1年生株高、产量有显著影响,以S3N3水平最为显著,增长率分别达38.41%和68.42%。在大田磷、钾基肥充足的情况下,底肥有机肥与追施氮肥能有效地促进新疆贝母体内光合产物的转化和积累,为鳞茎的发育和膨大提供物质基础,对新疆贝母生长有明显的促进作用。

不同栽培年限伊贝母组织化学研究

目的:研究伊贝母鳞茎组织结构及主要药用成分在鳞茎中的分布部位。方法:采用植物解剖学和组织化学方法对不同栽培年限伊贝母鳞茎的显微组织结构以及生物碱、皂苷成分的分布进行观察研究。结果:伊贝母鳞茎主要由表皮、皮层薄壁组织、有限外韧型维管束组成。维管束的数目在伊贝母种间上有一定的差异,新疆贝母的维管束数目略大于伊犁贝母;生物碱主要存在于不同栽培年限伊贝母鳞茎的皮层薄壁组织细胞及维管束周围的薄壁组织细胞上,其总生物碱含量从高到低的顺序为:3年生的伊贝母≥4年生的伊贝母>5年生的伊贝母;皂苷主要存在于不同栽培年限伊贝母鳞茎的表皮细胞和维管束周围的薄壁组织细胞上,其总皂苷含量从高到低的顺序为:5年生的伊贝母≥4年生的伊贝母>3年生的伊贝母,在种间及同种植物的不同栽培年限或不同组织结构中,其生物碱与皂苷的含量存在差异。其中,以4年生伊贝母药材中的生物碱与皂苷含量较高,表明其药用价值也较高,因此推断第4年为最佳采收期。结论:伊贝母鳞茎中大量薄壁细胞是主要药用成分的分布部位,同时研究结果可为合理采收提供依据。

新疆贝母鳞茎化学成分的分离与鉴定

目的:分离和鉴定新疆贝母鳞茎的化学成分。方法:利用正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、制备型中压柱层析等方法进行分离纯化,根据红外、质谱、核磁共振波谱及理化性质解析化合物的结构。结果:从新疆贝母鳞茎中分离鉴定了8个化合物,分别为:尿嘧啶核苷(1)、蔗糖(2)、腺嘌呤核苷(3)、三乙胺盐酸盐(4)、胆碱(5)、亚油酸(6)、β-谷甾醇(7)、胡萝卜苷(8)。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物2、4~6为首次从贝母属植物中分离得到。

新疆贝母的紫外光谱鉴别

目的 研究新疆贝母的鉴别依据。方法 利用紫外分光光度法测定和比较了新疆贝母与其它 4种贝母样品无水乙醇提取物的紫外光谱。结果 新疆贝母与其它 4种贝母有明显而稳定的差异。结论 该光谱特征作为新疆贝母与其它 4种贝母区别的依据。

新疆贝母潜在分布区域及生态适宜性预测

基于新疆贝母的62个自然分布点和15个环境因子,利用Arc GIS软件和最大熵模型(MAXENT),预测、分析了该植物在基准气候1961—1990及2050 (2041—2060,基于RCP2.6和RCP6.0情景)条件下的潜在适生区、驱动因子及其生态位参数。结果表明:(1)基准气候下,新疆贝母的适生区主要集中在阿勒泰地区、准噶尔盆地西部、南部、阿拉山口西南部、伊犁河谷南部及吐鲁番盆地西部地区。其中,最适宜的分布主要集中在准噶尔盆地西南部、塔城地区和伊犁河谷中部和南部;(2)新疆贝母在2050时段气候情境下的潜在分布范围与基准气候相比,将分别增加0.94%和0.23%,新增的潜在生境主要分布在准噶尔盆地西部。但最适生的分布区将在伊犁河谷中部、南部及塔城地区略有减少(0.42%和0.39%);(3)年平均降水量、最干月降水量、最干季平均气温和海拔主要限制了新疆贝母的潜在分布,累积贡献率之和达88.58%;基准气候下该植物最适宜分布区的生态位参数为:年平均降水量248—469 mm,最干月降水量3—19 mm,最干季平均气温-22.7—-2.0℃,海拔1350—2100 m。

新疆贝母DNA提取及ISSR-PCR体系的建立与优化

目的:从新疆贝母干叶片中提取高质量的DNA,建立ISSR-PCR体系并进行优化。方法:通过改进的CTAB法提取基因组DNA;综合利用单因素实验和L9(34)正交实验2种方法,对镁离子、dNTP、模板DNA含量、TaqDNA聚合酶量、引物浓度等因素进行优化,并采用温度梯度筛选引物的退火温度。结果:新疆贝母20μL ISSR-PCR最适反应体系dNTP为0.3 mmol/L,Mg2+为2.0 mmol/L,模板浓度为40～100 ng/(20μL),引物为1.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U/20μL,引物UBC 859的最适退火温度为50.7℃。结论:此提取方法得到的DNA纯度高,ISSR-PCR扩增效果显著,为新疆贝母种质资源鉴定、遗传多样性分析奠定研究基础。

新疆贝母不同部位的性状及显微特征的研究

目的研究新疆贝母植株不同部位的药材性状及粉末的显微特征,为推广这一药物资源提供了鉴定依据,为新疆贝母的资源开发利用奠定基础。方法采用性状鉴定法和显微鉴定法。结果描述了新疆贝母的药材性状以及粉末显微特征,并绘制出粉末图。结论新疆贝母的药材性状及粉末显微特征属首次报道。

UPLC-MS/MS同时测定乳核内消液中的贝母素甲、贝母素乙、西贝母碱和湖贝甲素

目的采用超高效液相色谱-串联质谱法同时测定乳核内消液中贝母素甲、贝母素乙、西贝母碱、湖贝甲素的含量。方法经超声离心后,采用YMC-Triart C_(18)色谱柱(150 mm×2.1mm,3μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温35℃;质谱采用ESI^(+)离子源,多反应监测模式检测。结果贝母素甲、贝母素乙、西贝母碱、湖贝甲素等的线性范围分别为0.119~23.72μg·mL^(-1)(r=0.9958)、0.120~23.94μg·mL^(-1)(r=0.9951)、0.105~20.93μg·mL^(-1)(r=0.9942)、0.109~21.72μg·mL^(-1)(r=0.9900),平均回收率(n=6)分别为99.4%(RSD=2.00%)、98.3%(RSD=2.20%)、100.9%(RSD=1.90%)、98.7%(RSD=2.50%)。结论所用方法同时测定了乳核内消液中4种生物碱成分的含量,方法灵敏、准确、重复性好,为乳核内消液的质量控制和综合评价提供了方法。

UPLC-ELSD法同时测定伊贝母中贝母辛和西贝母碱的含量

建立同时快速测定伊贝母两种基原植物中贝母辛和西贝母碱含量的方法。采用超高效液相色谱-蒸发光散射(UPLC-ELSD)检测法:色谱柱为Waters Acquity UPLCTM BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为乙腈(A)-0.02%三乙胺水溶液(B)系统;梯度洗脱(0～3 min,30%～60%A;3～4 min,60%～80%A;4～10 min,80%～100%A)。流速0.25 mL.min-1;柱温25℃;漂移管温度40℃,喷雾器参数40%,进样量1μL。贝母辛和西贝母碱分别在28.75～1150.0μg.mL-1(r=0.999 2)、51.5～1 030.0μg.mL-1(r=0.999 1)内浓度对数与峰面积对数呈良好线性关系,方法回收率分别为94.5%(RSD=1.12%)和98.1%(RSD=2.36%)。结果表明,本方法快速、简便、准确、重现性好,能快速分析伊贝母药材中两种生物碱含量,为伊贝母药材的质量控制提供了依据,此外,从UPLC-ELSD色谱图能快速鉴别新疆贝母和伊犁贝母药材。

中国天山山区新疆贝母居群遗传多样性及其环境适应性

新疆贝母(Fritillaria walujewii)具较高的药学利用价值,但现存量稀少,被列为新疆Ⅰ级保护植物。通过选取3个叶绿体基因片段,分析新疆贝母18个居群的遗传多样性,检测18个居群样地的土壤因子,利用SPSS软件分析了遗传多样性与土壤因子的关系。结果表明:新疆贝母居群总的遗传多样性较高,单倍型多样性指数与土壤中的全盐、SO_4^(2-)、Ca^(2+)、Mg^(2+)、有机碳、有机质、全氮、全磷含量呈显著正相关;平均等位差异与土壤SO_4^(2-)、Ca^(2+)、有机碳含量呈显著正相关;核苷酸多样性指数与土壤中的全盐、SO_4^(2-)、Ca^(2+)、Mg^(2+)、有机碳、有机质、全N呈极显著正相关,与土壤pH呈显著负相关。对新疆贝母居群土壤因子进行主成分分析,得到3个主分量,占总信息量的80.22%,得出新疆贝母的分布主要与全盐、有机碳、有机质、全N、全P、Ca^(2+)、SO_4^(2-)有关。土壤中硫酸盐和土壤有机质与新疆贝母居群遗传多样性显著相关,对新疆贝母居群的遗传多样性具有一定程度的选择性压力,在维持新疆贝母居群遗传多样性方面扮演较重要的角色,同时在一定程度上影响了新疆贝母目前的分布格局。