Wnt抑制因子FrzA/sFRP-1在冠心病中研究进展

FrzA基因,即可溶性卷曲相关蛋白1,通过与Wnt信号通路具有同源结构的特异性受体卷曲蛋白受体竞争结合而抑制Wnt信号通路。近期研究表明,抑制Wnt信号通路有益于减少心肌梗死面积,减轻心室重塑,改善心功能。而作为Wnt信号通路的抑制因子,FrzA在这个过程中起了重要的作用,这提示FrzA有可能成为未来冠心病基因靶向干预治疗手段之一。现对目前关于FrzA在冠心病中的研究进展进行归纳总结,并探讨FrzA在冠心病中的作用及未来发展趋势。

FrzA基因转导干预对大鼠体外缺血缺氧心肌细胞Wnt信号通路相关分子表达及细胞凋亡的影响

目的探讨重组9型腺相关病毒(r AAV9)携带Frz A基因转导对心肌细胞缺血缺氧模型Wnt信号通路活性的抑制作用及心肌细胞凋亡的影响。方法分离培养SD大鼠心肌细胞,将r AAV9携带Frz A基因转导至心肌细胞,在r AAV9表达高峰时建立心肌细胞缺血缺氧模型。随机分为空白组、缺血缺氧组、缺血缺氧+r AAV9-CMV-e GFP组(空病毒组)、缺血缺氧+r AAV9-CMV-Frz A组(Frz A组)。采用RT-PCR检测各组心肌目的基因Frz A的表达;Western blotting测定心肌细胞Wnt信号通路关键分子Dvl-1、β-catenin、c-Myc水平及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 r AAV9转染第5天,目的基因Frz A在心肌细胞中高表达(P<0.05)。缺血缺氧组、空病毒组、Frz A组Wnt信号通路关键分子Dvl-1、β-catenin、c-Myc表达及凋亡蛋白Bax/Bcl-2值较空白组明显升高(P均<0.05)。Frz A组心肌细胞中Wnt信号通路关键分子Dvl-1、β-catenin、c-Myc表达及凋亡蛋白Bax/Bcl-2值低于缺血缺氧组、空病毒组(P均<0.05)。结论 r AAV9介导的Frz A基因转导可有效干预Wnt信号通路,抑制其活性,从而减轻心肌细胞凋亡。

Wnt抑制因子FrzA/sFRP-1在急性心肌梗死后心脏破裂中的研究进展

心脏破裂作为急性心肌梗死(AMI)最严重的并发症之一,其发生和发展过程复杂,受许多因素的影响。在心肌肥大、心肌纤维化、心室重构等病理生理过程,Wnt信号通路具有多环节、多作用位点的特点,在信号转导中发挥十分重要的作用。近年来研究显示,Wnt信号通路与心肌梗死联系密切。Wnt信号通路的激活可加速心室重构,增加AMI后心脏破裂的风险。而作为Wnt通路的抑制因子Frz A/可溶性frizzled相关蛋白1可以减少炎性细胞浸润,改善胶原沉积,增加毛细血管密度,显著减少心肌梗死面积,降低心脏破裂的发生率,从而改善心功能。

FrzA基因减轻过氧化氢诱导的心肌细胞损伤

目的探讨FrzA基因通过mTOR信号通路减轻过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导心肌细胞H9c2凋亡和氧化应激。方法建立大鼠H9c2的H_(2)O_(2)氧化应激损伤模型,作为H_(2)O_(2)组,正常培养的H9c2作为Con组。将pcDNA3.0、pcDNA3.0-FrzA转染至H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞,分别作为pcDNA3.0组、pcDNA3.0-FrzA组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FrzA mRNA表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;细胞凋亡率使用流式细胞术测定;选取相应试剂盒测定MDA含量以及SOD和CAT活力;采用ELISA法检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β水平;采用蛋白质印迹(Western blot)检测cleaved caspase-3和caspase-3蛋白、p-mTOR蛋白表达。结果与Con比较,HO细胞FrzA mRNA表达显著降低(P<0.05);与pcDNA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞活力显著升高(P<0.05);与pcD-NA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞凋亡率及cleaved caspase-3蛋白表达均呈下降趋势,而caspase-3蛋白表达呈上升趋势(P<0.05);与pcDNA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞MDA含量显著降低,SOD和CAT活力显著升高(P<0.05);与pcDNA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05);与Con比较,H_(2)O_(2)细胞p-mTOR蛋白表达显著升高(P<0.05);与pcDNA3.0比较,pcDNA3.0-FrzA组细胞p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论过表达FrzA基因可能通过抑制mTOR信号通路减轻H2O2诱导心肌细胞凋亡和氧化应激。

FrzA基因转导干预缺血性心力衰竭小鼠心肌Wnt信号通路的研究

目的:研究重组9型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus serotype 9,rAAV9)携带FrzA基因转导干预缺血性心衰小鼠心肌Wnt信号通路的可行性,为基因治疗心力衰竭提供新的思路。方法:选择3月龄雄性C57BL/6J小鼠共130只,随机分为空白组(n=10),心衰组(n=40),心衰+空病毒(rAAV9-GFP)注射组(n=40),心衰+rAAV9-FrzA组(n=40),采用结扎左冠状动脉定量控制心梗面积,于术后2周行心脏超声评各组心功能变化,再经尾静脉注射已稀释好的病毒,28d后处死小鼠取心脏标本,RT-PCR检测心肌目的基因FrzA以及Dvl-1,β-catenin的表达;Western blot检测心肌Wnt信号通路关键分子Dvl-1,GSK3β,p-GSK3β,β-catenin的表达。结果:与空白组相比,成功建立心衰模型后小鼠心功能均不同程度降低(P<0.05);FrzA组与心衰组相比,心功能明显改善(P<0.05);经尾静脉注射可成功将rAAV9-FrzA导入小鼠体内,并且目的基因FrzA在心肌组织中高表达(P<0.05);心衰小鼠心肌中Wnt信号通路关键分子Dvl-1,p-GSK3β,β-catenin的表达显著升高(P<0.05),FrzA转导后小鼠心肌中Wnt信号通路中关键分子Dvl-1,p-GSK3β,β-catenin表达均降低(P<0.05)结论:利用rAAV9-FrzA转导缺血性心衰小鼠可以有效的干预心肌Wnt信号通路,抑制其活性,为基因治疗缺血性心衰提供了新的思路。