生育力保存领域冷冻载体的研究进展

本文研究了生育力保存领域常见的冷冻载体的种类,特点和使用情况。分别对卵子胚胎、卵巢组织、精子和睾丸冷冻保存所使用的载体进行归纳整理,分析了不同的冷冻载体保存不同生物样本的发展与现状。结果表明:开放式载体与封闭式载体各有优缺点,优化封闭式载体更好的用于生物样本保存是当务之急。生物样本种类不同所使用的载体有差异,卵子与胚胎的玻璃化保存技术相对成熟,被广泛使用的是开放式Cryotop式载体;卵巢组织由于其结构的复杂性,冷冻保存尚未有统一的标准;在精子冷冻保存方面,冷冻载体多用于微量精子的冷冻保存;睾丸组织的保存仍然面临比较大的挑战。

比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果

目的探讨不同冷冻载体对水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存效果的影响。方法以体外成熟培养18h的水牛卵母细胞为实验材料，分别以0．25ml冻精塑料细管（A）、自制拣卵针尖端部分制成的极细玻璃微管（D）和两种制作核移植工具针的玻璃细管（B、C）为冷冻载体卵母细胞，解冻后统计成熟率及早期胚胎发育率等冷冻保存效果指标。结果A组卵母细胞冷冻保存效果最差（成熟率：AVSB、C、D为43．9％VS51．7％、51．9％、55．9％，2～4细胞率：AVSB、C、D为34．1％VS40．0％、40．7％、41．2％），D组卵母细胞冷冻效果最好，但解冻时卵母细胞的回收率显著低于其他组（DVSA、B、C为69．2％VS87．0％、94．1％、91．9％）。B、C两组在解冻后的成熟率及早期发育率上显著高于A组，低于D组，但差异不明显，且其解冻后卵母细胞回收率显著高于D组（P〈0．05）。结论综合回收率和解冻后早期胚胎发育率，B、C两种玻璃细管是一种水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体。

临床微量精子标本冷冻方法的研究

目的探索一种安全、便捷、有效的用于微量精子冷冻的方法。方法选择内径130μm的玻璃剥卵针50支作为冷冻载体,进行10个周期的反复冻融,检测其完整性,计算不同冷冻周期中载体折损率。选取50例经检测合格的精液标本,将密度调整至(0.5~1)×10~6/ml,使用精子冷冻保护剂按照1∶1体积混合预平衡10 min,每份标本装载2支载杆,计算装载时间,其中1支载杆作为快速冷冻组,迅速投入液氮中冷冻保存,另1支载杆采用液氮熏蒸30 min后再投入液氮中保存,比较两种方法解冻后精子的复苏率。结果 50支冷冻载体中,其中有36支完成全部10轮的冷冻-复苏周期测试,折损率为28.0%,损坏原因中78.6%为金属镊子直接夹持导致玻璃剥卵针破裂。玻璃剥卵针至少可耐受4个周期反复冻融,但之后约4%~6%的会出现自发破损。100支冷冻载体装载精子时间为45~398 s,平均为(112.3±94.1)s。冷冻前平均精子活力为65.6%±9.9%,快速冷冻复苏后平均精子活力为36.64%±8.7%,熏蒸法冷冻复苏后平均精子活力为23.48%±6.2%。快速冷冻法精子复苏率为55.9%±11.0%,熏蒸冷冻法精子复苏率为36.3%±9.8%,两者比较,差异具有统计学意义(F=18.31,P<0.01)。结论采用剥卵针作为冷冻载体,并配合快速冷冻法,冷冻保存微量精子是一种安全、有效、简便的方法,适合临床广泛开展。

雄性生殖细胞冷冻保存研究进展

随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展,雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容,为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前,雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻;冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤,根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类;冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片(A)组、冷冻小钩(B)组、电镜铜环(C)组、自制冷冻叶片(D)组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义(P<0.01);D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。

冷冻载体浓度对复苏卵母细胞存活率的影响及蔗糖

目的:探讨MⅡ卵母细胞玻璃化冷冻和复苏过程中不同冷冻载体和不同蔗糖浓度解冻对卵母细胞存活率的影响。方法:收集2009年6月至2012年5月在成都市锦江区妇幼保健院生殖医学中心常规IVF治疗周期第1天没有受精的MⅡ卵母细胞853枚,进行玻璃化冷冻后复苏。按照实验过程中所用不同冷冻载体和不同解冻方法分为4组。A组79枚,载体为冷冻环,采用常规方法解冻;B组580枚,载体为半麦管,采用常规方法解冻;C组121枚,载体为冷冻环,采用改良法解冻;D组73枚,载体为半麦管,采用改良法解冻。将卵母细胞复苏2h后观察,对各组卵母细胞存活率进行了比较。结果:C组卵母细胞存活率(97.52%)显著高于A组(72.15%)、B组(52.24%)和D组(64.38%)(P<0.01);A组卵母细胞存活率高于B组,差异显著(P<0.05);其余各组间卵母细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:采用冷冻环冷冻及改良法解冻能提高成熟卵母细胞存活率。

卵母细胞冷冻保存技术新进展

卵母细胞的冷冻保存已经成为女性生殖力保存的一个重要方式,在人类辅助生殖领域中起着关键的作用。近几年,卵母细胞冷冻保存技术的研究有了很大的突破,在诸多方面都提出了一些新技术与新方法,主要包括冷冻方法、保护剂种类、保护剂添加与去除的方式以及卵母细胞质量的评价等,其中微流体装置不仅用于保护剂的连续添加和去除,还能用于细胞的玻璃化冷冻保存,同时细胞质量评价技术的优劣直接会影响胎儿的发育,甚至成人的健康。因此,微流体技术与科学的质量评价方法可能是未来卵母细胞冷冻保存研究的重要方向。

基于薄液膜蒸发的玻璃化冷冻方法中冷冻载体的传热优化

玻璃化冷冻方法是细胞超低温保存的有效冷冻方法之一。降温速率的提高有利于细胞内外溶液玻璃化程度的增加,同时可以降低低温保护剂的浓度,减少低温保护剂对细胞的毒性伤害和渗透性损伤。本文针对冷冻载体在基于薄液膜蒸发的超高速冷却过程中的传热过程进行了优化分析。研究结果显示:细胞悬浮液的传热热阻在总传热热阻中的比重最大,设法减低它是强化细胞冷冻传热过程的有效手段之一;另外液氮蒸发传热系数的提高在一定范围内可以强化冷冻传热过程,但强化效果会随着蒸发传热系数的增加而减小。上述研究成果为基于薄液膜蒸发的玻璃化冷冻新方法走向实用提供了技术保障。

两种商品化开放式冷冻载杆对冻融周期胚胎移植结局影响的比较

目的:探讨两种不同商品化冷冻载杆对冻融周期胚胎移植结局的影响。方法:回顾性分析2017年3月—2019年3月在武汉大学人民医院生殖中心接受冻融胚胎移植的患者资料,根据使用冷冻载杆的不同分为Cryotop组(K组)和iVitri组(S组),根据移植胚胎时期不同分为卵裂期和囊胚期,比较各组间胚胎复苏率、着床率、人绒毛膜促性腺激素(HCG)阳性率、临床妊娠率、早期流产率和异位妊娠率的差异。结果:在两组患者年龄、不孕年限、基础性激素水平、窦卵泡数、新鲜周期获卵数等基础情况均一致的情况下,无论是卵裂期胚胎还是囊胚,两种载杆的胚胎复苏率、着床率、HCG阳性率、临床妊娠率、早期流产率和异位妊娠率均无显著性差异(均P>0.05)。结论:研究所纳入两种开放式载杆的冷冻复苏结局无明显差别,在临床应用中,可综合考虑临床安全性等其他因素的影响选择合适冷冻载杆。

卵巢组织冷冻保存的研究进展

卵巢冷冻技术可保存卵巢中大量的生殖细胞,将冷冻的卵巢组织解冻移植后可恢复卵巢的内分泌功能和生育能力,是癌症患者保存生育能力的一个理想途径。在该技术中诸多因素,如冷冻保护剂(CPA)、冷冻载体、皮质块大小以及冷冻方法等均影响着卵巢冷冻保存的效果;且目前尚缺乏高效、统一和标准的技术程序,因而限制了该技术在临床和科研中的广泛使用。为优化该技术程序,改善冷冻后卵巢功能的恢复情况,本文对影响该技术使用效果的一些因素进行了论述。