一种新型胞内游离钙离子检测探针Fura-2

钙离子是细胞内的一种重要的信号分子,采用各种荧光染料进行胞内钙离子浓度和分布检测对了解细胞生理活动具有重要意义。Fura-2是一种被用来测定胞内钙离子浓度的第二代紫外激发的双波长Ca2+荧光指示剂,结合比例荧光成像系统可以有效地检测胞内钙离子浓度和分布.本文介绍了Fura-2的基本化学性质、导入细胞的方式,以及采用比率荧光成像系统检测胞内钙离子浓度的优缺点及其对策.

用Fura-2/AM测定细胞内游离钙浓度的方法

新型Ca^(2+)荧光指示剂F ura-2/AM由中国医学科学院药物研究所合成。本文详细介绍了用F ura-2/AM测定神经细胞、巨噬细胞和主动脉条平滑肌细胞内游离钙的方法。经比较,国产与Sigma产F ura-2/AM的质量相同。

应用Fura-2/AM检测分离的神经细胞内游离钙及其变化

本文以酶法制备新生大鼠脑细胞悬液,运用近年来发展起来的Fura-2技术,检测此神经细胞内游离钙(以下简写为[Ca^(2+)]i)及其变化。结果表明:在静息状态下,其[Ca^(2+)]i为240±5nmol/L。高钾去极化可使[Ca^(2+)]i成倍增加.钙拮抗剂verapamil和Ilifedipinc能阻断高钾升高[Ca^(2+)]i的作用。实验结果证明了所制备的神经细胞悬液的可用性及建立的Fura-2测定[Ca^(2+)]i方法的可靠性。

Fura-2荧光探针研究Ca^(2+)对大肠杆菌细胞的跨膜作用

以Fura 2 /AM作为荧光探针 ,研究了Ca2 + 对大肠杆菌HB10 1细胞的跨膜作用 .考察了不同浓度外源钙离子处理不同生长时期细胞的跨膜行为 ,并采用停流技术测定了荧光动力学 .结果表明大肠杆菌在用CaCl2 溶液处理后 ,胞外Ca2 + 可大量进入胞内 ,且进入细胞的钙离子量与胞外钙离子浓度相关 ;处于对数生长前期的细胞与对数生长后期和稳定期的细胞相比 ,胞内自身Ca2 + 浓度低 ,但其摄取外源Ca2 + 的能力最强 ,这应该与其生理代谢活性是相关的 ,而且这一时期是大肠杆菌细胞最易建立人工诱导感受态的时期 .该研究对于测定革兰氏阴性菌细胞内Ca2 + 浓度及胞外离子的跨膜传导行为 。

利用荧光浓度指示剂fura-2研究稀土离子的跨膜行为

本文提出了利用fura-2测量细胞内游离稀土离子浓度的定量方法.实验结果表明,在模拟细胞内离子组成的条件下,稀土离子La^(3+)和Y^(3+)与fura-2形成1:1的配合物.其配合物的表观离解常数分别为161nmol·dm^(-3)和404nmol·dm^(-3),pH7.05.有未配对f电子的Nd^(3+),Ho^(3+),Sm^(3+),Dy^(3+),Ce^(3+),Yb^(3+)等稀土离子对荧光起萃灭作用.此性质使我们能够定性鉴定它们是否进入了细胞.我们使用如上性质,利用单细胞阳离子测试系统,以小鼠骨髓瘤细胞为模式细胞,研究了游离稀土离子的跨膜行为及部分体内小分子对稀土离子跨膜行为的影响.实验结果支持游离稀土离子不能通过细胞膜的假设,而且所研究的体内小分子在生理浓度下对稀土离子的跨膜也无明显作用.

Fura-2/AM荧光法测定日本血吸虫培养细胞内游离钙离子浓度

目的 研究用钙荧光探剂 (Fura- 2 / AM)检测静息状态下日本血吸虫培养细胞内的游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i) ,以及β-巯基乙醇对培养细胞 [Ca2 + ]i的影响。方法 将 18d虫龄的日本血吸虫童虫制成细胞悬液 ,贴壁法接种于 30 ml培养瓶中 ,培养液为 RPMI- 16 4 0含 2 0 %小牛血清及常量抗生素。在培养的 0 - 3d,制备日本血吸虫细胞悬液 ,采用 Fura- 2 / AM钙荧光探剂测定正常静息状态下及加入β-巯基乙醇后日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i。结果 正常静息状态下 ,培养 0 d的日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i为 188.2 nmol/ L ;培养 1- 3d的 [Ca2 + ]i两两比较差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,它们的平均值为 (187.0± 10 .7) nm ol/ L ,与培养 0 d的 [Ca2 + ]i比较 ,差异也无显著性(P>0 .0 5 )。β-巯基乙醇可使日本血吸虫培养细胞内 [Ca2 + ]i明显升高 (P<0 .0 1) ,并随浓度的增加而升高。结论 培养 1- 3d,静息状态下日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i比较稳定 ,β-巯基乙醇能影响日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 +

利用Fura-2/AM荧光探针法和LCSM法研究受磁场处理S.aureus细胞Ca^(2+)的跨膜行为

研究受脉冲磁场处理金黄色葡萄球菌(S.aureus)细胞Ca2+的跨膜行为,为此研究了表征S.aureus胞内Ca2+浓度变化Fura-2/AM荧光探针检测法,并检测了不同脉冲数下经脉冲磁场处理后S.aureus细胞荧光强度的变化,采用激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)观察了经脉冲磁场处理前后S.aureus胞内Ca2+浓度的变化。研究结果表明,Fura-2/AM可成功的负载于S.aureus中,可以应用于S.aureus胞内游离钙离子浓度变化的测定。经脉冲磁场处理后,S.aureus胞内钙离子浓度显著上升,且与活菌数的减少高度相关,相关度达到-0.989 15;胞内光点显著增多,光点荧光强度明显增大,说明大量胞外钙离子跨膜进入胞内。因此,可以判断微生物细胞膜通透性的改变和胞内Ca2+浓度的上升是高强度脉冲磁场具有杀菌作用的重要原因。

Fura-2/AM 法和 MTT 法筛选多药抗药性逆转剂的比较

为了验证新方法Ｆｕｒａ２／ＡＭ法筛选多药抗药性逆转剂的效果，以新方法Ｆｕｒａ２／ＡＭ法与传统方法ＭＴＴ法进行筛选多药抗药性逆转剂的比较研究。结果显示Ｆｕｒａ２／ＡＭ法与ＭＴＴ法的筛选结果基本一致（相关系数γ＝０８６，Ｐ＜００１），且Ｆｕｒａ２／ＡＭ法有操作简单、快速、灵敏、重复性好及测定过程不需无菌操作等的特点，适用于大规模的筛选。

应用Fura-2/Am检测血小板胞浆游离钙浓度

以新型荧光指示剂Fura-2／Am检测血小板胞浆内游离钙浓度，并探讨检测过程中的某些实验条件。结果表明：正常成人参考值为137．6±15．2nmol／L，95％正常值范围为107．8～167．4nmol／L。批内及批间变异系数CV分别为6.22％、4.6％，重复性较好。且实验不受正常饮食，溶血、黄应及高脂样品的干扰，证实此方法是一种较为简便可靠的检测血小板胞浆游离钙浓度的方法。

用Fura-2双波长荧光法测定小鼠海马细胞内游离钙

目的:探讨小鼠海马细胞分离及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的测定。方法:低浓度胰蛋白酶消化、分离海马细胞,采用Ca2+荧光指示剂Fura2双波长荧光法测定[Ca2+]i。结果:海马细胞存活率超过95%。细胞外Ca2+1.0mmol/L时,静息状态下海马细胞[Ca2+]i为(210±10.7)nmol/L。30mmol/LKCl可显著增加[Ca2+]i,并且KCl的这种效应呈一定的剂量依赖关系。结论:低浓度胰蛋白酶消化分离小鼠海马细胞简单、可靠;Fura2建立的双波长荧光法灵敏、可靠。

用Fura-2测定人外周血中性粒细胞内游离钙浓度

本文用 2 - [6-双乙酸基 - 5 - ( 2 -双乙酸基 ) - 5 -甲苯氧乙氧基 ]- 2 -苯骈呋喃基 - 5 -恶唑羧酸五钾盐 ( Fura- 2 )建立了测定人外周血中性粒细胞内游离钙浓度的方法 ,并对一些测试条件进行了探讨。测定标本内中性粒细胞数以大约 10 6个 /m L为宜 ,在离心分离出中性粒细胞悬液时 ,标本制备好需静置 0 .5 h后才能上机测试 ,否则振荡形成的剪切应力将增大细胞内游离钙的浓度 ,p H偏离 7.4和受损细胞会极大增加细胞内游离钙的浓度。结果表明 ,正常人外周血中性粒细胞游离钙浓度为 3.95± 0 .76μg/L。对中性粒细胞内游离钙的测定有助于了解其功能状态。

用Fura-2/AM检测巨噬细胞〔Ca^(2+)〕_i影响因素分析

用Ｆｕｒａ┐２／ＡＭ检测巨噬细胞〔Ｃａ２＋〕ｉ影响因素分析王斌１杜冠华２陈敏珠１作者单位：１安徽医科大学临床药理研究所，合肥２３００３２２中国医学科学院药物研究所，北京１０００５０用Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ检测活细胞胞浆游离钙浓度（〔Ｃａ...

用Fura-2测定周围血单个核细胞内游离钙浓度

本文用Ｆｕａｒ－２测定了周围血单个核细胞内游离钙浓度，并对有关实验条件先进了探讨。对比研究表明，血标本在４℃保存４小时对测定结果无显著影响，测定标本中单个核细胞数以１０＾５－１０＾６／ｍｌ为宜。认为测定单个核细胞内游离钙浓度对判断单个核细胞的功能状况有一定帮助。

Fura-2/AM法测定大鼠脑缺血后细胞内游离钙浓度

目的 :观察大鼠全脑缺血后 3d时的脑细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)水平 ,介绍用Fura - 2 /AM法测定 [Ca2 + ]i的具体测定方法 ,探讨脑缺血后脑细胞内游离钙浓度变化的可能机制 .方法 :2 0只Wistar大鼠随机分成对照组和实验组 ,采用流行的传统四血管阻断法加以修改改良制作大鼠脑缺血动物模型 ,取假手术动物作对照组 ,用新型Ca2 + 荧光指示剂Fura - 2测定全脑缺血后 3d时的脑细胞内游离钙浓度 .结果 :对照组 [Ca2 + ]i为 (2 6 2 83± 90 12 )nmol/L ,实验组 [Ca2 + ]i为 (371 39± 89 0 0 )nmol/L ;用t -检验进行统计学分析 ,P =0 0 143<0 0 5 ,两者差异具有显著性 .结论 :大鼠全脑缺血后 3d时的脑细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)

Fura-2/AM荧光探针法用于大肠杆菌胞内游离钙的测定

目的探讨经超声处理后大肠杆菌胞内游离钙的变化。方法超声波作用影响大肠杆菌,用Fura-2/AM探针法测定胞内游离钙的变化。结果经超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高,打开了钙依赖性的离子通道,膜两侧离子交流加速,膜通透性增加。结论Fura-2/AM荧光探针法可用于微生物大肠杆菌胞内游离钙的测定。经一定条件下超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高。

应用Fura-2测定血小板内游离钙浓度

应用国产荧光指示剂Fura-2测定20名原发性高血压病人血小板内游离钙水平,结果血小板在静息状态下细胞内游离钙浓度为119.8±27.4nmol/L,批内变异为10.37％,批间变异为12.43％。

用Fura-2双波长荧光法测定低剂量电离辐射对小鼠脾细胞游离钙的影响

目的：探讨低剂量电离辐射免疫增强效应的机理。方法：采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ 双波长荧光测定法研究了低剂量电离辐射全身照射后小鼠脾Ｔ淋巴细胞内游离钙离子浓度（〔Ｃａ２＋ 〕ｉ）对次佳浓度Ｃｏｎ Ａ（５ ｍ ｇ／Ｌ）反应性的变化。结果：静息状态下的小鼠脾淋巴细胞内游离钙离子浓度为９５．０±１４．０ ｎｍ ｏｌ／Ｌ，ＣｏｎＡ 可使小鼠脾Ｔ淋巴细胞内游离钙离子浓度增加６９．４±７．６ ｎｍ ｏｌ／Ｌ，上升至峰值时间为７９．２ ｓ。７５、１００ 和２００ ｍ Ｇｙ 全身照射后２４ ｈ，Ｃｏｎ Ａ 诱导的小鼠脾Ｔ淋巴细胞内游离钙离子动员明显高于假照射组（Ｐ＜ ０．０１）。结论：低剂量电离辐射的免疫兴奋效应与其增强淋巴细胞内〔Ｃａ２＋

应用Fura-2测Ca^(2+)时应注意的问题

Ca^(2+)的荧光络合剂Fura—2,是目前最常使用的细胞内Ca^(2+)指示剂,它较Q-uin—2具有用量少,灵敏度高等优点,但其使用也存在一些实际问题。Fura-2不能透过细胞膜,所以常用其乙酰甲基酯Fura-2/AM,Fura—2/AM不溶于水,溶于二甲亚砜(DMSO)。