益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3表达的影响

目的探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血大鼠海马Wnt/β-catenin信号通路Wnt3a、卷曲蛋白9(Frizzled9)和T细胞因子3(TCF3)蛋白表达的影响。方法采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组,脑缺血2 h后持续灌注7d。采用Western-Blot法检测缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,用免疫组化Envision两步法检测缺血侧海马CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达。结果在缺血侧海马区,与假手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著增加(P<0.01);与模型组比较,益气活血方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.01),补肾生髓方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.01或P<0.05)。在缺血侧海马CA1区,与假手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,益气活血方组与补肾生髓方组能显著降低CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达(P<0.01)。结论 2种中药复方能通过抑制缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,调节Wnt/β-catenin信号通路,促进局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织修复。

海马中特异性敲除Dicer1蛋白的小鼠的构建和表型

目的:在小鼠海马中特异性敲除RNA酶Ⅲ酶(RNAase Ⅲenzyme)Dicer1,并初步观察Dicer1在小鼠海马的生长发育中起到的基本作用。方法:用在海马中特异性表达Cre酶的Frizzled9-CreERTM小鼠和Dicer1(flox/flox)小鼠交配,得到Dicer1(flox/+);Frizzled9-CreERTM小鼠,并再次与Dicer1(flox/flox)交配,得到Dicer1(flox/flox);Frizzled9-CreERTM小鼠,用他莫昔芬(TM)诱导Cre酶的表达,使Dicer1在海马中特异性敲除,观察小鼠的表型。结果:TM诱导的Dicer1全敲的小鼠出生率低,大部分在出生后40天左右死亡,海马中CA3区域变薄,猜测与海马中缺乏Dicer1酶有关。结论:Dicer1是miRNA产生过程中的重要因素,在海马中敲除Dicer1后影响小鼠发育,小鼠易猝死。